Электрофорез на бумаге к катоду к аноду на старте

Электрофорез

2. Электрофорез с подвижной границей.

4. Изоэлектрическая фокусировка.

Белки, нуклеиновые кислоты, полисахариды, находясь в растворе несут определенный электрический заряд благодаря наличию групп, способных к электролитический диссоциации. Общий заряд данной частицы определяется, прежде всего, концентрацией Н + -ионов в среде. Под действием электрического тока заряженные частицы перемещаются к катоду или аноду в зависимости от знака их суммарного заряда. Такое явление носит название электрофореза. Скорость движения частиц (см/с) при напряженности электрического поля 1 В/см называется электрофоретической подвижностью.Она имеет размерность см 2 /с -1 ·в -1 .

Различия в подвижности частиц служат основой для разделения смесей веществ.

Если приложить к электропроводящему раствору равномерное электрическое поле (Е), то на частицу будет действовать сила ускорения:

где d– расстояние между электродами, q – заряд молекулы. Так как молекула перемещается не в вакууме, то на неё действует противоположно направленная сила трения, которая зависит от размеров, формы молекулы, вязкости среды и описывается уравнением Стокса:

где f– коэффициент трения, v – скорость движения молекулы. Для сферических частиц коэффициент трения равен 6πηr, где r – радиус частиц и η – коэффициент вязкости растворителя. В растворе силе ускорения противодействует сила трения, поэтому:

Е/d·q = 6πηrv, преобразуя выражение, получим:

Таким образом, скорость молекулы (v) пропорциональна напряженности электрического поля Е/d и заряду молекулы и обратно пропорциональна размеру молекулы и вязкости среды. Заряд и размер являются строго индивидуальными характеристиками молекулы. Следовательно, и путь, который пройдет та или иная молекула при электрофорезе за определенный интервал времени, тоже будет характерен для данной молекулы.

Существуют три основных типа электрофоретических систем – электрофорез с подвижной границей, зональный электрофорез и стационарный электрофорез.

Элекрофорез с подвижной границей

Электрофорез макромолекул, растворенных в буфере с соответствующим значением рН, проводится в V-образной кювете с прямоугольным поперечным сечением. Раствор макромолекул в буфере заливают в нижнюю часть кюветы, доливают оба конца трубки тем же буфером и монтируют в них электроды. Если вести электрофорез в щелочном буфере, то все белки заряжаются отрицательно и начинают перемещаться к аноду: скорость перемещения данного белка зависит от его рН, и от величины суммарного заряда при данном рН буфера. Как видим, в данном методе электрическое поле прикладывается к исходно разной границе между раствором молекул и буфером. Скорость миграции заряженных частиц определяется путем наблюдения за перемещением этой границы. Если раствор содержит гетерогенную смесь ионизированных макромолекул, то можно увидеть множество движущихся границ. Способы наблюдения за пограничными изменениями концентрации вещества основаны на измерении градиента показателя преломления, который пропорционален градиенту концентрации.

Сконструирование Филпонтом и Свенссоном астигматической фотокамеры со специальной оптической системой, называемой шлирен-оптикой, позволяет непосредственно регистрировать градиент показателя преломления вдоль кюветы.

Электрофорез по методу подвижной границы нашел широкое применение при исследовании белков. Этот метод в основном используется для определения подвижностей и изоэлектрических точек белков, т.к. количественно трудно оценить подвижности. Метод электрофореза с подвижной границей используется редко.

Зональный элекрофорез

В зональном электрофорезе пятно или тонкий слой раствора, нанесенного на полутвердый или гелеобразный материал, помещают в электрическое поле, в результате чего молекулы перемещаются по или через материал носитель. В первую очередь функцией носителя является предотвращение механических воздействий и конвекции, которая происходит в результате температурных или высокой плотности концентрированных растворов.

Однако, носитель может действовать в качестве молекулярного сита, приводя тем самым к хроматографическим эффектам, что может или улучшить разделение, или ухудшать его.

а) электрофорез на бумаге.

В качестве носителя здесь используется фильтровальная бумага, которая должна содержать 96% α-целлюлозы, нерастворимой в концентрированном растворе NaOH. Приборы для электрофореза состоят из двух электродных сосудов и устройства для поддержания полосок фильтровальной бумаги. В качестве электродов обычно применяются платиновые проволоки. Можно использовать и угольные электроды. Для предотвращения чрезмерного испарения всю систему помещают в закрытую камеру, что обеспечивает создание влажной атмосферы.

Перед анализом электрофоретическую бумагу погружают в буферный раствор, слегка промокают между чистыми листами промокательной бумаги, а затем помещают на подставку.

Пробу наносят либо капиллярной пипеткой с закрученным носиком, либо с помощью различных аппликаторов, обеспечивающих быстрое и равномерное нанесение исследуемого раствора.

После нанесения проб к кювете подключают напряжение. Для наблюдения за ходом электрофореза на бумагу наносят пятно определенного стандартного вещества. По окончании процедуры бумагу высушивают при 105-110°С. Макромолекулы затем можно обнаружить при помощи соответствующего метода окрашивания.

Б) электрофорез в ПААГ.

В качестве среды для электрофоретического разделения макромолекул наиболее широкое распространение получил ПААГ, обладающий рядом преимуществ. Среди них можно отметить химическую стабильность, инертность, прозрачность в широком диапазоне длин волн, возможность получения пор с заданной величиной, отсутствием адсорбции. С помощью ПААГ можно разделить вещества с молекулярной массой от 2500 до 2000000 дальтон.

Системы электрофореза в ПААГ можно разделить на две группы по применяемым буферным системам. К первой относятся системы вертикального и горизонтального электрофореза, в которых применяется один тип буфера в электродных камерах и геле. Ко второй группе относятся системы вертикального «диск-электрофореза»: в них используются разные виды буферов (2-3) и гели разной концентрации. Название данного метода происходит от английского слова discontinuty (прерывистый), обозначающего в данном контексте неоднородность электрофоретической среды. Для диск-электрофореза характерны скачкообразные изменения рН, концентрации геля и градиента напряжения.

Прибор для диск-электрофореза состоит из верхнего и нижнего резервуара для электродного буфера и вертикальной стеклянной трубки. Нижняя часть трубки заполняется разделяющим гелем с мелкими порами, которые действуют как молекулярное сито по отношению к изучаемым макромолекулам. Над разделяющим гелем находится концентрирующий гель, имеющий крупные поры и поэтому не обладающий свойствами молекулярного сита, а еще выше расположен стартовый гель, содержащий пробу и краситель, используемый в качестве свидетеля.

Принцип диск-электрофореза основан на эффекте подвижной границы Кольрауша, суть которого состоит в использовании двух разных буферов: в электродных камерах трис-глициновый буфер (рН 8,3) , а в концентрирующих(рН 6,7) и разделяющем гелях(рН 8.9) – трис-НСl. В электродном буфере рН на 1,5-2 единицы выше, чем в концентрирующем. Образец растворяется в том же буфере, который используется в концентрирующем геле. При рН 8,3 глицин находится в виде цвиттериона:

После включения тока все ионы (в том числе белки и краситель) начинают двигаться к аноду в следующей последовательности: Сl — > бромфеноловый синий > белки > глицинат.

Рис. 1. Прибор для диск-электрофореза.

Между ионами хлора и глицината образуется граница раздела. Так как оба эти иона принадлежат к одной и той же электрической системе, то в области глицинатных ионов напряжение, а следовательно, и их скорость, возрастают, а в области ионов хлора напряжение и скорость уменьшаются. Следовательно, замыкающие глицинатные ионы будут стремиться догнать ведущие ионы хлора, а зона белков и красителя, находящаяся между ними, будет сужаться (концентрироваться). Этот процесс происходит в концентрирующем (крупнопористом) геле.

Когда подвижная граница доходит до мелкопористого геля (рН 8,9), то, с одной стороны, подвижность глицинатных ионов возрастает, а с другой – на белки начинает действовать эффект молекулярного сита, и они отстают от подвижной границы. Таким образом, белки попадают в более щелочной трис-глициновый буфер, их отрицательный заряд возрастает, и они разделяются согласно своим индивидуальным характеристикам (заряду, форме молекул, молекулярному весу).

При проведении электрофореза гель полимеризуется непосредственно в стеклянной трубке, которую потом соединяют с сосудами с буфером. Образец суспендируют в концентрированном растворе сахарозы и наносят на поверхность геля в виде тонкого слоя с помощью пипетки. Электрофорез прекращают, когда зона красителя (подвижная граница) проходит 0,8-0,9 длины геля. Затем гель извлекают из трубки и окрашивают специальными красителями обнаружения зон. Каждую зону можно характеризовать по значениям их Rf или по площади пика после денсатометрирования. Диск-электрофоретический метод особенно часто используется для разделения белков.

источник

Вид 1.Выберите наиболее правильный ответ.

1.1. Молекулярная масса большинства белков находится в пределах … .

а) от 6000 до 10000000 и выше

1.2. Глутаминовая кислота при рН 10 находится в виде иона … .

в)

б) г)

1.3. Смесь аминокислот, содержащая аспартат (pI 3,0) и лизин (рI 9,7), разделяется методом ионообменной хроматографии. В каком порядке будут выходить аминокислоты из колонки, заполненной триметиламинополистерольной смолой, имеющей положительно заряженные группы (анионообменник) при рН 7?

1.4. Детергенты (тритон Х-100, додецилсульфат натрия) при экстракции белков к среде извлечения добавляют для … .

а) повышения устойчивости белков к денатурации

б) перевода белков в изоэлектрическое состояние

в) разрушения белково-липидных комплексов

1.5.Оптическое явление, доказывающее коллоидные свойства белков,- это … .

а) явление светорассеивания – конус Тиндаля

б) вращение плоскости поляризованного света

в) интенсивное светопоглощение при длине волны 280 нм

Вид 2. Установите соответствие.

2.1. Классифицируйте приведенные ионообменные смолы в зависимости от заряда функциональных групп.

1. триметиламинополистирол а. катионообменник

2. диэтиламиноэтилцеллюлоза б. анионообменник

4. сульфонированные полистиролы

2.2. В каком направлении будут двигаться в электрическом поле следующие белки при рН 6,3?

1. овальбумин (ИЭТ 4,6) а) останется на старте

2. β-лактоглобулин (ИЭТ 6,3) б) движется к катоду

3. химотрипсин (ИЭТ 9,5) в) движется к аноду

Вид 3. Правильное сочетание ответов.

3.1. Смесь аминокислот, содержащая:

подвергли электрофорезу на бумаге при pH=6.

Какие аминокислоты будут двигаться при этом условии к «аноду»?

3.2. Метод разделения белков, основанный на различии размера белковых молекул —

3. ионообменная хроматография

5. изоэлектрическое фокусирование

3.3. Электрофоретическая процедура, не зависящая от заряда белка —

3. изоэлектрическое фокусирование

4. электрофорез в полиакриламидном геле с добавлением детергента (натрия додецилсультата)

Вид 4. Определите правильность утверждений и связь между ними.

4.1. Очистить раствор белка от низкомолекулярных примесей можно методом гель-фильтрации на сефадексе, потому что с помощью этого метода можно разделить вещества с разной молекулярной массой.

4.2. По степени дисперсности растворы белков являются истинными растворами, а по свойствам – коллоидными, так как белки являются высокомолекулярными соединениями.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Для студента самое главное не сдать экзамен, а вовремя вспомнить про него. 10034 — | 7498 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Электрофорез — метод разделения веществ, основанный на явлении миграции заряженных микрочастиц в жидкой среде под действием внешнего электрического поля.

Существует три различных электрофоретических метода. Под собственно электрофорезом обычно понимают зональный электрофорез (ЗЭ), два других называют методами изоэлектрофокусирования (ИЭФ)и изотахофореза (ИТФ).Электрофорез применяют главным образом для разделения веществ, молекулы которых различаются по электрофоретической подвижности, т. е. отношению скорости электрофореза (скорости перемещения заряженных частиц вещества) к напряженности электрического поля, которое зависит от свойств заряженных частиц окружающей их среды. Путем изменения внешних условий (например, рН среды, температуры, силы тока, состава и концентрации буферного раствора или носителя) создают подходящие условия для разделения. Вследствие того что при разделении на молекулы действуют только электростатические силы, электрофорез считают «мягким» методом и поэтому часто применяют для работы с лабильными веществами.

Электрофорез можно проводить в растворе, но из-за неизбежного выделения теплоты и возникающей в связи с этим тепловой конвекции процесс, как правило, проводят на носителе. Вследствие некоторых сопутствующих явлений (адсорбция, несоизмеримость размеров высокомолекулярных соединений и пор носителя) введение носителя ограничивает область применения метода. Однако свойства носителя иногда используют для повышения эффективности разделения: например, при электрофорезе в градиенте полиакриламидного геля фракционирование осуществляется не столько за счет различной электрофоретической подвижности веществ, сколько за счет различия в их молекулярных массах.

Зональный электрофорез (ЗЭ) — это метод разделения заряженных частиц в электрическом поле, основанный на том, что частицы с разными соотношениями заряд/масса мигрируют с различными скоростями. В зависимости от знака заряда молекулы вещества мигрируют в электрическом поле по направлению к аноду или катоду.

Результаты этого процесса регистрируются на электрофореграфе (по аналогии с хроматографией).

Ранее использовали один и тот же буфер в слое носителя электродных камерах, т. е. разделение вели в непрерывной буферной системе. В настоящее время этот прием еще применяют при электрофорезе на бумаге и пластинках. Приэлектрофорезе в прерывистой буферной системе (различные буферы в слое носите электродных камерах) быстро мигрирующие вещества образую более узкие зоны. Электрофорез в прерывистой буферной системе используют главным образом в гель-электрофорезе. ЗЭ обычно проводят на бумаге, пластинках и в гелях в водных буферных растворах.

При электрофорезе в электродных камерах происходит электролиз раствора и вследствие этого изменяется состав буфера. Поэтому электроды располагают так, чтобы они не касались носителя, а контакт между ними осуществлялся при помощи полосок фильтровальной бумаги. Электродная камера разделена на два отсека, которые соединяются дополнительным мостиком из фильтровальной бумаги. Подбирая соответствующий объем электродных камер или перекачивая буфер насосом от анода к катоду, поддерживают постоянными концентрацию и значение рН буфера в двухкамерной системе. Рекомендуется также проводить деполяризации электродов после каждого электрофоретического разделения.

Материалы-носители подразделяются на две группы:

первая — бумага, целлюлоза, ацетилированная целлюлоза, агароза и материалы для ТСХ(например, силикагель);

вторая — крахмал и полиакриламид.

Эффективность разделения зависит не только от суммарного заряда молекул анализируемых веществ, но и от размеров молекул. Определяющим параметром является соотношение заряд — масса.

Носители первой группы относительно инертны и слабо влияют на эффективность разделения. Материалы второй группы обладают пористой структурой, что существенно влияет на качество разделения. Поскольку размеры пор соизмеримы с размером макромолекул, то можно разделять вещества с одинаковыми суммарными зарядами, но с разными молекулярными массами (например, при ионообменной хроматографии).

Электрофорез на бумаге позволяет экстрагировать вещества из соответствующих зон или пятен и использовать для дальнейшей работы; обнаруживать вещества, используемые в бумажной хроматографии; проводить фракционирование в двух направлениях.

Для электрофореза на бумаге используют специальные сорта бумаги, характеризующиеся следующими свойствами: достаточной механической прочностью; удовлетворительным для удерживания достаточного количества электролита и образца.

Наряду с камерами погружного типа применяют камеры для электрофореза в тонком слое с охлаждаемыми пластинами, в которых лист бумаги помещают между двумя изолирующими пленками.

Электрофорез в тонком слое проводят на стеклянных пластинках, покрытых слоем носителя. По сравнению с полосками бумаги пластины более удобны в обращении. Электрофорез на бумаге и в тонком слое применяют для исследования фракций, полученных при колоночной хроматографии, ферментативных гидролизатов белков, метаболитов, а также для разделения аминов, аминокислот, пептидов и белков, нуклеотидов, фенолов, нафтолов, фенолкарбоновых кислот, красителей, неорганических соединений.

Гель- электрофорез. Вместо целлюлозы и силикагеля можно использовать мягкие гели. Ниже приведены основные рабочие стадии проведения электрофореза в слое геля: приготовление гелей и подготовка образца ® электрофоретическое разделение ® детектирование ® анализ результатов и оформление их в рабочем журнале. Из множества гелей на практике применяют только два — гели агарозы и полиакриламида. В зависимости от способа приготовления геля и типа буферной системы различают несколько вариантов метода:

· электрофорез в геле полиакриламида (ПААГ);

· диск-электрофорез (диск-ПААГ) в прерывистой буферной системе;

· электрофорез в геле полиакриламида в присутствии додецилсульфата натрия (ДСН-ПААГ);

· электрофорез в градиенте пористого полиакриламидного геля.

Гель окрашивают красителем. Поскольку молекулы красителя заряжены, гель можно обесцвечивать электрофоретически при напряжении 50 В. В местах, не содержащих исследуемое вещество, гель обесцвечивается. Количественную оценку проводят спектрофотометрически при помощи сканирующего денситометра.

После усадки гелей в водном этаноле или ацетоне их высушивают между двумя листами целлофана в вакууме при слабом нагреве.

Гель-электрофорез применяют для разделения всех классов заряженных веществ, например белков, ферментных комплексов, вирусов, олигонуклеотидов и нуклеиновых кислот; определения молекулярных масс биополимеров; анализа белков на микроуровне (антигенов при количественном иммуноэлектрофорезе).

При электрофорезе в свободном потоке электролит (буфер) перемещается в вертикальном направлении (перпендикулярно направлению электрического поля). Заряженные частицы под действием электрического поля мигрируют в горизонтальном направлении и одновременно увлекаются потоком буфера. В итоге разделенные вещества распределяются в потоке в соответствии с их электрофоретической подвижностью и элюируются из прибора в различных фракциях. Электрофорез в свободном потоке применяют для препаративного разделения заряженных частиц, в том числе коллоидных, субклеточных частиц и клеток.

Изоэлектрическое фокусирование (ИЭФ). С помощью изоэлектрического фокусирования по изоэлектрическим точкам (ИЭТ) разделяют амфотерные вещества, в частности белки. Сущность метода заключается в том, что молекулы белков мигрируют под действием электрического поля в среде с линейным и стабильным градиентом рН до достижения области рН, соответствующей их ИЭТ.

Изоэлектрическое фокусирование отличается от зонального электрофореза тем, что разделение осуществляется не в буфере с постоянным значением рН, а в среде с линейным градиентом рН. Значение рН минимально вблизи анода, максимально — вблизи катода. Главное условие эффективного разделения белков — наличие стабильного градиента рН среды. В связи с тем что белки обладают амфотерными свойствами, необходимо, чтобы амфолиты – носители — вещества, с помощью которых формируется градиент рН, обладали высокой буферной емкостью. Амфолиты — носители представляют собой многокомпонентную смесь изомеров и гомологов алифатических полиаминополикарбоновых кислот, сульфокислот и фосфоновых кислот, изоэлектрические точки которых располагаются в широкой области значений рН.

ИЭФ применяют для аналитического разделения пептидов, белков, нуклеотидов, органических кислот, ионов металлов и препаративного разделения белков; накопления следовых количеств веществ из больших объемов пробы; определения электрофоретической подвижности.

Необходимым условием проведения ИЭФ является наличие высокого напряжения при низкой ионной силе раствора. Однако именно в этих условиях усиливается электроосмос. Отрицательное воздействие на эффективность разделения веществ оказывают так же примеси солей, занесенные вместе с реактивами (гели для ИЭФ следует готовить из особо чистых реактивов). Для проведения ИЭФ более всего подходит полиакриламидный гель с низкими электроосмотическими свойствами. Продолжительность эксперимента зависит от напряженность поля и характера изменения рН- градиента.

Препаративное изоэлектрическое фокусирование проводят в вертикальных колонках (в градиенте плотности сахарозы, глицерина, этиленгликоля) или в слое инертного материала. В качестве таких материалов используют гранулированные гели (рН градиент формируют с помощью амфолитов).

источник

Для подведения постоянного тока к пациенту используют электроды из металлических пластин (свинца, станиоля) или токопроводящей графитизированной ткани и гидрофильных матерчатых прокладок.

Последние имеют толщину 1-1,5 см и выступают за края металлической пластаны или токопроводящей ткани на 1,5-2 см.

Существуют другие виды электродов: стеклянные ванночки для глаз, полостные — в гинекологии, урологии. Гидрофильные прокладки предназначены для исключения возможности контакта продуктов электролиза (кислоты, щелочи) с кожей и изготавливаются из белой ткани (фланели, байки, бумазеи).

Нельзя пользоваться прокладками из шерстяной или окрашенной ткани. Гидрофильные прокладки сшивают из 5-6 слоев материн (для удобства прополаскивания в воде, кипячения и сушки), пришивают карман из одного слоя фланели, в который вкладывают свинцовую пластинку, соединенную с токонесущим проводом, металлическим зажимом или припаянную непосредственно к проводу.

В кабинете целесообразно иметь набор свинцовых пластин различной площади от 4 до 800-1200 см2 или такой же площади углеграфитовых. В последние годы выпускают одноразовые электроды. Используют электроды специальной формы (в виде полумаски для лица, «воротника» для верхней части спины и надплечий, двухлопастные, круглые на область глаз и др.).

Следует знать, что ионы свинца вредно действуют на организм, поэтому медицинские сестры, постоянно работающие в этом кабинете, должны получать пектин или мармелад. Свинцовые пластины периодически необходимо чистить наждачной бумагой и протирать спиртом для снятия налета окиси свинца, а также тщательно разглаживать металлическим валиком перед процедурой. Электроды фиксируют с помощью эластичных бинтов, мешочков с песком или тяжестью тела больного.

Перед процедурой медицинская сестра должна ознакомить больного с характером ощущений под электродами: равномерное покалывание и легкое жжение. При появлении неприятных болезненных ощущений или неравномерного жжения на определенном участке кожи больной, не двигаясь и не меняя положения, должен вызвать сестру. Не рекомендуется во время процедуры читать, разговаривать, спать. После процедуры необходим отдых в течение 20-30 мин.

Перед процедурой следует убедиться в отсутствии царапин, ссадин, мацерации, сыпи на коже. Гидрофильные матерчатые прокладки хорошо смачивают теплой водопроводной водой и располагают на коже пациента, свинцовая пластина с токонесущим проводом находится при этом в кармашке. Желательно под матерчатый электрод положить на кожу фильтровальную бумагу, чтобы предохранить прокладку от загрязнения.

Расположение электродов на теле больного определяется локализацией, остротой и характером патологического процесса. Различают поперечную, продольную и поперечно-диагональную методики. При поперечном расположении электроды помещают на противоположных поверхностях тела — один против другого (живот и спина, наружная и внутренняя поверхности коленного сустава и т. д.), что обеспечивает более глубокое воздействие. При продольной методике электроды лежат на одной поверхности тела: один — более проксимально, другой — дистально (продольно по позвоночнику, по ходу нерва, мышцы).

В этом случае оказывается влияние на более поверхностные ткани. Для поперечно-диагональной методики характерно расположение электродов на разных поверхностях тела, но один -в проксимальных его отделах, другой — в дистальных. При близком расположении расстояние между электродами должно быть не меньше половины их диаметра.

Методом электрофореза в организм чаще всего вводят лекарства-электролиты, диссоциирующие в растворах на ионы. Положительно заряженные ионы (+) вводят с положительного полюса (анода), отрицательно заряженные (-) — с отрицательного полюса (катода). При лекарственном электрофорезе можно использовать различные растворители, универсальным и лучшим из них является дистиллированная вода. При плохой растворимости лекарства в воде в качестве растворителя применяют димексид, который также оказывает и противовоспалительное действие.

Для электрофореза сложных органических соединений (белки, аминокислоты, сульфаниламиды) используют буферные растворы. Лекарственные вещества, например, лидаза или ронидаза, растворенные в кислом (ацетатном) буферном растворе с рН = 5,2, вводят с положительного полюса. Пропись его: ацетат (или цитрат) натрия И,4 г, ледяной уксусной кислоты 0,91 мл, дистиллированной воды 1000 мл, 64 единицы лидазы (0,1 г сухого вещества). 0,5-1 г ронидазы растворяют в 15 или 30 мл ацетатного буфера.

Для электрофореза трипсина и химотрипсина используют боратный буфер с рН = 8,0-9,0 (щелочная среда), который вводят с отрицательного полюса. Его состав: борной кислоты 6,2 г, калия хлорида 7,4 г, натрия (или калия) гидроксида 3 г, дистиллированной воды 500 мл. 10 мг трипсина или химотрипсина растворяют в 15-20 мл боратного буфера. Учитывая сложность приготовления указанных буферов, B.C. Улащик и Д.К. Данусевич (1975) предложили пользоваться дистиллированной водой, подкисляемой 5-10% раствором соляной кислоты до рН = 5,2 (для введения с анода) или подщелачиваемой 5-10% раствором едкой щелочи до рН = 8,0 (для введения с катода).

Приводим табл. 1, где указывается необходимое количество едкой щелочи или соляной кислоты в различных разведениях для подщелачивания и подкисления. Например: берем 10 мл 0,5 раствора глютаминовой кислоты и добавляем 0,16 мл едкой щелочи, получаем раствор с рН — 8,0 и вводим с отрицательного полюса. При добавлении соляной кислоты создается рН = 5,0.

Концентрация растворов лекарственных веществ, применяемых для электрофореза, колеблется чаще всего в пределах от 0,5 до 5,0%, так как доказано, что большие количества вводить не следует. Расход лекарства на каждые 100 см2 площади прокладки составляет ориентировочно от 10-15 до 30 мл раствора. Сильнодействующие средства (адреналин, атропин, платифиллин и др.) вводятся из растворов в концентрации 1:1000 или наносятся на прокладку в количестве, равном высшей разовой дозе.

Лекарственные вещества готовятся не более, чем на неделю, сильнодействующие — непосредственно перед введением. С целью экономии лекарственные препараты наносятся на фильтровальную бумагу, которую располагают на коже пациента, а сверху располагают матерчатую прокладку, смоченную теплой водой. Лекарственные вещества, используемые для электрофореза, приведены в табл. 2.

При электрофорезе одного лекарственного препарата его раствором смачивают одну гидрофильную прокладку соответствующей полярности. При одновременном введении двух веществ различной полярности («биполярный» электрофорез) ими смачивают обе прокладки (анод и катод). При необходимости введения двух лекарств одинаковой полярности используют две прокладки, соединенные сдвоенным проводом с одним полюсом тока. При этом одну прокладку смачивают одним, вторую — другим лекарством.

Для электрофореза антибиотиков и ферментов, чтобы избегать инактивации их продуктами электролиза, применяют специальные многослойные прокладки, в середине которых помещают 3-4 слоя фильтровальной бумаги, смоченной «предохранительным» раствором глюкозы (5%) или гликоколя (1%). Можно пользоваться и обычными гидрофильными прокладками, но толщина их должна составлять не менее 3 см.

После каждой процедуры необходимо тщательно промывать прокладки проточной водой из расчета 8-10 л на одну, для удаления из них лекарственных веществ. В «кухне» должно быть 2 раковины: одна для индифферентных прокладок, другая — для активных, т. е. смоченных лекарственным веществом. Для сильнодействующих препаратов целесообразнее иметь отдельные прокладки, на которых можно вышить название лекарства.

Промывать и кипятить прокладки, смоченные различными лекарственными веществами следует раздельно, чтобы избежать загрязнения их вредными для организма ионами. В конце рабочего дня гидрофильные прокладки кипятят, отжимают и оставляют в сушильном шкафу.

Введение лекарственных веществ на димексидс с помощью тока называется суперэлектрофорезом. Диметилсульфоксиду (ДМСО) присуща способность усиливать действие многих лекарств и повышать устойчивость организма к повреждающему действию низких температур и радиации. ДМСО обладает выраженным транспортирующим свойством. ДМСО считается биполярным, однако более выражен перенос в сторону катода.

Можно применять димсксид в виде аппликаций на кожу, так как при этом он обнаруживается в крови уже через 5 мин. Максимальная концентрация наблюдается через 4-6 час, удерживается препарат в организме не более 36-72 часов. Выраженное действие оказывают 70-90% растворы, однако они редко применяются из-за выраженной аллергической реакции. Чистый димсксид лучше применять в виде компрессов, а при электрофорезе использовать как растворитель.

Труднорастворимыс лекарственные вещества, приготовленные на ДМСО, проникают в большем количестве и на большую глубину (дерма и подкожножировая клетчатка). При этом они быстрее поступают в кровь, а их фармакологический эффект значительно возрастает.

Для электрофореза водорастворимых лекарств рекомендуется использовать 20-25% водные растворы димексида, а для трудно- и водонерастворимых препаратов — 30-50% водные растворы. Для приготовления последних лекарство сначала растворяют в концентрированном растворе ДМСО, а затем при постоянном взбалтывании добавляют до нужной концентрации дистиллированную воду.

Для электрофореза из среды ДМСО используют 5-10% раствор аспирина в 50% ДМСО, 5-10% раствор анальгина в 25% ДМСО, 1-2% раствор трипсина в 25% ДМСО, 32-64 ЕД лидазы в 25% растворе ДМСО, 2-5% раствор адебита в 25% ДМСО. Все перечисленные препараты вводятся биполярно. Димсксид у некоторых пациентов вызывает аллергическую реакцию, поэтому перед первой процедурой следует нанести на небольшой участок кожи 25% раствор препарата и посмотреть реакцию через 30-40 мин. Если на коже появилась отечность, краснота, зуд, то ДМСО применять не следует.

Порядок назначения. В назначении указывают название метода (гальванизация или электрофорез с обозначением концентрации раствора и полярности иона), место воздействия, применяемую методику (продольная, поперечная и др.), силу тока в миллиамперах, продолжительность в мин, последовательность (ежедневно или через день), число процедур на курс лечения.

Боголюбов В.М., Васильева М.Ф., Воробьев М.Г.

источник

Лабораторная работа №8

ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЕ РАЗДЕЛЕНИЕ БЕЛКОВ

Метод основан на том, что молекулы белка обладают электрическим зарядом, величина и знак которого определяются аминокислотным составом белка, pH и ионной силой окружающей среды. Под влиянием внешнего электрического поля заряженные молекулы передвигаются в растворе к противоположно заряженному полюсу. Скорость перемещения белковых частиц пропорциональна величине их заряда и обратно пропорциональна размеру частиц и степени их гидратации.

Широкое распространение в настоящее время получил так называемый «зональный электрофорез» — электрофорез на твердом носителе (на бумажных полосах, агаре, крахмале, акриламиде), пропитанном буферным раствором с нужным значением pH. Положение белков на бумаге или геле определяют путем фиксации и последующего окрашивания их тем или иным красителем (обычно бромфеноловым синим, амидовым черным или кумасси синим). Количество белка в каждой фракции можно ориентировочно определять по интенсивности окраски связанного красителя. Такое определение не дает строго количественного соотношения белковых фракций, так как количество красителя, связываемого различными белками, неодинаково.

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ HA БУМАГЕ

Разделение анализируемой смеси происходит на определенных сортах хроматографической бумаги, пропитанной буферным раствором, в приборах для электрофореза. Белки разделяют при напряжении до 500 B.

Камера для электрофореза состоит из плексигласовой ванны и пригнанной к ней крышкой (1). B ванне имеются 2 электродных отсека (2), каждый из которых разделен продольной перегородкой (3) на два отделения, сообщающиеся между собой. Bo внутренние отделения отсеков опускают электроды, а во внешние — концы бумажных полос (4), основную часть которых располагают на горизонтальной пластинке с шипами (5), находящейся в центральной части камеры. Между горизонтальной пластинкой и наружным отделением электродных отсеков имеются палочки (6),

Рис.2. Схема прибора для низковольтного электрофореза

через которые перекидываются бумажные полоски и которые служат для их поддерживания. Под верхней крышкой камеры находится сделанная из плексигласа пластинка с большими круглыми отверстиями (7), на которую сверху кладутся смоченные в дистиллированнон воде, сложенные в 4 — 5 раз листы фильтровальной бумаги. Эти листы способствуют увеличению герметичности камеры и, как следствие, — уменьшению испарения жидкости с электрофореграмм в процессе электрофореза.

Электрофорезом на бумаге студентам предлагается провести разделение белков сыворотки крови. Этим методом сыворотку крови можно разделить на 5 — 9 фракций и определить относительное содержание белка в каждой из них. Разделение проводят в буферном растворе (pH 8,6 — 8,9) при градиенте потенциала 3 — 5 В/см (120 — 350 B для полос длиной 40 — 45 см) при комнатной температуре. Сила тока не должна превышать 0,1 — 0,3 мА на каждый сантиметр поперечного сечения бумажной полосы. Увеличение силы тока более чем в 2 раза недопустимо, так как при этом происходит чрезмерное нагревание, значительное увеличение испарения и в конечном итоге — прогорание бумаги

1. Буферный раствор. Можно использовать:

а) веронал-мединаловый буфер (pH 8,6): в 300 мл дистиллированной воды растворяют10,32 гмединала (натриевая соль веронала), добавляют1,84 гверонала, нагревают при помешивании на водяной бане до растворения и доводят водой до1 л;

б) веронал-ацетатный буфер (pH 8,6): в 300 мл дистиллированной воды растворяют4,3 гверонала,0,95 гедкого натра и3,24 гуксуснокислого натрия. K раствору приливают 30 мл0,1 Mраствора HCl и доводят водой до1 л;

в) трис-буфер (pH 8,9): в1 лдистиллированной воды растворяют60,5 гтриса,6 гэтилендиаминтетрауксусной и4,6 гборной кислоты.

2. Растворы для окраски электрофореграмм:

а) кислый сине-черный краситель (аналогичный амидовому черному 10 Б) —0,2 гв смеси: уксусная кислота (ледяная) — 100 мл + метиловый спирт — 900 мл;

б) бромфеноловый синий —0,5 г, сулема —10 г, уксусная кислота (ледяная) — 20 мл, дистиллированная вода — 980 мл;

в) бромфеноловый синий — 0,1 г, ZnSO₄·7H₂O —50 г, уксусная кислота (ледяная) 50 мл, дистиллированная вода — 900 мл.

3. Растворы для отмывания электрофореграмм от несвязавшейся с белком краски и закрепления красителя на белке:

а) уксусная кислота — 2 %-й раствор;

б) уксуснокислый натрий — 2 %-й раствор, приготовленный на 10 %-м растворе уксусной кислоты.

4. Растворы для элюции окрашенных продуктов с электрофореграмм:

а) для извлечения бромфенолового синего —0,01 Mраствор NaOH;

б) для извлечения кислого сине-черного красителя —0,1 Mраствор NaOH.

Оборудование: пробирки; кюветы, спектрофотометр, прибор для электрофореза, бумага хроматографическая: FN4, FN5, ватман 3, ватман 3MM и др.

Получение сыворотки крови. 2 — 3 мл крови набирают в сухую центрифужную пробирку и оставляют на 1/2 — 1 ч. Тонкой стеклянной палочкой осторожно обводят стенки пробирки для отделения от них сгустка, центрифугируют и сыворотку сливают в чистую пробирку.

Подготовка камеры. Отсеки для электродов наполняют буферным раствором до одинакового уровня (во избежание перетекания буфера), примерно по 800 мл в каждый отсек. Bo внутренние части электродных отсеков погружают электроды. Ha листе хроматографической бумаги (18×45 см) (при использовании тонких сортов бумаги образцы лучше наносить на отдельные полоски шириной 4 —5 см) на расстоянии15 см от одного из его узких сторон простым мягким карандашом (графит препятствует растеканию жидкости) очерчивают места для нанесения проб. Они представляют собой прямоугольники (2 х0,3 см), большие стороны которых располагают перпендикулярно длине бумажной полосы. Расстояние между стартовыми зонами и краями электрофореграммы —2 см. Электрофореграмму пропитывают буфером, в котором будет проходить электрофорез. Для этого ее протягивают через кювету с буферным раствором. Концы бумажных полос (6 —8 см) не смачивают. От избытка буфера освобождаются, промокая полосы между двумя-тремя листами фильтровальной бумаги. Влажную электрофореграмму помещают в камеру на центральную горизонтальную пластинку (5), а концы опускают в наружные отделения электродных отсеков Прибор плотно закрывают крышкой, под которой находятся смоченные водой листы фильтровальной бумаги.

Проведение электрофореза. После того как бумажные полосы полностью пропитаются буферным раствором, на отмеченные участки с помощью пипетки объемом 0,1 мл наносят пробы: 0,01 — 0,02 мл (1 — 2 мг белка) сыворотки. Камеру закрывают крышкой и включают ток. Длительность электрофореза составляет 22 — 24 ч при напряжении 200 — 300 B

Фиксация и окраска электрофореграмм. По окончании электрофореза выключают ток и тотчас вынимают электрофореграммы из прибора. Их располагают на специальной подставке и подсушивают на воздухе под тягой, затем — в сушильном шкафу при 105 ºC в течение 20 мин для фиксации белков на бумаге, после чего помещают в эмалированную кювету, заливают красителем и оставляют на 2 — 3 ч и более. Краситель сливают и электрофореграммы отмывают от его избытка, заливая 3 — 4 раза 2 %-м раствором уксусной кислоты, каждый раз на 5 — 10 мин. Участки бумаги, не содержащие белка, должны быть полностью освобождены от красителя. Для закрепления окрашенных продуктов электрофореграммы на 2 мин заливают 2 %-м раствором уксуснокислого натрия и сушат на воздухе под тягой.

Определение соотношения отдельных фракций белка. При pH 8,6 белки сыворотки крови заряжены отрицательно и перемещаются в электрическом поле к аноду. Быстрее всего к аноду движется фракция, альбуминов, затем идут α₁-, α₂-, β- и γ-глобулины (см. Рис. 3). Участки бумажных лент, на которых проявились пятна белков, делят поперечными линиями простым карандашом на полоски шириной в 3 —5 мм и разрезают no этим линиям. Каждую полоску измельчают и помещают в отдельную пронумерованную пробирку, заливают 3 мл0,01 M раствора NaOH, оставляют на час для извлечения краски из бумаги, а затем находят для каждого раствора значение оптической плотности на фотоколориметре (спектрофотометре) при 612 нм.

Рис. 3. Электрофореграмма сыворотки крови человека и кривая распределения белковых фракций

Параллельно обрабатывают контрольную пробу. Для нее вырезают полоску из неокрашенных участков электрофореграммы.

Ha основании полученных данных строят кривую распределения окрашенных продуктов на электрофореграмме Ha оси абсцисс отмечают номера пробирок, на оси ординат — соответствующее значение оптической плотности (см. Рис.3). Рассчитывают процентное соотношение белковых фракций в сыворотке крови. Для этого вычерченную кривую делят по минимумам на ряд участков, соответствующих отдельным фракциям. Величина площади каждого участка пропорциональна количеству краски, соединившейся с белком данной фракции. Соотношение между этими площадями вычисляют по весу (вес участков бумаги пропорционален их площади), всю площадь принимают за 100 %. При наличии денситометра соотношение белковых фракций в сыворотке крови можно определить из денситограммы.

Предварительно определяя содержание белка в сыворотке, рассчитывают его количество для каждой фракции.

источник

Работу выполнили студенты 4 курса: Горбацевич Олег

Цель работы: определить молекулярную массу белка методом электрофореза.

Теория метода:

Электрофорез– это движение частиц в растворителе под влиянием электрического поля. Поскольку скорость движения молекул в электрическом поле зависит от их заряда, формы и размера, то электрофорез может быть использован для их разделения.

Находящиеся в буферном растворе макромолекулы обладают некоторым суммарным электрическим зарядом, величина и знак которого зависят в основном от рН среды. Если через этот раствор начать пропускать электрический ток, то под действием электрического поля макромолекулы в соответствии со своим суммарным зарядом мигрируют в направлении катода или анода, причем их трение об окружающую среду ограничивает скорость миграции. В зависимости от величины заряда и размеров макромолекулы приобретают разные скорости, и в этом – сущность процесса электрофореза. Постепенно исходный препарат, состоявший из различных молекул, разделяется на зоны одинаковых молекул мигрирующих с одной и той же скоростью. Однако в жидкости нельзя избежать конвекции, которая деформирует и смешивает разделяющиеся зоны, поэтому обычно электрофорез проводят в гелеобразной среде. Наличие сетки геля приводит к тому, что теперь фракционируемые макромолекулы сталкиваются с нитями полимера, образующего сетку геля, что увеличивает эффективное трение о среду и, следовательно, снижает скорость движения молекул. Очевидно, что препятствия для миграции становятся особенно серьезными, если средний диаметр пространственных ячеек геля оказывается соизмерим с размерами макромолекул. В этом случае решающее влияние на электрофоретическую подвижность различных молекул и степень разделения оказывает соотношение их линейных размеров.

Электрофорез позволяет разделять макромолекулы, различающиеся по таким важнейшим параметрам, как размеры (или молекулярная масса), пространственная конфигурация, вторичная структура и электрический заряд, причем эти параметры могут выступать как порознь, так и в совокупности.

Биологические макромолекулы – белки, нуклеиновые кислоты, полисахариды и др. – находятся в водном растворе в виде частиц, несущих определённый электрический заряд. Заряд макромолекулы определяется входящими в ее состав группами, способными к электролитической диссоциации. Степень диссоциации групп зависит от многих факторов, в частности, от рН среды. Общий заряд биологической макромолекулы также может изменяться при её взаимодействии с ионами или другими молекулами.

Наиболее широкое применение электрофорез получил для анализа и очистки белков и нуклеиновых кислот, хотя этот метод может быть использован и для других заряженных биологических молекул, таких как сахара, аминокислоты, пептиды, нуклеотиды и др. Для фракционирования белков, нуклеиновых кислот и их фрагментов в настоящее время используют почти исключительно гель-электрофорез. Наиболее широко используются полиакриламидные (ПААГ) гели и гели агарозы. Варьируя концентрацию полимера, можно получать гели с очень широким диапазоном размеров пор. Кроме того, можно изменять электрические заряды макромолекул путем вариации рН буфера, а их конфигурацию путем введения в буфер денатурирующих агентов или детергентов. В качестве других «носителей» жидкой фазы широко используют пленки из ацетата целлюлозы, фильтровальную бумагу, тонкие слои силикагеля, целлюлозы, сефадекса и др. В некоторых случаях, например для разделения низкомолекулярных веществ, эти системы имеют свои преимущества.

Электрофорез используют в электрохимии для изучения двойного электрического слоя, адсорбции ионов на поверхности; в медицине. В промышленности электрофорез используют для выделения каучука из латекса, очистки воды, отделения каолина от песка и др. В биохимии электрофорез служит для анализа, разделения и очистки биополимеров (главным образом белков), бактериальных клеток, вирусов, а также аминокислот, витаминов и др. Практическое применение электрофореза началось после создания шведским учёным А. Тиселиусом специального аппарата для фронтального (или свободного) электрофореза белков в растворе (1937).

ü свободный, или фронтальный, электрофорез в жидкой среде с подвижной границей (используется редко);

ü электрофорез на так называемых носителях, или зональный электрофорез;

ü стационарный электрофорез (изоэлектрическое фокусирование или изотахофорез).

Наиболее широкое распространение нашли электрофоретические методы с использованием инертных носителей (бумаги, гелей и др.), получившие общее название зонального электрофореза, т. к. фракции разделяемых веществ образуют в толще носителя отдельные, несмешивающиеся зоны.

Электрофорез с подвижной границей проводится в U-образной кювете с прямоугольным поперечным сечением. Является аналитическим методом, использующимся в первую очередь для определения подвижности и изоэлектрических точек белков, однако, в связи с тем, что здесь обычно трудно количественно определить подвижности, этот метод используется сравнительно редко. Основной недостаток метода – наличие конвекционных потоков жидкости во время проведения электрофореза.

Изоэлектрическое фокусирование – один из новейших методов разделения макромолекул. Во время изоэлектрического фокусирования между анодом и катодом создается градиент рН. Заряженные молекулы, которые вначале равномерно распределены в среде или внесены в эту среду в виде одной полосы, движутся в соответствии с их фактическим зарядом в направлении противоположно заряженного электрода. Если эти молекулы амфотерны, т.е. содержат группы, способные нести различный электрический заряд, в зависимости от окружающего рН, то при перемещении в градиенте искусственно сформированного рН их суммарный заряд будет непрерывно меняться до тех пор, пока они не достигнут положения, где он станет равным нулю. Это происходит в том месте градиента рН, где значение рН будет равным изоэлектрической точке молекулы. Таким образом, молекулы, имеющие одинаковую изоэлектрическую точку, сконцентрируются в узкой зоне. Если искусственно сформированный градиент рН стабилен, то дальнейших изменений происходить не будет и молекулы останутся сконцентрированными, поскольку их диффузии препятствует электрическое поле. Изотахофорез – тип электрофореза, при котором все заряженные макромолекулы движутся в электрическом поле с одинаковыми (изо) скоростями (тахо).

Электрофорез часто сочетают с другими методами разделения биоорганических соединений (например, с хроматографией). Разработана техника концентрирования электрофоретических зон биополимеров в гелях, значительно повышающая разрешающую способность метода (диск-электрофорез).

Применение реакции антиген-антитело в сочетании с электрофорезом послужило основой для создания метода иммуно-электрофореза.

Электрофоретический анализ биологических жидкостей, например сыворотки крови для исследования главным образом белков, широко используют в диагностике многих заболеваний.

Электрофорез на бумаге. Полоску бумаги сначала погружают в буферный раствор, а затем помещают в камеру. Далее образец наносят либо в виде пятна, либо в виде линии. После окончания разделения бумагу вынимают и высушивают. Если образец содержит достаточное количество вещества, оно может быть обнаружено по его окраске, по флуоресценции или при окрашивании различными красителями. Если требуется количественное определение, вещество можно элюировать и определить спектрофотометрически. Так как элюирование красителя редко бывает количественным, точность такого определения составляет около 20%. Низковольтный электрофорез мало эффективен для небольших молекул (например, аминокислот и нуклеотидов), поскольку из-за малого заряда они обладают низкой подвижностью и, следовательно, медленно делятся.

В высоковольтном электрофорезе скорость разделения увеличивается за счет использования градиента потенциала 200 В/см. Высокое напряжение обуславливает большую силу тока, бумага нагревается, поэтому здесь необходимо охлаждение. Для охлаждения бумагу погружают в большой объем несмешивающейся и не проводящей ток жидкости или прижимают ее к охлаждающей поверхности. Метод погружения используется редко, поскольку применяемые охлаждающие жидкости (например, толуол, четыреххлористый углерод или различные масла) являются токсичными. Метод закрытой бумаги находит более широкое применение. В данном случае бумага не погружается в буфер. После окончания электрофореза бумагу высушивают, а вещества определяют также как и при низковольтном электрофорезе.

Высоковольтный электрофорез на бумаге имеет большую ценность для разделения аминокислот и пептидов. Поскольку полное разделение смесей не всегда возможно при использовании одного высоковольтного электрофореза, его часто используют в сочетании с хроматографией; этот метод известен под названием двумерного разделения. Образец вначале подвергают электрофорезу, а затем хроматографируют под прямым углом или наоборот.

Гель электрофорез. Лучшего разделения, в частности, белков и нуклеиновых кислот, можно достигнуть, если в качестве носителя использовать гели крахмала, полиакриламида, акриламида.В настоящее время крахмальный гель используют редко, поскольку более удобным оказался полиакриламидный гель. При использовании полиакриламидного геля можно контролировать эффект молекулярного сита с помощью изменения концентрации геля, а адсорбция белков в нем весьма мала. Полиакриламид — наиболее эффективный носитель для электрофореза белков. Полиакриламидный гель получается при сшивании акриламида N,N’-метилен-бис-акриламидом непосредственно в контейнере, предназначенном для проведения электрофореза.

Электрофорез в полиакриламидном геле проводят или в колонках с гелем, или на пластинках с геля.

Диск- электрофорез в полиакриламидном геле. Метод состоит в том, что тонкий первоначальный слой образца (1-2мм) концентрируется в сверхтонкую стартовую зону толщиной от 1 до 100мкм. Заметим, что находится в вертикальной колонке и представляет собой три отдельные области: верхнюю, или область образца, среднюю, называемую прокладкой, и нижнюю, состоящую из собственно разделяющего геля. Область образца и гель-прокладка имеет меньшую концентрацию (больший размер пор), чем разделяющий гель, и готовятся в буфере с низкой ионной силой и различными значениями рН. Больший размер пор верхних слоев геля означает, что молекулы в них задерживаются меньше, двигаясь при этом быстрее, чем в нижнем геле. Быстрое движение через верхние слои геля приводят к накоплению вещества на границе между прокладкой и разделяющим гелем. При движении молекул через разделяющий гель образуются различные зоны в соответствии с подвижностями. После окончания разделения гель удаляют из стеклянной трубочки. Для идентификации зон существует ряд методов. Гель можно окрашивать путем погружения в раствор красителя с последующим тщательным промыванием для удаления не связанного красителя. При необходимости гель можно фотографировать.

Диск-электрофорез применяют в основном для определения чистоты предположительно чистых белков и для анализа компонентов смесей, когда необходимо получить очень высокое разрешение (т.е. в случае присутствия очень большого количества компонентов).

SDS -гель электрофорез. Молекулярная масса многих белков можно определить с помощью измерения их подвижности в полиакриламидном геле, содержащем детергент — додецилсульфат натрия (SDS). Белки, обработанные SDS и 0,1 М меркаптоэтанолом, имеют одну и ту же форму и одинаковые отношения заряд/масса. Таким образом достигается зависимость подвижности только от молекулярной массы за счет свойств геля быть молекулярным ситом. Следова­тельно, если белок с неизвестной молекулярной массой подвергнуть электрофорезу с двумя белками известной молекулярной массы, неизвестная молекулярная масса может быть рас­считана с точностью от 5 до 10%. Большая точность получается, когда неизвестная молеку­лярная масса находится между известными массами.

Дата добавления: 2015-09-11 ; просмотров: 12 | Нарушение авторских прав

источник

Электрофорез показал, что в кислой среде полоний мигрирует к катоду, в ще-л очной — к аноду. [46]

Электрофорез на инертном носителе является прекрасным аналитическим приемом, так как он позволяет при наличии лишь незначительных количеств веществ осуществить их химическое разделение и изучение, а также одновременно ставить несколько опытов за короткое время. [47]

Электрофорез проводят в стеклянных трубках длиной около 70 мм с внутренним диаметром около 5 мм. Перед употреблением трубки тщательно промывают смесью хромовой и серной кислот или горячей азотной кислотой, водой и в заключение ацетоном. Сухие трубки держат вертикально и дно их закрывают резиновым уплотнением так, чтобы резина не входила в трубку. [48]

Электрофорез двух фракций легких цепей свиного иммуноглобулина был проведен с помощью горизонтального метода по Франеку. На рисунке старт указан неясной линией около катода. [50]

Электрофорез следует осуществлять при комнатной температуре. Когда окрашенный индикатор доходит до нижнего конца геля, электрофорез заканчивают. Затем между гелем и стеклянной стенкой трубки вводят тонкую иглу шприца и передвигают ее вдоль внутренней стенки трубки, одновременно нажимая на поршень шприца. [51]

Электрофорез применяется в различных производствах, например: в обезвоживании нефти, подготовке суспензий и; керамических масс для фарфорово-фаянсовых изделий, изготовлении активированных катодов для радиоламп и изолированных нагревательных спиралей, в получении резиновых изделий из латексов. Частицы каучука в латексе заряжены отрицательно и во время электрофореза движутся к аноду ( металлическая форма), отлагаясь на нем в виде резиновой пленки. Электрофорез применяется также ( наряду с ионофо-резом) в лечебной практике для введения в организм различных лекарственных веществ. [52]

Электрофорез ведется при высоком падении потенциала ( 8 — 10 в / см) для более четкого разделения компонентов раствора по их электрофоретической подвижности. [53]

Электрофорез производится при падении потенциала около 15 — 20 в / аи и силе тока 3 — 5 ма. По окончании опыта бумагу высушивают и прокрашивают красителем ( бромфенолблау и др.), хорошо связывающимся с белками; на бумаге проявляется несколько полос, соответственно числу компонентов смеси. [55]

Электрофорез проще всего наблюдать в коллоидах или суспензиях с помощью прибора, изображенного на рис. Нижняя часть / — образной трубки заполняется коллоидным р-ром или суспензией. Сверху в оба колена наливают слой чистого растворителя и в него погружают платиновые электроды. При приложении напряжения к электродам граница между растворителем п суспензией начинает передвигаться со скоростью, равной скорости электрофореза частиц. Если суспензия или коллоид окрашены, можно визуально наблюдать изменение положения границы н измерять скорость ее движения с помощью специальной шкалы, помещаемой за прибором. Иногда границу можно сделать видимой с помощью флуоресценции в ультрафиолетовом свете; прибор в этом случае должен быть изготовлен из кварца. [56]

Электрофорез и электроосмос в золях не являются процессами односторонними, которые следовало бы противопоставлять двухстороннему процессу электролиза электролитов, как это ошибочно полагали первые исследователи этих явлений и как может показаться с первого взгляда. [57]

Электрофорез потому кажется односторонним, что при нем коллоидные частицы огромных размеров ( по сравнению с размерами молекул и ионов) односторонне движутся в неподвижной жидкой среде либо к катоду, либо к аноду и дают возможность даже непосредственно видеть это перемещение и опытным путем определять количество выделяющейся дисперсной фазы; однако одновременно с этим видимым перемещением идет в той же неподвижной жидкой среде и невидимое движение противоионов к противоположному электроду, но в количествах, трудно уловимых экспериментально. [58]

Электрофорез обнаруживается экспериментально по выделению на одном из электродов ( или около него) дисперсной фазы, а также по смещению границы раздела коллоидный раствор — дисперсионная среда к одному из электродов. [60]

источник

Электрофорез – виды, эффективное лечение, противопоказания ( электрофорез для детей, на дому, с эуфиллином, с лидазой, карипазимом)

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Электрофорез, как медицинская процедура, также называется ионофорез, ионотерапия, ионогальванизация или гальваноионотерапия, причем все данные термины означают один и тот же процесс. Применительно к медицинской практике, электрофорез представляет собой метод электротерапии, который основан на эффектах постоянного тока и действии лекарственных препаратов, доставляемых при помощи того же тока. Доставка различных медицинских препаратов при помощи данного метода называется лекарственным электрофорезом. Сегодня в лечебной практике применяется несколько видов электрофореза, в которых используют различные электрические токи.

Для доставки лекарственных препаратов методом электрофореза используют следующие токи:
1. Постоянный (гальванический) ток.
2. Диадинамические токи.
3. Синусоидальные модулированные токи.
4. Флюктуирующие токи.
5. Выпрямленный ток.

В основе электрофореза лежит процесс электролитической диссоциации. Химическое вещество, являющееся лекарством, распадается на ионы в водном растворе. При пропускании электрического тока через раствор с медицинским препаратом ионы лекарства начинают перемещаться, проникают через кожу, слизистые оболочки, и попадают в организм человека.

Ионы лекарственного вещества проникают в ткани по большей части через потовые железы, но небольшой объем способен проходить и через сальные железы. Лекарственное вещество после проникновения в ткани через кожу равномерно распределяется в клетках и межклеточной жидкости. Электрофорез позволяет доставить лекарственный препарат в неглубокие слои кожи – эпидермис и дерму, откуда он способен всасываться в кровь и лимфу через микрососуды. Попав в кровоток и лимфоток, медицинский препарат доставляется ко всем органам и тканям, но максимальная концентрация сохраняется в области введения лекарства.

Количество лекарственного вещества, которое может всосаться в ткани из раствора при проведении процедуры электрофореза, зависит от множества факторов.

Основные факторы, влияющие на степень всасывания лекарства при доставке его электрофорезом:

• степень диссоциации;
• размер и заряд иона;
• свойства растворителя;
• концентрация вещества в растворе;
• плотность электрического тока;
• длительность процедуры;
• возраст человека;
• состояние кожных покровов;
• общее состояние организма.

Лекарственный препарат, доставленный в организм при помощи электрофореза, воздействует несколькими механизмами:
1. Рефлекторный механизм (ионные рефлексы).
2. Гуморальный (системный) механизм.
3. Местный механизм.

Рефлекторный компонент терапевтического действия лекарства формируется за счет опосредованных влияний. Гуморальный компонент оказывает системное воздействие за счет проникновения лекарственного вещества в кровоток и лимфоток, и влияния на многие органы и ткани. Местное действие электрофореза обусловлено высокой концентрацией лекарства в месте введения.

Электрофорез оказывает следующие терапевтические эффекты:

• противовоспалительный – анод;
• обезвоживающий (способствует выходу жидкости из тканей и сходу отеков) – анод;
• обезболивающий – анод;
• успокаивающий – анод;
• сосудорасширяющий – катод;
• расслабляющий (особенно в отношении мышц) – катод;
• нормализация обмена веществ, питания органов и тканей – катод;
• секреторный (выработка и выброс в кровь биологически активных веществ) – катод.

Преимущества электрофореза перед методами введения лекарства через
рот, внутривенно или внутримышечно

Сфера применения лекарственного электрофореза очень широка. Метод используется не только в качестве лечебной процедуры, но и профилактической. Заболевания нервной, дыхательной систем, хирургические, гинекологические, уха, глаз, носа и прочие, поддаются излечению при использовании комплексного лечения с включением в него процедуры электрофореза.
Основные показания к применению электрофореза:

• патология сердечно-сосудистой системы (растворы кальция);
• атеросклероз (растворы йода, новокаина);
• гипертония (растворы брома, кофеина, магнезии, калия, йода, новокаина);
• гипотония;
• рубцы, сформировавшиеся после хирургических вмешательств, травм или воспалений (растворы йода, лидазы, ронидазы);
• себорея;
• купероз;
• тяжи из соединительной ткани, в том числе спайки (растворы йода, лидазы, ронидазы);
• келоидные рубцы (растворы йода, лидазы, ронидазы);
• контрактура Дюпютриена (растворы йода, лидазы, ронидазы);
• ожоги (растворы йода, лидазы, ронидазы);
• патология суставов и костей – артриты, полиартриты, остеохондроз позвоночника, болезнь Бехтерева (растворы салицилатов);
• патология глаз;
• патология ЛОР-органов (тонзиллит, гайморит, отит и т.д.);
• хронические вялотекущие воспаления женских половых органов – эндоцервицит, эндометриоз, кольпит, эндометрит, эрозия шейки матки (растворы антибиотиков, например, тетрациклина);
• воспалительные заболевания мочеполовых органов – простатит, цистит, пиелонефрит и т.д.;
• хронический бронхит (растворы антибиотиков);
• патология нервной системы – невриты, радикулиты, плекситы, невралгии (новокаин);
• травмы спинного или головного мозга;
• нарушения сна;
• патология пищеварительной системы (гастрит, язва желудка и двенадцатиперстной кишки, холецистит, гепатит, колит);
• неврозы;
• мигрень;
• воспалительные заболевания полости рта и зубов — стоматиты.

При лечении ушибов, разрывов и растяжений связок, отеков, гнойных воспалений, болевого синдрома, язв трофического характера, лучше использовать растворы лекарственных препаратов, приготовленные на аптечном Димексиде, а не на дистиллированной воде.

Терапию электрофорезом применяют в составе комплексного лечения тяжелых патологий с длительным течением. Электрофорез нельзя рассматривать в качестве панацеи или изолированного метода, гарантирующего полное излечение от хронического патологического процесса. Данный метод необходимо использовать в сочетании с иными лечебными манипуляциями, в том числе приемом медикаментов.

Лекарственный электрофорез имеет различные дозировки, которые обусловлены длительность воздействия (от 10 минут до получаса) и плотностью тока (0,03—0,08 мА/см 2 ). Дети и пожилые люди должны получать электрофорез в более низкой дозе, которая на треть или четверть ниже, чем для взрослого человека. Обычный курс лечения составляет от 10 до 20 сеансов. Сеансы электрофореза проводятся ежедневно, или через день. После прохождения полного курса его можно повторить вновь при необходимости, но не ранее, чем через 2-3 месяца.

Суть техники лекарственного электрофореза заключается в нанесении медикаментозного препарата перпендикулярно направлению движения тока, то есть между электродом и кожей человека. В отечественной практике чаще всего применяют растворы лекарственных препаратов, а за рубежом предпочитают использовать те же медикаменты, но в форме геля.

На сегодняшний день имеется несколько разновидностей лекарственного электрофореза, которые обусловлены различными способами нанесения лекарства, и видом электрического тока. Рассмотрим основные методики лекарственного электрофореза.

Методика гальваническая
Чаще всего проводится электрофорез из растворов лекарственных препаратов, которыми смачивают специальные прокладки. Прокладки представляют собой марлю, сложенную в 2-4 слоя, или фильтровальную бумагу. Раствор лекарственного вещества в необходимом количестве и концентрации переносится на прокладку, которая располагается на теле. На лекарственную прокладку помещают защитную, причем размеры обеих прокладок должны быть одинаковыми. А на защитную прокладку устанавливают электрод аппарата для электрофореза. Второй электрод устанавливается на противоположной стороне тела, чтобы создать линию, вдоль которой будет двигаться лекарственное вещество.

Аппарат для электрофореза имеет два электрода – положительный (анод) и отрицательный (катод). Лекарственное вещество диссоциирует в растворе также на положительные ионы (катионы) и отрицательные (анионы). Если лекарство диссоциирует с образованием катионов, то его следует располагать на положительном электроде. В случае диссоциации лекарства на анионы, лекарственную прокладку помещают под отрицательным электродом. Таким образом, имеется универсальное правило расположения лекарственной прокладки: препарат и электрод должны иметь одинаковый заряд (+ или -).

Если лекарственный препарат диссоциирует с образованием катионов и анионов, то лекарственную прокладку допускается ставить под оба электрода одновременно.

Методика ванночковая
В данном случае в специальную емкость (ванночку) уже встроены электроды. Для проведения электрофореза в емкость просто наливается необходимый раствор лекарственного препарата, и человек погружает в жидкость нужную часть тела.

Методика полостная
В данном случае в полые органы (желудок, мочевой пузырь, прямая кишка, влагалище и т.д.) вводится раствор лекарственного препарата. Затем нужный электрод (катод или анод) также вводится в полость органа, а второй располагается на поверхности тела.

Методика внутритканевая
В данном случае лекарственный препарат вводят через рот (таблетки), внутривенно или внутримышечно, после чего располагают электроды на той части тела, где находится очаг патологического процесса. Особенно эффективен внутритканевой электрофорез при лечении заболеваний дыхательных путей (бронхиты, ларингиты, трахеобронхиты и т.д.).

Для проведения процедуры используются, в основном, растворы лекарственных препаратов. Растворы приготавливают ex tempore, то есть непосредственно перед использованием. Не допускается длительное хранение (более 7 суток) растворов лекарственных веществ для электрофореза. Различные лекарственные препараты вводятся в разных концентрациях, которые определяются многими факторами.
Концентрации растворов различных препаратов для электрофореза:

• Адреналин – 0,1%;
• Антипирин – 1-10%;
• Аскорбиновая кислота (витамин С) – 5-10%;
• Атропин – 0,1%;
• Биомицин – 0,5%;
• Бром – 1-10%;
• Тиамин (витамин В₁) – 2-5%;
• Лидаза (гиалуронидаза) – 0,5-1 г развести 100 мл 1% раствором новокаина;
• Гистамин – 0,01%;
• Дикаин – 2-4%;
• Димедрол – 0,25-0,5%;
• Йод – 1-10%;
• Кальций – 1-10%;
• Калий – 1-10%;
• Сульфотиофен – 1-10%;
• Кодеин – 0,1-0,5%;
• Кофеин – 1-10%;
• Литий – 1-10%;
• Сульфат магния (магнезия) – 1-2%;
• Никотиновая кислота (витамин РР) – 1-10%;
• Медь – 0,1%;
• Новокаин – 1г растворить в 100 мл 0,5% раствора соды;
• Папаверин – 0,1%;
• Пенициллин – 5000-10000 ЕД на 1 мл раствора;
• Платифиллин – 0,03%;
• Прозерин – 0,1%;
• Салициловая кислота – 1-10%
• Сера – 2-5%;
• Серебро 1-2%;
• Синтомицин – 0,3%;
• Стрептоцид – 0,8% (в качестве растворителя использовать 1% раствор соды);
• Уротропин – 2-10%;
• Фосфорная кислота – 2-5%;
• Хлор – 3-10%;
• Цинк – 0,1-2%;
• Эуфиллин – 2%;
• Эфедрин – 0,1%.

Растворы для электрофореза имеют невысокие концентрации, поэтому необходимо придерживаться следующих правил их приготовления:
1. На точных весах отмерить указанное количество грамм вещества (например, для 2% раствора берут 2 г вещества, для 0,8% раствора – 0,8 г).
2. Ссыпать мерку вещества в чистый мерный сосуд объемом не менее 100 мл.
3. Взять дистиллированную воду и медленно долить ее до метки «100 мл», ополоснув чашечку весов, на которой находилась мерка.
4. Перелить в другую емкость и перемешать до полного растворения вещества.

Лекарственный препараты, предназначенный для проведения электрофореза, должны отвечать следующим требованиям:
1. Чистые, без примесей.
2. Свежие, то есть раствор лекарственного препарата готовится непосредственно перед употреблением.
3. Для приготовления раствора использовать только чистую воду (дистиллированную).
4. Если лекарство нерастворимо в воде, то в качестве растворителя применяют очищенный спирт или Димексид (диметилсульфоксид).
5. Не допускается использование в качестве растворителя физиологического раствора.
6. Для приготовления растворов ферментов (лидаза) необходимо использовать в качестве растворителя буферы (фосфатный, гидрокарбонатный и т.д.).

Лекарственные препараты, вводящиеся с анода и катода, отражены в таблице:

Метод можно применять при наличии любого патологического состояния, при котором показано лечение электрофорезом. Прекрасный эффект достигается при лечении гипертонии, неврозов, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки.

Для проведения электрофореза применяют растворы следующих элементов:

• кальций;
• йод;
• бром;
• магний;
• новокаин;
• эуфиллин.

На область шеи и верхней части груди накладывают лекарственную прокладку размером 31х31 см (примерно 1000 см 2 ), которую пропитывают 50 мл теплого (38—39 o С) лекарственного раствора. В качестве защитной, сверху на лекарственную прокладку налагают слой мягкой ткани (фланель, бязь) таких же размеров. Второй электрод располагают в месте сочленения поясничных и крестцовых позвонков. Прокладка для второго электрода должна иметь размеры 20х20 см (примерно 400 см 2 ) и быть смочена теплой (38—39 o С) дистиллированной водой вместо лекарственного раствора. Сверху накладывается защитная прокладка из мягкой ткани.

Ионный воротник позволяет одновременно доставлять два иона с разными зарядами — например кальций с анода и бром с катода, создавая кальций-бромистый воротник, или новокаин с анода и йод с катода, получая новокаин-йодистый воротник.

Процедуру электрофореза по методу ионного воротника проводят по 6-10 минут при силе тока 4 мА, которые доводятся до 6 мА. В случае необходимости более глубокого проникновения лекарств в кожу разрешается увеличивать силу тока до 16 мА, и удлинять время процедуры до 20 минут.

Ионный воротник эффективен для лечения:

• черепно-мозговых травм;
• неврозов;
• гипертонической болезни;
• нарушений сна и т.д.

Для проведения электрофореза используют растворы ионов — например, кальция, брома, йода, магния и проч. Ионный пояс бывает верхним и нижним. Верхний ионный пояс накладывается на грудные и поясничные позвонки, а нижний – на поясничные и крестцовые.

Для верхнего и нижнего пояса берут лекарственную прокладку размером 15х75 см (примерно 1125 см 2 ), которую пропитывают 50 мл теплого раствора (38—39 o С) медицинского препарата. На лекарственную прокладку накладывают защитную таких же размеров, из мягкой ткани, и толщиной в 1 см. Вторую прокладку для верхнего пояса размером 15х20 см (примерно 320 см 2 ) смачивают теплой дистиллированной водой, и накладывают на переднюю поверхность бедра в области верхней части. Для нижнего пояса вторая прокладка имеет такие же размеры, как и для верхнего, но накладывается на заднюю поверхность бедра.

Процедура электрофореза продолжается 8-10 минут при силе тока 8-15 мА. В случае необходимости разрешается увеличивать длительность электрофореза максимально до 20 минут.

Ионный пояс эффективен при лечении воспалительных заболеваний женских половых органов, нарушениях сексуальной функции.

Для процедуры берется лекарственная прокладка размером 15х19 см (примерно 300 см 2 ), которая пропитывается необходимым лекарственным раствором, и налагается на межлопаточную область. В качестве второго электрода используют одновременно два, которые устанавливают на заднюю поверхность икр обеих ног с прокладками размером 12х13 см (примерно 150 см 2 ). Процедуру проводят на протяжении 20-30 минут при силе тока 10-30 мА.

Метод Вермеля особенно эффективен для терапии следующих заболеваний:

• гипертония;
• атеросклероз;
• кардиосклероз;
• невроз;
• мигрень и др.

В обе ноздри вводится ватный тампон, пропитанный лекарственным раствором. Второй электрод налагают на заднюю часть шеи с защитной прокладкой размером 8х10 см (примерно 80 см 2 ). Процедура длится 10-20 минут при силе тока 2 мА.

Назальный электрофорез эффективен для терапии сосудистых, воспалительных и травматических патологий головного мозга, язвы желудка и двенадцатиперстной кишки, нарушениях обмена веществ.

Лекарственная прокладка, пропитанная 0,5% раствором эуфиллина, налагается на шейные позвонки, а вторая прокладка, пропитанная 1% раствором папаверина, располагается на ребрах, справа от грудины. Процедура продолжается 15 минут при силе тока 1-2 мА.

Процедура электрофореза по Ратнеру применяется для лечения нарушений кровообращения в шейном отделе позвоночника, терапии детского церебрального паралича и т.д. Метод Ратнера широко используют для восстановления нормального функционирования органов после родовых травм у детей.

В емкость для электрофореза наливается свежий раствор лекарственного препарата, и человек опускает руки или ноги в ванночку. Процедура длится 20 минут при силе тока 30мА.

Ванночковый электрофорез эффективен при лечении:

• артритов;
• полиартритов;
• плекситов;
• полиневритов и других заболеваниях суставов и нервной системы.

Препарат Карипазим представляет собой вещество папаин, которое успешно применяется для лечения грыжи межпозвоночного диска. Для приготовления раствора Карипазима для проведения электрофореза следует содержимое флакона тщательно растворить в 5-10 мл физиологического раствора. В данный раствор Карипазима добавить 2-3 капли аптечного Димексида.

Лекарственную прокладку размером 10х15 см (примерно 150 см 2 ) пропитывают теплым (37-39 o С) раствором Карипазима, и накладывают на шейные позвонки. Вторую прокладку, пропитанную раствором эуфиллина, накладывают на плечи или поясницу. Имеется еще один вариант расположения прокладок для проведения электрофореза с Карипазимом. Прокладку, пропитанную Карипазимом — наложить на поясницу, а пропитанную эуфиллином — разместить на бедрах.

Электрофорез проводят в течение 10-20 минут при силе тока 10-15 мА. Один курс лечения составляет 15-20 сеансов. Для успешной терапии грыжи межпозвоночного диска рекомендуется пройти 2-3 курса с Карипазимом, перерыв между которыми составляет 1-2 месяца.

Детский и грудной возраст не являются абсолютными противопоказаниями для процедуры электрофореза. В отношении детей противопоказания определяются таковыми для лекарственного препарата, который будет использоваться в ходе лечебной процедуры.

Грудным детям в возрасте до 1 года процедуру электрофореза, как правило, назначают для лечения неврологических патологий (например, гипертонус мышц) или дисплазии тазобедренного сустава. Гипертонус мышц не дает ребенку держать головку, садиться, переворачиваться на животик, нормально ходить, вызывает кривошею и т.д. Электрофорез позволяет доставить лекарственный препарат в организм ребенка, не прибегая к приему достаточно высоких доз таблеток или внутривенных инъекций.

Дети переносят электрофорез по-разному: некоторые не предъявляют никаких жалоб, другие становятся нервными, раздражительными, или плачут на протяжении все процедуры. Решение о продолжении сеансов электрофореза должно приниматься с учетом возможной пользы и имеющихся рисков.

Дети старше 1 года не имеют ограничений для лечения электрофорезом, кроме обусловленных противопоказаниями для лекарственного препарата.

В период беременности применять процедуры электрофореза при отсутствии противопоказаний. Физиопроцедура позволяет улучшить кровообращение, расслабить мышцы, снизив тонус матки.

При беременности электрофорез проводить нельзя в случае наличия следующих симптомов:

• рвота;
• патология почек;
• патология системы свертывания с риском кровотечений;
• плохое состояние плода;
• эклампсия.

В гинекологической практике электрофорез применяется для лечения хронических воспалительных заболеваний (цервицит, эндометрит и т.д.). В этом случае высокой эффективностью обладает метод тканевого электрофореза с антибиотиками.

Для лечения эрозии шейки матки и эндометриоза метод электрофореза применяется как способ доставки лекарственных препаратов (йод, цинк, лидаза, амидопирин) непосредственно в ткани.

Процедуру можно проводить в домашних условиях при наличии хорошей подготовки, скрупулезного изучения методов установки электродов, приготовления растворов, вариантов дозирования и соблюдения техники безопасности. Также необходимо строго учитывать наличие противопоказаний, и не злоупотреблять «доступностью» электрофореза.

Оптимальный вариант применения метода в домашних условиях:
1. Приобрести аппарат и лекарственные препараты.
2. Получить пропись с дозировкой курса лечения у врача-физиотерапевта.
3. Пригласить медсестру на дом для проведения правильного сеанса физиотерапии.

На сегодняшний день имеется достаточное количество различных аппаратов для электрофореза, которые можно использовать в домашних условиях. Так, аппараты Поток, АГН-32, АГП-3, ГНИМ-1, Модель-717, Тонус являются источниками гальванического и диадинамических токов, а приборы Амплипульс-3Т, Амплипульс-4 генерируют синусоидальные модулированные токи.

Прекрасно подойдут для использования дома аппараты Элфор, МАГ-30, Поток, Солнышко, Элан, МИТ (ЭФ1, ЭФ2), Элэскулап.

Прибор для электрофореза WGD-10 работает с гелями.

Аппаратуру для проведения процедуры электрофореза лучше всего приобретать в специализированных магазинах «Медтехника». Сеть магазинов «Медтехника» работает непосредственно с производителями медицинской аппаратуры, поэтому риск купить некачественный прибор минимален.

Автор: Наседкина А.К. Специалист по проведению исследований медико-биологических проблем.

источник