Капель система капиллярного электрофореза методика поверки

ASTM D7881-13
ASTM D7882-13

М 01-31-2011
ПНД Ф 14.1:2:4.167-2000 (изд. 2011 г.)
ГОСТ 31869-2012

ПНД Ф 14.1:2:3:4.282-18
Методика М 01-58-2018
(ФР.1.31.2018.29956)
ПНД Ф 14.1:2:4.157-99 (изд. 2013 г.)
М 01-30-2009 (изд. 2013 г.)

источник

Техническое задание на поставку системы капиллярного электрофореза Система капиллярного электрофореза «Капель-105М» предназначена для количественного и качественного определения состава проб веществ в водных и водно-органических растворах. 1 основные технические характеристики

на поставку системы капиллярного электрофореза

Система капиллярного электрофореза «Капель-105М» предназначена для количественного и качественного определения состава проб веществ в водных и водно-органических растворах.

Диапазон рабочих длин волн, нм

Погрешность установки длины волны, нм

Ширина выделяемого спектрального интервала, нм

Диапазон регулировки напряжения, кВ

Предел обнаружения при отношении сигнал/шум 3/1

бензойной кислоты при использовании источника положительной полярности высокого напряжения прибора, мкг/см3 ,

хлорид-ионов при использовании источника отрицательной полярности высокого напряжения прибора, мкг/см3 ,

Среднеквадратичное отклонение (СКО) выходного сигнала по высоте пика, %, не более

Среднеквадратичное отклонение (СКО) выходного сигна-

ла за 8 часов работы (нестабильность показаний),%,

Время непрерывной работы прибора, ч,

Время установки рабочего режима, мин,

Напряжение питания переменного тока, В

Система должна работать при следующих условиях эксплуатации:

температура окружающей среды, °С

относительная влажность воздуха при +25 С,%,

Показатели надежности анализатора

Средняя наработка на отказ, ч, не менее

Средний срок службы, лет, не менее

Система капиллярного электрофореза «КАПЕЛЬ 105М» с установленной кассетой с капилляром или эквивалент

— система капиллярного электрофореза «Капель-105М»

— Сменный блок высокого напряжения (один из блоков установлен непосредственно в приборе)

— дополнительная кассета с капилляром

— Руководство по эксплуатации

— Копия сертификата ГосРеестра об утверждении типа СИ

— Практическое руководство по использованию систем КЭ

— кабель связи с компьютером

— штатив для кассеты, сменных блоков и комплекта ЗИП

— Пробирки для образцов (типа «Эппендорф») 500 шт

— Оправа для фильтра, многоразовая, диам. 25 мм

— Фильтры типа Владипор, диам. 25 мм, 50 шт

— Набор для промывки капилляра

— руководство пользователя ПО

Наборы для анализа и расходные материалы:

Набор для определения анионов в воде

Набор для определения катионов в воде

Оправа для фильтра, многоразовая, диам. 25 мм

Пробирки типа Эппендорф, 1,5 мл (нестер., 500 шт. в уп.)

Фильтры типа Владипор, диам. 25мм, 50 шт

ГСО на анионы в воде (комплект, 6 амп.)

ГСО на катионы (комплект, 8 амп.)

18-Краун-6 [ 1 г] (для МВИ на катионы)

Бензимидазол [ 2 г] (для МВИ на катионы)

Бис (2-оксиэтил)амин [4 г ] (для МВИ на анионы,

Винная кислота (DL), х.ч. 10 г (для МВИ на катионы)

Хромовый ангидрид (для МВИ на анионы, 4 г, в виале)

Цетилтриметиламмония гидроксид (ЦТАОН), 10% р-р, 3мл

• В цену товара должны быть включены все расходы Участника размещения заказа по доставке, упаковке, маркировке, погрузке, транспортировке, разгрузке товаров, а также прочие расходы и налоги, уплаченные или подлежащие уплате. Цена Договора должна оставаться неизменной до момента исполнения обязательств по Договору.
• Комплект поставки должен включать все дополнительные устройства, кабели, программное обеспечение и другие устройства, необходимые для полного функционирования оборудования;
• Прибор должен быть внесен в Госреестр средств измерений РФ;
• Сертификат об утверждении типа средства измерения;
• Прибор должен иметь методику поверки;
• Прибор должен пройти первичную поверку;
• Оборудование не ранее 2013 года выпуска, новое, не бывший в использовании, не из ремонта, с совместимыми с имеющимися у заказчика комплектующими. Расходные материалы должны быть оригинальные и не восстановленные.
• Наличие в комплекте предоставляемых поставщиком документов руководства по эксплуатации, свидетельства о поверке и паспорта на предлагаемые модели приборов, подтверждающих заявленные характеристики, на русском языке ОБЯЗАТЕЛЬНО!
• Пусконаладочные работы осуществляются силами авторизованной сервисной службы Сервис-центра завода-изготовителя или другими сертифицированными специалистами в лаборатории Заказчика течение 30 календарных дней с момента извещения о готовности к проведению пуско-наладочных работ. Пусконаладочные работы включают в себя запуск прибора, демонстрацию соответствия прибора заявленным техническим характеристикам, инструктаж по правилам работы на приборе и по методике выполнения измерений (МВИ) не менее чем для 2-х сотрудников Покупателя.

Срок гарантии на поставляемое оборудование и составляющие узлы не менее 12 месяцев.

Гарантия распространяется на все случаи возникновения неисправности, за исключением неисправностей возникших в результате неправильной эксплуатации оборудования, а также неисправностей, возникших в результате действия непреодолимых сил или стихийных бедствий.

Техническое сервисное обслуживание: должно включать наличие Сервисного центра на территории России, поставку и замену запасных частей оборудования, проведение профилактических работ, проведение ремонта. Техническое сервисное обслуживание системы капиллярного электрофореза не менее 36 месяцев с даты указанной в формуляре на прибор.

источник

«КАПЕЛЬ®-105M» – система капиллярного электрофореза, с автосемплером и автоматически переключаемой полярностью, управляемая от компьютера. Главной отличительной особенностью модели «КАПЕЛЬ®-105M» является спектрофотометрическое детектирование.

Капель-105М – система капиллярного электрофореза, с автосемплером и автоматически переключаемой полярностью, управляемая от компьютера.

Главной отличительной особенностью модели «КАПЕЛЬ®-105M» является спектрофотометрическое детектирование.

• Анализ объектов окружающей среды:
  • природные, питьевые, сточные воды (неорганические катионы и анионы, гербициды);
  • почвы, грунты, донные отложения (водорастворимые формы неорганических катионов и анионов).
• Контроль качества, подлинности и безопасности напитков (органические кислоты (в том числе индивидуальные формы D- и L- изомеров), сахара, неорганические катионы и анионы, консерванты, подсластители, синтетические красители, витамины, аминокислоты, фурфуролы, ароматические альдегиды, амины, флавоноиды, антоцианы, пестициды, фунгициды);
• Контроль качества и безопасности пищевой продукции, продовольственного сырья и БАД (консерванты, подсластители, кофеин, теобромин, органические кислоты, аминокислоты, амины, белки);
• Ветеринария и контроль качества кормов и комбикормового сырья (аминокислоты, витамины, органические кислоты, неорганические катионы и анионы, антибиотики, кокцидиостатики);
• Фарминдустрия (контроль безопасности и качества синтетических субстанций, природного сырья, активных фармацевтических ингредиентов, вспомогательных веществ и готовых лекарственных средств , в том числе анализ белков методами капиллярного гель-электрофореза и капиллярного изоэлектрического фокусирования).
• Криминалистическая экспертиза (наркотические средства, взрывчатые вещества, оптические отбеливатели)
• Клиническая биохимия (ионы, аминокислоты, амины, пептиды в биожидкостях)
• Химическая промышленность (определение основного компонента, примесей, контроль сырья и побочных продуктов)

• Диапазон рабочих длин волн от 190 до 380 нм;
• Возможность регистрации спектров поглощения компонентов анализируемой пробы;
• Автосемплер на 10 входных и 10 выходных пробирок типа «Эппендорф»;
• Охлаждение капилляра – жидкостное. В качестве теплоносителя используется дистиллированная вода. Задание и контроль температуры теплоносителя возможен в диапазоне от температуры на 10 градусов ниже температуры окружающей среды до +50°С;
• Способы ввода пробы: гидродинамический (давлением до 99 мбар), электрокинетический (при напряжении
  от -25 до +25 кВ);
• Промывка капилляра – автоматическая (при постоянном давлении 1000 мбар);
• Опциональная возможность промывки капилляра при 2000 мбар позволяет работать с высоковязкими фоновыми электролитами в режиме капиллярного гель-электрофореза;
• Источник высокого напряжения с автоматически переключаемой полярностью (постоянное напряжение
  от -25 до +25 кВ, с шагом 1 кВ, ток 0–200 мкА);
• Полное управление прибором, сбор и обработка данных с помощью специализированного программного обеспечения «Эльфоран»;
• Все процедуры – от ввода пробы до промывки капилляра производятся автоматически в режиме программирования, что снижает затраты времени и вероятность ошибки при проведении анализа, улучшая воспроизводимость результатов.

Система капиллярного электрофореза «КАПЕЛЬ-105M» сертифицирована на соответствие требованиям директив Европейского союза по безопасности и электромагнитной совместимости.

Всё вышеперечисленное делает «КАПЕЛЬ-105M» удобным инструментом для решения, как для исследовательских, так и рутинных аналитических задач.

система капиллярного электрофореза «КАПЕЛЬ-105М» (в комплект поставки прибора входят: система «КАПЕЛЬ®-105М», специализированное программное обеспечение «Эльфоран», две кассеты с капилляром; набор для тестирования системы, пробирки типа «Эппендорф», многоразовая насадка для фильтрования, фильтры);

По желанию заказчика:

• наборы для определения (в комплект набора для определения входят: текст методики, стандартные образцы, реактивы для фоновых электролитов и вспомогательных растворов, специализированная посуда и т.п.);
• дополнительные кассеты с капилляром;
• специальные кассеты с капилляром;
• микродозаторы на 10–100, 100–1000 мкл, 1–5 мл и наконечники к ним;
• лабораторная центрифуга для пробирок типа «Эппендорф»;
• персональный компьютер.

источник

Целью исследования явились изучение возможности определения и валидационная оценка результатов анализа артикаина [4] в моче капиллярным электрофорезом на приборе «Капель-105».

Важными вопросами при количественном определении лекарственных веществ в биологических жидкостях и субстратах (в том числе и моче) методом капиллярного электрофореза являются вопросы пробоподготовки (изолирование из объектов и концентрирование исследуемых соединений). В биообъектах возможно присутствие различных эндогенных компонентов, на фоне которых затрудняется детектирование искомых соединений в микрограммовых количествах. Кроме того, фотометрическое детектирование разделённых компонентов происходит непосредственно в капилляре, вследствие этого чувствительность детекции ограничена малой длиной оптического пути, равного внутреннему диаметру капилляра.

При разработке методики количественного определения артикаина в моче с использованием капиллярного электрофореза («Капель-105») эти осложняющие проблемы решали тем, что на этапе пробоподготовки для получения в достаточной степени очищенной и сконцентрированной пробы использовали жидкостно-жидкостную экстракцию хлороформом с последующим реэкстрагированием исследуемых компонентов в рабочий электролит, разбавленный водой в 10 раз. При этом перевод исследуемых компонентов в рабочий электролит, разбавленный водой в 10 раз, позволяет в процессе электрофореза в кварцевом капилляре дополнительно осуществить концентрирование пробы за счёт явления «стекинга». Данное явление происходит, когда ионы аналитов пересекают границу, которая отделяет зону низкой проводимости раствора образца и высокой — ведущего электролита. В случае, если матрица образца имеет значительно более низкую проводимость (обычно за счёт разбавления буфером или водой), чем ведущий электролит, в зоне образца возникает относительно высокое электрическое поле. Аналиты внутри зоны образца движутся с более высокой локальной скоростью, и, замедляясь на границе с зоной ведущего электролита, концентрируются.

При разработке методики количественного определения артикаина были использованы ранее изученные условия электрофореза с целью его идентификации на приборе «Капель-105» [6].

На основании проведённых исследований оптимальными условиями электрофореза являются:

а) по полной схеме (между первым и четвёртым анализами): 0,5М раствором хлористоводородной кислоты — 10 мин, водой очищенной — 10 мин, 0,5М раствором натрия гидроксида — 10 мин, водой очищенной — 10 мин, РЭ — 10 мин. Проведение холостого электрофореза — 15 мин: положительный электрод со стороны введения РЭ, напряжение: 20 кВ.;

б) по короткой схеме (между вторым и третьим анализами): РЭ — 10 мин. Проведение холостого электрофореза в тех же условиях, как и по полной схеме.

Запись и обработка данных анализа проводилась с помощью программного обеспечения «МультиХром для Windows».

При идентификации артикаина на ЭФГ нами рассчитаны наблюдаемое время миграции (tм), исправленное время миграции (tи) с использованием в качестве маркера ЭОП бензилового спирта, что позволило устранить колебания времени миграции. Значение tи и\спользовали для построения ЭФС, с помощью которого рассчитывали количественные характеристики: константу ионизации (рКа) и внутренние коэффициенты подвижности Рi, дающие более полное представление об ионном состоянии вещества и увеличивающие надёжность идентификации методом капиллярного электрофореза [6].

При количественном определении для подтверждения фактора линейности строили график зависимости фотометрических сигналов (площади пиков) от концентрации артикаина

на 5 уровнях концентраций его стандартных растворов [1, 5]. Готовили серию разведений стандартного раствора артикаина в буферном растворе Бриттона — Робинсона рН 2,3, разбавленном в 10 раз водой. Электрофоретические исследования полученных рабочих стандартных растворов проводили с использование прибора «Капель-105» в избранных условиях. Запись и обработку полученных электрофореграмм производили с помощью программного обеспечения «МультиХром для Windows». Электрофореграмма артикаина с концентрацией 15 мкг/мл представлена на рисунке 1.

Рисунок 1. Электрофореграмма артикаина (15 мкг/мл). «Капель-105»

РЭ — буферный раствор Бриттона-Робинсона, рН 2,3.

Ввод пробы: давлением (30 мбар * 15 сек).

Рабочее напряжение: 20 кВ. Детектирование: 270 нм.

Линейная зависимость фотометрического сигнала от концентрации артикаина, наблюдаемая в интервале концентраций от 1 до 20 мкг/мл, была аппроксимирована линейным уравнением с помощью метода наименьших квадратов на ПК. Полученное уравнение имеет вид:

Критерием приемлемости линейности является и коэффициент корреляции, который составил 0,9999. Его величина близка к 1 и совокупность данных можно описать прямой линией, что и видно из рисунка 2.

Рисунок 2. Калибровочный график для количественного определения артикаина методом капиллярного электрофореза («Капель-105»)

Таким образом, методика валидна по критерию линейности, и в данных интервалах концентраций обеспечивает определение с требуемой правильностью.

Для результатов анализа при исследовании биологических жидкостей важнейшее значение имеет способ пробоподготовки анализируемого вещества.

При изучении влияния рН среды, природы органического растворителя, кратности экстрагирования на степень экстракции артикаина из водных растворов было установлено, что максимальное количество артикаина экстрагируется хлороформом при рН 9 при однократной экстракции объёмом 5 мл и соотношении водной и органической фаз 1 : 1.

Для устранения фонового влияния сопутствующих балластных веществ мочи использовали приём реэкстракции исследуемых компонентов из хлороформного извлечения в рабочий электролит, разбавленный водой в 10 раз.

При количественном определении артикаина в условиях модельного эксперимента к 1 мл мочи с известным содержанием исследуемого вещества добавляли 4 мл буферного раствора Бриттона — Робинсона рН 9 и проводили экстракцию 5 мл хлороформа (шейкер, 10 мин). Эмульсии разрушали центрифугированием (6000 об/мин, 10 мин). Хлороформный экстракт отделяли, добавляли к нему 1,0 мл РП (буферного раствора Бриттона — Робинсона, рН 2,3, разбавленного в 10 раз водой) и проводили реэкстракцию (шейкер, 10 мин). Реэкстракт отделяли, центрифугировали в пробирках для образца типа «эппендорф» в мини-центрифуге («MiniSpin plus», 10000 об/мин, 5 мин) и использовали для количественного определения артикаина по разработанной электрофоретической методике. Результаты определения артикаина в моче представлены в таблице 1.

Таблица 1 Количественное определение артикаина в моче методом капелльного электрофореза (Капель-105)

Концентрация артикаина в модельной смеси, мкг/мл

источник

ПНД Ф 14.1:2.226-2006. Количественный химический анализ вод. Методика измерений массовых концентраций ацетат-ионов в природных и сточных водах методом капиллярного электрофореза

PDF файл	Методики (краткое название)	Аттестация	№ в Федеральном информационном фонде и Реестре ГСИ РК	Прибор
	Определение 4-карбоксибензальдегида и п-толуиловой кислоты в очищенной терефталевой кислоте

1 Приписанные характеристики показателей точности измерений

3 Средства измерений. Вспомогательные устройства. Реактивы и материалы

3.2 Вспомогательное оборудование

4 Условия безопасности проведения работ

5 Требования к квалификации оператора

6 Условия выполнения измерений

8 Подготовка к выполнению изменений

8.3 Приготовление растворов

8.4 Установление градуировочной характеристики

9.1 Подготовка пробы к анализу

10 Обработка результатов измерений

11 Оформление результатов измерений

12 Оценка приемлемости результатов измерений

13 Контроль точности результатов измерений

Приложение 1. Блок-схема проведения анализа

Приложение 2. Пример электрофореграммы сточной воды

Разработан: Аналитический центр ЗАО РОСА

Утвержден: ФБУ Федеральный центр анализа и оценки техногенного воздействия 02.02.2012

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА ПО НАДЗОРУ
В СФЕРЕ ПРИРОДОПОЛЬЗОВАНИЯ

Директор ФБУ «Федеральный центр
анализа и оценки техногенного
воздействия»

____________ Ю.С. Чевычелов

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВОД

МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ МАССОВЫХ
КОНЦЕНТРАЦИЙ АЦЕТАТ-ИОНОВ В ПРИРОДНЫХ
И СТОЧНЫХ ВОДАХ МЕТОДОМ
КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Методика допущена для целей государственного
экологического контроля

МОСКВА 2006 г.
(издание 2012 г.)

Методика рассмотрена и одобрена федеральным бюджетным учреждением «Федеральный центр анализа и оценки техногенного воздействия (ФБУ «ФЦАО»).

Главный инженер ФБУ «ФЦАО», к.х.н.

Аналитический центр ЗАО «РОСА»

Настоящий нормативный документ устанавливает методику измерений массовой концентрации ацетат-ионов в пробах природных и сточных вод методом капиллярного электрофореза.

Диапазон измеряемых концентраций от 5 до 1000 мг/дм3. При содержании ацетат-ионов более 50 мг/дм3 требуется предварительное разбавление пробы.

Блок-схема проведения анализа приведена в Приложении 1.

Настоящая методика обеспечивает получение результатов анализа с погрешностями, не превышающими значений, приведенных в табл. 1.

Диапазон измерений, значения показателей точности,
воспроизводимости, правильности и повторяемости методики

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), σr %

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), σR, %

Показатель правильности (границы относительной систематической погрешности при Р = 0,95), ±δС, %

Показатель точности (границы относительной погрешности при Р = 0,95) ±δ, %

Метод основан на разделении анионов в процессе миграции по кварцевому капилляру под действием электрического поля вследствие их различной электрофоретической подвижности. Идентификацию и количественное определение анализируемого аниона проводят косвенным методом, регистрируя ультрафиолетовое поглощение на длине волны 254 нм, используя в качестве фонового хроматный электролит.

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы:

3.1.1. Система капиллярного электрофореза с отрицательной полярностью, фотометрическим детектором и кварцевым капилляром длиной 60 см и внутренним диаметром 75 мкм, например, «КАПЕЛЬ 104»;

3.1.2. Весы лабораторные по ГОСТ Р 53228 высокого класса точности;

3.1.3. Колбы мерные с притертыми пробками вместимостью 50; 100; 200 см3 по ГОСТ 1770, класс точности 2;

3.1.4. Пипетки градуированные вместимостью 1; 2; 5 см3 по ГОСТ 29227, класс точности 2;

3.1.5. Пипетки с одной меткой вместимостью 1; 5; 10 см3 по ГОСТ 29169, класс точности 2;

3.1.6. Дозаторы пипеточные с переменным объемом 0,2 — 1 см3, 1 — 5 см3 и пределом допускаемой погрешности измерения не более ±5 %;

3.1.7. рН-метр лабораторный любой модели.

3.2. Вспомогательное оборудование

3.2.1. Бидистиллятор по ТУ 25-11.1592 или установка для получения воды для лабораторного анализа 2 степени чистоты по ГОСТ Р 52501;

3.2.2. Персональный компьютер, позволяющий работать с программным обеспечением для сбора и обработки данных;

3.2.3. Блок бесперебойного питания типа, например, АРС-500;

3.2.4. Ультразвуковая баня любого типа;

3.2.5. Баня водяная любого типа;

3.2.6. Холодильник бытовой, обеспечивающий температуру (2 — 10) °С;

3.2.7. Пробирки полимерные одноразовые вместимостью 1,5 см3 по ТУ 64-2-300;

3.2.8. Пробирки полиэтиленовые с крышкой вместимостью 15; 50 см3;

3.2.9. Шприцы одноразовые медицинские (объем 5 и 10 см3);

3.2.10. Наконечники к дозаторам;

3.2.11. Емкости из полимерного материала для хранения реактивов.

Допускается использование других средств измерения, вспомогательного оборудования, лабораторной посуды с аналогичными или лучшими метрологическими и техническими характеристиками

3.3.1. Картриджи для предварительной очистки пробы от карбонатов OnGuard-H, например, фирмы DIONEX;

3.3.2. Картриджи для предварительной очистки пробы от сульфатов OnGuard-Ba, например, фирмы DIONEX;

3.3.3. Картриджи для предварительной очистки пробы от хлоридов OnGuard-Ag, например, фирмы DIONEX;

3.3.5. Насадки фильтрующие к шприцам с диаметром пор 0,45 мкм, например, фирмы Millipore или аналогичные;

3.3.6. Стаканы химические вместимостью 50; 100 см3 по ГОСТ 25336;

3.4.1. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или вода для лабораторного анализа 2 класса чистоты по ГОСТ Р 52501 (далее — вода дистиллированная);

3.4.2. Хрома (VI) оксид, ч.д.а. по ГОСТ 3776 или импортный, например, производства фирмы «Флука» (Швейцария), квалификации p.a. (pure for analysis);

3.4.3. Цетилтриметиламмонийбромид (ЦТАБ), например, производства фирмы «Флука» (Швейцария), квалификации р.а.;

3.4.4. Диэтаноламин, хч по ТУ 6-09-40-207 или импортный, например, производства фирмы «Флука» (Швейцария) квалификации р.а.;

3.4.5. Натрий уксуснокислый 3-водный (ацетат натрия), ч.д.а. по ГОСТ 199 (вещество гарантированной чистоты);

3.4.6. Натрий гидроокись, х.ч. по ГОСТ 4328;

3.4.7. Соляная кислота, х.ч. по ГОСТ 3118.

Допускается использование других реактивов при условии, что их квалификация не хуже чем у вышеуказанных.

4.1. При выполнении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

4.2. При работе с оборудованием необходимо соблюдать правила электробезопасности по ГОСТ Р 12.1.019.

4.3. Обучение работающих безопасности труда должно быть организовано в соответствии с ГОСТ 12.0.004.

4.4. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие высшее или среднее специальное образование, или опыт работы в химической лаборатории, прошедшие соответствующий инструктаж и освоившие метод капиллярного электрофореза в процессе обучения.

При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

относительная влажность воздуха

7.1. Отбор проб воды осуществляют в соответствии с ГОСТ Р 51592 «Вода. Общие требования к отбору проб» и ГОСТ Р 51953 «Вода питьевая. Отбор проб» Пробы сточной воды отбирают в полиэтиленовые флаконы с крышками. Объем отбираемой пробы составляет не менее 0,1 дм3.

7.2. Отобранную пробу анализируют в течение суток. Если такой возможности нет, то пробу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Пробу можно хранить после фильтрования не более 7 суток при температуре (2 — 10) °С.

7.3. При отборе проб составляют сопроводительный документ по утвержденной форме, в котором указывается:

— место, дата и время и отбора;

— должность, фамилия отбирающего пробу.

Подготовку к работе системы капиллярного электрофореза и настройку программы сбора и обработки электрофореграмм проводят в соответствии с руководствами по эксплуатации.

8.2.1. Подготовка нового капилляра к работе

Новый капилляр, а также капилляр, загрязненный во время работы, промывают для восстановления кондиционного состояния внутренней поверхности в соответствии с руководством по эксплуатации прибора.

При работе на приборе «Капель 104» рекомендуется следующая процедура промывки капилляра. В держатель пробирок на входе капилляра устанавливают одноразовые пробирки, в которые помещают по 0,5 см3 промывных растворов: в гнездо № 6 помещают раствор соляной кислоты (по п. 8.3.2), в гнездо № 7 — дистиллированную воду, в гнездо № 8 — раствор гидроксида натрия (по п. 8.3.1), в гнездо № 9 — рабочий буферный раствор (по п. 8.3.6). На выходе капилляра в гнездо № 9 помещают пустую пробирку для слива промывных растворов.

Капилляр промывают в следующей последовательности:

— раствором соляной кислоты в течение 30 мин.;

— дистиллированной водой в течение 30 мин.;

— раствором гидроксида натрия в течение 30 мин.;

— дистиллированной водой в течение 30 мин.;

— рабочим буферным раствором в течение 30 мин.

Примечание: Необходимо следить за уровнем жидкости в сливной пробирке. Категорически недопустимо перетекание жидкости из пробирки в прибор.

Перед началом измерений капилляр промывают следующим образом:

— раствором соляной кислоты (по п. 8.3.2),

— раствором гидроксида натрия (по п. 8.3.1),

— рабочим буферным раствором (по п. 8.3.6).

Время промывки каждым раствором 10 минут.

Готовность капилляра к работе проверяют, записав электрофоре-грамму рабочего буферного раствора (без ввода пробы) в условиях проведения анализа — контроль базовой линии. Если сигнал базовой линии сохраняет относительное постоянство после начального участка (около 40 — 50 секунд), капилляр можно считать готовым к работе.

Между измерениями для удаления остатков введенной пробы и восстановления кондиционного состояния поверхности капилляр промывают в течение 3 минут рабочим буферным раствором.

По окончании работы капилляр промывают дистиллированной водой в течение 10 минут и оставляют входной и выходной концы капилляра опущенными в пробирки с дистиллированной водой.

1. Во избежание ухудшения воспроизводимости времени выхода анализируемого компонента при загрязнении капилляра допускается увеличение продолжительности промывки одним из промывочных растворов.

2. Перед длительным перерывом в работе системы капиллярного электрофореза (более 1 недели) необходимо после промывки капилляра водой продуть его воздухом. Для этого на вход капилляра помещают пустую пробирку, переводят ее в верхнее положение, и проводят промывку капилляра по стандартной процедуре. После того как выйдет последняя капля жидкости, на выход капилляра также устанавливают пустую пробирку, переводят ее в верхнее положение и выключают прибор.

8.3. Приготовление растворов

Все растворы готовят на дистиллированной воде.

В мерную колбу вместимостью 100 см3, наполовину заполненную дистиллированной водой, помещают 2,0 г гидроксида натрия. По окончании растворения и охлаждения до комнатной температуры объем раствора доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Срок хранения раствора при комнатной температуре в сосуде из полимерного материала с плотно завинчивающейся крышкой — 6 месяцев.

В мерную колбу вместимостью 100 см3, наполовину заполненную дистиллированной водой, приливают 4 см3 соляной кислоты, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Срок хранения в сосуде из полимерного материала при комнатной температуре 1 год.

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают навеску 0,500 г оксида хрома (VI), растворяют в 50 — 70 см3 дистиллированной воды, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают. Раствор переносят в сосуд из полимерного материала. Срок хранения раствора при комнатной температуре не ограничен.

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают навеску 0,525 г диэтаноламина, растворяют в дистиллированной воде, доводят объем раствора до метки дистиллированной водой и перемешивают. Срок хранения раствора в полимерном сосуде, плотно закрытом крышкой с прокладкой, 1 месяц при температуре (2 — 10) °С.

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают навеску 0,300 г ЦТАБ и 20 см3 дистиллированной воды. Раствор выдерживают в ультразвуковой бане или на водяной бане при температуре 40 °С до полного растворения, затем добавляют 50 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Срок хранения раствора при комнатной температуре в колбе с притертой пробкой — 3 месяца.

При температуре ниже 19 °С ЦТАБ может выпадать в осадок. В этом случае перед использованием раствор рекомендуется слегка прогреть на водяной бане при температуре 40 °С.

В сухой стакан вместимостью 50 см3 помещают 1 см3 раствора оксида хрома (VI) (по п. 8.3.3), добавляют 4 см3 раствора диэтаноламина (по п. 8.3.4) и 3 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, затем добавляют 2 см3 раствора ЦТАБ (по п. 8.3.5). Общий объем рабочего буферного раствора 10 см3. Приготовленный раствор содержит 5 10-3 моль/дм3 оксида хрома (VI), 20 10-3 моль/дм3 диэтаноламина и 1,65 10-3 моль/дм3 ЦТАБ. Сразу после перемешивания раствор фильтруют через мембранный фильтр (диаметр пор 0,45 мкм) в сухой полиэтиленовый сосуд с завинчивающейся крышкой. Раствор используют в течение 1 недели при хранении при комнатной температуре.

Примечание. При необходимости объем приготавливаемого буферного раствора можно увеличить Запрещается изменять порядок добавления реактивов.

В мерной колбе вместимостью 100 см3 в 50 — 70 см3 дистиллированной воды растворяют 0,2306 г ацетата натрия, доводят объем раствора до метки и перемешивают. Полученный основной раствор с концентрацией ацетат-иона 1000 мг/дм3 стабилен при хранении в холодильнике при температуре (2 — 10) °С в течение 2 месяцев. Перед использованием его выдерживают при комнатной температуре не менее 20 мин.

Шкалу рабочих градуировочных растворов с концентрацией ацетат-ионов 5, 10, 25 и 50 мг/дм3 готовят последовательным разбавлением основного градуировочного раствора дистиллированной водой в соответствии с табл. 2. Растворы готовят непосредственно перед установлением градуировочной характеристики.

Приготовление шкалы градуировочных растворов

Концентрация ацетат-ионов в растворе, мг/дм3

Объем основного градуировочного раствора, см3

Вместимость колбы, используемой для разбавления, см3

Срок хранения градуировочных растворов ацетат-иона, используемых для проверки стабильности градуировочной характеристики, с концентрацией 5 и 10 мг/дм3 — 1 неделя, с концентрацией 25 и 50 мг/дм3 — 2 недели при температуре (2 — 10) °С. Перед использованием растворы выдерживают при комнатной температуре не менее 20 мин.

Примечание: Допускается проведение градуировки с применением растворов, в которых концентрации ацетат-иона отличаются от указанных в табл. 2, но находятся внутри установленного диапазона Процедура приготовления градуировочных растворов аналогична описанной в п. 8.3.7.

8.4. Установление градуировочной характеристики

Перед построением градуировочной зависимости рекомендуется проанализировать холостой раствор. Для приготовления холостого раствора рабочий буферный раствор по п. 8.3.6 разбавляют дистиллированной водой в соотношении 1:1. На электрофореграмме холостого раствора должен отсутствовать пик определяемого аниона. Если примеси обнаружены, то, прежде всего, необходимо проверить чистоту используемой посуды.

Для этого пробирку ополаскивают разбавленным буферным раствором, затем заполненную пробирку вновь помещают в прибор и повторно проводят анализ. Если на полученной электрофореграмме не наблюдается уменьшение интенсивности пика ацетата, то следует заново приготовить буферный раствор. Если и после этого наблюдается пик ацетата, то необходимо заменить используемые реактивы.

С помощью программного обеспечения необходимо создать метод с заложенным в него шаблоном градуировки для проведения качественного и количественного анализа в соответствии с руководством по эксплуатации.

Примечание: Подробное описание программы «МультиХром для Windows» изложено в «Руководстве пользователя», рекомендации по проведению градуировки даны в методических указаниях, прилагаемых к руководству по эксплуатации системы капиллярного электрофореза «Капель-104».

При работе на приборе «Капель 104» рекомендуется следующий порядок работ: Пробирки, заполненные рабочим буферным раствором (по 0,5 см3), устанавливают в гнездо № 10 на входе и выходе капилляра. Пробирки с градуировочными растворами помещают в автоматический пробоотборник на входе капилляра. Запускают работу прибора при помощи подготовленного метода (по п. 8.4.2) и записывают электрофореграмму градуировочного раствора.

Рекомендуются следующие условия проведения анализа:

Температура термостабилизации капилляра — (22 ± 0,2) °С;

Параметры ввода пробы — давление 30 мбар, время 15 с;

Параметры анализа — напряжение 20 кВ, время 6 мин.

Процедуру градуировки повторяют для каждого из 4 градуировочных растворов с проведением двух параллельных измерений.

1 Уровни жидкости в пробирках с буферным раствором на входном и выходном концах капилляра должны быть одинаковы, поэтому необходимо через 4 — 5 вводов пробирки на входе и выходе капилляра заново заполнять буферным раствором.

2 Параметры ввода и анализа могут быть изменены в зависимости от кондиционного состояния поверхности капилляра, но должны быть одинаковыми для градуировочных растворов и анализируемых проб.

На электрофореграмме пик ацетат-иона выходит после пика гидрокарбонат-иона, всегда присутствующего в градуировочных растворах. По полученным данным строят градуировочную зависимость средних арифметических значений площадей пика от концентрации ацетат-иона (мг/дм3). Градуировочный график должен быть линейным в диапазоне определяемых концентраций.

Градуировочная характеристика аппроксимируется линейным уравнением:

где X — концентрация ацетата, мг/дм3;

В — коэффициент уравнения, вычисляемый компьютером в режиме линейной градуировки методом наименьших квадратов.

Градуировка проводится не реже 1 раза в месяц, а также при замене хотя бы одного из компонентов буферного раствора, при изменении условий проведения анализа, при отрицательных результатах контроля стабильности результатов анализов, при замене капилляра или после ремонта прибора.

Проверку стабильности градуировочной характеристики с использованием одного из градуировочных растворов проводят ежедневно непосредственно перед выполнением серии анализов по двум характеристикам: время выхода ацетат-иона и массовая концентрация ацетат-иона в градировочном растворе.

Отклонение от установленного времени выхода ацетат-иона не должно превышать 10 %. В противном случае необходимо повторить промывку капилляра по п. 8.2.2 и вновь провести анализ градуировочного раствора. Если превышение времени выхода сохраняется, проводят программную корректировку метода или заново устанавливают градуировочную характеристику.

Полученное значение концентрации ацетат-ионов в градуировочном растворе не должно отличатся от аттестованного значения более, чем на 15 %. Если указанное условие не выполняется, то необходимо заменить пробирки с хроматным буферным электролитом и выполнить повторный анализ градуировочного раствора. Если допустимое отклонение концентрации снова превышено, то выясняют и устраняют причины выявленных расхождений и повторяют контроль с использованием того же и других градуировочных растворов. При повторном получении неудовлетворительных результатов контроля градуировочную характеристику устанавливают заново.

Картриджи предварительной очистки пробы перед использованием активируют, пропуская через них 10 см3 дистиллированной воды со скоростью не более 1 капли в 3 — 5 секунд. Каждый картридж активируется отдельно.

Анализируемую пробу набирают в одноразовый шприц (объем 5 см3) и фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые 3 см3 фильтрата. Остальной фильтрат собирают в одноразовые пробирки типа Эппендорфа и дегазируют в ультразвуковой бане (в течение 2 минут).

При анализе реальных проб на электрофореграмме присутствуют пики хлорид-, нитрит-, сульфат-, нитрат-, фторид- и фосфат-ионов, а также могут наблюдаться дополнительные пики.

При анализе проб с высоким содержанием хлорид-, сульфат- и карбонат-ионов из-за перегрузки капилляра может наблюдаться плохая идентификация пика ацетат-иона при его концентрациях менее 25 мг/дм3. В этом случае используют картриджи предварительной подготовки пробы для удаления хлоридов, сульфатов и карбонатов. Для этого сначала анализируемую пробу (объем 10 см3) фильтруют через мембранный фильтр, отбрасывая первые 2 — 3 см3 фильтрата. Оставшуюся профильтрованную часть пробы пропускают через цепочку последовательно соединенных картриджей предварительной очистки (подготовленных по п. 8.5) — один картридж очистки пробы от сульфатов, один картридж очистки пробы от хлоридов, один картридж очистки пробы от карбонатов. Щприц с картриджами располагают вертикально, скорость фильтрации не более 1 капли в 3 — 5 сек. Начальную порцию фильтрата (2 — 3 см3) отбрасывают. Заполняют оставшимся фильтратом одноразовые пробирки для анализа и с помощью полиэтиленового капилляра интенсивно пробулькивают через него гелий в течение 1 — 2 минут для удаления карбонатов.

Дегазирование проб также может быть выполнено одним из возможных способов:

— центрифугированием. В этом случае пробирки с приготовленными пробами плотно закрывают и помещают в центрифугу. Рекомендуемые параметры центрифугирования — скорость вращения 6000 об/мин, время 2 мин;

— вакуумированием при помощи водоструйного насоса.

Анализ подготовленных проб (п. 9.1.) проводят аналогично анализу градуировочных растворов по п. 8.4.3. Каждую пробу анализируют не менее двух раз. Ацетат-ион идентифицируют по времени удерживания в соответствии с градуировкой по п. 8.4.4.

В случае превышения концентрации ацетат-иона верхнего предела измерения по установленной градуировочной зависимости (50 мг/дм3) необходимо разбавить анализируемую пробу дистиллированной водой. При вычислении результатов измерения степень разбавления учитывается автоматически при введении коэффициента разбавления в паспорт пробы.

В случае плохой идентификации пика ацетат-иона, или если пик ацетата отсутствует на электрофореграмме, необходимо провести подготовку пробы с помощью картриджей предварительной очистки для удаления хлорид-, сульфат- и карбонат-ионов (по п. 9.1) и затем повторить анализ.

Пример типичной электрофореграммы ацетат-иона в пробе сточной воды представлен в Приложении 2.

Примечание: При анализе проб, в которых затруднена идентификация пика ацетат-иона, рекомендуется проводить контроль с использованием метода добавок. Увеличение высоты пика подтверждает правильность идентификации.

Массовая концентрация ацетат-иона в пробах сточных вод рассчитывается с помощью компьютерной программы в соответствии с градуировочной характеристикой. Программа формирует отчет с указанием концентрации анализируемого аниона, выраженной в мг/дм3.

За результат измерения массовой концентрации ацетат-иона в анализируемой пробе (X) принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не должно превышать значений предела повторяемости г (см. табл. 3).

Результаты измерений представляют в виде:

где X — значение концентрации ацетат-иона в анализируемой пробе,

Δ — значение показателя точности (мг/дм3) рассчитывают по формуле

где δ — показатель точности, % (см. табл. 1);

Результаты измерений заносят в протокол анализа с точностью:

источник

Капиллярный э/ф использовали давно. Проблема – нет синхронизации, а одного капилляра для детекции не хватало.

Но прогресс на месте не стоит. «Капель». На западе тоже производится. Экологи любят – для детекции загрязнения тризолом, фенолом.

q кварцевые с внешним полиимидным защитным покрытием капилляры (внутр. диаметр 50-75 мкм, внешний 365 мкм, общая длина 30-100 см);

q положительные и отрицательные напряжения до 30 кВ;

q для ввода пробы применяют избыточное давление (гидродинамический способ) или высокое напряжение (электрокинетический). Объем пробы составляет несколько нанолитров;

q для регистрации электрофореграмм используют УФ-детектирование непосредственно в капилляре, в прямом и косвенном вариантах

Двойной электрический слой. Стекло капилляра, при определенных рН протонируется и приобретает заряд «-», соответственно 1-й слой катионов, который прилежит к этой поверхности, практически не может двигаться под действие ЭП, т.к. электростатическое взаимодействие со стеклом сильнее.

Двойным слоем моно управлять, используя рН.

А поле здесь очень высокое – вплоть до кВ на см. Позволяет процесс проводить очень быстро. В геле такое делать нельзя! Возникает аномальная зависимость подвижности от размера. А в свободной среде – можно.

В середине капилляра – детектор, чтобы можно было использовать оба направления.

Нанесение образцов – гидростатически или электрокинетически, или комбинированно.

Гидростатичски – небольшой объем поместить засчет всасывания-засасывания жидкости. Есть возможность управлять макроскопическим потоком, и определенный столбик образца мы получим.

Электрокинетически – конец капилляра помещаем в пробирку. Туда же помещается второй электрод, катод, если нас анионы интересуют, под дейтвием ЭП в-ва попадают в капилляр, ведем недолго, чтобы зона была узкая, а потом собственно начинам э/ф.

Насколько прибор универсален?

Позволяет анализировать даже неионогенные в-ва, которые строго говоря в электрическом поле двигаться не должны.

При C однозарядного электролита 1 – 0.1 mМ толщина двойного электрического слоя составляет в среднем 30 – 50 мкм. При диаметре канала 50 – 100 мкм практически вся жидкость, заполняющая капилляр, представляет собой диффузную часть двойного электрического слоя.

Электроосмотический поток направлен к катоду.

Используют Мицеллярную электрокинетическую хроматографию (МЭКХ):

использование встречного потока мицелл детергента (ДСН) для разделения нейтральных молекул форм веществ (аналог ВЭЖХ) .

изображает из себя хроматограф – гетрофазная система.

Раствор с достаточно высоким содержание детергента, образуются мицеллы (1 уровня). Если еще больше – образуются мицеллы 2 порядка. И эти макроскопические шарики – наша вторая фаза, причем гидрофобная. Мицеллы несут большой отрицательный заряд. В ЭП будут двигаться с контролируемой скоростью и синхронно, т.к. размер задается концентрацией. А потом поместим толуол и будем радостно за ним наблюдать (надо только как-то детектировать, но это задача решаемая).

Э/ф в псевдогеле. НК

«ГЕННЫЙ АНАЛИЗАТОР» ABI 310
(Applera = Applied Biosystems+Сelera Genomics)

Принцип тот же, трение о матрикс. Только гель не совсем честный, иначе мы его ни за что из капилляра не вытряхнем, а одноразовые капилляры – дорого.

Используется псевдогель, модифицированный линейный ПАА. Есть боковые группы, которые создают виртуальный гель засчет нековалентных взаимодействий. Начинает приближаться к агарозе. Этакий жидкий кристалл. Но никто не проверял. Хотя хорошо отфильтрованный линейный ПАА, в узком диапазоне длин, тоже работает.

Позволяет разделять продукты реакции Сенгера. Или просто разделять фрагменты – ГенСкан.

При разделении некоторые фрагменты имеют разную массу, но одинаковую подвижность – просто у флюорохромов разные заряды. Даже сдвигают подвижность до 1 звена.

Современные приборы – до 16 капилляры.

Организация стока поверхностных вод: Наибольшее количество влаги на земном шаре испаряется с поверхности морей и океанов (88‰).

Папиллярные узоры пальцев рук — маркер спортивных способностей: дерматоглифические признаки формируются на 3-5 месяце беременности, не изменяются в течение жизни.

Поперечные профили набережных и береговой полосы: На городских территориях берегоукрепление проектируют с учетом технических и экономических требований, но особое значение придают эстетическим.

источник

М 01-30-2009
ПНД Ф 14.1:2:4.157-99

М 01-49-2011
ПНД Ф 14.1:2:4.266-2012