Электрофорез изоформ трансферрина sialo что это

Злоупотребление алкоголем является одной из основных причин низкой продолжительности жизни в РФ. От трети до более половины смертей мужчин трудоспособного возраста составляют прямые и непрямые алкогольные потери [1, 2]. Помимо анализа социально-экономических и психологических факторов большое значение имеет исследование алкоголизма, позволяющее выявить молекулярные механизмы развития заболевания и нарушений, связанных с злоупотреблением алкоголем. В настоящее время во всем мире проводится исследование диагностических маркеров потребления алкоголя. Их используют при профессиональной диспансеризации, при возврате водительского удостоверения, изъятого по причине вождения в состоянии алкогольного опьянения, при наблюдении за ходом лечения больных алкоголизмом, при подготовке к хирургическому вмешательству. Наиболее специфичным и перспективным из таких маркеров для клинической практики является карбон-дефицитный трасферрин (CDТ) [3]. Среди существующих методик выявления граждан, страдающих хроническим алкоголизмом, наиболее распространенными являются способы позволяющие проводить анкетирование. К ним относятся тесты: CAGE, AUDIT, Сетка LeGo. Они просты для заполнения больными, легко и быстро оцениваются врачом, и в наибольшей мере учитывают национальные особенности « российского менталитета» и отношение к алкоголю [4, 5, 6].

Мировой опыт свидетельствует, что краткое анкетирование и элементарный врачебный осмотр являются качественным диагностическим инструментарием. Необходимо дополнительное использование тестов, которые повышают вероятность распознавания хронической алкогольной интоксикации (ХАИ). В первую очередь к ним относятся биохимические анализы, определяющие повышение активности гамма-глутамилтранспептидазы (GGT), аминотрансферазы [7]. В последние годы для объективной лабораторной диагностики хронической алкогольной интоксикации применяют качественное и количественное определение маркера карбогидрат-дефицитного трансферрина (CDT) в сыворотке крови больного [8].

Среди маркеров потребления алкоголя наиболее специфичным является карбондефицитный траснферрин. Трансферрин-белок, переносящий в клетки всех тканей тела ионы железа при их абсорбции в кишечнике или высвобождении из эритроцитов. Различие изоформ трасферрина определяется гликозилированием. Основная фракция трансферрина представлена изоформной с 4 остатками сиаловой кислоты. При потреблении значительных количеств алкоголя (40-60 г в день на протяжении нескольких дней, или больших разовых доз) возрастает доля карбонгидрат-дефицитного трансферрина (CDT) –изоформ с двумя, одним остатком или полностью десиализированный трансферрин (0-форма). В норме фракция CDT не превышает 1.3 % – 1.7 %, тогда как при потреблении указанных количеств алкоголя уровень CDT превышает эти границы и может возрастать до 10-15 раз. Выбор данного маркера основан на его диагностической возможности отражать как раннее и скрытое злоупотребление алкоголем, так и обеспечивать мониторинг эффективности проводимой терапии посредством объективного отражения ремиссии или возникновения рецидива.

Цель работы заключалась в установлении диагностической значимости сравнительного определения маркеров хронического употребления алкоголя, методами капиллярного электрофореза и биохимического анализа при обследовании различных групп больных алкоголизмом.

Материалы и методы исследования

Исследование проведено на базе Московского научно-практического центре наркологии ДЗ города Москвы в группе мужчин, которое исключает влияние гендерных различий.

Клиническое исследование выполняли в группе больных состоящей из 250 пациентов в возрасте от 23 до 72 лет с установленным диагнозом хронический алкоголизм. Анализ сыворотки крови на содержание маркера карбогидрат-дефицитного трансферрина проводили в динамике, осуществляя забор венозной крови на 1-ый, 7, 14 и 21-ый день лечения. Контрольную группу составили 1000 здоровых доноров. Комплексная оценка больных хроническим алкоголизмом включали данные, о возраст, поле и длительности заболевания. Анализируемые группы пациентов были однородны по всем перечисленным выше характеристикам.

Для установления диагностической значимости маркеров хронического употребления алкоголем проводили определение в сыворотке крови пациентов изоформ гликозилированного трансферрина (CDT) и биохимические показатели содержания печеночных ферментов аланинаминотрансфераза (ALT), аспартатаминотрансфераза (АST), глутаминаминотранспептидазой (GGТ).

Кровь в количестве 5мл забирали в моноветы. Далее пробирки центрифугировали на центрифуге ELMI СМ-6М (Латвия) 5 мин., при скорости 3 тыс. об. мин. После чего сыворотку делили на аликвоты по 1,5 мл в пробирки eppendorf для определения содержания биохимических маркеров и трансферрина. Определение белка CDT проводили на приборе Minicap (Франция). Для определения биохимических маркеров показания крови ALT, AST и GGT по 1 мл сыворотки закапывали в кюветы биохимического анализатора HORIBA ABX Pentra 400 (Франция). Статистический анализ проводили стандартными методами с помощью пакета WinSTAT 2003.1, интегрированного в Excel. При оценке отношения шансов (OR) и значимости отличий частот по точному тесту Фишера использовали свободно распространяемый пакет программ WinPepi: http://www.brixtonhealth.com/pepi4windows.html

Результаты исследования и их обсуждение

При хроническом злоупотреблении алкоголя гликозилирование трансферрина нарушается, что приводит к изменению процентного соотношения его изоформ в сторону повышения уровня низкосиалированных вариантов, называемых также карбогидрат-дефицитными, или CDT. Патомеханизм повышения уровня CDT в ответ на хроническое злоупотребление алкоголем заключается, главным образом, в том, что этанол и/ или его метаболит – ацетальдегид влияют на синтез цепей N-гликанов в аппарате Гольджи, ингибируя активность галактозилтрансферазы и N-ацетилглюкозаминилтрансферазы и одновременно с этим повышая активность сиалидазы в плазматических мембранах печени. Этанол также вызывает дестабилизацию и снижение концентрации м-РНК ?-2,6-сиалилтрансферазы и снижение синтеза ?-2,6-сиалилтрансферазы, обусловленное снижением активности сиалилтрансферазы, и, как следствие, уменьшение сиалирования молекул трансферрина [3,8,9]. Нами были выполнены исследования, направленные на определение диагностической значимости результатов, полученные двумя независимыми методами при обследовании группы лиц с хронической алкогольной зависимостью. Определения маркера CDTпроводили в образцах крови в 1-й, 7, 14 и 21-й дни лечения. Для анализа на биохимические маркеры ALT, AST и GGT использовали образцы 1-й и 21-й дни. При анализе полученных усредненных результатов были выявлены зависимости, представленные на рис. 1, 2.

Как видно из рис. 1, концентрации CDT составляет в среднем 4,31 % при поступлении пациента, на 7 день лечения она уменьшается до 2,27 %. К 14 дню составляла 1,48 %, к 21 дню лечения 1,14 %. Полученные данные свидетельствуют о том, что при полном отказе от алкоголя у пациента происходит снижение концентрации белка и значение CDT приходит в норму за 2-3 недели.

Рис. 1. Зависимость значений CDT от времени

Рис. 2. Зависимость биохимических показателей от времени

На рис. 2 представлена динамика изменения биохимических маркеров. Концентрация ферментов с течением времени так же уменьшается. Однако, даже через 2-3 недели эти значения не нормализуются и остаются высокими. Полученные данные и их значения не позволяют в эти сроки подтвердить полный отказ пациента от алкоголя. Таким образом, сравнивая в динамике уменьшение числового ряда значений CDT и биохимических показателей, характеризующих содержание ферментов, можно заметить, что данные CDT являются более информативными по сравнению с такими маркерами, как ALT,AST и GGT. В отличие от содержания ферментов повышение гликозилированного трансферрина в наименьшей степени ассоциировано с органическим поражением печени или других органов (как алкогольного, так и неалкогольного генеза) или повышенным синтезом микросомальных ферментов. В отличие от других гликопротеинов, недостаток сиалирования изоформ трансферрина никак не связан с клиренсом печени или почек.

Проведены сравнительные исследования маркеров хронического злоупотребления алкоголем характеризующих изменения в содержании ферментов и гликозилированного трансферрина. При этом использовали методы биохимического анализа и капиллярного электрофореза. Установлено, что наиболее важными для диагностики ранних состояний алкоголизма являются данные определения CDT.

Таким образом, маркер CDT является универсальным диагностическим инструментом для реализации профилактической и медико-реабилитационной стратегии при заболеваниях зависимости от алкоголь-содержащих веществ. Ключевой составляющей при использовании маркера CDT является объективизация факта злоупотребления алкоголя методами лабораторной диагностики. Представленный маркер CDT на сегодняшний день является единственным маркером оценки хронической алкогольной нагрузки, имеющий опыт практического использования.

Результаты, полученные на основе анализа данных о пациентах с алкоголизмом, послужат основой для разработки стратегий мониторинга рисков, оптимальных терапевтических и профилактических стратегий, а также поиска новых фармакологических мишеней с применением новых методов диагностики такого социально значимого заболевания, как алкоголизм.

источник

Система автоматизированная для капиллярного электрофореза Minicap

В настоящее время выявляемость хронического злоупотребления алкоголем не превышает 20%. При этом избыточное потребление алкоголя зачастую служит первопричиной развития многих заболеваний и должно своевременно выявляться как в ЛПУ первичного звена, так и специализированными учреждениями наркологического профиля. В настоящее время наиболее специфичным показателем, отражающим хроническое злоупотребление алкоголем, признан карбогидрат-дефицитный трансферрин (CDT). Методика SEBIA позволяет разделять изоформы трансферрина, присутствующие в сыворотке обследуемого, и проводить качественную и количественную оценку уровня карбогидрат-дефицитных фракций. На основании полученных данных делается вывод о наличии или отсутствии у пациента хронической алкогольной нагрузки.

CDT – это лабораторный маркер, признанный международным медицинским сообществом в качестве наиболее специфичного показателя хронического злоупотребления алкоголем.

С биохимической точки зрения термин «CDT» означает совокупность трех углевод-дефицитных изоформ (асиало-, моносиало- и дисиало) белка трансферрина – основного переносчика ионов железа Fe 3+ в организме человека.

Система автоматизированная для капиллярного электрофореза Capillarys-2 Flex Piercing

В норме содержание асиало- и дисиало- изоформ трансферрина не превышает 1,3% от общей концентрации трансферрина крови. Моносиалотрансферрин в сыворотке здоровых лиц не обнаруживается вовсе.

Хроническое употребление высоких и опасных доз алкоголя приводит к повышению концентрации карбогидрат-дефицитных изоформ (>1,3%), что позволяет использовать показатель CDT для диагностики хронического злоупотребления алкоголем.

Показатель CDT выгодно отличается от других маркеров злоупотребления такими характеристиками как:

возможность дифференцировки разового и/или умеренного употребления от хронического злоупотребления;
возможность отсроченной диагностики (на протяжении 1 месяца с момента хронического алкогольного эксцесса);
высокая специфичность и минимальный риск ложноположительных результатов.

Minicap – это компактная, многофункциональная и полностью автоматизированная система капиллярного электрофореза от всемирно известного производителя – компании SEBIA, позволяющая выполнять оценку уровня карбогидрат-дефицитного трансферрина (CDT) в полном соответствии с требованиями международных стандартов.
Capillarys-2 Flex Piercing – аналог прибора Minicap, превосходящий его по производительности в 4 раза и рассчитанный на крупные лаборатории с большим потоком анализов.

Технология капиллярного электрофореза SEBIA представляет собой уникальное сочетание методов агарозного электрофореза и жидкостной хроматографии, являющихся «золотыми стандартами» среди разделительных методов, позволяя добиваться действительно непревзойденного качества исследований.

Более 80% от всего объема CDT тестов, ежегодно выполняемых по всему миру, осуществляется на системах капиллярного электрофореза SEBIA, что подтверждает их высокие аналитические и пользовательские характеристики.

Определение CDT методом SEBIA имеет ряд существенных преимуществ:

полное соответствие аналита текущему определению CDT (в настоящее время и до завершения программы международной стандартизации CDT, инициированной Международной Федерацией Клинической Химии (IFCC), к карбогидрат-дефицитному трансферрину принято относить сумму асиало-, моносиало- и дисиало- изоформ трансферрина);
возможность определения карбогидрат-дефицитных фракций по отдельности (требование IFCC для завершения международной стандартизации CDT);
возможность качественной оценки изоформ трансферрина с целью выявления интерференций и сопутствующих патологических состояний (профиль цирроза и пр.).

CDT тест производства SEBIA – единственный метод, прошедший широкомасштабные клинические испытания на российской популяции и взятый за основу материально-технической базы федеральных методических рекомендаций МЗ РФ «Диагностика, мониторинг хронического злоупотребления алкоголем и скрининг наиболее распространенных патологических состояний, обусловленных злоупотреблением» (утверждены 03 ноября 2013 года).

источник

Анализ крови на алкоголь – объемное исследование, которое проводится каждый день в различных лабораторных центрах всего мира. В некоторых случаях ответов анализа ожидают с трепетом, а иногда и со страхом, осознавая, что положительный результат способен перевернуть всю жизнь пациента.

Зачастую кровь на наличие этанола вынуждены сдавать автомобилисты, попадающие в дорожные аварии, или люди, которые попадают под внимание стражей порядка на дорогах. Водителю, чтобы доказать свое трезвое состояние, нужно обязательно сдать анализ, который и определит, употреблял ли человек алкоголь.

Однако не только шоферам нужны такие тесты. Анализы на спиртное берут и у людей, получивших опасные травмы, чтобы определить возможность оперативного вмешательства или выявить причины неадекватного поведения и состояния пациента. Срочный лабораторный тест на алкоголь порой может понадобиться и несовершеннолетним или специалистам, обязанным по роду профессии быть трезвыми во время работы. Поэтому у людей не получается заранее подготовиться к таким анализам.

Исследование проб проводится в специальных лабораторных условиях: в наркологических клиниках или в платных терапевтических центрах.

Анализ крови на алкоголь определяет количество чистого спирта в крови человека. Подсчет ведется в тысячных долях кровяного объема – промилле. Показатель демонстрирует, какое количество этанола присутствует в литре крови, и определяет количество выпитого спиртного накануне.

Лаборатория

Каждый врач во время назначения лабораторного анализа крови обязан предупреждать пациента о том, что не меньше суток до сдачи пробы нельзя употреблять продукты, содержащие спирт. Клинические показатели могут серьезно измениться под воздействием алкоголя.

Алкоголь в кровяных клетках

Состав крови меняется следующим образом:

Увеличивается содержание молочной кислоты.
Поднимается процент триглицеридов, что может свидетельствовать о начале развития атеросклероза.
Существенно растет содержание мочевой кислоты по сравнению с нормальными параметрами. Врач может расценить такой результат как признак болезни печени и почек;
Поднимается число эритроцитов.
Увеличивается показатель холестерина.
Повышается содержание ферментного вещества гамма-глутамилтранспептидазы. Это указывает на патологии печени.

Если опытный врач обнаружит существенное превышение перечисленных параметров биохимического исследования крови, он может предположить, что пациент перед сдачей крови употреблял спиртное. Однако данные параметры могут быть и признаками начинающихся проблем с жизненно важными органами: почками, сердцем и печенью. Так что для получения достоверных результатов анализов в лабораторию нужно идти в совершенно трезвом виде.

Анализ CDT показывает фракцию трансферрина. Данное вещество представляет собой сывороточную аминокислоту, чья главная функция – транспортировка железа в организме. Этот белок присутствует в крови в качестве изоформы с разным числом прикрепленных продуктов сиаловых кислот. Одна молекула трансферрина содержит до 8 таких кислот.

Сывороточный трансферрин

Главной формой сывороточного белка в крови считается карбогидрат-тетрасиалотрансферрин. Когда человек употребляет спиртное в больших дозах, процесс гликозилирования трансферрина протекает со сбоями, отчего в крови повышается количество его иных изоформ, содержащих меньшее число продуктов сиаловой кислоты. Они оцениваются в качестве суммарного углеводного дефицитного трансферрина – CDT.

Биохимический анализ крови СДТ показывает высокий уровень дефицитного сывороточного белка, если пациент каждый день употребляет минимум 60 миллилитров этанола (такое количество содержится в одной бутылке вина) на протяжении 14 дней.

Если человек однократно принимает большое количество спиртного, то содержание CDT в сыворотке крови остается неизменным. Время полувыведения данного белка составляет 2 недели. Так что после отказа от спиртного на этот срок вышеуказанный показатель полностью приходит в норму.

Анализ крови CDT помогает диагностировать хронический алкоголизм у людей в 90 процентах случаев. При этом чувствительность белка к спирту составляет 70 процентов.

Если анализ крови на алкоголь проводится с применением высокоэффективной хроматографии жидкостного типа, то оно даст максимально точный результат, в отличие от иммунологических методов, с точки зрения чувствительности и специфики анализа. Содержание CDT высчитывается в относительных долях – процентах от общего количества трансферрина. Так что если человек страдает малокровием, это никак не скажется на показателях анализа.

Внимание! Несмотря на высокую результативность анализа CDT для определения алкоголизма, не рекомендуется самостоятельное назначение этого исследования без прохождения других анализов. Стоит учесть, что содержание углеводного дефицитного трасферрина может быть высоким при вынашивании плода, употреблении гормонов, галактоземии.

Лабораторный тест на алкоголь может назначаться для:

Выявления хронического алкоголизма;
Оценки результативности лечения алкоголизма;
Наблюдения абстиненции для определения рецидивов зависимости от спиртного;
Дифференциального диагностирования причин патологий печени и неадекватного поведения пациента.

Алкоголизм

Биохимический анализ крови на наличие этанола может быть назначен в случае:

Подозрения на алкогольную зависимость;
Наличия симптомов и изменений анализов крови, ассоциирующихся со злоупотреблением спиртным;
Наблюдения за больными с высоким риском развития алкоголизма.

Если биохимия показала, что в крови пациента менее 1,2 процента трансферрина, то это значение считается нормальным. Когда процент превышает 2,5, – это патологический показатель.

Среди причин высокого показателя CDT можно отметить:

Употребление спиртного в дозе выше 60 миллилитров этанола каждый день на протяжении минимум 14 дней;
Врожденные сбои в процессе гликозилирования в сыворотке крови.

Внимание! Есть вероятность получения ложноположительного показателя биохимии крови на СДТ. Это может быть спровоцировано билиарным первичным циррозом, клеточной карциномой печеночных тканей, анемией в тяжелой форме.

Биохимический анализ крови устанавливает количество спирта только в момент забора пробы. Это исследование не показывает, как давно алкоголик употреблял спиртное. Специальная подготовка для этого обследования не нужна. Однако анализ крови на алкоголь часто помогает выявить, был ли человек пьяным в то время, когда сдавал кровь. Один из самых точных методов биохимии – газовая хроматография.

Во время этого исследования образец крови пациента отправляется в специальную колбочку из стекла, в которой жидкая среда медленно испаряется. В пробирке при этом остается газ, который подвергается исследованию с помощью соответствующего оборудования – хроматографа. В остаточном газе эксперты оценивают наличие этанола. Такой способ предусматривает применение дорогой техники и специальных химических реагентов. Методика хроматографии применяется в каждой лаборатории, обладающей лицензией на такой род деятельности.

Ферментная методика не так распространена, как хроматография. В ее основе лежит то, что при поступлении в организм алкоголя увеличивается активность ферментов, отвечающих за его переработку. В организме непьющего пациента этих ферментов нет. Во время выполнения анализа сданная кровь отправляется в колбу и делится на фракции. Пробирка, где находится сыворотка крови, отправляется в специальный анализирующий прибор. Для установления результатов требуется всего несколько минут времени, после чего наличие и количество ферментов в кровяной сыворотке станет известно.

С помощью ферментной методики можно выявить и время, когда употреблялось спиртное, и уровень зависимости пациента от спиртсодержащих напитков.

Нередко анализ ферментов на определение спирта применяется в наркологической терапии с целью мониторинга людей, страдающих алкоголизмом, которые проходят курс лечения. Пациент может отрицать факт приема алкоголя, но анализы не соврут.

Данный вид анализов проводится редко ввиду неточности результатов. Формула, которую предложил Видмарк, не выявляет количество спирта, не всосанного в кровь. Чаще всего этот способ применяется для обследования крови у умерших людей.

Исследование проб

Иногда в медицинской практике случаются конфликтные ситуации, когда у совершенно трезвого человека выявляют высокий процент этанола в анализах. Это возможно в таких случаях:

При неправильном заборе проб. Неопытный лаборант может протереть кожный покров спиртом в том месте, где выполняется укол, чего делать категорически нельзя;
В крови диабетиков нередко повышается уровень ацетона, что тоже сказывается на результатах анализа на алкоголь;
Употребление медикаментов, содержащих спирт – настоек на травах, сиропов и пр.;
Отравление метиловым спиртом.

Организм каждого человека уникален. Все люди по-разному реагируют на различные дозы употребляемого спиртного, поэтому намеренно снизить его процент в анализах сложно. Кто-то от определенной дозы может попрощаться с жизнью, а кто-то от такого же количества просто слегка опьянеет. Считается, что к смерти может привести доза выше 4 промилле этанола в крови.

На скорость выведения спирта из крови влияет крепость алкогольного напитка. Чем она выше, тем дольше этанол задержится в человеческом организме. Дело в том, что крепкое спиртное медленно всасывается, соответственно, медленно снижается его содержание. Еще на скорость влияет и состояние здоровья пациента: работа легких, печени и выделительной системы.

источник

Углеводдефицитный трансферрин – биомаркер хронического употребления алкоголя (более 60 граммов этанола в сутки).

Углеводдефицитный трансферрин (УДТ), карбогидрат-дефицитный трансферрин.

Синонимы английские

Carbohydrate-deficient transferrin (CDT), % CDT.

Высокоэффективная жидкостная хроматография.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
Не принимать пищу в течение 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
Полностью исключить прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед анализом (по согласованию с врачом).
Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение за 30 минут до исследования.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Трансферрин – сывороточный белок, главная функция которого – транспорт железа. В крови он присутствует в виде изоформ с различным количеством присоединенных остатков сиаловых кислот (в молекуле трансферрина их может быть до 8). В крови основной формой трансферрина является тетрасиалотрансферрин. При употреблении алкоголя в большом количестве гликозилирование трансферрина нарушается и в крови возрастает концентрация других его изоформ с меньшим количеством остатков сиаловых кислот (асиало-, моно-, дисиалотрансферринов). Их и оценивают как суммарный углевод-дефицитный трансферрин (CDT). Уровень карбогидрат-дефицитного трансферрина значительно возрастает при ежедневном употреблении более 60 граммов этанола (4-5 алкогольных напитков или 0,75 литра вина в день) в течение не менее двух недель. При однократном приеме высоких доз спиртных напитков концентрация углеводно-дефицитного трансферрина в крови не изменяется. Период полувыведения трансферрина составляет 2 недели, поэтому после прекращения употребления алкоголя показатель нормализуется в вышеуказанный срок.

Специфичность CDT для диагностики хронического злоупотребления спиртными напитками составляет 80-90 %, чувствительность – 60-70 %. Исследование, выполненное с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), обладает значительным преимуществом перед иммунологическим методом в плане специфичности и чувствительности. CDT оценивается в относительных единицах ( % от общего трансферрина), поэтому наличие анемии не влияет на результат анализа.

Углеводдефицитный трансферрин – более специфичный показатель для диагностики алкоголизма, чем гамма-глютамилтранспептидаза (ГГТП) и средний объем эритроцита (MCV). Однако отдельное назначение CDT (без дополнительных анализов) в качестве скрининга не рекомендовано в связи с его недостаточной чувствительностью. Необходимо также учитывать, что уровень углевод-дефицитного трансферрина повышается при врождённых нарушениях гликозилирования, галактоземии, беременности и применении гормональных препаратов.

Для чего используется исследование?

Для диагностики хронического употребления высоких доз алкоголя;
для оценки эффективности лечения алкоголизма;
для мониторинга абстиненции в целях выявления рецидивов алкоголизма;
для дифференциальной диагностики причин изменений функции печени, изменений поведения.

Когда назначается исследование?

При подозрении на злоупотребление алкоголем;
при наличии клинических данных и изменений в лабораторных анализах, которые могут быть ассоциированы с употреблением алкоголя (повышение ГГТП, изменение соотношения АЛТ/АСТ, нарушение функции печени, поджелудочной железы, психоневрологические изменения);
при наблюдении за пациентами с риском рецидива алкоголизма.

Отсутствие употребления алкоголя в течение 2 недель: 2,5 % от общего трансферрина.

злоупотребление алкоголем в дозе более 60 граммов этанола в сутки в течение не менее двух недель;
врождённые нарушения гликозилирования.

Что может влиять на результат?

Результаты исследования могут быть искажены при беременности, приеме гормональной заместительной терапии, врождённых нарушениях гликозилирования (например, карбогидрат-дефицитном гликопротеиновом синдроме Iа типа), галактоземии, врождённом нарушении толерантности к фруктозе.
Исследование более специфично для мужчин, чем для женщин.
Прием лекарственных препаратов (антидепрессантов, дисульфирамов) не вызывает значительных изменений в результате данного анализа.

Уровень CDT снижается до нормы через 2 недели после прекращения употребления алкоголя. Однократные приемы высоких доз алкоголя не вызывают повышения этого показателя.

Кто назначает исследование?

Нарколог, психиатр, невролог, гастроэнтеролог, терапевт, судмедэксперт, токсиколог

источник

Система автоматизированная для капиллярного электрофореза Minicap

Система автоматизированная для капиллярного электрофореза Capillarys-2 Flex Piercing

Показатель CDT выгодно отличается от других маркеров злоупотребления такими характеристиками как:

возможность дифференцировки разового и/или умеренного употребления от хронического злоупотребления;
возможность отсроченной диагностики (на протяжении 1 месяца с момента хронического алкогольного эксцесса);
высокая специфичность и минимальный риск ложноположительных результатов.

Определение CDT методом SEBIA имеет ряд существенных преимуществ:

полное соответствие аналита текущему определению CDT (в настоящее время и до завершения программы международной стандартизации CDT, инициированной Международной Федерацией Клинической Химии (IFCC), к карбогидрат-дефицитному трансферрину принято относить сумму асиало-, моносиало- и дисиало- изоформ трансферрина);
возможность определения карбогидрат-дефицитных фракций по отдельности (требование IFCC для завершения международной стандартизации CDT);
возможность качественной оценки изоформ трансферрина с целью выявления интерференций и сопутствующих патологических состояний (профиль цирроза и пр.).

источник

Как определить, болен ли человек алкоголизмом?

Во многих семьях и в производственных коллективах встает проблема – как определить: потребляет ли человек чрезмерное количество алкоголя и как это сказывается на его психическом и физическом здоровье? Возникают подобные вопросы в связи с тем, что начинает настораживать поведение людей дома или на работе. В семье родственники видят, что муж или жена, или взрослый сын, к примеру, почти каждый день употребляют спиртные напитки. Доза может быть и небольшой (40 – 60 гр в день), но это происходит регулярно и заставляет насторожиться, потому что люди становятся неадекватными в той или иной ситуации, особенно теряются в тех случаях, когда необходимо быстро сориентироваться и принять правильное решение. Родственники начинают задумываться, что же будет дальше.

На предприятиях во многих отраслях есть должности, которые требуют особой ответственности и сосредоточенности в связи с выполняемой работой. Это водители в первую очередь, от состояния здоровья (особенно связанного с употреблением алкоголя) которых зависит жизнь многих людей, это охранники, получившие разрешение на использование оружия, крановщики, от точных действий которых зависит эффективность производственного цикла, рабочие, занятые выполнением сложной работы на производственных станках с повышенной степенью опасности и т.д.

В интересах руководителей предприятий иметь коллектив, в слаженной работе которого можно быть уверенным, и главное, что такую уверенность может обеспечить трезвый образ жизни каждого работника.

Не так давно появился метод и способ, позволяющие определить, болен ли человек алкоголизмом, сделать прогноз в отношении зависимости от алкоголя. Для этого надо взять у человека лишь немного венозной крови – буквально «каплю». Когда человек потребляет по его меркам немного алкоголя (все равно какого – пиво, вино, водка) и внешне не замечает изменение своего поведения, он начинает уверять себя и окружающих, что «все нормально» и так можно жить дальше. Но это совсем не так. Постепенно печенью в ответ на регулярное (40 – 60 гр в день) употребление спиртных напитков начинает вырабатываться дефектный белок, которого у непьющих людей или употребляющих немного алкоголя не вырабатывается. Этот белок, который называется карбогидратдефицитный трансферрин (CDT) появляется только при чрезмерно употреблении спиртного и не образуется ни при каких других воздействиях (например, лекарственных веществ) или заболеваниях.

У таких людей, у которых появляется в крови этот белок, постепенно меняется психическое состояние, а следовательно и поведение, что сказывается на взаимоотношении в семье и трудовом коллективе.

Алкоголь нарушает образование трансферрина печеночными клетками. Это приводит к повышенному содержанию особой изоформы трансферрина – карбогидрат-дефицитного трансферрина (CDT).

В норме CDT составляет менее 1,3 %.

Доказано, что CDT возрастает при ежедневном употреблении 125 – 200 грамм водки или в пересчете на пиво – 1,0 – 1,5 литра в течение 7 – 10 дней, что позволяет устанавливать факт хронического злоупотребления алкоголем лабораторным путем. Потребление алкоголя в данных дозах согласно классификации Всемирной организации здравоохранения соответствует хроническому злоупотреблению алкоголем с высоким риском тяжелых психических и физических нарушений и развитием зависимости.

Повышение уровня CDT сохраняется до 4 недель после периода злоупотребления.

У большинства людей, не злоупотребляющих алкоголем, но страдающих заболеваниями печени, уровень карбогидрат-дефицитного трансферрина остается в пределах нормы. Исключение составляют пациенты с тяжелым циррозом, хроническим гепатитом с высокой активностью и редким наследственным заболеванием.

Определение CDT позволяет определиться с решением проблем в семье и рабочем коллективе, улучшить и поднять производительность труда, сохранить физическое и психическое здоровье.

Определение карбогидрат-дефицитного трансферрина позволяет решать следующие задачи:

Выявлять скрытые формы алкоголизации у лиц с вредными последствиями для здоровья, формировать группы риска и проводить профилактическую работу;
Выявлять лиц с хроническим злоупотреблением алкоголя среди работников, связанных с особо опасными условиями труда и не допускать их к управлению транспортными средствами, работе на техногенных объектах.
Проводить государственную политику по реализации антиалкогольной стратегии;

C 2014 года в нашей лаборатории областного наркодиспансера было сделано 11 612 исследований карбогидрат-дефицитного трансферрина. Из них выявлено 2 125 человек с повышенным значением CDT.

Наркологическая служба ставит следующие задачи при сотрудничестве с работодателями:

Снизить количество больных наркопатологией за счет раннего выявления злоупотребления и проведения профилактической работы;
Повысить выявляемость скрытых и начальных стадий заболевания алкоголизмом;
Снизить количество клинических осложнений зависимости при отказе от психоактивных веществ;
Снизить количество употребляемого алкоголя;
Сократить количество суицидов и преступлений, совершаемых в состоянии опьянения;
Снизить число смертей от несчастных случаев.

Таким образом, вместо существующего субъективного, зачастую несвоевременного выявления лиц, страдающих хроническим злоупотреблением алкоголем, мы внедрили методику, которая позволяет перейти к активной целевой профилактике и раннему выявлению лиц, предрасположенных к злоупотреблению алкоголем.

В марте, апреле 2016 г. была проведена акция по определению содержания психоактивных веществ и карбогидратдефицитного трансферрина (CDT) в биологических жидкостях у сотрудников (водителей машин скорой помощи) в ГУЗ «Липецкая областная станция скорой медицинской помощи и медицины катастроф». Работниками клинико-диагностической лаборатории ГУЗ «ЛОНД» было обследовано 222 человека. У 14% водителей машин скорой помощи было выявлено повышенное содержание карбогидратдефицитного трансферрина – маркера злоупотребления алкоголем.

Планируются программы взаимодействия областного наркодиспансера с организациями Липецка и Липецкой области, преследующие цель выявления злоупотребляющих алкоголем, проведение оздоравливающих мероприятий по снижению рискованного поведения, связанного с повышенным потреблением алкоголя. Также сотрудники диспансера активно ведут профилактическую работу, главная цель которой привить населению здоровый образ жизни.

Где сдать анализ:

кровь можно сдать в диспансерном отделении, обратившись в регистратуру, где вам все объяснят и направят в процедурный кабинет.

регистратуры: (4742) 73-03-13.
лаборатории: 950-803-03-66.

Срок исполнения:

выполняется в течение дня.

Где выполняется анализ:

Анализ выполняется в клинико-диагностической лаборатории наркологического диспансера по адресу: ул. Ленинградская, 18 на новейшем оборудовании производства «Себия» Франции, которое исключает фальсификацию анализа.

По результатам:

можно получить консультирование врача нарколога-психиатра. Если есть необходимость, врач назначит корректирующее лечение.

источник

Процедура анализа карбогидрат-дефицитного трансферрина методом капиллярного электрофореза

Анализ карбогидрат-дефицитного трансферрина позволяет диагностировать употребление высоких доз алкоголя, эквивалентных 50 – 80 г и более абсолютного этилового спирта в день, на протяжении продолжительного периода времени (неделя и более) [108, 111], что согласно классификации ВОЗ соответствует хроническому злоупотреблению алкоголем с высоким риском тяжелых психических и физических нарушений и развития или наличием алкогольной зависимости.

Процедура анализа состоит из следующих этапов:

— Информирование, опрос пациента и заполнение опросника (Приложение 7);

— Взятие образца крови, маркировка и оформление сопроводительной документации (Приложение 8);

— Транспортировка образцов и документации в лабораторию для проведения анализа маркера CDT (Приложение 9);

— Получение сыворотки крови (Приложение № 10);

— Проведение качественной и количественной оценки маркера CDT методом капиллярного электрофореза и учет результатов;

— Оформление заключения о результатах анализа (Приложение № 6).

В случае несогласия освидетельствуемого с положительным результатом исследования, а также в случае получения положительного результата, количественные значения которого соответствуют «серой зоне» (1,3% ≤ CDT ≤ 1,6%), следует повторно внимательно рассмотреть возможные факторы интерференции на результат анализа (пп. 6.5-6.6) и назначить повторное исследование со свежим образцом сыворотки через 3-4 недели.

По результатам анализа врачом психиатром-наркологом оформляется «Заключение медицинского учреждения о прохождении обследования на предмет хронического злоупотребления алкоголем» (Приложение № 11).
7.1. Информирование, опрос пациента и заполнение опросника

В соответствии со ст. 31 Основ законодательства РФ об охране здоровья граждан от 22.07.1993 № 5487-1 до реализации анализа необходимо в полном объеме провести разъяснительную работу о целях и порядке осуществления тестирования с оформлением добровольного информированного согласия лиц старше 15 лет и родителей и/или иных законных представителей лиц в возрасте до 15 лет (Приложение 1). При отказе от обследования оформляется письменный отказ по форме, приведенной в Приложении 2.

Для выявления возможных интерферирующих факторов и ограничений к исследованию, а также с целью получения данных по употреблению алкоголь-содержащих веществ проводится опрос обследуемого и заполняется опросник в соответствии с Приложением 7. При этом обследуемому в доступной форме доводится до сведения о важности предоставления полной и достоверной информации для интерпретации результатов анализа.
7.2 Взятие образца крови, маркировка и оформление сопроводительной документации

Для проведения лабораторного тестирования осуществляют взятие и подготовку проб крови в соответствии с требованиями ГОСТ Р 53079.4 – 2008.

7.2.1. Требования к условиям и процедуре взятия, приема и утилизации образцов крови

Кровь отбирается из поверхностной вены открытым или закрытым способом в пластиковую одноразовую пробирку с плотно завинчивающейся крышкой без антикоагулянтов. Не допускается использование пробирок с ЭДТА или цитратом. Объем образца достаточный для исследования составляет 2-4 мл.

При взятии образца крови оформляется «Направление на исследование образца крови методом капиллярного электрофореза на предмет злоупотребления алкоголем» (Приложение 8), а также «Справка о доставке биологических объектов на исследование методом капиллярного электрофореза» (Приложение 9).

После взятия образцов крови осуществляется их кодирование с целью последующей надежной идентификации и исключения подмены. Наиболее целесообразно применение штрих-кодов, в которых отражены идентификационные признаки обследуемого. Штрих-коды изготавливают в месте взятия образца или в лаборатории, выполняющей анализ. Допустимо ручное кодирование образцов в соответствии с требованиями ГОСТ Р 53079.4 – 2008.

Контейнер с биопробой должен находиться под наблюдением ответственного за процедуру лица до тех пор, пока не будет кодирован и опечатан защитной самоклеющейся пленкой или отправлен на тестирование.

Прием образцов крови для тестирования осуществляется уполномоченным лицом.

Образцы не принимаются к исследованию в случае выявления несоответствия требованиям их взятия, хранения и транспортировки.

Образцы биопроб считают потенциально опасными и утилизируют в соответствии с санитарно-эпидемиологическими требованиями после истечения сроков хранения и проведения аналитических исследований согласно СанПиН 2.1.7.728-99 «Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений».

7.2.2. Требования к условиям хранения и транспортировки образцов крови

Образцы требуется как можно скорее доставлять в лабораторию, где будет проводиться дальнейшее исследование. Хранение образов крови до отправки в лабораторию и их последующая транспортировка должны осуществляться в холодильнике или специальных термоконтейнерах, поддерживающих температуру среды не выше 2-8 о С. Не допускается хранение и транспортировка образцов при комнатной температуре.

Транспортировку образцов и документации осуществляет лицо, уполномоченное медицинским учреждением.

При необходимости длительного транспортирования в лабораторию (более часа) образцы свернувшейся крови (обычно свертывание происходит в течение 30 мин.) должны быть отцентрифугированы для получения сыворотки не позднее, чем через 1 час после взятия образца. Процедура получения сыворотки крови приведена в Приложении 10.

Свежая сыворотка крови пригодна для исследования без дополнительной пробоподготовки.

К анализу допускается сыворотка при хранении ее в условиях холодильника при температуре 2- 8°C не более 10 дней. При необходимости более длительного хранения образцы сыворотки крови должны быть заморожены (-18-24 о С) в течение 8 часов с момента их взятия. Замороженная сыворотка пригодна для исследования в течение месяца.
7.3. Проведение качественной и количественной оценки маркера CDT методом капиллярного электрофореза

Проведение качественного и количественного анализа CDT методом капиллярного электрофореза осуществляется в соответствии с Инструкциями по применению наборов реагентов для определения CDT на системах Capillarys или Minicap [10, 12] и предусматривает выполнение следующих этапов:

— Настройка прибора для выполнения аналитических операций;

— Помещение пробирок с образцами в штатив(ы);

— Считывание штрих-кодов с пробирок с образцами и штативов для образцов (выполняется автоматически);

— Разведение образцов из первичных пробирок в сегменте для разведения (выполняется автоматически);

— Промывка капилляров и инжекция в них разведенных образцов (выполняется автоматически);

— Разделение фракций CDT и их прямая детекция в капиллярах (выполняется автоматически);

— Учет и интерпретация результатов;

— Завершение работы на приборе.
7.4. Учет и интерпретация результатов

После проведения анализа результаты качественного и относительного количественного определения изоформ трансферрина генерируются автоматически при помощи программного обеспечения прибора.

7.4.1. Учет результатов качественного анализа

Результаты качественной оценки представляют собой электрофоретические кривые, отображающие фракции трансферрина, присутствующие в анализируемом образце сыворотки и располагающиеся в следующем порядке (слева направо): пентасиалотрансферрин, тетрасиалотрансферрин, трисиалотрансферрин, дисиалотрансферрин и асиалотрансферрин (Приложение 5, пример 1).

Учет результатов качественного анализа включает обязательную визуальную оценку полученной ЭФ кривой с целью выявления на профиле аномальных помех или генетических вариантов трансферрина, присутствие которых может влиять на результаты количественной оценки CDT.

Протокол исследования, содержащий графическую кривую с изображением профилей изоформ трансферрина, является обязательным приложением к заключению о результатах исследования (Приложение 6). Заключение о результатах исследования без протокола качественной оценки считаются недействительными.

При наличии интерферирующих помех проведение количественной оценки фракций CDT недопустимо до их полного устранения (пп. 3.5-3.6).

7.4.2. Учет результатов количественного анализа

Результаты относительной количественной оценки представляют собой автоматически скалькулированные относительные (%) концентрации изоформ трансферрина, полученные посредством прямой денситометрии фракций при 200 нм.

Полученные результаты количественной оценки по каждой изоформе трансферрина, выраженные в процентах, отображаются в виде таблицы справа от графической кривой. Цвет, присвоенный той или иной фракции трансферрина в таблице, всегда соответствует цвету этой же фракции, выраженной графически (Приложение 5, пример 1).

Для подсчета относительной концентрации изоформ CDT согласно текущему определению аналита программное обеспечение прибора производит суммирование значений карбогидрат-дефицитных фракций (ди-, моно- и асиалотрансферрина) и приводит итоговый результат количественного анализа в виде процентного содержания изоформ CDT слева от графической кривой (Приложение 5, пример 1). Это же значение импортируется в Протокол исследования и служит показателем наличия или отсутствия хронического злоупотребления алкоголем.

Исследования Schellenberg и Wielders [109] на статистически достоверной выборке, а также клинические испытания теста, проведенные с 2011 по 2013 гг. в МНПЦ наркологии, показали, что верхнее референсное значение концентрации карбогидратдефицитного трансферрина (CDT) составляет 1,3 %. Пороговое значение, основанное на приведенном выше верхнем референсном значении с учетом погрешности измерений, составляет 1,6 %. Таким образом, в отсутствии интерферирующих факторов, значение CDT 1,6 % следует расценивать как показатель хронического алкогольного злоупотребления (положительный результат) (Приложение 5, пример 4). Значение CDT 7 8 9 10 11

источник

119002, г. Москва, Малый Могильцевский пер., д. 3. м. Смоленская
Администрация Центра

109559, г. Москва, ул. Ставропольская, д. 27, стр. 7. м. Люблино
Наркологическая клиника

Информационные материалы по методологической валидности и экономической целесообразности применения метода качественного и количественного анализа CDT в сыворотке крови методами капиллярного электрофореза или высокоэффективной жидкостной хроматографии для контроля ремиссии больных алкоголизмом или диагностики потребления алкоголя.

Подготовлены по запросу начальника управления организации государственного контроля качества оказания медицинской помощи населению Росздравнадзора А.Н. шаронова от 03.04.2018 г. № 06-14179/18.

Согласно классификации ВОЗ, употребление более 60 граммов алкоголя в день (в пересчете на абсолютный спирт) рассматривается как злоупотребление этанолом[1]. Употребление указанного количества ежедневно на протяжении 5-7 дней и более рассматривается как хроническое злоупотребление.

Всасывание алкоголя частично начинается уже в ротовой полости и пищеводе, до 10-15% алкоголя всасывается в желудке, но большая часть – в проксимальном отделе тонкого кишечника[2].

Выведение алкоголя из организма происходит различными путями: около 2-10% потребленного алкоголя выводится в неизменённом виде с мочой, потом и выдыхаемым воздухом, 90-95% алкоголя метаболизируется в печени с помощью фермента алкогольдегидрогеназы (ADH) до ацетальдегида, затем при воздействии фермента альдегиддегидрогеназы (ALDH) ацетальдегид превращается в уксусную кислоту. Конечными продуктами метаболизма этанола являются вода и диоксид углерода[3]. Помимо окислительного пути метаболизма этанола (через ацетальдегид и ацетат до углекислого газа и воды) существует еще неокислительный путь, через который проходит менее 1% экзогенного этанола[4].

На практике потребление алкоголя устанавливается путем измерения концентрации этанола в крови, моче и его паров в выдыхаемом воздухе. Из-за быстрого выведения из организма детектирование этанола данным методом невозможно уже спустя сутки после его употребления. Это не позволяет использовать данный метод для контроля факта потребления алкоголя в течение более длительного времени[5].

Напротив, метаболиты алкоголя, образующиеся по неокислительному пути, а также другие изученные биомаркеры, образующиеся в организме вследствие токсического воздействия этанола на печень и внутренние органы, представляют больший интерес для определения факта употребления алкоголя во времени, нежели сам этанол[6].

Выделяют прямые метаболиты алкоголя, которые возникают в процессе его метаболизма, к которым относятся PEth (фосфатидилэтанол), FAEEs (этиловый эфиры жирных кислот), EtG (этилглюкуродин), EtS (этилсульфат).

Также выделяют непрямые маркеры, возникающие при воздействии высоких токсических доз этанола на организм, к ним относят GGT (гамма глютамилтрансфераза), AST и ALT (аспартат и аланинаминотрансферазы), MCV (средний корпускулярный объем эритроцитов), CDT (углеводдефицитный трансферрин), 5HTOL (5-гидрокситриптофол).

Углеводдефицитный трансферрин (CDT) относится к непрямым метаболитам алкоголя и предлагался для мониторинга хронического злоупотребления алкоголем в клинической практике[7]. Трансферрин – гликопротеин, участвующий в транспорте железа в организме, присутствует в крови в виде различных изоформ. В зависимости от состава углеводных цепей трансферрина количество присоединенных остатков сиаловых кислот в его молекуле может достигать восьми. Из них только 5-(пента), 4-(тетра), 3-(три), и 2-(ди) сиалотрансферрины циркулируют в детектируемом количестве. В норме трансферрин представлен преимущественно тетрасиалотрансферрином. Хроническое употребление больших доз алкоголя (более 40 граммов этанола в сутки) в течение не менее двух недель приводит к угнетению гликозилирования трансферрина (и прикрепления остатков сиаловых кислот), в результате чего возрастает содержание изоформ со сниженным количеством остатков сиаловых кислот (асиало-, моно- и дисиалотрансферринов), которые оценивают суммарно как CDT. Основную часть CDT составляет дисиалотрансферрин. При прекращении приема алкоголя повышенное содержание СDT сохраняется до 2-х недель (период полувыведения трансферрина), после чего результаты теста нормализуются. Соотношение CDT с другими изоформами выше 1.6% расценивается как показатель хронического злоупотребления алкоголем (положительный результат), менее 1.6% – отрицательный[8].

В настоящее время для повышения специфичности показателя CDT рабочей группой IFCC по стандартизации CDT рекомендуется использование метода ВЭЖХ и капиллярного электрофореза для проведения качественного и количественного анализа CDT[9].

По имеющимся оценкам, чувствительность результатов анализа СDT в выявлении хронической алкогольной зависимости достигает 60-70%, специфичность – 80-90%, но это при ежедневном потреблении больших доз алкоголя (более 60-100 г/день). При низком или среднем ежедневном уровне потребления алкоголя (меньше 60 г/день) чувствительность и специфичность теста падает ниже 40%[10]. Наибольшая специфичность теста отмечается при обследованиях мужчин старше 40 лет. Исследование менее специфично для женщин, особенно при беременности, а также в случае применения гормональной замещающей терапии или гормональных противозачаточных средств. Тест неприменим в случае подозрения на врожденные нарушения гликозилирования, галактоземии, при врожденном нарушении толерантности к фруктозе. Также факторами, оказывающими влияние на результаты теста, являются тяжелые повреждения печени, билиарный цирроз печени, хронический гепатит[11].

Таким образом, применение метода качественного и количественного анализа CDT в сыворотке крови методами капиллярного электрофореза или высокоэффективной жидкостной хроматографии для контроля ремиссии больных алкоголизмом или диагностики потребления алкоголя в качестве единственного диагностического показателя недостоверно.

Провести полную оценку экономической целесообразности применения рассмотренных маркеров потребления алкоголя ввиду ограниченных сроков предоставления информации не представляется возможным. В случае необходимости такая работа может быть выполнена специалистами ННЦН – филиал ФГБУ «НМИЦ ПН им. В.П. Сербского» Минздрава России в течение месяца.

Генеральный директор З.И. Кекелидзе

Исп. Клименко Т.В., Носырев А.Е.

[1] WHO. Global Status Report on Alcohol and Health. (2011). [2] Бобров А.Е., Бобров А.И., Игошкин А.В., Митюшин В.В. Фармакодинамические и фармакокинетические параметры эффекта этилового спирта на различных этапах алкогольной зависимости // Журнал неврологии и психиатрии им. Корсакова. – 1991. – Т. 91. – Вып. 2. – С. 70-74. [3] Haber P.S., Gentry R.T., Mak K.M., Mirmiran-Yazdy S.A.A., Greenstein R., Lieber C.S. Metabolism of alcohol by human gastric cells: relation to first-pass metabolism // Gastroenterology. – 1996. – V. 111. – P. 863– 870. [4] Ammon E., Schafer C., Hofmann U., Klotz U. Disposition and first-pass metabolism of ethanol in humans: is it gastric or hepatic and does it depend on gender? // Clin. Pharmacol.Ther. – 1996. – V. 59. – № 5. – P. 503-513. [5] Баринская Т.О., Смирнов А.В., Саломатин Е.М., Шаев А.И. Кинетика этанола в биологических средах // Судебно-медицинская экспертиза. – 2006. – № 1. – С. 27-32. [6] Ammon E., Schafer C., Hofmann U., Klotz U. Disposition and first-pass metabolism of ethanol in humans: is it gastric or hepatic and does it depend on gender? // Clin. Pharmacol.Ther. – 1996. – V. 59. – № 5. – P. 503-513. [7] Тарасова О.И., Огурцов П.П., Мазурчик Н.В., Моисеев В.С. Современные лабораторные маркеры употребления алкоголя // Клиническая фармакология и терапия. – 2013. – Т. 16. – № 1. – C. 1-5. [8] Tavakoli H.R., Hull M., Okasinski Lt.M. Review of current clinical biomarkers for the detection of alcohol dependence // Innov.Clin.Neurosci. – 2011. – V. 8. – № 9. – P. 26-33. [9] Helander A. et al. Toward standardization of carbohydrate-deficient transferrin (CDT) measurements: II. Performance of a laboratory network running the HPLC candidate reference measurement procedure and evaluation of a candidate reference material // Clin Chem Lab Med. – 2010. – V. 48. – № 11. – P. 1585-92.

источник

Изобретение относится к способу лабораторной диагностики злоупотребления алкоголем. Заявленный способ заключается в определении соотношения белкового компонента мукопротеинов и углеводного компонента мукопротеинов сыворотки крови, при увеличении более чем в 40 раз диагностируют злоупотребление алкоголем. Изобретение обеспечивает доступность для широкого использования в лабораториях поликлиник и клиник широкого профиля. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к наркологии, внутренним болезням, клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для лабораторной диагностики злоупотребления алкоголем.

Известен способ диагностики злоупотребления алкоголем путем определения содержание алкоголя в крови, моче и выдыхаемом воздухе. При отсутствии диагностически значимых концентраций алкоголя в крови можно считать, что пациент не употреблял алкоголь в течение 6-8 часов [Neumann Т., Spies С. Use of biomarkers for alcohol use disorders in clinical practice. 2003 Society for the study of addiction to alcohol and other drugs, Addiction, 1998, Suppl. 2, 81-91]. Быстрое окисление алкоголя определяет необходимость измерения уровней его метаболитов. Повышенное содержание в крови ацетальдегида, молочной, яблочной и Р-оксимаслянной кислот наблюдается не позже чем через 24 часа после приема алкогольных напитков [Helander A., Eriksson С.Laboratory tests for acute alcohol consumption: results of the WHO/ISBRA Study on State and Trait Markers of Alcohol Use and Dependence. Alcohol Clin. Exp.Res., 2002, 26 (7), 1070-1077].

В клинической практике часто используется определение активности гамма-глютамилтрансферазы (ГГТ). Определение активности ГГТ является довольно дешевым и хорошо известным методом [Чернобровкина Т.В. Энзимопатии при алкоголизме. Киев, 1992, 312 с.]. В наибольших количествах этот фермент содержится в эпителии желчных канальцев, поэтому повышение активности ГГТ в крови традиционно связывают с холестатическими заболеваниями печени и билиарной системы. В этих случаях увеличение активности ГГТ, как правило, сопровождается и повышением уровня щелочной фосфатазы. Недостаток этого метода в том, что ГГТ не является строго специфичным маркером алкогольной интоксикации. Многие неалкогольные болезни печени, прием лекарственных и токсических веществ также вызывают повышение активности ГГТ. Этот фермент в значительных количествах присутствует в почках, в небольших количествах — в поджелудочной железе, тонкой кишке, клетках крови. Активность его может незначительно повышаться при сахарном диабете, почечной и сердечной недостаточности [Успенский А.Е. Объективные методы выявления употребления алкоголя. Перспективный аналитический обзор. М., 1998].

Другие методы диагностики хронической алкогольной интоксикации, как определение уровня среднего корпускулярного объема эритроцита (СКОЭ), мочевой кислоты, кетокислот, триглицеридов, липопротеинов высокой плотности (ЛПВП), активности ACT, АЛТ, лактатдегидрогеназы, щелочной фосфатазы, обладают меньшей информативностью. Уровень ЛПВП зависит от пола, диеты, физических упражнений, приема некоторых лекарственных препаратов [Rosman A., Lieber Ch. Biochemical markers of alcohol consumption. Alcohol Health & Research World, 1990].

Известно, что хроническая алкогольная интоксикация характеризуется появлением в сыворотке крови углевод-дефицитных белков, таких, как, например, углевод-дефицитный трансферрин. При алкогольном поражении печени нарушается гликозилирование трансферрина и образуются его дефектные асиало-, моносиало-, дисиало- и трисиало-изоформы, называемые углевод-дефицитными трансферринами (УДТ, Carbohydrate-deficient transferrin CDT). УДТ (CDT) повышается у людей, употребляющих 60-80 мл алкоголя в течение не менее 8-10 дней, и обладает периодом полураспада не менее 15 дней, поэтому его определение рекомендуется для идентификации чрезмерного употребления алкоголя [Bean P. Carbohydrate-deficient transferrin: what have we learned in the last decade? American Clinical Laboratory, 2001, May 8-10]. У большинства пациентов, страдающих заболеваниями печени, уровень УДТ остается в пределах нормы, что выгодно отличает его от определения активности ГГТ, АЛТ и ACT [Das S., Vasudevan K. Should we use carbohydrate-deficient transferrin as a marker for alcohol abusers? Indian J. Clin. Biochem, 2004, 19(2), 36-44].

Известно несколько методов определения в сыворотке крови УДТ (СОТ), рекомендованных для клинической практики. Они различаются особенностями выделения десиалоформ из общего пула трансферрина и способами их последующей детекции. CDTect позволяет измерить абсолютное количество углеводдефицитного трансферрина. Определяют 0-1 сиалоформы и небольшое количество дисиалотрансферрина путем радиоиммунологического анализа после микроколоночного расщепления. %СБТ — турбидимитрический иммунологический анализ, проводимый после ионообменной хроматографии, определяет процент 0-2 сиалоформ от общего количества трансферрина (Vitala K., Lahdesmaki K., Niemela О. Comparison of the Axis %CDT TLIA and the CDTect method as laboratory tests of alcohol abuse. Clinical Chemistry, 1998, 44, 1209-1215). Метод %CDT-TIA позволяет определять процентное содержание УДТ с учетом некоторого процента трисиалотрансферрина. При проведении последнего исследования на первом этапе происходит насыщение ионами Fe3+сывороточного трансферрина, после чего трансферрин с низким содержанием сиаловой кислоты сепарируется с помощью ионно-обменной хроматографии. УДТ (CDT) определяют с помощью турбидиметрического метода с использованием антител к трансферрину. При исследовании %CDT RIA (CDTriTIA) УДТ измеряют радиоиммунологическим методом [Viitala K., Lahdesmaki K., Niemela О. Comparison of the Axis %CDT TLIA and the CDTect method as laboratory tests of alcohol abuse. Clinical Chemistry, 1998, 44, 1209-1215].

Существует несколько коммерческих тест-систем исследования УДТ. BioRad CDT, Pharmacia CDTect test, Axis-Shield CDT основаны на оценке изоформ трансферрина методом изоэлектрофокусировки/иммуноблотинга после жидкостной хроматографии высокого разрешения [Reif A., Keller Н., Schneider M. et al. Carbohydrate-deficient transferrin is elevated in catabolic female patients. Alcohol Alcohol, 2001, 36 (6), 603-607, Anttila P., Jarvi K., Latvala J. et al. Diagnostic characteristics of different carbohydrate-deficient transferrin methods in the detection of problem drinking: effects of liver disease and alcohol consumption. Alcohol Alcohol, 2003, 38 (5), 415-420]. Разработаны методы по анализу изоформ УДТ — капиллярный электрофорез и капиллярный зонный электрофорез, которые в настоящее время являются наиболее чувствительными и позволяют оценить процентное соотношение изоформ [Sillanaukee P., Lof K. et al. Comparison of different methods for detecting carbohydrate-deficient transferrin. Alcohol Clin. Exp. Res., 1994, 18, 1150-1155]. На уровень УДТ влияет прием контрацептивов. Ложноположительные результаты встречаются в редких случаях при наличии генетически обусловленной D-формы трансферрина либо при врожденном нарушении метаболизма гликопротеинов — синдроме углевод-дефицитного гликопротеина.

Определение углевод-дефицитного белка — трансферрина в последнее время является наиболее информативным, однако его широкое применение имеет ряд технических и экономических ограничений, так как требуется дорогостоящее оборудование.

Задачей настоящего изобретения является совершенствование метода лабораторной диагностики злоупотребления алкоголем, доступного для широкого использования в лабораториях поликлиник и клиник широкого профиля.

Поставленная задача решается тем, что в сыворотке крови определяют колориметрическим методом уровень белкового компонента мукопротеинов по содержанию тирозина и углеводного компонента мукопротеинов — по содержанию гексоз — орциновым методом. При увеличении коэффициента соотношения белкового и углеводного компонента мукопротеинов более чем в 40 раз диагностируют злоупотребление алкоголем.

Способ осуществляют следующим образом. Кровь (5-10 мл), взятая из локтевой вены с 8 до 9 ч, после 15-минутной инкубации при 37°C центрифугируется при 3000 об/мин в течение 10 мин, после чего отделяется сыворотка. Уровень белкового компонента мукопротеинов определяют по содержанию тирозина с помощью набора реактивов «Мукопротеины» («Hospitex diagnostics)), Швейцария). Тирозин — ароматическая аминокислота с высоким уровнем полярности, взаимодействие тирозина с реактивом Кумасси приводит к образованию хромогена (синее окрашивание), интенсивность которого используется для расчета уровня мукопротеинов. Содержание гексоз в мукопротеинах определяют орциновым методом после осаждения мукопротеинов фосфорновольфрамовой кислотой из хлорного экстракта сыворотки крови (Камышников B.C. Справочник по клинической химии. — Минск. «Беларусь» 1982. — 358 с.). Затем производят расчет соотношения уровня белкового и углеводного компонента мукопротеинов, при увеличении этого коэффициента более чем в 40 раз диагностируют злоупотребление алкоголем.

Классы МПК:	G01N33/50 химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания A61B5/145 измерение характеристик крови в живом организме, например концентрации газа, величины pH
Автор(ы):	Высокогорский Валерий Евгеньевич (RU) , Арзамасова Ольга Александровна (RU) , Лукина Наталья Юрьевна (RU)
Патентообладатель(и):	Государственное образовательное учреждение Высшего профессионального образования «Омская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Росздрава» (RU)
Приоритеты:

Содержание (Медиана) мукопротеинов (тирозин) и гексоз в мукопротеинах в сыворотке крови больных, злоупотребляющих алкоголем (г/л)
Показатели	Контрольная группа	Больные хроническим алкоголизмом
МП (тирозин)	11,25	15,60
Гексозы в МП	0,31	0,21
Соотношение тирозин/гексозы в МП	27,80	45,62

Пример 1. Больной М., 40 лет. Кровь из вены взята с 8 до 9 ч. В сыворотке крови с помощью набора реактивов «Мукопротеины» определили уровень белкового компонента мукопротеинов, орциновым методом определили уровень углеводного компонента в мукопротеинах. Результаты анализа: уровень мукопротеинов, определяемых по тирозину — 15,6 г/л, уровень углеводов в мукопротеинах — 0,21 г/л. Соотношение мукопротеинов (тирозин)/гексозы мукопротеинов — 15,6/0,21=74,3; следовательно, у больного сформирован алкогольный абстинентный синдром, можно поставить диагноз: алкоголизм. Клинически данному больному был поставлен диагноз: алкоголизм второй стадии.

Пример 2. Больной Г., 51 год. Кровь из вены взята с 8 до 9 ч. В сыворотке крови с помощью набора реактивов «Мукопротеины» определили уровень белкового компонента мукопротеинов, орциновым методом определили уровень углеводного компонента в мукопротеинах. Результаты анализа: уровень мукопротеинов, определяемых по тирозину — 18 г/л, уровень углеводов в мукопротеинах — 0,31 г/л. Соотношение мукопротеинов (тирозин)/гексозы мукопротеинов — 18/0,31=58,06; следовательно, у больного сформирован алкогольный абстинентный синдром, можно поставить диагноз: алкоголизм. Клинически данному больному был поставлен диагноз: алкоголизм второй стадии.

Способ диагностики злоупотребления алкоголем, включающий определение соотношения углеводного и белкового компонента в мукопротеинах сыворотки крови, отличающийся тем, что при увеличении соотношения уровня белкового компонента мукопротеинов к углеводному компоненту мукопротеинов более чем в 40 раз диагностируют злоупотребление алкоголем.

источник