Ацетатцеллюлозная мембрана для электрофореза

ОФС.1.8.2.0009.15 Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на плёнках из ацетата целлюлозы

Содержимое (Table of Contents)

ОФС.1.8.2.0009.15 Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на плёнках из ацетата целлюлозы

Настоящая общая фармакопейная статья распространяется на метод электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы, который предназначен для определения однородности (идентичности) иммунобиологических лекарственных препаратов (иммуноглобулинов). Метод основан на различной скорости перемещения белков в электрическом поле в зависимости от соотношения основных и кислотных групп белка, рН, ионной силы буферного раствора, величины заряда и молекулярной массы частиц.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение однородности ОФС.1.8.2.0009.15

лекарственных препаратов

из сыворотки крови человека

и животных методом

электрофореза на плёнках

из ацетата целлюлозы Вводится впервые

Белки движутся в электрическом поле со скоростью, пропорциональной их суммарному заряду. Белки, имеющие суммарный отрицательный заряд, движутся к аноду (+), а положительно заряженные – к катоду (–). По скорости движения в электрическом поле белки делятся на 5 основных фракций: альбумины, α1-глобулины, α2-глобулины, β-глобулины и γ-глобулины. Наименьшей скоростью продвижения обладают γ – глобулины (молекулярная масса 150-160 тыс. кДа); они практически остаются на линии старта, т.к. их заряд близок к нейтральному. Альбумины обладают выраженным отрицательным зарядом и меньшей молекулярной массой (67-70 тыс. кДа), поэтому в электрическом поле они движутся с наибольшей скоростью и в результате обнаруживаются дальше других белковых фракций от линии старта. С меньшей скоростью, чем альбумины, в электрическом поле перемещаются α1-, α2- и β-глобулины.

На увлажнённую плёнку из ацетата целлюлозы размером 90х90 мм, заправленную в специальную рамку, наносят 2-4 мкл исследуемых образцов (5 образцов в 2-х параллельных определениях) и для идентификации контрольный образец – сыворотка для контроля качества электрофоретического разделения белковых фракций. Определение проводят в 2-х параллельных определениях. Предварительно в электродные секции камеры (аппарат для электрофореза на плёнках из ацетата целлюлозы) наливают барбиталовый буферный раствор (рН 8,4). Вместо барбиталового буферного раствора можно использовать любой подходящий коммерческий буферный раствор с указанным значением рН.

Рамку с пленкой из ацетата целлюлозы помещают в разделительную камеру, закрывают крышкой, включают источник питания (сила тока 8-10 мА, напряжение 100-129 В). Разделение проводят в течение 30-40 мин. После проведения электрофореза снимают крышку разделительной камеры, не допуская попадания конденсационной воды на пленку. Рамку с плёнкой извлекают из камеры, избегая контакта с участками, где происходил электрофорез испытуемых образцов. Пленку достают из рамки пинцетом и дают подсохнуть на воздухе. Затем плёнку обрезают с обоих концов (около 2,5 мм), помещают в кювету с 50 мл раствора красителя и выдерживают в течение не более 5 мин (контакт с красителем в течение более длительного времени может деформировать плёнку). Плёнку вынимают из кюветы и после стекания избыточной жидкости помещают на 5 мин поочерёдно в 3 кюветы, со 100 мл отмывочной жидкости (для ускорения процесса отмывки кювету покачивают). После отмывки фон плёнки должен приобрести бледно-голубое окрашивание или стать почти прозрачным. Далее плёнку тщательно промывают водой, помещают между листами фильтровальной бумаги и слегка промокают.

Идентификацию белковых фракций проводят путём сравнения электрофореграммы испытуемых образцов с электрофореграммой контрольной сыворотки для контроля качества электрофоретического разделения белковых фракций. Сыворотка должна разделиться не менее, чем на 5 фракций: альбумин, α1- и α2-глобулины, β-глобулин и γ-глобулин. После проведения электрофореза проводят количественное определение фракций иммуноглобулина путём извлечения краски из плёнки элюирующим раствором с последующим колориметрированием или путём денситометрии электрофореграмм.

Колориметрическое определение. Извлечение краски каждой фракции проводят в 3 мл элюирующего раствора с 2-х параллельных электрофореграмм. Элюцию проводят в течение 40 мин при многократном встряхивании. Оптическую плотность полученного элюата измеряют на спектрофотометре при длине волны 620 нм в кюветах с толщиной слоя 10 мм по отношению к элюату неокрашенного участка электрофореграммы. Сумму оптических плотностей всех белковых фракций принимают за 100 % и рассчитывают процентное содержание каждой фракции препарата иммуноглобулина.

Денситометрическое определение. Электрофореграммы исследуемых образцов высушивают между листами фильтровальной бумаги в полиэтиленовом пакете (такие условия высушивания исключают деформацию плёнки). Высушенные плёнки просветляют вазелиновым маслом, пропитывая их таким образом, чтобы в плёнке не остались пузырьки воздуха. Для этого плёнку следует держать горизонтально и нижней поверхностью осторожно касаться масла. Избыток вазелинового масла удаляют, промокая плёнку между листами фильтровальной бумаги.

Фракции иммуноглобулина записываются денситометром в виде пиков. Величина площади каждого пика пропорциональна количеству краски, соединившейся с белком. С помощью автоматического интегратора площадь каждого пика вычисляют по формуле площади прямоугольника

(h ∙ d, где h – максимальная высота пика, d – ширина пика). Сумма площадей всех пиков фракций иммуноглобулина принимается за 100 % и вычисляется процентное содержание каждой фракции в испытуемом препарате иммуноглобулина.

Подготовка плёнки из ацетата целлюлозы. Плёнку смачивают в барбиталовом буферном растворе и гладкой стороной помещают в кювету на поверхность буферного раствора на 2 мин, а затем пинцетом погружают на дно кюветы и выдерживают 5 мин. После этого плёнку вынимают пинцетом, избыток влаги удаляют между листами фильтровальной бумаги и заправляют в рамку, избегая неравномерного натяжения и провисания.
Подготовка испытуемых образцов. Испытуемые образцы предварительно обрабатывают 0,05% раствором красителя – бромфенолового синего, используемого для отслеживания продвижения и распределения белковых фракций препарата иммуноглобулина в процессе электрофореза. В пробирку типа Эппендорф помещают 100 мкл испытуемого образца и 10 мкл 0,05% раствора бромфенолового синего и перемешивают. Окрашенные испытуемые образцы в объеме 2-4 мкл помещают в каждую лунку лотка.
Приготовление барбиталового буферного раствора (рН 8,4)*. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г натрия барбитала, растворяют в 600-700 мл воды очищенной, прибавляют 11 мл 1М раствора хлористоводородной кислоты, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают.

*Вместо барбиталового буферного раствора можно использовать любой другой коммерческий буферный раствор с известным значением рН.

4.Приготовление 1 М раствора хлористоводородной кислоты. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 85 мл хлористоводородной кислоты концентрированной, доводят объём раствора до метки и перемешивают.

Приготовление красителя. К 0,5 г амидочёрного 10 Б прибавляют 10 мл уксусной кислоты ледяной, 3 г трихлоруксусной кислоты и 90 мл этилового спирта и перемешивают. Для полного растворения краситель оставляют на 24 ч. Перед использованием раствор красителя перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр.
Приготовление раствора для отмывки электрофореграмм. В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл помещают 40 мл уксусной кислоты ледяной, прибавляют 700 мл воды очищенной и перемешивают. Затем объём раствора доводят водой очищенной до метки и вновь перемешивают.
Приготовление элюирующего раствора. Смешивают 10 мл 1 М раствора натрия гидроксида с 1 мл 1 М раствора натрия эдетата (трилон Б).

Если условия проведения анализа и реагенты отличаются от приведенных в данной статье, они должны быть указаны в соответствующей фармакопейной статье или нормативной документации с изложением иной валидированной методики анализа.

источник

Предлагаем вашему вниманию устройство электрофореза сыворотки крови УЭФ-01-«Астра» (регистрационное удостоверение N ФСР 2009/04670 от 07.05.2018) и программу обработки данных электрофореза «Анализ ФСК», которая совместно с персональным компьютером и планшетным сканером выполняет функции денситометра.

Устройство УЭФ-01-«АСТРА» позволяет проводить:

электрофорез белков сыворотки крови,
электрофорез с иммунофиксацией,
электрофорез липопротеидов,
электрофорез белков в моче,
электрофорез гликозамингликанов (ГАГ)

Устройство УЭФ-01-«АСТРА» состоит из:

Источника питания
Камеры деления для белков сыворотки крови
Камеры деления для иммунофиксации
Комплекта аппликаторов для нанесения проб на АЦ мембраны
Комплекта планшетов для проб пациентов
Комплекта мостиков для закрепления мембран в камере
Комплекта емкостей для реагентов
Емкостей для дезинфекции

Источник питания представляет собой программируемый источник напряжения. Питается от сети 220 В ± 10 %, частота 50 Гц. Имеет возможность регулировки: — по напряжению U = 10 … 300 В (дискретность 2 В); — времени t = 1 … 99 мин. (дискретность 1 мин).

Источник питания не требует времени подготовки к работе.

В процессе электрофореза имеется возможность контролировать заданные и текущие параметры (напряжение, ток, время), которые отображаются на индикаторе. Существует, также, звуковая сигнализация режимов работы (таймер, обрыв цепи, короткое замыкание, окончание работы).

Источник питания имеет восемь режимов работы. Каждый режим можно запрограммировать на свой вид анализа. Имеются возможность изменения запрограммированных параметров. Габаритные размеры источника питания 200х202х113 мм.

Камера деления позволяет работать одновременно с тремя ацетатцеллюлозными пленками формата 57х95 мм. Конструкция камеры обеспечивает наиболее оптимальные параметры для электрофореза, а также электрическую безопасность персонала при работе. Габаритные размеры камеры деления 298х180х85 мм.

Камера для иммунофиксации позволяет производить электрофорез гемоглобина и электрофорез с иммунофиксацией.

Многоразовый аппликатор позволяет наносить на пленку одновременно 8 проб сыворотки крови. Объем наносимой пробы — не более 0,2 мкл. Аппликатор имеет конструкцию, защищающую рабочую поверхность от механических повреждений при падении и ударах.

Аппликаторы, мостики для закрепления пленки и планшеты для раскапывания сыворотки крови имеют цветовую маркировку, исключающую ошибку в нумерации проб.

Полученная в результате электрофореза пленка, обработанная специальным образом (окраска, закрепление), помещается в сканер. Считывание результатов электрофореза и их обработка производится с помощью специальной программы (С) “Анализ фракций сыворотки крови”, которая совместно с персональным компьютером и планшетным сканером выполняет функции денситометра.

Программа обработки данных электрофореза имеет банк образцов, позволяющий сохранить изображение необработанной пленки в течение необходимого времени. Это удобно при выполнении большой серии проб.

Обработка результатов анализа производится автоматически одновременно для всех нанесенных на пленку проб. При некачественном разделении или нестандартном распределении фракций возможно ручное редактирование. Программа рассчитывает процентное содержание белков, их содержание в грамм/литр, строит график распределения фракций.

Результаты анализа вместе с изображением исследуемой фореграммы можно поместить в архив и при необходимости извлечь и распечатать. Информация хранится в архиве сколь угодно долго.

Предусмотрена возможность сортировки информации в архиве по имени, дате, номеру анализа и др.

Информация на печать выводится в виде протокола, на котором кроме результатов анализа имеются, сведения о пациенте, лечебном учреждении, времени и дате анализа, необходимые комментарии и т.д.

В стандартный комплект поставки входит стартовый набор расходных материалов для электрофореза белков сыворотки крови. Для производства других типов анализов необходимо заказать соответствующие комплекты расходных материалов.

п/п

Наименование Устройство электрофореза белков сыворотки крови УЭФ-01-«АСТРА» в составе: Источник питания 1 Камера деления для белков 1 Камера для гемоглобина и иммунофиксации 1 Аппликатор на 8 позиций 3 Мостик для закрепления пленки 3 Планшет для образцов двойной 3 Планшет-фиксатор двойной 1 Емкость для реактивов вертикальная 4 Картридж для пленки 2 Планка прижимная 3 Поддон для ёмкостей 1 Емкость для дезинфекции 2 Шнур сетевой 1 Предохранитель 2А 2

Стартовый комплект реагентов на 800 анализов для проведения электрофореза белков в составе:

Мембрана из ацетата целлюлозы для электрофореза белков,57х95 мм, (50 шт./уп.)- 2 уп.

Клинитест- ЭФ 1 уп, РФ-18- 2 уп.

Компьютерный комплекс в составе: Системный блок OC Win10 Home

источник

Используя ацетат целлюлозу, можно разделить сывороточные белки на 5 фракций: альбумин и 4 глобулиновых группы

— альфа 1, альфа 2, бета (часто подразделяются на 2 различные группы

Рис.1 Нормальная электрофореграмма сывороточных протеинов

Электрофорез с иммунофиксацией — один из современнейших методов в кинической лаборатории для получения характеристик моноклональных иммуноглобулинов. Моноклональная гаммопатия характеризуется неконтролируемой пролифирацией одного клона плазменных клеток за счет других клеток. Эта дисфункция часто приводит к синтезу большого количества одного иммуноглобулина или его субъединицы со снижением нормальных уровней иммуноглобулинов. При этом на электрофореграмме выявляется один резко увеличенный пик в бета-гамма-области

Большинство моноклональных гаммопатий являюттся доброкачественными и не проявляют себя клинически. Однако, высокие уровни моноклонального протеина на фоне сниженных уровней других иммуноглобулинов могут быть ассоциированы с малигнизацией.

В последние годы участились парапротеинемические гемобластозы (миеломная болезнь, лимфоцитомия, лейкозы), когда на электрофореграмме может наблюдаться присутствие двух (и очень редко трех) моноклональных протеинов. Анализ протеинов абсолютно необходим в диагностике и мониторинге лимфопролиферативных заболеваний. При этом если иммуннохимический метод может выявить количественные отклонения протеиновой продукции, отмечая наличие расстройства в этой среде, то электрофорез в состоянии продемонстрировать моноклональную сущность этих нарушений. Однако, выявление того или иного варианта парапротеинемии на электрофоретической картине недостаточно для полной идентификации патологического процесса. В таких случаях необходимо использовать иммуноэлектрофорез .

Поликлональные гаммопатий в общих чертах характеризуются диффузным увеличением уровня протеина в гамма-регионе на электрофоретической пластине. Обычно концентрации трех главных иммуноглобулинов (IgG, IgA, IgM) соответственно увеличены

Обычно поликлональная гаммопатия наиболее часто встречаемое в клинике отклонение после гипоальбуминемии.

Сохраняющаяся поликлональная гаммопатия имеет определенную прогностическую значимость при ряде заболеваний: хроническая патология печени, коллагенозы, хронические инфекции, метастатистическая карцинома, ожоговая болезнь.

Снижением большинства или даже всех иммуноглобулинов характеризуется гипогаммоглобулинемия и агаммоглобулинемия

Рис.4 Гипогаммаглобулинемия и агаммаглобулинемия

Чаще всего это связано с наследственной патологией и проявляется уже в раннем детстве (синдром Вискотт-Алдриха, болезнь Брутона, атаксия).

Приобретенная недостаточность иммуноглобулинов во взрослом возрасте может быть вторичной, в виде моноклональной гаммопатии или быть индуцированной иммуносупрессивной терапией. Остановимся на электрофоретических характеристиках сывороточных протеинов при некоторых клинических проявлениях.

Острое воспаление. характеризующееся локализованным биохимическим ответом (активация комплемента) и реакцией на клеточном уровне (мобилизация фагоцитов, увеличение синтеза протеинов), дает при электрофорезе белков сыворотки увеличение уровней альфа 1-й альфа 2-глобулинов, фибриногена (рис.5).

Хроническое воспаление ассоциируется с увеличением фракций белков, рассматриваемых как «белки хронической фазы». Электрофоретически это будет проявляться умеренным увеличением альфа 2-глобулинов и легким увеличением бета-глобулинов. Альбумин может быть слегка подавлен на фоне поликлонального увеличения гамма глобулинов (рис.6).

Рис.6 Хроническое воспаление

Такие отклонения, характеризующие хроническое воспаление, могут проявляться при хронических инфекциях (бруцеллез, туберкулез и др.), коллагенозах, аллергиях, аутоиммунных процессах, а также при малигнизации.

Заболевание печени. В связи с тем, что в печени синтезируются альбумин и альфа-глобулин, заболевания этого органа, затрагивающие белковосинтезирующую функцию могут сопровождаться снижением их уровней в крови, что соответственно отразится на электрофореграммах (рис.7).

Следует однако помнить, что печень обладает значительными резервами синтезирующей способности, поэтому выявление данных нарушений будет свидетельствовать о глубоких гепатоцеллюлярных нарушениях

Дата добавления: 2014-01-05 ; Просмотров: 567 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Принцип метода: Белки являются амфотерными электролитами. Направление движения белков в электрическом поле зависит от рН среды. Коллоидные частицы белка перемещаются в электрическом поле постоянного тока к аноду – в щелочной среде, к катоду – в кислой среде.Разделение белков сыворотки обычно проводят в буферном растворе при рН 8,6 – 8,9. В качестве носителя используют пленки из ацетата целлюлозы. В этих условиях заряженные белки сыворотки крови перемещаются по смоченным пленкам из ацетата целлюлозы в направлении анода со скоростью, зависящей от величины заряда и относительной молекулярной массы белка. Этот след представляет собой дорожку, на которой после окрашивания ясно видны места концентрации белков различных фракций. Наиболее быстро движутся альбумины, затем a₁-, a₂-, b-глобулины, и, наконец, g-глобулины. По этим следам (дорожкам) можно определить содержание белка в различных белковых фракциях пробы. Методом электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы можно получить 5 и более белковых фракций.

Нормальные величины белковых фракций зависят от вида применяемого красителя:

Белковые фракции	Окраска электрофореграммы
Пунцовый С	Амидо черный
1. Альбумины	52% (46,9-61,4)	60,2% (50,3-70,1)
2. a1-Глобулины	3,3% (2,2-4,2)	4,4% (2,7-6,1)
3. a2-Глобулины	9,4% (7,9-10,9)	12,3% (9,4-15,2)
4. b-глобулины	14,3% (10,2-18,3)	13,0% (7,7-18,0)
5. g-Глобулины	21,4% (17,6-25,4)	20,1% (15,2-25,0)

Оборудование и реагенты:

1) Аппарат для электрофореза;

2) Источник постоянного тока;

4) Веронал-мединаловый буфер, рН 8,6;

5) Раствор амидо черного для окрашивания электрофореграммы (амидо черный 250 мг в 100 мл 7% уксусной кислоты);

6) Раствор для отмывания (5-7% уксусная кислота)

7) Раствор для просветления пластинок из ацетата целлюлозы (смесь этанола, уксусной кислоты и глицерина);

Просветления пластинок из ацетата целлюлозы можно достигнуть также, погрузив пластинки на 2-3 минуты в глицерин или вазелиновое масло.

Проведение анализа

1. Сухие пластинки из ацетата целлюлозы помечают карандашом, а затем осторожно кладут на поверхность буфера для электрофореза так, чтобы они поглощали жидкость только снизу с помощью капиллярных сил. При быстром погружении пластинки в буфер в порах ацетата целлюлозы может остаться воздух.

2. Извлекают пластинки из буферного раствора и аккуратно зажимают их между листами плотной фильтровальной бумаги, не допуская высыхания пластинок. О высыхании свидетельствует появление белых пятен на поверхности пластинки. В этом случае пропитывание буфером следует повторить (см. пункт 1).

3. Влажную пластинку закладывают в рамку и помещают в электрофоретическую камеру.

4. С помощью апликатора на поверхность пластинки с катодного краю наносят образец – 0,2-0,4 мл сыворотки крови.

5. Сразу после нанесения образцов включают электрический ток.

Для кратковременного электрофореза на пленках из ацетата целлюлозы лучшие результаты получаются при стабильном напряжении. Как правило, для пластинок толщиной около 120 мкм сила тока не должна превышать 0,5 мА на 1 см ширины пластинки. Для более толстых пластинок (250-300 мкм) сила тока может достигать 1мА на 1 см ширины пластинки. Применив высокий градиент напряжения (30-40 В на 1 см) можно получить четкое разделение фракций белка за короткий промежуток времени (20-30 минут).

6. После отключения тока пластинки осторожно переносят в красящий раствор на 5 минут.

7. Затем пластинки отмывают до отбеливания фона в 5-7% растворе уксусной кислоты дважды по 3 минуты. Промывают 3 раза дистиллированной водой. Просушивают между листами фильтровальной бумаги.

8. Проводят просветление пластинок. Для этого помещают пластинки на 30 секунд в 90° этиловый спирт. Затем помещают их в осветляющий раствор на 30 секунд. Наклеивают на стекло и помещают в сухожаровой шкаф на 5 минут при температуре 100°С.

9. Высушенную пластинку сканируют на денситометре придлине волны 600 нм, характерной для красителя амидо черного.

Данные о содержании белка в белковых фракциях сыворотки крови могут быть представлены как в форме процентного распределения белка по фракциям, так и в форме содержания белка в отдельных фракциях в г/л (для этого предварительно в крови определяют содержание общего белка биуретовым методом).Результаты измерения заносят в таблицу:

Белковые фракции	Нормальные величины, %	Полученные величины, %	Полученные величины, г/л
1. Альбумины	60,2% (50,3-70,1)
2. a1-Глобулины	4,4% (2,7-6,1)
3. a2-Глобулины	12,3% (9,4-15,2)
4. b-глобулины	13,0% (7,7-18,0)
5. g-Глобулины	20,1% (15,2-25,0)
Концентрация общего белка в сыворотке крови – ______ г/л

Клинико-диагностическое значение: Электрофорез белков сыворотки крови имеет диагностическое значение в наблюдении за динамикой патологического процесса и оценке эффективности медикаментозного лечения.

Увеличение содержания a-глобулинов в сыворотке характерно для острых воспалительных заболеваний, так ка в данную фракцию входят белки острой фазы.

Во фракцию a-глобулинов входит также и большинство гликопротеинов крови. Поэтому ее содержание увеличивается при различных хронических заболеваниях, раке, травмах, ревматизме и инфаркте миокарда.

Повышение b-глобулинов в сыворотке чаще наблюдается при гиперлипопротеинемиях различного происхождения, так как в эту фракцию входят липопротеины.

Фракция g-Глобулинов состоит из иммуноглобулинов и увеличивается при заболеваниях, связанных с интенсивными иммунными процессами, а также при миеломных болезнях.

Гипогаммаглобулинемия может носить врожденный характер или быть обусловленной истощением иммунной системы (рак, хронические воспалительные процессы, аллергические заболевания, СПИД).

ТЕМА 2. ФЕРМЕНТЫ

Лабораторная работа № 3.

Последнее изменение этой страницы: 2016-12-28; Нарушение авторского права страницы

источник

ОФС.1.8.2.0009.15 Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на плёнках из ацетата целлюлозы

Содержимое (Table of Contents)

ОФС.1.8.2.0009.15 Определение однородности лекарственных препаратов из сыворотки крови человека и животных методом электрофореза на плёнках из ацетата целлюлозы

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Определение однородности ОФС.1.8.2.0009.15

лекарственных препаратов

из сыворотки крови человека

и животных методом

электрофореза на плёнках

из ацетата целлюлозы Вводится впервые

Подготовка плёнки из ацетата целлюлозы. Плёнку смачивают в барбиталовом буферном растворе и гладкой стороной помещают в кювету на поверхность буферного раствора на 2 мин, а затем пинцетом погружают на дно кюветы и выдерживают 5 мин. После этого плёнку вынимают пинцетом, избыток влаги удаляют между листами фильтровальной бумаги и заправляют в рамку, избегая неравномерного натяжения и провисания.
Подготовка испытуемых образцов. Испытуемые образцы предварительно обрабатывают 0,05% раствором красителя – бромфенолового синего, используемого для отслеживания продвижения и распределения белковых фракций препарата иммуноглобулина в процессе электрофореза. В пробирку типа Эппендорф помещают 100 мкл испытуемого образца и 10 мкл 0,05% раствора бромфенолового синего и перемешивают. Окрашенные испытуемые образцы в объеме 2-4 мкл помещают в каждую лунку лотка.
Приготовление барбиталового буферного раствора (рН 8,4)*. В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г натрия барбитала, растворяют в 600-700 мл воды очищенной, прибавляют 11 мл 1М раствора хлористоводородной кислоты, доводят объём раствора водой до метки и перемешивают.

Приготовление красителя. К 0,5 г амидочёрного 10 Б прибавляют 10 мл уксусной кислоты ледяной, 3 г трихлоруксусной кислоты и 90 мл этилового спирта и перемешивают. Для полного растворения краситель оставляют на 24 ч. Перед использованием раствор красителя перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр.
Приготовление раствора для отмывки электрофореграмм. В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл помещают 40 мл уксусной кислоты ледяной, прибавляют 700 мл воды очищенной и перемешивают. Затем объём раствора доводят водой очищенной до метки и вновь перемешивают.
Приготовление элюирующего раствора. Смешивают 10 мл 1 М раствора натрия гидроксида с 1 мл 1 М раствора натрия эдетата (трилон Б).

источник

Мембрана ацетатцеллюлозная Мембраны для электрофореза. Марки МФАС-ОС-1 (без подложки) 57 х 140. Мембраны в виде пластин для электрофоретического метода анализа белков сыворотки крови. Размеры: 57 Х 140 мм. 50 штук в упаковке. Российская Федерация

Опубликованный тендер

Закон, регулирующий правовые отношения в области государственных закупок.

Способы закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ
Исключения из правил: что нельзя закупить по 44-ФЗ или 223-ФЗ
Независимый регистратор по 44-ФЗ: обзор, функции, цели, плюсы и минусы использования
Оплата по контракту по 44-ФЗ: как получить вовремя
Чем обычный договор отличается от контракта по 44-ФЗ
Национальный режим при осуществлении закупок по 44-ФЗ и 223-ФЗ: запреты, ограничения, условия допуска
Расширили список запрещенных иностранных товаров по 44 ФЗ
Предметы роскоши по 44-ФЗ: как их опознать
Банковское сопровождение контракта по 44-ФЗ: виды, случаи и порядок осуществления
Неустойка по 44-ФЗ: разбираемся с особенностями начисления
Идентификационный код закупки (ИКЗ) по 44-ФЗ: определение, формирование, расшифровка и поиск закупок по ИКЗ
Вопрос: Я продаю компьютеры. Могу ли я участвовать в закупках по 44фз, если у меня нет документов о том, что эта техника — российского происхождения?
Что такое госзакупки: полное определение понятия, виды закупок по 44-ФЗ
Что не так с 44-ФЗ, или Почему злится Артемий Лебедев
Сравниваем 44-ФЗ и 223-ФЗ: таблица для чайников
Существенные условия контракта по 44-ФЗ: что к ним относится и можно ли их изменять?
Что изменилось в закупках в конце мая: обзор Постановлений Правительства
Как проходят закупки у СМП по 223-ФЗ и 44-ФЗ
Как оплатить неустойку по 44-ФЗ
В каких случаях указывать и подтверждать страну происхождения товара по 44-ФЗ?
Переторжка по 44-ФЗ и 223-ФЗ: особенности, процедура проведения

ИНН: 2464008420 / КПП: 246401001

Как заказчики злоупотребляли своими правами
«Зачем потеть и страдать, затачивая техзадание под своего подрядчика?» — подумал как-то заказчик и обратился к компьютерщикам.
Заказчик разместил аукцион на ремонтные работы. Сроки выполнения работ — нереальные. Стоит ли участвовать?
Заказчик не платит
Топ-5 ловушек заказчика в техзадании
Как отличить убытки от неустойки
Контракт исполнен, а оплаты нет — знакомая ситуация?
Любовь заказчика к ПДФ (pdf)
Может ли заказчик поменять техзадание после публикации закупки?
Топ-5 ловушек заказчика в документации
Кто такие государственные заказчики
Ошибки заказчика и обжалование действий заказчика
Общение с заказчиками
Может ли поставщик увидеть заявки конкурентов?
Права поставщика, о которых молчат заказчики
ФАС в шоке: новое нарушение госзаказчиков
Об исчезновении строительства детского сада.
Положение о закупках по 223-ФЗ: содержание, структура, примеры

При прокрутке вниз Вы можете получить очень полезную информацию, подобранную специально для Вас нашей программой. А также самые интересные и актуальные статьи о тендерах и закупках, которые мы подобрали для Вас на просторах интернета.

Copyright © 2008-2019, TenderGURU
Карта сайта. Календарь.
Все права защищены. Полное или частичное копирование запрещено.
При согласованном использовании материалов сайта TenderGURU.ru необходима гиперссылка на ресурс.
Электронная почта: info@tenderguru.ru
Многоканальный телефон 8-800-555-89-39
с любого телефона из любого региона для Вас звонок бесплатный!

Портал отображает информацию о закупках, публикуемых в сети интернет
и находящихся в открытом доступе, и предназначен для юрлиц и индивидуальных предпринимателей,
являющихся участниками размещения государственного и коммерческого заказа. Сайт использует Cookie, которые нужны для авторизации пользователя.
На сайте стоят счетчики Яндекс.Метрика, Google Analytics и LiveInternet,
которые нужны для статистики посещения ресурса.

Недавно мы открыли страницы соцсетях!
Присоединяйтесь и следите за новостями:

Наш новый канал в Telegram https://t.me/tenderguru_ru

источник

+7 (499) 346-74-93
+7 (800) 200-74-93 БЕСПЛАТНО ПО РОССИИ

+7 (800) 200-74-93 Бесплатно по России

Каталог продукции
Инжиниринг
Валидация
Сервис
Собственное производство
Наши лаборатории
Научно-образовательный центр
Трансфер технологий

DEFAULT_VALUE] => ) [manufacturer] => Array ( [ID] => 7 [TIMESTAMP_X] => 2014-07-29 12:35:13 [IBLOCK_ID] => 1 [NAME] => Производитель [ACTIVE] => Y [SORT] => 500 [CODE] => manufacturer [DEFAULT_VALUE] => [PROPERTY_TYPE] => E [ROW_COUNT] => 1 [COL_COUNT] => 30 [LIST_TYPE] => L [MULTIPLE] => N [XML_ID] => [FILE_TYPE] => [MULTIPLE_CNT] => 5 [TMP_ID] => [LINK_IBLOCK_ID] => 2 [WITH_DESCRIPTION] => N [SEARCHABLE] => N [FILTRABLE] => N [IS_REQUIRED] => Y [VERSION] => 1 [USER_TYPE] => [USER_TYPE_SETTINGS] => [HINT] => [PROPERTY_VALUE_ID] => 409 [VALUE] => 236 [DESCRIPTION] => [VALUE_ENUM] => [VALUE_XML_ID] => [VALUE_SORT] => [

DEFAULT_VALUE] => ) [paramsInText] => Array ( [ID] => 13 [TIMESTAMP_X] => 2014-08-04 12:50:00 [IBLOCK_ID] => 1 [NAME] => Параметры товара [ACTIVE] => Y [SORT] => 500 [CODE] => paramsInText [DEFAULT_VALUE] => [PROPERTY_TYPE] => S [ROW_COUNT] => 1 [COL_COUNT] => 30 [LIST_TYPE] => L [MULTIPLE] => N [XML_ID] => [FILE_TYPE] => [MULTIPLE_CNT] => 5 [TMP_ID] => [LINK_IBLOCK_ID] => 0 [WITH_DESCRIPTION] => N [SEARCHABLE] => N [FILTRABLE] => N [IS_REQUIRED] => N [VERSION] => 1 [USER_TYPE] => HTML [USER_TYPE_SETTINGS] => Array ( [height] => 200 ) [HINT] => [PROPERTY_VALUE_ID] => [VALUE] => [DESCRIPTION] => [VALUE_ENUM] => [VALUE_XML_ID] => [VALUE_SORT] => [

DEFAULT_VALUE] => ) [bestOffer] => Array ( [ID] => 70 [TIMESTAMP_X] => 2014-08-29 09:59:41 [IBLOCK_ID] => 1 [NAME] => Лучшее предложение [ACTIVE] => Y [SORT] => 500 [CODE] => bestOffer [DEFAULT_VALUE] => [PROPERTY_TYPE] => L [ROW_COUNT] => 1 [COL_COUNT] => 30 [LIST_TYPE] => L [MULTIPLE] => N [XML_ID] => [FILE_TYPE] => [MULTIPLE_CNT] => 5 [TMP_ID] => [LINK_IBLOCK_ID] => 0 [WITH_DESCRIPTION] => N [SEARCHABLE] => N [FILTRABLE] => N [IS_REQUIRED] => N [VERSION] => 1 [USER_TYPE] => [USER_TYPE_SETTINGS] => [HINT] => [PROPERTY_VALUE_ID] => [VALUE] => [DESCRIPTION] => [VALUE_ENUM] => [VALUE_XML_ID] => [VALUE_SORT] => [VALUE_ENUM_ID] => [

DEFAULT_VALUE] => ) [inStock] => Array ( [ID] => 71 [TIMESTAMP_X] => 2014-08-29 09:59:41 [IBLOCK_ID] => 1 [NAME] => Есть на складе [ACTIVE] => Y [SORT] => 500 [CODE] => inStock [DEFAULT_VALUE] => [PROPERTY_TYPE] => L [ROW_COUNT] => 1 [COL_COUNT] => 30 [LIST_TYPE] => L [MULTIPLE] => N [XML_ID] => [FILE_TYPE] => [MULTIPLE_CNT] => 5 [TMP_ID] => [LINK_IBLOCK_ID] => 0 [WITH_DESCRIPTION] => N [SEARCHABLE] => N [FILTRABLE] => N [IS_REQUIRED] => N [VERSION] => 1 [USER_TYPE] => [USER_TYPE_SETTINGS] => [HINT] => [PROPERTY_VALUE_ID] => [VALUE] => [DESCRIPTION] => [VALUE_ENUM] => [VALUE_XML_ID] => [VALUE_SORT] => [VALUE_ENUM_ID] => [

DEFAULT_VALUE] => ) [documents] => Array ( [ID] => 74 [TIMESTAMP_X] => 2015-07-16 10:58:43 [IBLOCK_ID] => 1 [NAME] => Документация [ACTIVE] => Y [SORT] => 500 [CODE] => documents [DEFAULT_VALUE] => [PROPERTY_TYPE] => F [ROW_COUNT] => 1 [COL_COUNT] => 30 [LIST_TYPE] => L [MULTIPLE] => Y [XML_ID] => [FILE_TYPE] => [MULTIPLE_CNT] => 5 [TMP_ID] => [LINK_IBLOCK_ID] => 0 [WITH_DESCRIPTION] => Y [SEARCHABLE] => N [FILTRABLE] => N [IS_REQUIRED] => N [VERSION] => 1 [USER_TYPE] => [USER_TYPE_SETTINGS] => [HINT] => [PROPERTY_VALUE_ID] => [VALUE] => [DESCRIPTION] => [VALUE_ENUM] => [VALUE_XML_ID] => [VALUE_SORT] => [

DEFAULT_VALUE] => ) [pdf] => Array ( [ID] => 81 [TIMESTAMP_X] => 2016-08-26 12:41:46 [IBLOCK_ID] => 1 [NAME] => PDF [ACTIVE] => Y [SORT] => 500 [CODE] => pdf [DEFAULT_VALUE] => [PROPERTY_TYPE] => F [ROW_COUNT] => 1 [COL_COUNT] => 30 [LIST_TYPE] => L [MULTIPLE] => N [XML_ID] => [FILE_TYPE] => [MULTIPLE_CNT] => 5 [TMP_ID] => [LINK_IBLOCK_ID] => 0 [WITH_DESCRIPTION] => Y [SEARCHABLE] => N [FILTRABLE] => N [IS_REQUIRED] => N [VERSION] => 1 [USER_TYPE] => [USER_TYPE_SETTINGS] => [HINT] => [PROPERTY_VALUE_ID] => [VALUE] => [DESCRIPTION] => [VALUE_ENUM] => [VALUE_XML_ID] => [VALUE_SORT] => [

Оптический диапазон — 2 светофильт-ра — 630 нм и 525 нм.
Линейный диапазон — от 0.000 до 2.500 опт. пл.
Сканирование фореграммы — автоматическое.
Разрешающая способность ± 0.001 опт. пл.
Питание — 220 В, 50 Гц.
Мощность — 75 Вт.
Габариты — 41 х 34 х 18 см.
Масса — 8,25 кг.

Scanion (Сканион) — система для проведения микрозонального электрофореза на ацетат-целлюлозных мембранах для определения фракций белков сыворотки крови, липопротеинов, гемоглобина и изоферментов, состоящая из автоматизированного денситометра, камеры для разгонки и блока питания с регулируемым напряжением, таймером и показателем силы тока.

Денситометр предназначен для сканирования ацетат-целлюлозных или агарозных пластин в проходящем свете. Имеет встроенный термопринтер. Возможна передача данных на внешний компьютер через стандартный порт RS232. В памяти прибора хранится до 9 программ, открытых для программирования, и 44 наименования фракций электрофоретических разгонок.

На принтере распечатывается денситограмма, которая потом может быть отредактирована по Вашему усмотрению. Пересчёт всех значений при корректировке — автоматический.

Прибор идеально подходит для лабораторий районных городских и сельских поликлиник с загрузкой до 100 анализов в день. Возможна работа на реактивах других компаний.

Электрофоретическая камера рассчитана на проведение электрофореза одновременно на 3-х ацетат-целлюлозных мембранах по 4-8 образцов на каждой. Предусмотрена возможность одновременного подключения 2-х электрофоретических камер.

источник

загрузка до 144 тестов за смену

Система электрофореза на ацетат-целлюлозных мембранах SCANION

ИСТОЧНИК ПИТАНИЯ КАМЕРЫ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЙ
Основные технические характеристики:
Источник питания работает от сети питания 220 В, частотой 50 Гц, при этом сохраняет работоспособность при изменении напряжения питания в диапазоне от 198 до 242 В.
Установившееся значение потребляемой мощности при напряжении питания 220 В частотой 50 Гц, не более 35 ВА.
Источник питания обеспечивает следующие характеристики:
Выходное напряжение: от 0 до 300 В постоянного тока с шагом установки 1 В;
Выходной ток: от 0 до 50 мА;
Таймер от 0 до 120 минут;
Индикацию установленных параметров;
Отключение выходного напряжения, в случае перегрузки (выходного тока более 50мА);
Габаритные размеры источника (Длина х Ширина х Высота), мм не более: 330 х 240 х150
Масса источника питания не более 5 кг.
Время установления рабочего режима источника не более 1 мин.
Источник обеспечивает продолжительный режим работы не менее 8 часов в сутки.

Комплектность поставки камеры

Таблица 1 Наименование	Обозначение документа	Количество, шт.
Камера электрофоретическая	ХСДИ.941412.001-02	1
Мостик для установки мембраны	—	3
Шнур питания камеры	—	1
Принадлежности:
Аппликатор для нанесения 4 проб на мембрану	—	1
Аппликатор для нанесения 8 проб на мембрану	—	1
Мембраны для электрофореза белков	—	3
Эксплуатационная документация:
Руководство по эксплуатации камеры электрофоретической	ХСДИ.941412.001-02 РЭ	1

КАМЕРА ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКАЯ
Основные технические характеристики:
Камера работает от источника питания, входящего в комплект поставки, с выходным напряжением от 0 до 300 В постоянного тока.
Камера электрофоретическая имеет возможность:
Одновременной установки не менее трех мостиков мембран
Вмещения не менее 500 мл буферного раствора без образования токопроводящего слоя между электродами.
Габаритные размеры (Длина х Ширина х Высота), не более мм: 350 х 220 х 120
Масса не более 2 кг.
Время установления рабочего режима камеры не более 1 мин.
Камера обеспечивает продолжительный режим работы не менее 8 часов в сутки.

СКАНЕР ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММ
Основные технические характеристики:
Установившееся значение потребляемой мощности при напряжении питания (220 В) частотой 50 Гц не более 40 ВА.
Габаритные размеры сканера (Длина х Ширина х Высота), мм не более: 450 х 400 х 200,
Масса сканера не более 10 кг.
Сканер имеет встроенный термопринтер, обеспечивающий печать результатов измерения в виде процентного содержание фракций белков сыворотки крови и спектра их распределения (гистограмма).
Время измерения и печати результатов не более 60 секунд.
Сканер обеспечивает возможность распознавания и измерения до 5 фракций белков, %:
-Альбумин
-α1-глобулин
-α2-глобулин
-β-глобулин
-γ-глобулин

источник

Изобретение относится к медицинской технике и может быть использовано для проведения электрофореза. В устройстве держатель состоит из двух частей П-образной формы. Нижняя часть установлена на перегородку кюветы и имеет буртики. На нижнюю часть натянута мембрана. Мембрана крепится буртиками верхней части держателя. Верхняя часть имеет ряд окон и содержит направляющие прорезей для фиксированного прохождения аппликатора. Электроды выполнены из титана и имеют Г-образную форму. Положительный электрод покрыт платиной. Верхняя часть держателя имеет валики с приливами крепления мембран. Аппликатор может быть выполнен с зубцами для нанесения проб и с параллельными несущими поверхностями, расположенными с воздушным зазором, а часть аппликаторов подвергнута электроэрозии или имеет поперечные или продольные риски-канавки. Устройство снабжено основанием, имеющим лунки для внесения проб. Держатель содержит два ряда штырей. Один буртик выполнен неподвижным, а второй подвижным и имеет две пружины и направляющие прорези для перемещения. Устройство снабжено пробойником для нанесения на мембрану отверстий. Устройство позволяет использовать все виды носителей: агаровые и агарозные гели, пленочные, бумажные, ацетатцеллюлозные мембраны. Устройство надежно, просто, экономично. 2 с. и 4 з.п. ф-лы, 17 ил.

Изобретение относится к медицинской технике и может быть использовано во всех видах медицинских учреждений.

Известны устройства для проведения электрофореза в гелевых и на мембранных носителях (в дальнейшем мембранах) по патентам, авторским свидетельствам, свидетельствам на промышленные образцы и ГОСТам, выданным на имя Соболева В. И. : патент N 1780513 от 20.11.90 г. «Устройство для проведения электрофореза в геле», А. С. N 967470 от 26.04.77 г., А.С. N 997672 от 23.10.79 г. , А.С. N 1517938 от 10.06.87 г., Свидетельства на промобразцы N 11918, N 11919, N 11920 от 30.04.80 г., ГОСТ 27153-86 «Приборы и аппараты медицинские для обработки пробы методами электрофореза».

Все они содержат ряд камер, каждая из которых включает кювету с перегородкой, разделяющей ее на две полости для буфера, на которой размещен держатель с мембраной или гелем, и крышку с электродами. Мембраны и гель служат для нанесения на них проб, а также для электрического соединения анодно-катодного пространства через буфер.

Однако с помощью данных устройств нельзя проводить ряд диагностических биохимических методик, указанных ниже.

Для осуществления новых методик необходимы новые конструктивные решения с применением мембран, которые бы быстро, просто и надежно крепились в камере, позволяли быстро и фиксированно наносить пробы в микроколичествах вещества, быстро подключать камеру к источнику питания и получать высококачественные результаты при проведении биохимических методик.

Прототипом заявляемого устройства является патент N 1780513 от 20 ноября 1990 г. Устройство содержит ряд камер, каждая из которых включает кювету с перегородкой, разделяющей ее на две полости для буфера, на которой размещен держатель геля с рабочей поверхностью, с двух сторон от которой выполнены параллельные вертикальные прорези, а также крышку с электродами. На держателе с двух сторон от рабочей поверхности выполнены планки, верхняя поверхность которых параллельна рабочей поверхности держателя. На планки накладывается, по крайней мере, одна ацетатцеллюлозная мембрана, концы которой введены в снабженные прижимами вертикальные прорези держателя со стороны ее нерабочей поверхности.

Устройство также снабжено шаблоном с двумя параллельными буртиками, соприкасающимися с мембраной и верхними поверхностями планок. Шаблон имеет ряд окон, две стороны каждого из которых выполнены с выемками для нанесения проб.

Данное устройство очень удобно при креплении одиночных полосок из мембраны шириной 28 мм при необходимости исследовать небольшое количество проб, но неудобно при креплении мембраны стандартного размера 180×90 мм. Поэтому недостатком данного устройства является то, что время, затрачиваемое на крепление шести полосок мембран, составляет 12-15 минут, в то время как время, затрачиваемое на крепление мембраны в заявляемом устройстве, составляет 0,5 мин. Значительно уменьшается время на другие процедуры.

Целью предлагаемого устройства является проведение следующих методик: — электрофоретическое фракционирование белков и липопротеидов сыворотки крови, — электрофоретическое разделение изоферментов лактатдегидрогеназы и щелочной фосфотазы, — определение однородности препаратов -глобулинов сыворотки крови, — определение однородности осажденной -липопротеидной фракции.

Все эти методики отработаны на заявляемом устройстве на кафедре биохимии С-Петербургской санитарно-гигиенической Академии.

Предлагаемые устройства и методики необходимы для диагностики липидного обмена, возникающего при ишемической болезни сердца и атеросклерозе, злокачественных опухолях, аллергических заболеваниях, острых и хронических воспалительных процессах на ранних стадиях заболеваний.

Данные устройства также необходимы при определении чистоты при изготовлении и использовании -глобулиновых препаратов, например, на станциях переливания крови.

Поставленные цели достигаются тем, что в предлагаемом устройстве держатель состоит из двух частей П-образной формы, нижняя из которых установлена на перегородку кюветы и имеет по всей длине держателя не менее двух параллельных буртиков, при этом на нижнюю часть натянута одна или несколько мембран. Они крепятся буртиками верхней части держателя, имеющей ряд окон и содержащей один или несколько рядов направляющих прорезей для фиксированного прохождения аппликатора, а электроды выполнены из титана и имеют Г-образную форму, причем положительный электрод покрыт платиной.

Верхняя часть держателя может быть снабжена не менее чем двумя валиками с приливами для натяжения и крепления мембран.

Аппликатор выполнен с зубцами для нанесения проб, которые расположены с двух противоположных сторон, а их торцы подвергнуты электроэрозии или имеют поперечные или продольные риски-канавки.

Устройство снабжено основанием, имеющим лунки для внедрения проб (сывороток крови), соизмеримые с шагом и размером зубцов аппликатора, предлагаемого выше.

Устройство также содержит аппликатор, который имеет, по крайней мере, две несущие параллельные поверхности, расположенные одна относительно другой с воздушным зазором, при этом поверхности для соприкосновения с пробой подвергнуты электроэрозии или имеют поперечные или продольные риски-канавки.

Предлагаемое устройство для проведения электрофореза, как самостоятельный независимый вариант, содержит ряд камер, каждая из которых включает кювету с перегородкой, разделяющей ее на две полости для буфера, на которой размещен держатель с ацетатцеллюлозной мембраной, и крышку с электродами. Держатель содержит не менее двух рядов штырей, расположенных по всей длине буртика, при этом один буртик выполнен неподвижным, а второй — подвижным и имеет, по крайней мере, две пружины и направляющие прорези для перемещения подвижного буртика со штырями в направлении неподвижного буртика, причем устройство снабжено пробойником для нанесения на мембрану отверстий, соответствующих наименьшему расстоянию между двумя рядами штырей.

Предлагаемое устройство для проведения электрофореза (в дальнейшем «устройство») содержит одну или несколько электрофоретических камер и блок питания (на фиг. не показан).

На фиг.1 изображена камера для проведения электрофореза. На фиг.2 и 3 — нижняя часть держателя, на фиг.4 и 5 — верхняя часть держателя, на фиг.6 — электрод, на фиг.7 и 8 — верхняя часть держателя с валиками, на фиг.9 и 10 — держатель со штырями, на фиг.11 и 12 — аппликатор, на фиг.13 и 14 — основание, на фиг.15 и 16 — аппликатор.

Камера (фиг.1) содержит кювету 1 с перегородкой 2, разделяющей ее на две полости для буфера 3, на которой размещен держатель 4 с ацетатцеллюлозной мембраной 6. Держатель состоит из двух частей П-образной формы, нижняя 4, которая установлена на перегородку кюветы 2, имеет по всей длине держателя не менее двух параллельных буртиков 5. На нижнюю часть натянута одна или несколько мембран 6, которые крепятся буртиками 8 верхней части держателя 7. Верхняя часть держателя имеет ряд окон 9 и содержит один или несколько рядов направляющих прорезей 10 для фиксированного прохождения аппликатора 20 (фиг. 11). Электроды 12 (фиг.1 и 6) имеют Г-образную форму, причем положительный электрод покрыт платиной. Верхняя часть держателя (фиг.7 и 8) снабжена не менее чем двумя валиками 13 с приливами 14 для натяжения и крепления мембран 6.

Аппликатор 20 выполнен с зубцами 21 для нанесения проб, которые расположены с двух противоположных сторон, а их торцы подвергнуты электроэрозии или имеют поперечные или продольные риски-канавки. Зубцы 22 служат для фиксации аппликатора в прорези 10 верхней части держателя.

Основание 23 (фиг.13 и 14) имеет лунки 24 для внесения в них проб, соизмеримые с шагом и размером зубцов аппликатора 20.

Аппликатор 25 (фиг.15 и 16) имеет две несущие параллельные поверхности 26, расположенные одна относительно другой с воздушным зазором, при этом поверхности для соприкосновения с пробой подвергнуты электроэрозии или имеют поперечные или продольные риски-канавки.

Устройство для проведения электрофореза по п. 6 формулы содержит ряд камер, каждая из которых включает кювету 1 (фиг.1) с перегородкой 2, разделяющей ее на две полости для буфера 3. На перегородке размещен держатель 15 (фиг. 9 и 10) с ацетатцеллюлозной мембраной и крышка с электродами 11 (фиг. 1). Держатель содержит не менее двух рядов штырей 16 (фиг.9), расположенных по всей длине буртика, при этом один буртик 17 выполнен неподвижным, а второй 18 подвижным и имеет, по крайней мере, две пружины 19 и направляющие прорези 20 для перемещения подвижного буртика со штырями в направлении неподвижного буртика. Устройство снабжено пробойником (не показан) для нанесения на мембрану отверстий, соответствующих наименьшему расстоянию между двумя рядами штырей.

П-образная форма нижней 4 и верхней 7 частей держателя придает П-образную форму мембране 6, в результате чего мембрана обеспечивает электрический контакт между двумя буферно-электродными пространствами 3 кюветы 1.

На нижнюю часть держателя 4 вручную натягивается предварительно намоченная в буфере мембрана 6, которая прилипает к боковым и нижним стенкам (как показано на фиг.3).

Далее нижняя часть держателя 4 с мембраной 6 устанавливается на перегородку 2 кюветы 1. Сверху устанавливается верхняя часть держателя 7. При этом буртики 8 верхней части 7 и буртики 5 нижней части 4 накладываются друг на друга и удерживают мембрану 6 до завершения электрофореза. Благодаря этому мембрана находится в горизонтальном натянутом состоянии в воздухе. Это обеспечивает ее рабочее состояние, ибо как только влажная мембрана ляжет на горизонтальную поверхность нижней части, электрический ток в этом случае не потечет полностью через мембрану, а частично потечет в пространстве между мембраной и поверхностью держателя за счет капиллярности. В этом случае фракционирование пробы не произойдет или будут большие искажения в электрофореграмме за счет искажения электрических полей.

Окна 9 верхней части держателя необходимы для визуального наблюдения момента соприкосновения аппликатора с мембраной при нанесении пробы, чтобы исключить повреждение мембраны. Направляющие прорези 10 служат для фиксированного нанесения проб на мембрану, так как проба по решению оператора может наноситься на одно и то же место многократно (от одного до трех раз). Этот момент очень важный и составляет также преимущество предлагаемой конструкции.

Целью исследований была разработка серийнопригодных электродов для электрофореза, снижение их стоимости, повышение механической прочности с сохранением устойчивости к агрессивным средам, такой же, как у платиновых электродов.

При выборе материалов электродов для электрофореза исходили из того, что электрод должен обладать малым поляризационным сопротивлением, быть серийнопригодным, механически прочным, при этом должен быть устойчив в агрессивной кислотно-щелочной среде при воздействии ионизации и электролиза.

Известно, что минимальным поляризационным сопротивлением обладают платина, палладий и титан. Электроды с малым поляризационным сопротивлением позволяют уменьшить нагрев электродов и буфера, благодаря чему можно снизить разрушительное воздействие электролиза на электроды и создать более благоприятные условия для электрофореза. Электроды с малым поляризационным сопротивлением позволяют уменьшить энергопотребление и повысить КПД прибора в целом.

Повышение серийнопригодности, в том числе экономичности, электродов из титана по сравнению с электродами из платины и палладия объясняется тем, что титан в 400 раз дешевле платины и в 100 раз дешевле палладия.

Электроды из титана обладают значительно большей механической прочностью по сравнению с электродами из платины и палладия. Кроме того, диаметр электродов и их длина могут быть увеличены до необходимых конструктивных размеров вследствие сравнительной дешевизны материала. Расчеты показывают, что конструктивно диаметр электродов должен быть в пределах от 4 мм до 10 мм, что подтвердилось в работающих камерах.

Кроме того, титан позволяет разработать электроды любых конструктивных форм: круглые из прутка, пластинчатые, фигурные и т.д.

В предлагаемом устройстве применены электроды Г-образной формы из прутка. Г-образная форма позволяет изготавливать их из пластины.

Желательно при электрофорезе применять электроды большего диаметра, так как это уменьшает плотность электрического тока при контакте электродов с буфером вследствие того, что при незначительном увеличении диаметра электрода значительно увеличивается рабочая площадь электрода: S = DL, где S — рабочая площадь электрода, D — диаметр электрода, L — рабочая длина электрода.

С уменьшением плотности электрического тока уменьшается нагрев электродов и буфера. Это особенно важно при больших токах. Так при использовании в качестве носителя геля электрический ток в данной камере может достигать 200 мА.

Применение в качестве носителя мембран на порядок позволяет снизить энергопотребление. Так при использовании полоски из ацетатцеллюлозной мембраны шириной 26 мм величина электрического тока составляет (1,3 — 1,5) мА. При ширине 90 мм — 7,2 мА, при использовании полной стандартной мембраны размером 180×90 мм ток составляет (15-20) мА.

До настоящего времени в электрофоретических камерах в качестве электродов применялась платиновая проволока диаметром (0,1 — 0,3) мм, которая присоединялась к токоведущему штырю при помощи винта. Место соединения за счет электролиза быстро окисляется, разрушается, что влияет отрицательно на процесс электрофореза, так как в процессе работы сильно изменяется полное сопротивление контакта:
где R_a — активное сопротивление контакта,
X_L — индуктивное сопротивление,
X_C — емкостное сопротивление,
Z — полное сопротивление контакта.

В этом случае камера работает не надежно и быстро выходит из строя.

Предлагаемая Г-образная форма электрода позволяет исключить какие-либо механические соединения электрода с токоведущими деталями, что значительно повышает долговечность электродов и камеры в целом и обеспечивает электрофорез со стабильными параметрами.

Платинирование электродов позволяет исключить их коррозию и эрозию. Опыты показывают, что при использовании в качестве электродов чистого титана быстрей разрушается положительный электрод, причем, чем больше электрический ток, тем больше разрушение. Поэтому можно платинировать только положительный электрод, что экономит платинохлористоводородную кислоту при нанесении платинового покрытия.

Торцы аппликаторов подвергнуты электроэрозии или имеют поперечные или продольные риски-канавки, так же как две несущие параллельные поверхности, расположенные одна относительно другой с воздушным зазором служат для лучшей смачиваемости и захвата пробы. Аппликатор 20 позволяет вместе с верхней частью держателя фиксированно через прорези 10 наносить на старт три или четыре пробы одним и тем же аппликатором. Если придавать к устройству аппликаторы разных толщин, то можно наносить разные количества вещества. Обыкновенно к устройству дается два аппликатора толщиной 0,5 мм и 1 ми.

Основание 23 (фиг. 13 и 14) служит для внесения пипеткой или дозатором сывороток крови в лунки 24. Затем проба микроколичествами вещества переносится аппликатором на мембрану. Микроколичества вещества позволяют получать более четкие фракции. При разном количестве вносимого на мембрану вещества позволяют проводить количественный электрофорез.

При использовании устройства для проведения электрофореза по п.6 формулы держатель берется в левую руку, при нажатии большим пальцем на подвижный буртик 18 расстояние между двумя рядами штырей уменьшается. Другой рукой предварительно перфорированная мембрана надевается на штыри. При снятии нажатия расстояние между штырями увеличивается на 1,5 мм, но этого достаточно, чтобы мембрана натянулась.

Устройство работает следующим образом.

1. В устройстве используется ацетатцеллюлозная мембрана «ВЛАДИПОР » МФА-МА N 4 или N 5, которая имеет стандартные размеры 90×90 мм и 180×90 мм ТУ 6-05-1903-87.

Таким образом, устройство позволяет использовать стандартную мембрану того и другого размера без разрезки, что уменьшает время на пробоподготовку. Держатели позволяют закреплять одну мембрану 180×90 мм или две мембраны 90×90 мм. При меньшем количестве проб устройство позволяет закреплять полоски мембран любой ширины, которые режут при длине 90 мм.

2. Используют буфер следующего состава:
— Барбитал натрия — 12,75 г.

— Барбитал — 2,3 г заливают дистиллированной водой до 1000 мл и ставят в водяную баню.

3. Готовят 7% раствор уксусной кислоты, для чего 7 мл ледяной уксусной кислоты разводят дистиллированной водой до 100 мл.

4. Для окрашивания белков готовят 0,25% раствор амидочерного, для чего 250 мг амидочерного растворяют в 100 мл 7% уксусной кислоты.

5. Для окрашивания липопротеидов используют судан — черный судан 3 или судан 4 (красный цвет). Небольшое количество красителя, на кончике скальпеля помещается в 5 мл изопропилового спирта. После полного растворения красителя добавляется 10 мл 5% NaOH.

6. Для просветления ацетатцеллюлозных мембран применяют раствор, состоящий из метанола — 87 мл, ледяной уксусной кислоты — 12 мл и глицерина — 1 мл. Данный раствор пригоден только при фракционировании белков.

Порядок работы
1. В каждую часть 3 кюветы 1 заливают буфер от 45 мл до 50 мл.

2. Увлажняют мембрану, поместив ее на 1-3 мин в буфер.

3. Вынимают мембрану из буфера и кладут между двумя листами фильтровальной бумаги.

4. Мембрану помещают в держатель, используя один из четырех способов крепления. Держатель с мембраной устанавливают на перегородку 2 кюветы 1.

5. В лунки 24 основания 23 дозатором или пипеткой вносится исследуемая сыворотка.

6. С основания 23 аппликатором 20 снимается проба и наносится на мембрану через прорези 10 верхней части держателя. Аппликатор 25 используется только с держателем 15, тогда как аппликатор 20 используется со всеми видами держателей.

7. Кювета с буфером, держателем и мембраной закрывается крышкой и сразу подключается к источнику питания.

8. На камеру подается постоянное стабилизированное напряжение, величина которого устанавливается в зависимости от проводимой методики.

При фракционировании белков и липопротеидов сыворотки крови U = (100-150) В, при времени T = 20-30 мин.

При фракционировании лактатдегидрогеназы и щелочной фосфотазы U = 270 В, при времени T = 50 мин.

При определении однородности препаратов -глобулинов сыворотки крови U = (100-200) В, при времени T = 30-40 мин.

9. После окончания электрофореза мембрану помещают в фиксаж на 10 мин, а затем в окрашивающий раствор. Буфер из обеих частей кюветы сливают в одну емкость для повторного использования.

10. Для оценки полученных фракций при помощи денситометрирования мембрану помещают в глицерин или обрабатывают следующим образом. Мембрану промывают в воде в течение (10-15) мин. Остатки влаги удаляют фильтровальной бумагой. Помещают в этиловый спирт на (2-3) мин для окончательного вытеснения воды. Затем мембрану кладут на стекло, выдавив из-под нее воздух, помещают в осветляющую жидкость на (3-4) мин. Затем мембрану помещают в термостат при T = 100 o C на (4-5) мин.

Диагностическая ценность методов и предлагаемых устройств.

1. Белки сыворотки крови разделяются на пять фракций: дальше всех от линии старта удаляется наиболее значительная фракция -альбумина, затем следуют глобулины: ₁, ₂, , .

Определение фракционного состава белков представляет широкие диагностические возможности, позволяя выявлять изменения в составе белков крови, связанные с различными заболеваниями, такими как злокачественные опухоли, аллергические заболевания, острые и хронические воспалительные процессы.

2. Липопротеиды разделяются на три фракции: наиболее удаленная от старта фракция -липопротеидов (соответствует зоне ₂-глобулинов), затем фракция пре —-липопротеидов (соответствует зоне -глобулинов) и фракция -липопротеидов. В зависимости от их соотношения можно установить тип имеющейся дислипопротеидемии.

Определение фракционного состава липопротеидов дает возможность выявить нарушения липидного обмена, возникающие при атеросклерозе, ишемической болезни сердца на ранних стадиях.

Осуществление цели изобретения
1. Основным преимуществом заявляемого устройства является осуществление тех диагностических биохимических методик, которые представлены выше.

2. Улучшено качество крепления мембран, уменьшено время, затрачиваемое на их крепление.

3. Устройство позволяет использовать любой из четырех способов крепления мембран, что позволяет осуществлять воспроизводство биохимических методик независимо от количества проб, опыта работы оператора, его возраста, профессиональных привычек.

4. Повышена долговечность устройства за счет предлагаемой конструкции камеры и электродов, устройство просто и надежно в эксплуатации.

5. В устройстве могут применяться все виды используемых в настоящее время носителей: агаровые, агарозные, пленочные, бумажные, в т.ч. ацетатцеллюлозные мембраны.

Возможность автоматизации процесса
Предлагаемое устройство, электрофоретическая камера, подключается к источнику питания простым вдвижением камеры в разъем. Напряжение на камеру подается одним поворотом рукоятки таймера. Камера отключается автоматически.

1. Устройство для проведения электрофореза, содержащее ряд камер, каждая из которых включает кювету с перегородкой, разделяющей ее на две полости для буфера, на которой размещен держатель с ацетатцеллюлозной мембраной, и крышку с электродами, отличающееся тем, что держатель состоит из двух частей П-образной формы, нижняя из которых установлена на перегородку кюветы и имеет по всей длине держателя не менее двух параллельных буртиков, при этом на нижнюю часть натянута одна или несколько мембран, которые крепятся буртиками верхней части держателя, имеющей ряд окон и содержащей один или несколько рядов направляющих прорезей для фиксированного прохождения аппликатора, а электроды выполнены из титана и имеют Г-образную форму, причем положительный электрод покрыт платиной.

2. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что верхняя часть держателя снабжена не менее чем двумя валиками с приливами для натяжения и крепления мембран.

3. Устройство по п.1, отличающееся тем, что аппликатор выполнен с зубцами для нанесения проб, которые расположены с двух противоположных сторон, а их торцы подвергнуты электроэрозии или имеют поперечные или продольные риски-канавки.

4. Устройство по п. 1, отличающееся тем, что оно снабжено основанием, имеющим лунки для внесения проб, соизмеримые с шагом и размером зубцов аппликатора.

5. Устройство по п.1, отличающееся тем, что аппликатор имеет, по крайней мере, две несущие параллельные поверхности, расположенные одна относительно другой с воздушным зазором, при этом поверхности для соприкосновения с пробой подвергнуты электроэрозии или имеют поперечные или продольные риски-канавки.

6. Устройство для проведения электрофореза, содержащее ряд камер, каждая из которых включает кювету с перегородкой, разделяющей ее на две полости для буфера, на которой размещен держатель с ацетатцеллюлозной мембраной, и крышку с электродами, отличающееся тем, что держатель содержит не менее двух рядов штырей, расположенных по всей длине буртика. При этом один буртик выполнен неподвижным, а второй — подвижным и имеет, по крайней мере, две пружины и направляющие прорези для перемещения подвижного буртика со штырями в направлении неподвижного буртика, причем устройство снабжено пробойником для нанесения на мембрану отверстий, соответствующих наименьшему расстоянию между двумя рядами штырей.

источник