Меню Рубрики

Электрофорез липопротеинов сыворотки крови

Изучение спектра белка в крови совершается различными способами, но наиболее популярным считается определение % содержания липопротеинов в сыворотке методом электрофореза.

В чем заключается методика?

Белки крови с отрицательным зарядом под действием электрического поля осуществляют движение на бумажном носителе, который смочен специальным раствором в сторону положительного электрода. Их скорость при этом зависит от веса частиц и размера заряда. В ходе данного процесса кровяные белки делятся на пять основных фракций:
1. Альбумины.
2. Альфа-1-глобулины.
3. Альфа-2-глобулины.
4. Бета-глобулины.
5. Гамма-глобулины.

Первая фракция отличается отрицательным зарядом и маленьким весом молекулы, а потому альбумины двигаются с большой скоростью в электрическом поле. К тому же они дальше прочих фракций продвигаются от стартовой отметки.
Самая маленькая скорость отмечена у гамма-глобулинов, которые остаются на стартовой линии. Уровень молекулярного заряда приближен к нейтральному.

Фракционные белковые пятна, которые получились при помощи электрофореза на любом носителе, называются электрофореграммой. Подсчеты содержания и прочие замеры проводятся в ходе денситометрического сканирования электрофореграммы.

Каждая из фракций характеризуется собственным типом белков, входящих в состав. В случае различных болезней содержание определенных белковых фракций в процентном соотношении изменяется. Нормальный уровень белка в кровяной сыворотке называют диспротеинемией.

Как подготовиться к диагностике?

Перед тем как проводить определение % содержания липопротеинов в сыворотке методом электрофореза, необходимо правильно подготовиться к процессу. Следует знать, что:
1. Для обследования берется кровь из вены.
2. В момент наложения жгута и проведения пункции возможно легкое ощущение дискомфорта.
3. Ограничений в рационе нет.
4. Пациент обязан предупредить лаборанта и доктора об употреблении лекарственных средств, влияющих на итоги процедуры.
После осуществления пункции кровь собирают в пробирку, а затем место прокола придавливается ватой, чтобы остановить кровотечение. Если возникает синяк, на месте пункции проводят компрессы согревающего характера.

Причины осуществления анализа

Помимо нефротического синдрома значительная утрата белков происходит при синдроме Лаэлла, недугах системы пищеварения и ожогах, которые затронули большую площадь кожи. При болезнях пищеварительной системы расшифровка протеинограммы говорит о снижении процента альбумина в случае параллельного увеличения каждой фракции глобулина.

Чтобы регулировать общий белок и альбумин в крови, непрерывно производят определение % содержания липопротеинов в сыворотке методом электрофореза, а помимо этого, вводят препараты для замещения белковых элементов в сыворотке.

Явное уменьшение гамма-фракции говорит о том, имеется сложный иммунодефицит приобретенного либо врожденного характера. Врачи отмечают, что для обнаружения полной картины болезни необходимо проводить определение числа иммуноглобулинов A, G, M.
Электрофорез считается единственным способом, который предоставлял возможность обнаружения парапротеинемии – признака, присущего опухолям доброкачественного либо злокачественного характера.

В нашем лабораторно-диагностическом центре в Тольятти проводят подобное исследование крови высокого качества и очень быстро! Благодаря инновационному оснащению лаборатории и высокой квалификации докторов, диагностика позволяет получить максимально точные результаты.

источник

В плазме человеческой крови находится множество белковых компонентов. Они различны по своему составу, строению и подвижности в определенной среде, проводящей электрический ток. На этом и строится разделение общего белка, который локализуется в плазме, на различные белковые фракции. При проведении электрофореза сыворотки крови выясняют количественное отношение отдельных белковых составляющих и структур. Это необходимо для определения наличия у человека различных патологических явлений, например инфекций или онкологии. Именно электрофорез белков сыворотки крови имеет большое значение при проведении диагностики различных болезней.

Для расщепления белковых фракций применяют электрофорез сыворотки крови, принцип которого основан на разной подвижности белковых компонентов в созданном электрическом поле. Такой метод исследования является более точным и информативным, в отличие от стандартного общего анализа крови. Но при этом электрофорез показывает только количество определённой фракции белка, характер и степень патологического процесса в общей форме. Анализ проведенных исследований позволяет медицинским специалистам выяснить, какое именно соотношение белковых фракций наблюдается в организме человека, и определить специфику патологии, присущую конкретному заболеванию.

Большую часть основной биологической жидкости человека, или крови, составляют белки. В общем количестве их норма находится в пределах 60-80 г/л. Для получения точного анализа проводится электрофорез сыворотки крови на бумаге. Это исследование является самым распространенным способом анализа. Основной средой является особая фильтровальная бумага. Главная ее особенность – высокая гигроскопичность. Такая бумага может поглотить воды больше своего веса в 130-200 раз. В зависимости от применяемого оборудования электрофорез на бумаге длится 4-16 часов. Происходит подразделение белковых структур. Затем полосы бумаги обрабатывают специальными красками для получения анализа. Такая методика является самой распространенной в работе медицинских лабораторий. За счёт воздействия электрического тока белковые фракции, заряженные отрицательно, двигаются в сторону положительно заряженного электрода. Благодаря этому белковые составляющие крови подразделяются на 5 известных фракций:

Альбумины заряжены отрицательно, имеют маленькую, по сравнению с другими фракциями, молекулярную массу. За счет этого скорость их передвижения гораздо выше, чем у остальных фракций, и они дальше всех локализуются от участка старта. Первые три фракции глобулина передвигаются с более низкой скоростью из-за своей массы. Но самая маленькая скорость регистрируется у γ-глобулинов. Эти белки имеют большую массу и крупные, относительно других, размеры. Их заряд почти нейтрален, поэтому данная белковая фракция практически не сдвигается с линии старта.

В настоящее время электрофорез сыворотки крови часто проводимый анализ для постановки точного диагноза болезни. Этот анализ могут назначить как терапевты, так врачи узкого профиля. Показаниями по проведению исследований будут:

  • различные воспаления;
  • болезни хронической природы;
  • патологические процессы в соединительной ткани;
  • внутреннее кровотечение;
  • злокачественные новообразования.

Для того чтобы полученные результаты поведенных исследований были верными, не менее чем за 8 часов до сдачи крови необходимо отказаться от приёма еды. Кроме того, необходимо согласовать прием лекарственных средств, если таковые имеются, с лечащим врачом.

Для того чтобы результаты не были по ошибке завышены, необходимо снизить до минимума возможность свертывания крови для определения показателя белковых фракций и общего белка. Электрофорез сыворотки крови проводится аккуратно, поскольку существует вероятность искажения полученных результатов из-за фибриногена. Он может прятать ненормальные белки или быть спутанным с ними.

В течение суток после сдачи пробы будет готов анализ на электрофорез белков сыворотки крови. Норма полученных показателей по категориям у взрослых людей:

  1. Общий белок – 63-82 г/л.
  2. Альбумины – 40-60 % от общего количества фракций.
  3. α1-глобулины – 2-5 %.
  4. α2-глобулины – 7-13 %.
  5. β-глобулины – 8-15 %
  6. γ-глобулины – 12-22 %.

Изменение количества любой белковой фракции в большую или меньшую сторону может свидетельствовать о развитии той или иной патологии. Для получения достоверной информации об этом необходим электрофорез белков сыворотки крови. Расшифровка результатов облегчит медицинским специалистам постановку диагноза и выбор лечения.

В самом начале при анализе полученных результатов определяют количество альбумина. Увеличение этой фракции может говорить об обезвоживании. Такое может произойти, если у больного отмечается затяжная рвота или нарушения в пищеварительной системе. Также увеличение альбумина происходит при ожогах большой площади кожного покрова.

Гораздо опаснее, если в организме снижается количество альбуминов, это может говорить о следующих патологиях:

  1. Поражения почек и печени.
  2. Патологии желудочно-кишечного тракта.
  3. Инфекционные процессы.
  4. Нарушения в деятельности сердечно-сосудистой системы.
  5. Кровотечения.
  6. Злокачественные новообразования.
  7. Сепсис.
  8. Ревматизм.

Незначительное уменьшение количества альбуминов может быть также:

  1. У будущих матерей.
  2. При превышении дозы лекарственных препаратов.
  3. При длительной лихорадке.
  4. У заядлых курильщиков.

Уменьшение количества a1-глобулинов регистрируется при недостатке α1-антитрипсина. Увеличение же отмечают при обострении воспалений в организме, нарушениях в работе печени, при тканевом распаде.

Регистрируют его при сахарном диабете, воспалительных процессах в поджелудочной железе, у новорожденных детей при желтухе, при гепатитах токсического происхождения. Свидетельствует оно и о неправильном, несбалансированном питании.

Происходит при наличии следующих заболеваний:

  1. Воспаления, особенно с присутствием гнойного экссудата (воспаление легких и другие процессы с наличием гноя).
  2. Поражения соединительной ткани (например, ревматизм).
  3. Злокачественные новообразования.
  4. Периоды восстановления после ожогов.
  5. Поражение почек.

Кроме того, такое явление характерно для гемолиза крови в пробирке во время проведения исследования.

Проявляется при гиперлипопротеидемии (увеличении количества липидов в крови), патологиях печени и почек. Можно обнаружить при открытой язве желудка, а также гипотиреозе (нарушение работы щитовидной железы). Снижение фракции регистрируют при гипобеталипопротеинемии (повышение в крови компонента беталипопротеин).

Эта фракция включает в свой состав иммуноглобулины. Поэтому увеличение γ-глобулинов регистрируется при сбоях в иммунитете. Обычно это происходит при различных инфекциях, развитии воспалительного процесса, изменениях ткани и ожоговых поражениях. Рост γ-глобулинов отмечают у больных хронической формой гепатита. Практически такая же картина характерна для цирроза печени. При запущенных случаях данного заболевания количество белковой фракции γ-глобулинов значительно выше показателя альбуминов. При определенных болезнях могут возникать сбои в образовании γ-глобулинов, и происходит развитие измененных протеинов в крови – парапротеинов. Для выяснения характера такого развития производится дополнительное исследование – иммуноэлектрофорез. Такая картина характерна для миеломного заболевания и патологии Вальденстрема.

Увеличение количества γ-глобулинов также присуще следующим патологиям:

  • красной волчанке;
  • эндотелиоме;
  • ревматоидной форме артрита;
  • остеосаркоме;
  • хронической форме лимфолейкоза;
  • кандидомикозу.

Снижение показателя γ-глобулинов подразделяют на 3 вида:

  1. Физиологический (характерен для детей в возрасте от трех до пяти месяцев).
  2. Врожденный (развивается с момента рождения).
  3. Идиопатический (когда причину развития установить не удается).

Вторичное снижение регистрируется при развитии заболеваний, которые вызывают истощение иммунной системы. В последнее время в медицинской практике все чаще проводится анализ на определение количества преальбуминов. Обычно такое исследование проводят больным, находящимся в реанимации.

Уменьшение количества преальбуминов очень важный и точный тест на определение недостаточности белковых структур в организме пациента. При проведении анализа на преальбумины выполняют коррекцию белкового метаболизма у таких пациентов.

Принцип проведения подобного анализа схож с технологией выполнения электрофореза сыворотки крови. Проводят его для более точной постановки диагноза или обнаружения других патологий. Кроме того такой анализ поможет выявить у больного наличие протеинурии.

Электрофорез сыворотки крови и мочи – важные методы в диагностике различных инфекционных заболеваний. Благодаря методике исследования и высокой точности они помогают определить вид патологии. Точный диагноз – верный путь к правильному лечению и полному выздоровлению.

источник

Все типы липопротеинов имеют сходное строение — гидрофобное ядро и гидрофильный слой на поверхности (рис. 8-18). Гидрофильный слой образован белками, которые называют

апопротеинами, и амфифильными молекулами липидов — фосфолипидами и холестеролом. Гидрофильные группы этих молекул обращены к водной фазе, а гидрофобные части — к гидрофобному ядру липопротеина, в котором находятся транспортируемые липиды. Некоторые апопротеины интегральные и не могут быть отделены от липопротеина, а другие могут свободно переноситься от одного типа липоп-ротеина к другому. Апопротеины выполняют несколько функций:

• формируют структуру липопротеинов;

• взаимодействуют с рецепторами на поверхности клеток и таким образом определяют, какими тканями будет захватываться данный тип липопротеинов;

• служат ферментами или активаторами ферментов, действующих на липопротеины.

В организме синтезируются следующие типы липопротеинов (см. ниже табл. 8-5): хиломик-роны (ХМ), липопротеины очень низкой плотности (ЛПОНП), липопротеины промежуточной плотности (ЛППП), липопротеины низкой

Рис. 8-18. Липопротеины плазмы крови.

плотности (ЛПНП) и липопротеины высокой плотности (ЛПВП).

Каждый из типов ЛП образуется в разных тканях и транспортирует определённые липиды. Например, ХМ транспортируют экзогенные (пищевые жиры) из кишечника в ткани, поэтому триацилглицеролы составляют до 85% массы этих частиц.

ЛП хорошо растворимы в крови, не коалес-цируют, так как имеют небольшой размер и отрицательный заряд на поверхности. Некоторые ЛП легко проходят через стенки капилляров кровеносных сосудов и доставляют липиды к клеткам.

Большой размер ХМ не позволяет им проникать через стенки капилляров, поэтому из клеток кишечника они сначала попадают в лимфатическую систему и потом через главный грудной проток вливаются в кровь вместе с лимфой.

Методы исследования.Состав ЛП крови можно исследовать разными методами (рис. 8-19). Метод ультрацентрифугирования позволяет разделить ЛП, используя их различие в плотности, которая зависит от соотношения количества липидов и белков в частице. Так как жир имеет меньшую, чем вода, плотность, то ХМ,

Читайте также:  Гальванизация чем отличается от электрофореза

содержащие более 85% жиров, располагаются на поверхности сыворотки крови, а ЛПВП, содержащие наибольшее количество белков, имеют самую большую плотность и при центрифугировании располагаются в нижней части центрифужной пробирки. Так как ЛП впервые были выделены из сыворотки крови методом ультрацентрифугирования, то в названии указывают плотность частиц. Однако метод ультрацентрифугирования непригоден для широкого использования, поэтому в клинических лабораториях обычно применяют метод электрофореза. Скорость движения частиц при электрофорезе зависит от их заряда и размера. Заряд, в свою очередь, зависит от количества белков на поверхности ЛП (табл. 8-5). При электрофорезе в геле все типы ЛП движутся к положительному полюсу; ближе к старту располагаются ХМ, а ЛПВП, имеющие наибольшее количество белков и наименьший размер, удаляются от старта дальше других частиц.

Состав ЛП крови значительно изменяется в течение суток. В абсорбтивный период (особенно при употреблении жирной пищи) в крови появляются ХМ. Богатая углеводами пища способствует образованию ЛПОНП, так как эти ЛП транспортируют жиры, синтезированные

Рис. 8-19. Разделение липопротеинов сыворотки крови.А — метод ультрацентрифугирования. Б — метод электрофореза в полиакриламидном геле через 2 ч после еды.

Таблица 8-5. Липопротеины — транспортные формы липидов

Примечания:ФЛ — фосфолипиды; ХС — холестерол; ЭХС — эфиры холестерола; ТАГ — триацилглицеролы.Функции апопротеинов

• В-100 — основной белок ЛПОНП, ЛПНП, ЛППП, взаимодействует с рецепторами ЛПНП;

• C-II — активатор ЛП-липазы, переносится с ЛПВП на ХМ и ЛПОНП в крови;

• Е — обеспечивает связывание нескольких типов липопротеинов с рецепторами ЛПНП и др. рецепторами;

• А-I — активатор фермента лецитин:холестеролацилтрансферазы (ЛХАТ).

в печени из углеводов. В постабсорбтивный период и при голодании в крови присутствуют ЛПНП, ЛПВП и в небольшом количестве ЛПОНП, основная функция которых заключается в транспорте холестерола.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студента самое главное не сдать экзамен, а вовремя вспомнить про него. 10034 — | 7498 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

источник

Липопротеины являются мицеллярными структурами, которые различаются по молекулярной массе, процентному содержанию отдельных липидных компонентов, соотношению белков и липидов. Относительно постоянный уровень циркулирующих в крови липопротеинов поддерживают процессы синтеза и секреции липидных и апобелковых компонентов, активного транспорта липидов между липопротеиновыми частицами и наличие пула свободных апобелков крови, специфический транспорт плазменных белков, изменения в составе липопротеинов в результате процессов, активируемых гепаринзависимой липопротеидлипазой (КФ 3.1.1.34), печеночной триацилглицероллипазой (КФ 3.1.1.3.), фосфатитдилхолин‑холестерол-ацилтрансферазой (КФ 2.3.1.43.), удалением из циркуляции путем интернализации как липопротеинов, так и их белковых компонентов.

Разделяют липопротеины методом ультрацентрифугирования в солевых растворах, используя их различия в плавучей плотности. Меньшую плавучую плотность имеют хиломикроны, которые образуют сливкообразный слой на поверхности сыворотки при хранении ее в течение суток при температуре 0+4°С, при дальнейшем насыщении сыворотки нейтральными солями можно отделить липопротеины очень низкой (ЛПОНП), низкой (ЛПНП) и высокой (ЛПВП) плотности.

Учитывая разное содержание белка (которое отражается на суммарном заряде частиц), липопротеины разделяют методом электрофореза в различных средах (бумага, ацетатцеллюлоза, полиакриламидный, агаровый, крахмальный гели). Наибольшей подвижностью в электрическом поле обладают a‑липопротеины (ЛПВП), содержащие большее количество белка, после них следуют β‑ и преβ‑липопротеины (ЛПНП и ЛПОНП соответственно), а хиломикроны остаются около линии старта.

Состав и некоторые свойства липопротеинов сыворотки крови
Критерии оценки липопротеинов Типы липопротеинов
ЛПВП ЛПНП ЛПОНП Хиломикроны
Плотность, г/л 1063‑1210 1010‑1063 1010‑930 930
Молекулярная масса, ×10 5 1,8‑3,8 22,0 30,0‑1280,0
Размер молекул и частиц, нм 7,0‑10,0 10,0‑30,0 200,0 >200
Всего белков, % 50‑57 21‑22 5‑12 2
Всего липидов, % 43‑50 78‑79 88‑95 98
Главные апопротеины АпоA‑I, C‑I, II, III Апо B Апо B, C‑I, II, III Апо C и B
Свободный холестерин 2‑3 8‑10 3‑5 2
Этерифицированный холестерин, % 19‑20 36‑37 10‑13 4‑5
Фосфолипиды, % 22‑24 20‑22 13‑20 4‑7
Общий холестерин / фосфолипиды 1,0 2,3 0,9 1,1
Триацилглицерины 4‑8 11‑12 50‑60 84‑87
Плазма (электрофорез) α‑липопротеины 0,2‑0,25 г/л
β‑липопротеины 2,1‑4,0 г/л
преβ‑липопротеины 1,3‑2,0 г/л
хиломикроны 1,0‑2,5 г/л

Изменения в спектре отдельных фракций липопротеинов не всегда сопровождаются гиперлипидемией, поэтому наибольшее клинико‑диагностическое значение имеет выявление типов дислипопротеинемий, которое проводят по принципам, общим с типированием гиперлипопротеинемий по Фредриксону с соавт. (1965, 1971) с введением дополнительных типов гипер‑α‑ и гипо‑α‑липопротеинемий и гипоβ‑липопротеинемии:

Обусловлена генетическим дефектом липопротеинлипазы. В результате, вследствие нарушения превращения хиломикронов в остаточные (ремнантные) формы, снижается их апоЕ-рецепторный эндоцитоз.

  • значительное увеличение количества хиломикронов;
  • нормальное или слегка повышенное содержание преβ‑липопротеинов (ЛПОНП);
  • резкое увеличение концентрации ТАГ.
  • отношение ХС / ТАГ 2. Подтип IIb:

Вызвана функциональным снижением активности апоВ-100-рецептора которое развивается при нарушении формирования зрелых форм ЛПНП. Причиной блока созревания ЛПНП являются

  • дефицит апобелка D, при этом не взаимодействуют ЛПВП и ЛПНП,
  • снижение активности фермента лецитин-холестерол-ацилтрансферазы,
  • дефект апобелка А-1, что приводит к нарушению функционирования ЛПВП,
  • ассоциация белка острой фазы амилоида А с ЛПВП и, в результате, нарушение ЛХАТ-реакции и функционирования ЛПВП.
  • возрастание концентрации β‑липопротеинов (ЛПНП) и преβ‑липопротеинов (ЛПОНП);
  • высокий уровень холестерина;
  • умеренное повышение триацилглицеринов.

Клинически проявляется атеросклеротическими нарушениями. Первичная гипер β‑липопротеинемия встречается более часто и наблюдается уже в раннем возрасте. В случае гомозиготной формы заканчивается летальным исходом от инфаркта миокарда в молодом возрасте, вторичная отмечается при нефрозах, заболеваниях печени, миеломной болезни, макроглобулинемии.

Обусловлена дефектом апобелка Е, ответственного за связывание остаточных хиломикронов и ЛПОНП с рецепторами на гепатоците. В результате извлечение из крови этих частиц снижается.

  • возрастание концентрации β‑липопротеинов (ЛПНП) и преβ‑липопротеинов (ЛПОНП);
  • высокий уровень холестерина и триацилглицеринов;
  • отношение ХС / ТАГ = 0,3‑2,0 (чаще составляя около 1,0).

Клинически проявляется атеросклерозом с коронарными нарушениями, чаще встречается у взрослых. У части больных отмечаются плоские, бугорчатые и эруптивные ксантомы. Вторичная гиперлипопротеинемия III типа встречается у больных системной красной волчанкой и диабетическим кетоацидозом.

Обусловлена неадекватно высоким синтезом триацилглицеролов в печени в резуль-тате поступления избытка глюкозы.

  • повышение ЛПОНП;
  • повышение уровня триацилглицеридов;
  • нормальный или слегка повышенный уровень холестерина.

Первичная гиперлипопротеинемия IV типа приводит к развитию ожирения и атеросклероза после 20 лет, вторичная — наблюдается при переедании, гипотиреозе, сахарном диабете 2 типа, панкреатите, нефрозе, алкоголизме.

Обусловлена умеренным снижением активности липопротеинлипазы в результате дефекта апоСII-белка, что приводит к накоплению в крови хиломикронов и ЛПОНП.

  • повышение уровня хиломикронов;
  • повышение уровня преβ‑липопротеинов (ЛПОНП);
  • содержание триглицеринов повышенное, в ряде случаев резко;
  • содержание холестерина в норме или умеренно повышено;
  • отношение ХС / ТАГ = 0,15‑0,60

Клинически проявляется как первый тип.

  • повышение количества ЛПВП;
  • повышение уровня α‑холестерина свыше 2 ммоль/л.

Известны случаи семейной гипер‑α‑холестеринемии и увеличение ЛПВП в крови при тренировке к длительным физическим нагрузкам.

Обусловлена врожденным нарушением синтеза апопротеинов А‑I и А‑II.

  • отсутствие нормальных и появление аномальных ЛПВП;
  • снижение содержания общего холестерина до 0,26 ммоль/л и менее;
  • увеличение доли эфиров холестерина.

Клинические проявляется тонзиллитом, рано развивающимся атеросклерозом и ишемической болезнью сердца.

Обусловлена снижением синтеза в печени апопротеина В.

  • снижение количества хиломикронов;
  • снижение уровня ЛПОНП и ЛПНП.
  • снижение холестерина до 0,5‑2,0 ммоль/л;
  • снижение содержания триглицеридов до 0‑0,2 г/л.

Клинически проявляется нарушением всасывания пищевых жиров, пигментным ретинитом, акантозом и атаксической невропатией.

1. Гипо‑α‑липопротеинемия часто сочетается с увеличением в крови ЛПОНП и ЛПНП. Клинически проявляется как II, IV и V типы гиперлипопротеинемий, что увеличивает риск возникновения атеросклероза и его осложнений.

2. Гипо‑β‑липопротеинемия выражается в снижении в крови ЛПНП. Клинически проявляется нарушением всасывания пищевых жиров в кишечнике.

Обусловлена генетическим дефицитом фермента лецитин:холестерин-ацил-трансферазы.

  • снижение коэффициента этерификации холестерина;
  • нарушение химического состава и структуры всех классов липопротеинов.
  • появление аномального липопротеина X во фракции ЛПНП.

Клинически проявляется гипохромной анемией, почечной недостаточностью, спленомегалией, помутнением роговицы вследствие накопления неэтерифицированного холестерина в мембранах клеток почек, селезенки, роговицы глаза, эритроцитах.

В присутствии CaCl2 и гепарина нарушается коллоидоустойчивость белков сыворотки крови и осаждается фракция преβ‑ и β‑липопротеинов.

Увеличение фракций β‑ и пре‑β‑липопротеинов в сыворотке крови тесно связано с гиперхолестеринемией, которая сопровождает атеросклероз, диабет, гипотиреоз, мононуклеоз, некоторые острые гепатиты, резкую гипопротеинемию, ксантоматоз, гликогеновую болезнь, также наблюдается при жировой дистрофии печени, механической желтухе. Диспротеинемическая проба Бурштейна имеет значение не только при гиперлипемических состояниях, но и как функциональная печеночная проба. При сопоставлении с тимоловой пробой этот показатель особенно ценен. Тимоловая проба более чувствительна в начальной фазе, а проба Бурштейна в конечной фазе острого гепатита и оценки постгепатитного состояния. В сочетании с тимоловой пробой она имеет большое значение для дифференциации механической желтухи от паренхиматозной. При паренхиматозной желтухе обе пробы положительны либо тимоловая положительна, а проба на β‑липопротеины отрицательна. При механической желтухе тимоловая проба отрицательна (если нет вторичного гепатита), проба Бурштейна — резко положительна.

Снижение содержания β‑липопротеинов отмечается при циррозе, токсической дистрофии печени, гипофункции симпатоадреналовой системы.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Липопротеин плазмы крови — транспортная форма липидов в организме человека. Они осуществляют транспорт липидов как экзогенного (пищевого), так и эндогенного происхождения. Отдельные липопротеины захватывают избыточный холестерин из клеток периферических тканей для транспорта его в печень, где происходит его окисление в жёлчные кислоты и выведение с жёлчью. С участием липопротеинов транспортируются также жирорастворимые витамины и гормоны.

Плазменные липопротеины имеют сферическую форму. Внутри находится жировая «капля», содержащая неполярные липиды (триглицериды и эстерифицированный холестерин) и формирующая ядро ЛП-частицы. Оно окружено оболочкой из фосфолипидов, неэстерифицированного холестерина и белка.

Существует несколько методов определения липопротеинов в крови. Один из них — определение содержания холестерина в различных классах липопротеинов — рассмотрен выше. Другой метод исследования содержания липопротеинов — электрофоретический. При использовании этого метода отдельные фракции липопротеинов классифицируют, сравнивая их электрофоретическую подвижность с подвижностью обычных сывороточных белков. На основании электрофоретической подвижности липопротеинов были разделены на следующие фракции.

  • Хиломикроны. При проведении электрофореза хиломикроны остаются на старте (содержат очень мало белка) подобно у-глобулинам; представляют собой богатые жиром частицы, поступающие в кровь из лимфы и транспортирующие пищевые триглицериды. Они являются самыми крупными липопротеинами. Плазма крови здоровых людей, не принимавших пищи в течение 12-14 ч, хиломикроны не содержит или содержит их в ничтожном количестве.
  • Альфа-липопротеины. При электрофорезе а-ЛП движутся вместе с альфа-глобулинами и соответствуют ЛПВП. ЛПВП содержат до 50% белка, приблизительно 30% фосфолипидов, 20% ХС и очень немного триглицеридов. Образуются в печени и стенке тонкой кишки.
  • Бета-липопротеины. При электрофорезе на бумаге бета-ЛП движутся вместе с бета-глобулинами и соответствуют ЛПНП. ЛПНП содержат 25% белка, 50% ХС, 20% фосфолипидов и 8-10% триглицеридов. Предполагают, что ЛПНП образуются частично или полностью при распаде липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП).
  • Пре-бета-липопротеины. При электрофорезе пре-бета-липопротеины оказываются между альфа-липопротеинами и бета-липопротеинами, они соответствуют ЛПОНП.

Электрофорез липопротеинов позволяет провести качественный анализ липопротеинов. Существует два метаболических процесса, определяющих патогенез атеросклероза: скорость инфильтрации богатых ХС ЛП во внутренний слой стенки кровеносных сосудов и скорость удаления холестерина из сосудов с последующим выведением из организма. В этой сбалансированной системе повышенные концентрации хиломикронов, ЛПОНП и ЛПНП определяют риск избыточного отложения холестерина внутри стенки сосуда. С другой стороны, увеличенные концентрации ЛПВП способствуют повышению скорости удаления холестерина из атеросклеротических бляшек. Метод электрофореза ЛП может дать дополнительную информацию о соотношении этих метаболических процессов.

Читайте также:  Эуфиллин электрофорез как делать

Помимо перечисленных выше классов липопротеинов, в плазме крови могут быть обнаружены и другие ЛП-комплексы, в том числе необычные, которые получили название патологические (или условно-патологические) ЛП. К ним относятся β-ЛПОНП, ЛПВПхс и ЛП-Х. β-ЛПОНП, называемые также флотирующими β-ЛП, характеризуются тем, что имеют электрофорети-ческую подвижность, свойственную β-ЛП, и плотность, соответствующую ЛПОНП, благодаря чему всплывают при ультрацентрифугировании вместе с последними. Наличие β-ЛПОНП — характерный признак III типа ДЛП. ЛПВПхс представляет собой фракцию ЛПВП, перегруженную холестерином, роль этих ЛП в патогенезе атеросклероза не выяснена. ЛП-Х характеризуются высоким содержанием фосфолипидов (65-68%) и неэстерифицированного холестерина (23-27%). Благодаря высокой жёсткости ЛП-Х способствуют повышению вязкости крови. Они появляются в крови при обтурационной желтухе и при недостаточности лецитин-холестериновой ацилтрансферазы. Роль ЛП-Х в развитии атеросклероза не изучена.

источник

Этот анализ является исследованием, которое позволяет определить их количественные и качественные показатели по тому, как белки распределяются в электрическом поле. Исследование основано на том, что белковые молекулы несут заряды, положительные или отрицательные в зависимости от того, какой кислотностью будет обладать среда, в которой будет проводиться непосредственно электрофорез. Молекулы, которые окажутся положительно заряженными, будут адсорбироваться лучше, нежели чем те, которые несут отрицательный заряд.

Носителями, которые будут применяться для электрофореза, могут быть хроматографическая бумага, агаровый гель, полиакриловой гель, ацетатцеллюлозная бумага или акриловый гель. Значительно реже применяется капиллярный электрофорез.

Во время анализа белки разделяют на 5 или 6 фракций, в зависимости от применяемого метода. Это будут гамма-глобулины, которые делятся на бета-1 и бета-2, альбумины — альфа-1 и альфа-2, а также бета-глобулины.

Имеются установленные нормы белковых фракций, которые должны присутствовать в крови. Отклонение их от показателей является признаком нарушения в организме, что требует проведения обследования для выявления причины.

Фракция Норма в г/л
Альбумин 35-44
Глобулин альфа-1 1-3
Глобулин альфа-2 5-8
Бета-глобулин 4-10
Гамма-глобулин 5-12

Значения показателей, в зависимости от того какие реактивы применяются в конкретной лаборатории, могут несколько изменяться. Поэтому в бланке результатов исследования в каждом медицинском учреждении обязательно указываются значения нормы, которые приняты в нем. На них будет ориентироваться врач при расшифровке анализа.

Электрофорез белков крови назначают не очень часто, так как сегодня современные лабораторные исследования позволяют провести анализ на определенный белок, что ускоряет процесс диагностики. Абсолютным показанием к электрофорезу является наличие монолокальной гаммапатии. Также иногда анализ может быть показан в таких случаях:

  • чрезмерно высокая скорость оседания эритроцитов, когда она превышает 50 мм/ч;
  • значительно повышенный уровень гамма-глобулинов;
  • скрининговое обследование для контроля эффективности лечения миеломной болезни;
  • чрезмерно высокий общий белок в крови;
  • ряд аутоиммунных заболеваний, поражающих печень и почки;
  • слабость, для которой нет выраженной причины;
  • развитие патологических переломов костей и постоянные боли в костях;
  • частые рецидивы инфекционных заболеваний;
  • нарушения, обнаруженные в прочих анализах, указывающие на то, что у человека могут развиваться анемии, лейкемии, гиперкальциемия или гипоальбуминемия.

При общей диспансеризации и получении медицинских справок для трудоустройства данное исследование крови не осуществляется. Не требуется оно и в процессе подготовки человека к хирургическому вмешательству.

Для получения наиболее точных результатов рекомендуется соблюдение правил подготовки к анализу. Они включают в себя голодную диету в течение 15 часов до того как будет взята кровь, когда пациент может употреблять только чистую не газированную воду. За 90 минут до проведения исследования необходимо полностью исключить нагрузки как эмоциональные, так и физические, и курение в активной или пассивной форме. Чтобы не допустить искажение данных, забор материала не проводят сразу после того, как был осуществлен гемодиализ или проведена процедура, при которой использовались радиоконтрастные составы. Важно также, чтобы за несколько дней до исследования полностью было исключено лечение пенициллином, так как он вызывает расщепление амбулина, что исказит результат.

Фракция Повышение Понижение
Амбулин Злоупотребление алкоголем, период вынашивания ребёнка, дегидрация Холецистит в острой форме, лейкоз, миелома, саркоидоз, пневмония, остеомиелит, системная красная волчанка, лимфома
Глобулин альфа-1 Цирроз печени, стрессовые состояния, лимфогранулематоз, период вынашивания ребёнка, язва желудка, острое или хроническое воспаление Гепатит вирусной природы в острой форме
Глобулин альфа-2 Сахарный диабет, остеомиелит, гломерулонефрит в острой форме, стрессовые состояния, системная красная волчанка, узловатый полиартрит, цирроз Гипертиреоз, гепатит вирусной природы в острой форме, гемолиз интраваскулярный
Бета-глобулин Сахарный диабет, саркоидоз, ревматоидный артрит, беременность, гломерулонефрит, желтуха подпеченочная, нефротический синдром Лейкоз, цирроз, склеродермия имеющая системный характер, лимфома, системная красная волчанка
Гамма-глобулин Цирроз, склеродермия системного характера, ревматоидный артрит, лимфолейкоз в хронической форме, муковисцидоз, синдром Шегрена Лейкоз, склеродермия, гепатит вирусной природы в острой форме, лимфома, гломерулонефрит

Исказить показатели, кроме неправильной подготовки к проведению анализа, могут 2 фактора: недавно проведенная процедура гемодиализа, из-за которой произошло разрушение эритроцитов в крови, и повышенный уровень билирубина в организме. В любом из этих случаев потребуется пересдача анализа через некоторое время, которое определит врач.

источник

Методы разделения липопротеидов на отдельные фракции. Электрофорез на бумаге, в ПААГ, ультрацентрифугирования

Алипопротеинемия

1. Ан‑α‑липопротеинемия (танжерская болезнь).

Обусловлена врожденным нарушением синтеза апопротеинов А‑I и А‑II.

Лабораторные показатели: отсутствие нормальных и появление аномальных ЛПВП; снижение содержания общего холестерина до 0,26 ммоль/л и менее; увеличение доли эфиров холестерина.

Клинические проявляется тонзиллитом, рано развивающимся атеросклерозом и ишемической болезнью сердца.

2. А‑β‑липопротеинемия.

Обусловлена снижением синтеза в печени апопротеина В.

Лабораторные показатели: снижение количества хиломикронов; снижение уровня ЛПОНП и ЛПНП. снижение холестерина до 0,5‑2,0 ммоль/л; снижение содержания триглицеридов до 0‑0,2 г/л.

Клинически проявляется нарушением всасывания пищевых жиров, пигментным ретинитом, акантозом и атаксической невропатией.

Гиполипопротеинемия

1. Гипо‑α‑липопротеинемия часто сочетается с увеличением в крови ЛПОНП и ЛПНП. Клинически проявляется как II, IV и V типы гиперлипопротеинемий, что увеличивает риск возникновения атеросклероза и его осложнений.

2. Гипо‑β‑липопротеинемия выражается в снижении в крови ЛПНП. Клинически проявляется нарушением всасывания пищевых жиров в кишечнике.

Структура и функции биологических мембран. Общие свойства мембран: жидкостностьпоперечная асимметрия, избирательная проницаемость,, Разнообразие структур и функций мембран, механизм транспорта веществ через мембрану.

Основу мембраны составляет двойной липидный слой,в формировании которого участвуют фосфолипиды и гликолипиды. Липидный бислой образован двумя рядами липидов, гидрофобные радикалы которых спрятаны внутрь, а гидрофильные группы обращены наружу и контактируют с водной средой. Белковые молекулы как бы «растворены» в липидном бислое. Мембранные липиды — амфифильные(амфипатические) молекулы,т.е. в молекуле есть как гидрофильные группы (полярные «головки»), так и алифатические радикалы (гидрофобные «хвосты»), самопроизвольно формирующие бислой. В большинстве эукариотических клеток они составляют около 30-70% массы мембраны. В мембранах присутствуют липиды трёх главных типов — фосфолипиды, гликолипиды и холестерол (холестерин).

Фосфолипиды.Все фосфолипиды можно разделить на 2 группы — глицерофосфолипиды и сфингофосфолипиды. Глицерофосфолипиды относят к производным фосфатидной кислоты. Наиболее распространённые глицерофосфолипиды мембран — фосфатидилхолины и фосфатидилэтаноламины. В мембранах эукариотических клеток обнаружено огромное количество разных фосфолипидов, причём они распределены неравномерно по разным клеточным мембранам. Эта неравномерность относится к распределению как полярных «головок, так и ацильных остатков.

Гликолипиды.В гликолипидах гидрофобная часть представлена церамидом. Гидрофильная группа — углеводный остаток, присоединённый гликозидной связью к гидроксильной группе у Первого углеродного атома церамида. В зависимости от длины и строения углеводной части различают цереброзиды,содержащие моно- или олигосахаридный остаток, и ганглиозиды,к ОН-группе которых присоединён сложный, разветвлённый олигосахарид, содержащий N-ацетилнейраминовую кислоту (NANA).

Полярные «головки» гликосфинголипидов находятся на наружной поверхности плазматических мембран. В значительных количествах гликолипиды содержатся в мембранах клеток мозга, эритроцитов, эпителиальных клеток. Ганглиозиды эритроцитов разных индивидуумов различаются строением олигосахаридных цепей, проявляющих антигенные свойства.

Холестерол.Холестерол присутствует во всех мембранах животных клеток. Его молекула состоит из жёсткого гидрофобного ядра и гибкой углеводородной цепи, единственная гидроксильная группа является «полярной головкой» Для животной клетки среднее молярное отношение холестерол/фосфолипиды равно 0,3-0,4, но в плазматической мембране это соотношение гораздо выше (0,8-0,9). Наличие холестерола в мембранах уменьшает подвижность жирных кислот, снижает латеральную диффузию липи-дов и белков, и поэтому может влиять на функции: мембранных белков. В составе мембран растений холестерола нет, а присутствуют растительные стероиды — ситостерол и стигмастерол.

К основным функциям мембран можно отнести:

· отделение клетки от окружающей среды и формирование внутриклеточных компартментов(отсеков);

· контроль и регулирование транспорта огромного разнообразия веществ через мембраны;

· участие в обеспечении межклеточных взаимодействий, передаче внутрь клетки сигналов;

· преобразование энергии пищевых органических веществ в энергию химических связей молекул АТФ.

Асимметрия липидов

Каждая мембрана клетки замкнута, т.е. имеет внутреннюю и внешнюю поверхности, различающиеся по липидному и белковому составам — эту особенность мембран называют трансмембранной(поперечной) асимметрией. Липидная асимметрия возникает прежде всего потому, что липиды с более объёмными полярными «головками» стремятся находиться в наружном монослое, так как там площадь поверхности, приходящаяся на полярную «головку», больше. Фосфатадилхолины и сфингомиелины локализованы преимущественно в наружном монослое, а фосфатидилэтаноламины и фосфатидилсерины в основном во внутреннем.

Жидкостностъ мембран

Для мембран характерна жидкостность (текучесть), способность липидов и белков к латеральной диффузии. Скорость перемещения молекул зависит от микровязкости мембран, которая, в свою очередь, определяется относительным содержанием насыщенных и ненасыщенных жирных кислот в составе липидов. Микровязкость меньше, если в составе липидов преобладают ненасыщенные жирные кислоты, и больше при высоком содержании насыщенных жирных кислот. Ацильные (алифатические) остатки ненасыщенных жирных кислот имеют так называемые «изломы». Эти «изломы» препятствуют слишком плотной упаковке молекул в мембране и делают её более рыхлой, а следовательно и более «текучей». На текучесть мембран также влияют размеры углеводородных «хвостов» липидов, с увеличением длины которых мембрана становится более «текучей».

Избирательная проницаемость

Клеточные мембраны обладают избирательной проницаемостью: через них медленно диффундируют глюкоза, аминокислоты, жирные кислоты, глицерол и ионы, причем сами мембраны в известной мере активно регулируют этот процесс — одни вещества пропускают, а другие нет. Существует четыре основных механизма для поступления веществ в клетку или вывода их из клетки наружу: диффузия, осмос, активный транспорт и экзо- или эндоцитоз. Два первых процесса носят пассивный характер, то есть не требуют затрат энергии; два последних — активные процессы, связанные с потреблением энергии. Избирательная проницаемость мембраны при пассивном транспорте обусловлена специальными каналами — интегральными белками. Они пронизывают мембрану насквозь, образовывая своего рода проход. Для элементов K, Na и Cl есть свои каналы. Относительно градиента концентрации молекулы этих элементов движутся в клетку и из неё. При раздражении каналы натриевых ионов раскрываются, и происходит резкое поступление в клетку ионов натрия. При этом происходит дисбаланс мембранного потенциала. После чего мембранный потенциал восстанавливается. Каналы калия всегда открыты, через них в клетку медленно попадают ионы калия.

Первично-активный транспорт

Перенос некоторых неорганических ионов идёт против градиента концентрации при участии транспортных АТФ-аз (ионных насосов). Все ионные насосы одновременно служат ферментами, способными к аутофосфорилированию и аутодефосфорилированию. АТФ-азы различаются по ионной специфичности, количеству переносимых ионов, направлению транспорта. В результате функционирования АТФ-азы переносимые ионы накапливаются с одной стороны мембраны. Наиболее распространены в плазматической мембране клеток человека Ма + ,К + -АТФ-аза, Са 2+ -АТФ-аза и Н + ,К + ,-АТФ-аза слизистой оболочки желудка.

Na + , К + -АТФ-аза

Этот фермент-переносчик катализирует АТФ-зависимый транспорт ионов Na + и K + через плазматическую мембрану. Ка + ,К + -АТФ-аза состоит из субъединиц α и β; α — каталитическая большая субъединица, a β — малая субъединица (гликопротеин). Активная форма транслоказы — тетрамер (αβ)2 (рис. 5-19).

Na + ,К + -АТФ-аза отвечает за поддержание высокой концентрации К + в клетке и низкой концентрации Na + . Так как Na + Д + -АТФ-аза выкачивает три положительно заряженных иона, а закачивает два, то на мембране возникает электрический потенциал с отрицательным значением на внутренней части клетки по отношению к её наружной поверхности.

Читайте также:  Производитель электроды для электрофореза

Са 2+ -АТФ-аза

В цитозоле «покоящихся» клеток концентрация Са 2+ составляет

10 -7 моль/л, тогда как вне клетки она равна

2 10 -3 моль/л. Поддерживает такую разницу в концентрации система активного транспорта ионов кальция; ее основные компоненты — кальциевые насосы — Са 2+ -АТФ-азы и Na + ,Ca 2+ -обменники. Са 2+ -АТФ-аза локализована не только в плазматической мембране, но и в мембране ЭР. Фермент состоит из десяти трансмембранных доменов, пронизывающих клеточную мембрану. Между вторым и третьим доменами находятся несколько остатков аспарагиновой кислоты, участвующих в связывании кальция. Область между четвёртым и пятым доменами имеет центр для присоединения АТФ и аутофосфорилирования по остатку аспарагиновой кислоты. Са 2+ -АТФ-азы плазматических мембран некоторых клеток регулируются белком кальмодулином. Каждая из Са 2+ -АТФ-аз плазматической мембраны и ЭР представлена несколькими изоформами.

Перенос вещества из среды в клетку вместе с частью плазматической мембраны называют«эндоцитоз».Путем эндоцитоза (фагоцитоза) клетки могут поглощать большие частицы, такие как вирусы, бактерии или обломки клеток. Захват больших частиц осуществляется в основном специализированными клетками — фагоцитами. Поглощение жидкости и растворённых в ней веществ с помощью небольших пузырьковназывают «пиноцитоз».Усвоение веществ механизмом эндоцитоза (пиноцитоза) характерно для всех клеток.

Цикл эндоцитоза начинается в определённых участках плазматической мембраны, называемых«окаймлённые ямки».. Белок клатринобразует решётчатые структуры, связанные с углублениями на поверхности плазматической мембраны. Окаймлённые ямки втягиваются в клетку, сужаются у основания, отделяются от мембраны, образуя окаймлённые пузырьки (пиноцитозные пузырьки). Время жизни окаймлённых ямок невелико, они формируются в течение минуты, затем совершают цикл эндоцитоза. Вещества в составе пиноцитозных пузырьков не смешиваются с другими макромолекулами клетки. Они заканчивают свой путь в лизосо-мах, а мембранные компоненты пузырьков, содержащие клатрин, возвращаются в плазматическую мембрану. Эндоцитоз, происходящий с участием рецепторов, встроенных в окаймлённые ямки, позволяет клеткам поглощать специфические вещества. Макромолекулы или частицы связываются рецепторами и накапливаются в окаймлённой ямке. Затем следует погружение в клетку и отделение эндоцитозного пузырька, в составе которого находится поглощённое вещество, мембранные компоненты окаймлённой ямки и рецептор. В разные окаймлённые ямки могут быть встроены разные рецепторы. Количество рецепторов в окаймлённой ямке плазматической мембраны варьирует в зависимости от потребности клетки в холестероле. Нарушение структуры рецепторов ЛПНП (мутации в гене) не позволяет им встраиваться в плазматическую мембрану в область окаймлённой ямки. Положение рецептора вне окаймлённой ямки не снижает его комгшементарность к ЛПНП, но эндоцитоз комплекса рецептор-ЛПНП не происходит.

Макромолекулы, например белки плазмы крови, пептидные гормоны, пищеварительные ферменты, белки внеклеточного матрикса, ли-попротеиновые комплексы, синтезируются в клетках и затем секретируются в межклеточное пространство или кровь. Но мембрана непроницаема для таких макромолекул или комплексов, их секреция происходит путём экзоцитоза. Особенность экзоцитоза в том, что секретируе-мые вещества локализуются в пузырьках и не смешиваются с другими макромолекулами или органеллами клетки. В ходе экзоцитоза содержимое секреторных пузырьков выделяется во внеклеточное пространство, когда они сливаются с плазматической мембраной. В организме имеются как регулируемый, так и нерегулируемый пути экзоцитоза. Нерегулируемая секрецияхарактеризуется непрерывным синтезом секретируемых белков, упаковкой их в транспортные пузырьки в аппарате Гольджи и переносом к плазматической мембране для секреции. Примером может служить синтез и секреция коллагена фибробластами для формирования межклеточного матрикса.

62. Старение связано также с уменьшением концентрации воды в клетке, с переходом жидкокристаллической структуры в кристаллическую. С возрастом внутренние части биологических мембран кристаллизуются

Методы разделения липопротеидов на отдельные фракции. Электрофорез на бумаге, в ПААГ, ультрацентрифугирования

Метод ультрацентрифугирования позволяет разделить ЛП, используя их различие в плотности, которая зависит от соотношения количества липидов и белков в частице. Так как жир имеет меньшую, чем вода, плотность, тоХМ, содержащие более 85% жиров, располагаются на поверхности сыворотки крови, а ЛПВП, содержащие наибольшее количество белков, имеют самую большую плотность и при центрифугировании располагаются в нижней части центрифужной пробирки. Так как ЛП впервые были выделены из сыворотки крови методом ультрацентрифугирования, то в названии указывают плотность частиц. Однако метод ультрацентрифугирования непригоден для широкого использования, поэтому в клинических лабораториях обычно применяют метод электрофореза.

Скорость движения частиц при электрофорезе зависит от их заряда и размера. Заряд, в свою очередь, зависит от количества белков на поверхности ЛП. При электрофорезе в геле все типы ЛП движутся к положительному полюсу; ближе к старту располагаются ХМ, а ЛПВП, имеющие наибольшее количество белков и наименьший размер, удаляются от старта дальше других частиц.

Электрофорез на бумаге: образуются следующие фракции: α-фракция(повышенное содержание белка), β-фракция(среднее содержание белка), γ-фракция(малое содержание белка)

Электрофорез в ПААГ(полиакриламидный гель). Разделение ЛП сыворотки крови проводят в стеклянных трубках. В специальном штативе трубки заполняют гелем. Пробы предварительно окрашивают насыщенным раствором судана черного. Образуются следующие фракции: ХМ, преβЛП, β-ЛП, α-ЛП, комплекс: альбумины+ЖК.

60. Диагностическое значение определения содержания ЛП в сыворотке крови. Классификация липопротеинемий по Фридриксону.

Изменения в спектре отдельных фракций липопротеинов не всегда сопровождаются гиперлипидемией, поэтому наибольшее клинико‑диагностическое значение имеет выявление типов дислипопротеинемий, которое проводят по принципам, общим с типированием гиперлипопротеинемий по Фредриксону с соавт. (1965, 1971) с введением дополнительных типов гипер‑α‑ и гипо‑α‑липопротеинемий и гипоβ‑липопротеинемии:

Тип I: Гиперхиломикронемия

Обусловлена генетической недостаточностью липопротеинлипазы.

Лабораторные показатели: увеличение количества хиломикронов; нормальное или слегка повышенное содержание преβ‑липопротеинов; резкое увеличение уровня ТАГ. отношение ХС / ТАГ

Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; Нарушение авторского права страницы

источник

ЛП плазмы крови — транспортная форма липидов в организме человека. Они осуществляют транспорт липидов как экзогенного (пищевого), так и эндогенного происхождения. Отдельные ЛП захватывают избыточный ХС из клеток периферических тканей для транспорта его в печень, где происходит его окисление в жёлчные кислоты и выведение с жёлчью. С участием ЛП транспортируются также жирорастворимые витамины и гормоны.

Плазменные ЛП имеют сферическую форму. Внутри находится жировая «капля», содержащая неполярные липиды (ТГ и эстерифицированный ХС) и формирующая ядро ЛП-частицы. Оно окружено оболочкой из фосфоли-пидов, неэстерифицированного ХС и белка.

Существует несколько методов определения ЛП в крови. Один из них — определение содержания ХС в различных классах ЛП — рассмотрен выше. Другой метод исследования содержания ЛП — электрофоретический. При использовании этого метода отдельные фракции ЛП классифицируют, сравнивая их электрофоретическую подвижность с подвижностью обычных сывороточных белков. На основании электрофоретической подвижности ЛП были разделены на следующие фракции.

■ Хиломикроны . При проведении электрофореза хиломикроны остаются на старте (содержат очень мало белка) подобно у-глобулинам; представляют собой богатые жиром частицы, поступающие в кровь из лимфы и транспортирующие пищевые ТГ. Они являются самыми крупными ЛП. Плазма крови здоровых людей, не принимавших пищи в течение 12-14 ч, хиломикроны не содержит или содержит их в ничтожном количестве.

■ а-ЛП. При электрофорезе а-ЛП движутся вместе с а-глобулинами и соответствуют ЛПВП. ЛПВП содержат до 50% белка, приблизительно 30% фосфолипидов, 20% ХС и очень немного ТГ. Образуются в печени и стенке тонкой кишки.

■ р-ЛП. При электрофорезе на бумаге р-ЛП движутся вместе с р-глобу-линами и соответствуют ЛПНП. ЛПНП содержат 25% белка, 50% ХС, 20% фосфолипидов и 8-10% ТГ. Предполагают, что ЛПНП образуются частично или полностью при распаде липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП).

■ Пре-Р-ЛП. При электрофорезе пре-Р-ЛП оказываются между а-ЛП и Р-ЛП, они соответствуют ЛПОНП.

Электрофорез ЛП позволяет провести качественный анализ ЛП. Существует два метаболических процесса, определяющих патогенез атеросклероза: скорость инфильтрации богатых ХС ЛП во внутренний слой стенки кровеносных сосудов и скорость удаления ХС из сосудов с последующим выведением из организма. В этой сбалансированной системе повышенные концентрации хиломикронов, ЛПОНП и ЛПНП определяют риск избыточного отложения ХС внутри стенки сосуда. С другой стороны, увеличенные концентрации ЛПВП способствуют повышению скорости удаления ХС из атеросклеротических бляшек. Метод электрофореза ЛП может дать дополнительную информацию о соотношении этих метаболических процессов.

Помимо перечисленных выше классов ЛП, в плазме крови могут быть обнаружены и другие ЛП-комплексы, в том числе необычные, которые получили название патологические (или условно-патологические) ЛП. К ним относятся Р-ЛПОНП, ЛПВПхс и ЛП-Х. Р-ЛПОНП, называемые также флотирующими Р-ЛП, характеризуются тем, что имеют электрофорети-ческую подвижность, свойственную Р-ЛП, и плотность, соответствующую ЛПОНП, благодаря чему всплывают при ультрацентрифугировании вместе с последними. Наличие Р-ЛПОНП — характерный признак III типа ДЛП. ЛПВПхс представляет собой фракцию ЛПВП, перегруженную ХС, роль этих ЛП в патогенезе атеросклероза не выяснена. ЛП-Х характеризуются высоким содержанием фосфолипидов (65-68%) и неэстерифицированного ХС (23-27%). Благодаря высокой жёсткости ЛП-Х способствуют повышению вязкости крови. Они появляются в крови при обтурационной желтухе и при недостаточности лецитин-холестериновой ацилтрансферазы. Роль ЛП-Х в развитии атеросклероза не изучена.

источник

Количественное соотношение фракций общего белка крови, отражающее физиологические и патологические изменения состояния организма.

Общий белок сыворотки состоит из смеси белков с разной структурой и функциями. Разделение на фракции основано на разной подвижности белков в разделяющей среде под действием электрического поля.

Обычно методом электрофореза выделяют 5 — 6 стандартных фракций: 1 — альбумины и 4 — 5 фракций глобулинов (альфа1-, альфа2-, бета- и гамма-глобулины, иногда отдельно выделяют фракции бета-1 и бета-2 глобулинов). Глобулиновые фракции более разнородны.

Фракция альфа1-глобулина включает в себя острофазные белки: альфа1-антитрипсин (основной компонент этой фракции) — ингибитор многих протеолитических ферментов — трипсина, химотрипсина, плазмина и т. д., а также альфа1-кислый гликопротеин (орозомукоид). Он обладает широким спектром функций, в зоне воспаления способствует фибриллогенезу. К глобулинам относятся транспортные белки: тироксинсвязывающий глобулин, транкортин (функции — связывание и транспорт кортизола и тироксина соответственно), альфа1-липопротеин (функция — участие в транспорте липидов).

Фракция альфа2-глобулинов преимущественно включает острофазные белки — альфа2-макроглобулин, гаптоглобин, церулоплазмин. Альфа2-макроглобулин (основной компонент фракции) участвует в развитии инфекционных и воспалительных реакций. Гаптоглобин — это гликопротеин, который образует комплекс с гемоглобином, высвобождающимся из эритроцитов при внутрисосудистом гемолизе, утилизирующийся затем клетками ретикулоэндотелиальной системы. Церулоплазмин — специфически связывает ионы меди, а также является оксидазой аскорбиновой кислоты, адреналина, диоксифенилаланина (ДОФА), способен инактивировать свободные радикалы. Фракция бета-глобулинов содержит трансферрин (белок-переносчик железа), гемопексин (связывает гем, что предотвращает его выведение почками и потерю железа), компоненты комплемента (участвующие в реакциях иммунитета) и часть иммуноглобулинов. Фракция гамма-глобулинов состоит из иммуноглобулинов, (в порядке количественного убывания — IgG, IgA, IgM, IgE), функционально представляющих собой антитела, обеспечивающие гуморальную иммунную защиту организма от инфекций и чужеродных веществ.

При многих заболеваниях встречается нарушение соотношения фракций белков плазмы (диспротеинемия). Диспротеинемии наблюдаются чаще, чем изменение общего количества белка и при наблюдении в динамике могут характеризовать стадию заболевания, его длительность, эффективность проводимых лечебных мероприятий.

Парапротеинемия – появление на электрофореграмме дополнительной дискретной полосы, свидетельствующей о присутствии в большом количестве однородного (моноклонального) белка, обычно иммуноглобулинов или отдельных компонентов их молекул, синтезирующихся в В-лимфоцитах. Большие концентрации М-белка (больше 15 г/л) с большой вероятностью указывают на миелому.

Исследование белковых фракций при подозрении на миелому имеет особую диагностическую ценность. Лёгкие цепи иммуноглобулинов (белок Бенс-Джонса) свободно проходят через сывороточный фильтр и на электрофореграмме сыворотки могут не определяться. Малые М-белки иногда могут наблюдаться при хронических гепатитах, доброкачественно — у пациентов престарелого возраста. Имитировать малую парапротеинемию могут большие концентрации С-реактивного белка и некоторых других острофазных белков, присутствие в сыворотке фибриногена, иногда – лекарственные препараты на основе моноклональных антител в пиковой концентрации (используются в качестве противоопухолевых препаратов, иммунодепрессантов и др.).

Внимание! Данное исследование отдельно не выполняется, только в комплексе с тестами: №28 Общий белок (в крови) (Protein total) .

источник