Метод капиллярного электрофореза гост

С перечнем вступающих в силу ГОСТ и областью их применения можно ознакомиться в таблице:

С ГОСТ, вступившими в силу в январе 2019 года можно ознакомиться по ссылке.

С ГОСТ, вступившими в силу в июле 2019 года можно ознакомиться по ссылке.

источник

ГОСТ Р 58254-2018 Мед натуральный. Определение водорастворимых витаминов методом капиллярного электрофореза

Текст ГОСТ Р 58254-2018 Мед натуральный. Определение водорастворимых витаминов методом капиллярного электрофореза

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением «Федеральный научный центр пчеловодства» (ФГБНУ «ФНЦ пчеловодства»)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 432 «Пчеловодство»

3 УТ8ЕРЖДЕН И 8ВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23 октября 2018 г. № 831-ст

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. Nt 162-ФЗ «О стандартизации в Российской Федерации». Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе «Национальные стандарты», а официальный текст изменений и поправок—в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра /замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

© Стаидартинформ, оформление. 2018

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

3 Термины и определения. 2

5 Требования к условиям измерений. 2

6 Требования к квалификации оператора. 2

7 Требования к показателям точности метода. 2

8 Требования безопасности проведения работ. 4

9 Отбор и подготовка проб. 4

10 Определение содержания витаминов. 4

10.1 Средства измерений, оборудование, материалы и реактивы. 4

10.2 Подготовка к проведению измерений. 5

10.3 Контроль стабильности градуировочной характеристики. 11

10.4 Проведение измерений. 11

10.5 Обработка результатов измерений. 12

10.6 Проверка приемлемости результатов измерений. 12

10.7 Оформление результатов измерений. 12

10.8 Оценка приемлемости результатов, получаемых в условиях вспроизводимости. 12

11 Контроль точности результатов измерений при реализации метода. 13

11.1 Контроль с использованием образцов для контроля. 13

11.2 Контроль стабильности. 13

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

Определение водорастворимых витаминов методом капиллярного электрофореза

Natural honey. Determination of water-soluble vitamins by capillary electrophoresis method

Настоящий стандарт распространяется на натуральный мед и устанавливает метод капиллярного электрофореза для определения содержания водорастворимых витаминов: 8, (тиаминхлорида). В₂ (рибофлавина), В₂ (лантотеновой кислоты), В₅ (никотиновой кислоты и никотинамида), В₆ (пиридоксина), В_с (фолиевой кислоты), С (аскорбиновой кислоты) с целью идентификации их естественного содержания.

Настоящий стандарт не применяется для идентификации различных видов меда или его фальсификатов.

в настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.0.004 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 1770 (ИСО 1042—83. ИСО 4788—80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4199 Реактивы. Натрий тетраборнокислый 10-водный. Технические условия

ГОСТ 4328 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 5644 Сульфит натрия безводный. Технические условия ГОСТ 9656 Реактивы. Кислота борная. Технические условия

ГОСТ 14919 Электроплиты, электроплитки и жарочные элекгрошкафы бытовые. Общие техни

ческие условия ГОСТ 16317 ГОСТ 19792 ГОСТ 22180 ГОСТ 25336

Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

Мед натуральный. Технические условия

Реактивы. Кислота щавелевая. Технические условия

Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и

ГОСТ 25629 Пчеловодство. Термины и определения

ГОСТ 29227 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р ИСО 5725*6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов из* мерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 58144 вода дистиллированная. Технические условия

При мече н ие — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных 8 данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ 25629.

Метод капиллярного электрофореза основан на разделении сложных смесей компонентов в кварцевом капилляре при приложении к нему электрического напряжения. Возникающее в капилляре электрическое поле вызывает миграцию зоны пробы и ее разделение. Разделение пробы происходит вследствие различия скоростей перемещения зараженных частиц в растворе под влиянием электрического поля.

В зависимости от состава анализируемой пробы натурального меда используют два варианта метода капиллярного электрофореза:

— метод капиллярного зонного электрофореза (далее — КЗЭ) не применяют для определения В? (рибофлавина) и В₅ в форме никотинамида;

— метод мицеллярной электрокинетической хроматографии (далее — МЭКХ) не применяют для определения В, (тиаминхлорида).

При выполнении измерений следует соблюдать следующие условия:

— температура окружающего воздуха. (25 ± 5) в С:

• относительная влажность воздуха. (55 ± 25) %;

-атмосферное давление. 97.1—101.1 кПа(730—760мм рт.ст.>.

Выполнение измерений должен проводить инженер-химик, техник или лаборант, квалификацией не ниже 4-го разряда, подготовленный по ГОСТ 12.0.004. имеющий высшее или специальное образование. опыт работы в химической лаборатории, изучивший техническую документацию на капиллярный электрофорез.

Диапазоны измерений содержания витаминов и значения показателей повторяемости, воспроизводимости и точности при вероятности Р — 0.95 приведены в таблице 1.

Наименование определяемого компонента и диапазон измерений. гмг

отклонено повторяемости) о_г%

расхождения между двумя результатами определений, полученными в услоодях воспроизводимости) Р.%.Р = 0.95

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

Баня водяная с регулятором нагрева.

Пробирки центрифужные полипропиленовые.

Дозаторы переменного объема 10—100 мм э . 100—1000 мм 3 . 1000—5000 мм 3 и с пределом допускаемой погрешности измерения не более ±5 %.

Наконечники полипропиленовые для дозаторов, вместимостью 0.3 см 3 ,1.0 см 3 и 5.0 см 3 .

Сосуды из темного стекла с герметично завинчивающимися крышками и тефлоновыми прокладками вместимостью 10—40 см 3 для приготовления основных растворов витаминов.

Колбы плоскодонные с притертыми пробками Кн-2-50-18(22) по ГОСТ 25336.

Стаканы химические В-1-100 (150,250) ТС по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-25 (50.100)-2 по ГОСТ 1770.

Цилиндры 1 (3)-10(25) по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные 1(2.3,5>-1(1а.2.2а)>2>1(5,10) по ГОСТ 29227.

Фильтры целлюлозно-ацетатные, размер пор — 0,2 мкм. диаметр — 25 мм.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор молярной концентрации с (NaOH) = 0,5 моль/дм 3 .

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Кислота борная по ГОСТ 9656.

Натрия сульфит безводный по ГОСТ 5644.

Кислота щавелевая по ГОСТ 22180.

Натрий тетраборнокислый. стандарт-титр.

Натрий тетраборнокислый 10-водный по ГОСТ 4199.

Натрия додецилсульфат. витамин В, (тиаминхлорид).

Витамин В₃ (пантотеноеая кислота), витамин В₅ (никотиновая кислота).

Витамин В_е (пиридоксин), витамин В_с (фолиевая кислота).

Витамин С (L-асхорбиновая кислота).

Вода дистиллированная по ГОСТ Р 58144.

1 Допускается применение средств измерений и оборудования с такими же или лучшими метрологическими и техническими характеристиками, а также материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

2 Все применяемые средства измерений должны быть проверены (калиброваны), испытательное оборудование — аттестовано.

3 Все реактивы должны быть квалификации х. ч. или ч. д. а.

10.2 Подготовка к проведению измерений

10.2.1 Приготовление вспомогательных растворов

10.2.1.1 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации с (НО) = 6 моль/дм 3

50 см 3 концентрированной соляной кислоты смешивают в химическом стакане вместимостью

200 см 3 с 50 см 3 дистиллированной воды. Смесь переносят в стеклянную емкость с притертой пробкой для хранения. Срок хранения не ограничен.

10.2.1.2 Приготовление раствора соляной кислоты молярной концентрации с (НО) = 1 моль/дм 3

17 см 3 раствора соляной кислоты, приготовленного по 10.2.1.1. смешивают в химическом стакане

вместимостью 200 см 3 с 83 см 3 дистиллированной воды. Смесь переносят в стеклянную емкость с притертой пробкой для хранения. Срок хранения не ограничен.

10.2.1.3 Приготовление раствора гидроокиси натрия молярной концентрации с (NaOH) = = 0.5 моль/дм 3

Навеску гидроокиси натрия массой 2.000 г растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см 3 с 50—60 см 3 дистиллированной воды и объем в колбе доводят дистиллированной водой до метки. Раствор перемешивают и хранят в емкости из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой. Срок хранения — не более 2 мес.

Примечание — Растворы по 10.2.1.2,10.2.1.3 предназначены только для промывок капилляра.

10.2.1.4 Приготовление раствора борной кислоты молярной концентрации с (1/3 Н₃ВО₃) = = 0.2 моль/дм 3

Навеску борной кислоты массой 1.238 г растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см 3 в 50— 80 см 3 дистиллированной воды, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и перемешивают. Раствор хранят в емкости из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой. Срок хранения — не более 2 мес.

10.2.1.5 Приготовление раствора соляной кислоты объемной концентрации 1 %

2 см 3 раствора соляной кислоты, приготовленной по 10.2.1.1, растворяют в 98 см 3 дистиллированной воды в стеклянной емкости вместимостью 100—150 см 3 и тщательно перемешивают. Раствор хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой. Срок хранения не ограничен.

10.2.1.6 Приготовление раствора щавелевой кислоты с массовой долей 1 %

Навеску безводной щавелевой кислоты массой 1.000 г или 2-водной щавелевой кислоты массой 1.400 г растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см 3 в дистиллированной воде, доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой и перемешивают. Раствор хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой. Срок хранения не ограничен.

10.2.1.7 Приготовление раствора тетраборнокислого натрия молярной концентрации с (Na₂8₄O₇ • ЮН₂О) = 0,05 моль/дм 3

Раствор готовят из стандарт-титра по прилагаемой к нему инструкции и хранят в полиэтиленовой емкости с плотно завинчивающейся крышкой. Срок хранения — не более 2 мес.

Примечание — При отсутствии стандарт-титра раствор готовят из 10-водното тетраборнокислого натрия. Для этого навеску препарата массой 19,071 г растворяют в мерной колбе вместимостью 1 дм 3 в свежелрокипячен-ной и охлажденной без доступа воздуха дистиллированной воде. pH раствора при 20 *С должен быть (9,22 ± 0,10).

10.2.1.8 Приготовление раствора тетраборнокислого натрия молярной концентрации c(Na₂B₄O₇ • 10Н₂0) = 0,01 моль/дм 3

20 см 3 раствора тетраборнокислого натрия, приготовленного по 10.2.1.1, помещают в химический стакан вместимостью 100 см 3 , добавляют 20 см 3 раствора борной кислоты (см. 10.2.1.4) и тщательно перемешивают. Раствор хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой. Срок хранения — не более 2 мес.

10.2.1.9 Приготовление ведущего электролита № 1

40 см 3 тетраборнокислого натрия, приготовленного по 10.2.1.7. помещают в химический стакан вместимостью 100 см 3 , добавляют 20 см 3 раствора борной кислоты (см. 10.2.1.4) и тщательно перемешивают. Раствор хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой. Срок хранения — не более 2 мес.

10.2.1.10 Приготовление ведущего электролита No 2

Навеску додецилсульфата натрия массой 0.578 г помещают в мерную колбу вместимостью 25 см 3 , добавляют 15—17 см 3 ведущего электролита No 1 (см. 10.2.1.9) и перемешивают. Доводят объем в колбе до метки этим же раствором и снова перемешивают. Раствор хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой. Срок хранения — не более 1 мес.

10.2.1.11 Подготовка растворов ведущих электролитов для проведения измерений

Непосредственно перед началом измерений растворы ведущих электролитов необходимо:

— профильтровать через ацетатно-целлюлозный фильтр, отбросив первые порции фильтрата (1—1.5 см 3 );

— дегазировать центрофугироеанием в течение 3—5 мин при скорости вращения 5000 об/мин.

10.2.1.12 Приготовление раствора сульфита натрия молярной концентрации с (1/2 Na₂SO₃) = 0.1 моль/дм 3 .

Навеску безводного сульфита натрия массой 0,630 г помещают в мерную колбу вместимостью 50 см 3 , добавляют 20—30 см 3 дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения препарата и доводят объем раствора в колбе дистиллированной водой до метки.

Раствор используют только в день приготовления, поэтому указанный выше объем (50 см 3 ) не является строго определенным. Его изменяют в зависимости от интенсивности использования раствора в течение предстоящего рабочего дня.

10.2.1.13 Приготовление экстрагирующего раствора для получения вытяжки витаминов из испытуемых проб

Раствор тетраборнокислого натрия (см. 10.2.1.7) смешивают с раствором сульфита натрия (см. 10.2.1.12) в соотношении 3:2 в химическом стакане вместимостью 250 см 3 . Раствор хранят в стеклянной емкости с притертой пробкой и используют только в день приготовления.

10.2.2 Подготовка капилляра к работе

10.2.2.1 Подготовка нового капилляра к работе

Подготовку нового капилляра к работе проводят в соответствии с руководством по эксплуатации системы капиллярного электрофореза.

10.2.2.2 Ежедневная подготовка капилляра к работе

Если капилляр оставлен на ночь заполненным дистиллированной водой, то перед работой его необходимо промыть раствором гидроокиси натрия (см. 10.2.1.3) и дистиллированной водой по 5 мин. затем раствором соответствующего ведущего электролита в течение времени, предусмотренного инструкцией к прибору.

В том случае, если накануне в капилляре был оставлен раствор ведущего электролита, то на следующий день в зависимости от предстоящего метода определения витаминов капилляр промывают следующим образом:

« при работе методом КЗЭ — свежей порцией ведущего электролита (см. 10.2.1.9) в течение 10— 15 мин без напряжения:

— при работе методом МЭКХ следует проводить последовательную промывку дистиллированной водой, раствором гидроокиси натрия (см. 10.2.1.3) и снова дистиллированной водой по 5 мин. а затем ведущим электролитом (см. 10.2.1.10) в течение 10—15 мин без напряжения.

Во всех случаях следует проверять состояние капилляра, проанализировав контрольный раствор (см. 10.2.3.6).

Между анализами капилляр промывают соответствующим ведущим электролитом в течение 3 мин.

После работы с испытуемыми образцами в конце рабочего дня необходимо проводить последовательную промывку капилляра дистиллированной водой в течение 10 мин. раствором соляной кислоты (см. 10.2.1.2) и дистиллированной водой по 5 мин, а затем раствором гидроокиси натрия (см. 10.2.1.3) и дистиллированной водой по 10 мин.

При определении витаминов методом КЗЭ капилляр оставляют на ночь заполненным дистиллированной водой.

При определении витаминов методом МЭКХ капилляр промывают ведущим электролитом № 1 (см. 10.2.1.9) в течение 10—15 мин и оставляют на ночь с этим же раствором.

Примечание — При работе с испытуемыми пробами на эпектрофореграмме может наблюдаться дрейф базовой линии, появление ступеней и смещение времени выхода компонентов, что связано с возможным мешающим влиянием матричных компонентов или примесей. В этом случае рекомендуется:

• во время проведения анализов увеличить время промывки капилляра между анализами:

— проводить промывку в течение 3 мин под напряжением;

— при появлении ступеней заменить свежими порциями ведущий электролит в пробирках.

Порядок хранения капилляра при перерывах в работе зависит от интенсивности использования прибора.

При перерывах в работе на 2—3 сут (до недели) капилляр следует промыть дистиллированной водой и оставить заполненным дистиллированной водой.

При перерывах на срок более недели капилляр необходимо после тщательной промывки дистиллированной водой высушить и оставить в сухом состоянии. 8 этом случае для восстановления работоспособности капилляра его нужно подготовить к работе, как новый капилляр.

10.2.3 Приготовление градуировочных растворов

10.2.3.1 Приготовление основных растворов витаминов В., (тиаминхлорида). В^ (пактотеноеой кислоты), В₅ (никотиновой кислоты), В₅ (никотинамида), В₆ (пиридоксина) с номинальными значениями массовых концентраций 1 мг/см 3 .

Навески витаминов в соответствии с таблицей 2 вносят в отдельные емкости из темного стекла и растворяют в 5 см 3 дистиллированной воды. Растворы хранят а герметично закрытых емкостях в холодильнике. Срок хранения — 3 мес.

Таблица 2 — Рекомендуемые навески с учетом форм витаминов, необходимых для приготовления основных растворов, и коэффициенты пересчета навески на массу соответствующего витамина

Витамин в форма взвешивания

Витамин В₅ (никотиновая кислота)

Массовые концентрации витаминов в каждом растворе С_г мг/см 3 , вычисляют по формуле

где т₍ — масса навески соответствующего витамина в форме взвешивания, мг:

— коэффициент пересчета массы навески на массу соответствующего витамина:

V,- — объем основного раствора соответствующего витамина, см 3 .

10.2.3.2 Приготовление основного раствора витамина В_с (фолиевой кислоты) с номинальным значением массовой концентрации 0.5 мг/см 3

Навеску фолиевой кислоты массой в соответствии с таблицей 2 вносят в емкость из темного стекла вместимостью 10—15 см 3 , добавляют 10 см 3 раствора тетрабориокислого натрия (см. 10.2.1.8) и тщательно перемешивают до полного растворения навески. Массовую концентрацию витамина В_с (фолиевой кислоты) в полученном растворе вычисляют по формуле (1). Раствор хранят в герметично закрытой емкости в холодильнике. Срок хранения — 1 мес.

10.2.3.3 Приготовление основного раствора витамина С (аскорбиновой кислоты) с номинальным значением массовой концентрации 2 мг/см 3

Навеску аскорбиновой кислоты массой в соответствии с таблицей 2 вносят в емкость из темного стекла вместимостью 10—15 см 3 , добавляют 1 см 3 раствора соляной кислоты (см. 10.2.1.5), 4 см 3 рас* твора щавелевой кислоты (см. 10.2.1.6) и перемешивают до полного растворения навески. Массовую концентрацию витамина С (аскорбиновой кислоты) в полученном растворе вычисляют по формуле (1). Раствор хранят в герметично закрытой емкости в холодильнике. Срок хранения — одна неделя.

10.2.3.4 Приготовление основного раствора витамина В₂ (рибофлавина) с номинальным экачени» ем массовой концентрации 0.5 мг/см 3

Навеску рибофлавина массой в соответствии с таблицей 2 вносят в емкость из темного стекла вместимостью 10—15 см 3 , добавляют 0.2 см 3 раствора соляной кислоты (см. 10.2.1.1), леремешивают до полного растворения, добавляют 8 см 3 раствора щавелевой кислоты (см. 10.6.1.6). 1,8 см 3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают. В случае неполного растворения навески следует нагреть раствор в закрытом сосуде на водяной бане при температуре 80 ’С. Массовую концентрацию витамина В₂ (рибофлавина) в полученном растворе вычисляют по формуле (1). Раствор хранят в герметично закрытой емкости в холодильнике. Срок хранения — 1 мес.

10.2.3.5 Приготовление градуировочных растворов витаминов

Основные растворы витаминов помещают в стеклянную емкость в объемах, указанных в таблице 3. Добавляют 1065 мм 3 раствора тетрабориокислого натрия (см. 10.2.1.8). 240 мм 3 раствора щавелевой кислоты (см. 10.2.1.6). 60 мм 3 раствора соляной кислоты (см. 10.2.1.5) и тщательно перемешивают. Массовые концентрации витаминов в градуировочном растворе С_г, мг/дм 3 , вычисляют по формуле

где С, — массовая концентрация витамина в основном растворе, мг/дм 3 ;

V, — объем основного раствора соответствующего витамина, мм 3 ;

1000 — коэффициент пересчета см 3 в дм 3 ;

2000 — общий объем градуировочного раствора, мм 3 .

Градуировочный раствор используют в течение 2 ч с момента приготовления.

Таблица 3 — Объемы основных растворов витаминов, используемых для приготовления градуировочных растворов

Витамин В_& (никотиновая кислота)

10.2.3.6 Приготовление контрольного раствора витаминов

8 пробирку помещают 20 мм 3 основного раствора пиридоксина и 40 мм 3 основного раствора ри-бофлавина. специально приготовленных для этой цели по 10.2.3.1 и 10.2.3.4 соответственно. Добавляют 940 мм 3 раствора тетраборнокислого натрия (см. 10.2.1.6) и перемешивают. Массовые концентрации витаминов в контрольном растворе С_е вычисляют по формуле

где С, — массовая концентрация витамина в основном растворе, мг/дм 3 ;

V, — объем основного раствора соответствующего витамина, мм 3 :

1000 — коэффициент пересчета см 3 в дм 3 ;

1000 — общий объем градуировочного раствора, мм 3 .

Контрольный раствор следует использовать в течение 2 ч с момента приготовления для проверки работоспособности прибора и для контроля стабильности градуировочной характеристики (см. 10.2.5).

10.2.4.1 Градуировка системы методом КЗЭ

Рекомендуемые параметры ввода и условия анализа представлены в таблице 4. Непосредственно перед анализом растворы центрифугируют е течение 5 мин при 5000—6000 об/мин.

Таблица 4 — Условия анализа градуировочного раствора методом КЗЭ

Определяемые витамины в порядке выхода

В, (тиамин), В₂ (рибофлавин). В_е (пиридоксин).

С (аскорбиновая кислота). В₃ (пантотеновая кислота).

В₅ (никотиновая кислота), В_с (фолиевая кислота)

Ввод градуировочного раствора (пробы)

В начале анализа — 0. после появления пика В& (пиридоксина) прикладывают давление 30 до конца анализа

При выполнении анализа необходимо изменение условий регистрации электрофореграммы. а именно приложения давления после появления пика пиридоксина.

Для определения момента времени, по истечении которого необходимо приложить давление, готовят пробный раствор витаминов в соответствии с 10.2.3.5 и снимают пробную электрофореграмму. В этом случае после регистрации пиридоксина (третьего компонента анализируемого раствора) в ручном режиме задают давление 30 мбар и ведут анализ до появления лика последнего компонента (фолиевой кислоты) пробы. Пробную электрофореграмму не используют для построения градуировочной зависимости. Операцию нахождения времени включения давления, описанную выше, можно выполнить один раз и использовать полученный параметр до тех пор. пока время выхода пиридоксина будет меньше задеваемого.

Установленный промежуток времени вносят в программу поэтапного анализа системы капиллярного электрофореза и используют ее для записи электрофореграммы градуировочного раствора и анализа растворов, полученных из испытуемых проб.

Для проведения градуировки системы последовательно, не менее трех раз. готовят и сразу же анализируют градуировочный раствор (см. 10.2.3.5). В таблице концентраций создают столько градуировочных уровней, сколько получено электрофореграмм. при этом концентрации компонентов в каждом уровне будут одинаковые.

Градуировку следует считать успешной, если отклонения времени выхода ликов компонентов не превышают 5 % от среднеарифметических значений. Если градуировку признают неудовлетворительной. продолжают готовить и анализировать градуировочный раствор, создавая дополнительные градуировочные уровни до тех пор. пока указанные условия не будут выполнены. При этом допускается отбраковывать неудовлетворительные данные, однако число принятых к градуировке точек должно быть не менее трех.

10.2.4.2 Градуировка системы методом МЭКХ

Рекомендуемые параметры ввода и условия анализа представлены в таблице 5. Непосредственно перед анализом растворы центрифугируют в течение 5 мин при 5000—6000 об/мин.

Таблица 5 — Условия анализа градуировочного раствора методом МЭКХ

Определяемые витамины в порядке выхода

В^кикогинамид). В& (пиридоксин), В₂ (рибофлавин).

С (аскорбиновая кислота). В₃ (пантотеновая кислота).

В₅(никотиновая кислота). В_с (фолиевая кислота). В, (тиаминхпорид)

Ввод градуировочного раствора (пробы)

240 (после пика пантотеноеой кислоты)

В начале анализа — 0. после появления пика (пантотеноеой кислоты) прикладывают давление 50 до конца анализа

№ 2 (приготовление по 10.2.1.10)

При выполнении анализа необходимо изменение условий регистрации электрофореграммы, а именно приложение давления и изменение рабочей длины волны после появления пика пантотеноеой кислоты.

Для определения момента времени, по истечении которого необходимо приложить давление и изменить длину волны, готовят пробный раствор витаминов в соответствии с 10.2.3.5 и регистрируют пробную электрофореграмму при длине волны 200 нм. В этом случае после регистрации пантотеноеой кислоты (пятого компонента анализируемого раствора) в ручном режиме задают давление 50 мбар и ведут анализ до появления пика последнего компонента (тиаминхлорида) пробы. В ручном режиме длина волны без остановки анализа не может быть установлена, поэтому заканчивают пробную электрофореграмму при измерении на длине волны 200 нм. Пробную электрофореграмму не используют для построения градуировочной зависимости. Операцию нахождения времени включения давления и изменения длины волны регистрации, описанную выше, можно выполнить один раз и использовать полученный параметр до тех пор, пока время выхода пантотеноеой кислоты будет меньше задаваемого.

Установленный промежуток времени вносят в программу поэтапного анализа вместе с изменением длины волны регистрации и используют ее для записи электрофореграмм градуировочных растворов и анализа растворов, полученных из испытуемых проб.

Для проведения градуировки системы последовательно, не менее трех раз. готовят и сразу же анализируют градуировочные растворы (см. 10.2.3.5). На полученных электрофореграммах проверяют правильность автоматической разметки пиков, при необходимости, корректируют разметку, удаляют лишние пики. В таблице компонентов должно быть столько строк, сколько витаминов анализируют. 8 таблице концентраций создают столько градуировочных уровней, сколько получено электрофореграмм. при этом концентрации компонентов в каждом уровне будут одинаковые.

Градуировку следует считать успешной, если отклонения времени выхода пиков компонентов не превышают 5 % среднеарифметических значений. Если градуировка признается неудовлетворительной. продолжают готовить и анализировать градуировочные растворы, создавая дополнительные градуировочные уровни до тех пор. пока указанное условие не будет выполнено. При этом допускается отбраковывать неудовлетворительные данные, однако число принятых к градуировке точек должно быть не меньше трех.

10.3 Контроль стабильности градуировочной характеристики

Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят в начале рабочего дня перед измерениями анализируемых проб.

Для проверки работоспособности системы и контроля стабильности градуировочной характеристики используют свежеприготовленный контрольный раствор витаминов (см. 10.2.3.6). который анализируют в условиях, соответствующих анализу градуировочных растворов.

Градуировка признается стабильной, если выполняется неравенство

где X— измеренное значение массовой концентрации соответствующего витамина в контрольном растворе, мг/дм 3 ;

С,. — массовая концентрация соответствующего витамина в контрольном растворе. мг/дм 3 ;

G — норматив контроля стабильности градуировочной характеристики. %.

На стадии освоения метода в качестве значения G принимают значения, равные 10 % для пиридоксина и 16 % для рибофлавина.

При накоплении статистических данных лаборатория вправе устанавливать собственные нормативы контроля стабильности градуировочной характеристики, не превышающие значений, приведенных выше.

При невыполнении условия (4) заново анализируют контрольный раствор еще два раза. При повторных отклонениях, превышающих указанные нормативы хотя бы один раз. градуировку системы проводят заново, начиная с приготовления новых запасных растворов.

Также необходимо обращать внимание на время выхода пиков компонентов, отклонения которых не должны превышать 5 % средних значений.

Рекомендуется начинать работу с пробами только после проведения градуировки системы. Однако анализ получаемых растворов необходимо проводить в течение первых 1.5—2 ч после их приготовления.

10.4.1 Получение вытяжки витаминов из испытуемой пробы

Навеску меда массой 1.000 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 50 см 3 , добавляют 25 см 3 экстрагирующего раствора, приготовленного по 10.2.1.13. и ставят в перемешивающее устройство при комнатной температуре на 15 мин.

Часть полученной вытяжки переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют в течение 5 мин при 5000—6000 об/мин. Раствор над осадком отбирают в чистую пробирку.

Примечание — Вытяжку из навески исследуемой пробы необходимо анализировать 8 течение первых 1.5—2 ч после ее получения, что связано с низкой стабильностью витамина С (аскорбиновой кислоты).

10.4.2 Анализ полученных водных вытяжек

10.4.2.1 Анализ полученных вытяжек витаминов методом КЗЭ

Промывают капилляр ведущим электролитом № 1 е течение 10—15 мин. Далее устанавливают на выходе в рабочее положение пробирку с этим же электролитом, а на входе — пробирку с пробой и проводят ее ввод.

На полученных электрофореграммах необходимо проверить правильность автоматической разметки пиков, удалить лишние лики и настроить отчет так. чтобы маркировка пиков включала наименование компонента и его массовую концентрацию.

10.4.2.2 Анализ полученных водных вытяжек методом МЭКХ

Рекомендуется приступать к работе в мицеллярном варианте после проведения всех необходимых измерений в капиллярном зонном варианте, что связано с нежелательным частым кондиционированием капилляра при переходе с одного ведущего электролита на другой. Смена ведущего электролита чаще одного раза в течение рабочего дня может привести к загрязнению капилляра, которое потребует длительной промывки.

Промывают капилляр ведущим электролитом № 2 е течение 10—15 мин. Далее устанавливают на выходе в рабочее положение пробирку с этим же ведущим электролитом и проверяют стабильность градуировочной характеристики ло 10.2.5. Если стабильность удовлетворительная, проводят ввод пробы и затем анализ. Если стабильность градуировочной характеристики признают неудовлетворительной. то для сохранения приготовленного раствора сначала проводят анализ подготовленных проб, затем градуировку системы повторяют, создают на этой основе новый метод и обрабатывают полученные электрофореграммы в новом методе.

10.5 Обработка результатов измерений

Содержание соответствующего витамина в пробе Х_е г/кг. вычисляют ло формуле

где С,- — массовая концентрация соответствующего витамина в экстракте, указанная на электрофоре-грамме или прочитанная в отчете, мг/дм 3 ;

V₍ — объем полученного экстракта, равный 0.025 дм 3 ; т — масса навески пробы, г.

10.6 Проверка приемлемости результатов измерений

В случае проведения экспресс-анализов возможно получение результата измерения содержания витаминов по единичному определению.

При проведении контрольных измерений в качестве результата измерения принимают среднеарифметическое результатов параллельных определений, если выполняется условие приемлемости

где С₁. С₂ — результаты двух параллельных определений измерений массовой концентрации соответствующего витамина в пробе, мг/дм 3 :

С_ср — среднее значение двух параллельных определений измерений массовой концентрации соответствующего витамина в пробе, мг/дм 3 ;

г — значение предела повторяемости (таблица 1), %.

Если условие (6) не выполняется, то находят и устраняют причины нестабильности, заново регистрируют электрофореграммы и обрабатывают полученные результаты.

10.7 Оформление результатов измерений

Результат измерения представляют в виде X ± Д_г г/кг. Р — 0.95.

По полученному результату анализа С, и значению относительной погрешности рассчитывают абсолютную погрешность ло формуле

где С/— среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, мг/дм 3 .

Допускается результат измерения в документах, выдаваемых лабораторией, представлять в виде X ± Д,, г/кг. Р — 0,95. при условии Д_л 1 /^. Гарнитура Ариал. Уел. печ. л. 2.32. Уч.-изд. л. 2.10.

Подготовлено на основе электронной версии, предоставленной разработчиком стандарта

Создано в единичном исполнении для комплектования Федеральною информационного фонда стандартов. 117413 Москва. Нахимовский пр-т. д. 31. к. 2.

источник

ГОСТ 31765-2012 ВИНА И ВИНОМАТЕРИАЛЫ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Добавил: Богдан Кривошея

Дата: [31.03.2017]

ГОСТ 31765-2012 ВИНА И ВИНОМАТЕРИАЛЫ. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА

Дата введения — 1 июля 2013 г.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

1 Подготовлен Государственным научным учреждением «Северо-Кавказский зональный научно-исследовательский институт садоводства и виноградарства» Россельхозакадемии (ГНУ «СКЗНИИСиВ» Россельхозакадемии)

2 Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 15 ноября 2012 г. N 42)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004-97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Госстандарт Республики Беларусь

Госстандарт Республики Казахстан

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 29 ноября 2012 г. N 1686-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31765-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 года

5 Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53154-2008

Настоящий стандарт разработан в целях установления требований к проведению испытания по определению массовой концентрации синтетических красителей в винодельческой продукции методом капиллярного электрофореза.

Метод определения массовой концентрации синтетических красителей с использованием капиллярного электрофореза обеспечивает необходимую точность и позволяет отказаться от длительного процесса пробоподготовки и использования специфической аппаратуры, применяемой при решении подобных задач другими аналитическими методами, в частности, методами тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Метод обеспечивает получение сопоставимых результатов и повышает достоверность информации для потребителя.

Настоящий стандарт распространяется на винодельческую продукцию и устанавливает метод определения массовой концентрации синтетических красителей в диапазоне измерений от 0, 002 до 0, 200 г/дм 3 на основе измерения их массовых концентраций посредством капиллярного электрофореза.

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие межгосударственные стандарты:

ГОСТ ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 3956-76 Силикагель технический. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Реактивы. Сольдинатриевая этилендиамин-N, N, N`, N`-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 31730-2012 Продукция винодельческая. Правила приемки и методы отбора проб

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов по указателю «Национальные стандарты», составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

Требования электробезопасности при работе с приборами — по ГОСТ 12.1.019.

При выполнении анализов необходимо выполнять требования безопасности при работе с химическими реактивами согласно ГОСТ 12.1.007.

К выполнению измерений методом капиллярного электрофореза допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера, прошедшего соответствующий курс обучения.

Прибор капиллярного электрофореза, оснащенный кварцевым капилляром длиной не менее 50 см до детектора, внутренним диаметром 75 мкм, фотометрическим детектором, работающим на длине волны 254 нм или спектрофотометрическим детектором в интервале длин волн от 200 до 300 нм и блоком высокого напряжения отрицательной полярности и электронно-вычислительная машина (компьютер) с программным обеспечением для регистрации и обработки электрофореграмм.

Спектрофотометр, позволяющий измерять оптическую плотность растворов, с диапазоном измерения длин волн от 400 до 700 нм.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания ±0, 0001 г.

Шкаф сушильный с диапазоном температур в рабочей камере от 40°С до 200°С и основной погрешностью стабилизации температуры ±1°С.

Термометр жидкостный стеклянный с диапазоном измерения от 0°С до 100°С и ценой деления 1°С по ГОСТ 28498.

Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1, 2, 5, 10 см 3 по ГОСТ 29227.

Колбы мерные 2-250-2, 2-100-2, 2-50-2, 2-25-2 по ГОСТ 1770.

Стаканы химические по ГОСТ 25336.

Стаканчик СВ-14/8 по ГОСТ 25336.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

Центрифуга лабораторная с частотой вращения ротора не менее 6000 об/мин.

Пробирки одноразовые (типа Эппендорфа) вместимостью 1, 5 см 3 .

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Кислота соляная по ГОСТ 3118.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328.

Кислота лимонная безводная по ГОСТ 3652.

Тетраметилэтилендиамин (N, N, N, N-tetramethylethylenediamine) с содержанием основного вещества 99, 5%.

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии с содержанием основного вещества не менее 99%.

Красители синтетические стандартные в соответствии с приложением А.

Допускается применение средств измерений и вспомогательного оборудования с аналогичными метрологическими и техническими характеристиками, а также реактивов по качеству не хуже указанных.

Отбор проб — по ГОСТ 31730.

Метод капиллярного электрофореза для определения массовых концентраций синтетических пищевых красителей основан на разделении их под действием электрического поля в капилляре в условиях, способствующих подавлению влияния посторонних веществ. Идентификацию и количественное определение анализируемых красителей проводят, регистрируя поглощение при длине волны 254 или 215 нм.

Диапазон измеряемых концентраций с учетом разбавления от 0, 002 до 0, 200 г/дм 3 .

Показатели прецизионности метода определены в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-2 и представлены в таблице 1.

Предел повторяемости r, %, Р = 0, 95

Предел воспроизводимости R, %, Р = 0, 95

Границы относительной погрешности ±5 при вероятности Р = 0, 95, %

Подготовку проб и измерения проводят в лабораторных условиях при температуре окружающего воздуха (23±5)°С, атмосферном давлении от 87 до 107 кПа, относительной влажности воздуха не более 80%, частоте переменного тока (50±0, 4) Гц, напряжении в сети 220 В.

9.1 Приготовление буферных и вспомогательных растворов

9.1.1 Раствор гидроксида натрия массовой долей 4%

В 50 — 60 см 3 дистиллированной воды растворяют 4 г гидроксида натрия. По окончании растворения разбавляют дистиллированной водой до объема 100 см 3 .

Срок хранения в сосуде из полиэтилена с плотно завинчивающейся крышкой — 2 мес.

9.1.2 Раствор соляной кислоты массовой долей 3, 5%

В мерную колбу вместимостью 100 см 3 помещают 8, 3 см 3 соляной кислоты плотностью 1, 18 г/см 3 , затем добавляют дистиллированную воду до метки и перемешивают. Срок хранения не ограничен.

9.1.3 Раствор лимонной кислоты молярной концентрации 0, 05 моль/дм 3

В стакан вместимостью 25 см 3 отбирают навеску (0, 240±0, 001) г безводной лимонной кислоты. В стакан добавляют 15 см 3 дистиллированной воды и перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения. Затем раствор количественно переносят в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 25 см 3 , доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — одна неделя.

9.1.4 Раствор тетраметилэтилендиамина молярной концентрации 0, 05 моль/дм 3

В стакан вместимостью 25 см 3 отбирают навеску (0, 145±0, 001) г тетраметилэтилендиамина. В стакан добавляют 10 см 3 дистиллированной воды (хранившейся с момента приготовления не более 4 сут) и перемешивают стеклянной палочкой. Затем раствор переносят в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 25 см 3 , доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора в плотно закупоренной емкости при комнатной температуре — две недели.

9.1.5 Раствор трилона Б молярной концентрации 0, 05 моль/дм 3

В стакан вместимостью 25 см 3 отбирают навеску (0, 465±0, 001) г трилона Б. В стакан добавляют 15 см 3 дистиллированной воды и перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения. Затем раствор количественно переносят в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 25 см 3 , доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Срок хранения раствора при комнатной температуре — 1 мес.

9.1.6 Рабочий буферный раствор

Раствор лимонной кислоты по 9.1.3, раствор тетраметилэтилендиамина по 9.1.4, раствор трилона Б по 9.1.5 и ацетонитрил смешивают в объемных соотношениях 4:3:1:1. Не допускают хранение рабочего буферного раствора более 2 сут с момента приготовления при нормальных условиях в плотно закупоренной емкости с пришлифованной или полиэтиленовой пробкой. Полученный рабочий буферный раствор помещают в пробирки типа Эппендорф в количестве 0, 8 см 3 и центрифугируют 4 мин при 6000 об/мин.

9.2 Подготовка прибора и порядок проведения анализа

9.2.1 Прибор подготавливают к работе в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают следующие рабочие параметры:

— длина волны — 254 нм или 215 нм;

— дозирование пробы — пневматическое при 30 мБар в течение 5 с при напряжении 0 кВ;

— рекомендуется термостатирование капилляра при температуре 25°С.

Перед измерениями подготавливают капилляр к работе, промывая его 3, 5% раствором соляной кислоты (см. 9.1.2) в течение 3 мин, затем дистиллированной водой — 3 мин, затем 4%-ным раствором гидроокиси натрия (см. 9.1.1) в течение 3 мин, затем дистиллированной водой в течение 3 мин и далее рабочим буферным раствором (см. 9.1.6) в течение 3 мин. Капилляр промывают каждый раз при включении прибора. Между анализами капилляр промывают рабочим буфером в течение 2 мин. При сильном загрязнении капилляра, что проявляется в искажении электрофореграммы, допускается повторение начальной промывки.

9.2.2 Определение синтетических красителей в градуировочном растворе или исследуемой пробе проводится путем пневматического дозирования проб (30 мБар, 5с) и регистрации полученных данных в течение 12 мин в виде электрофореграмм. Процедуры градуировки и анализа исследуемых проб должны проводиться на одной длине волны.

Первое измерение на каждой порции буфера повторяют не менее двух раз. При сильном расхождении результатов первый отбрасывают. Содержимое одной пробирки с рабочим буферным раствором можно использовать для выполнения не более пяти измерений.

9.3 Приготовление градуировочных растворов

9.3.1 Приготовление исходных растворов синтетических красителей

В необходимое число стаканов вместимостью 50 см 3 каждый отбирают навески стандартных синтетических красителей с записью результата до четвертого знака.

Массу навески стандартного синтетического красителя m, г, рассчитывают с учетом массовой доли основного красящего вещества в образце по формуле

где 0, 1 — масса основного красящего вещества, содержащегося в навеске стандартного синтетического красителя, г;

100 — коэффициент пересчета в проценты;

X — массовая доля основного красящего вещества в стандартном синтетическом красителе, %.

Массовую долю основного красящего вещества Х в стандартном синтетическом красителе определяют в соответствии с приложением Б.

В каждый стакан с навеской стандартного синтетического красителя прибавляют 20 см 3 дистиллированной воды и перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения. Для интенсификации растворения допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане до температуры не более 90°С. Затем раствор охлаждают до 20°С, количественно переносят в мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 100 см 3 , доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Полученный раствор контрольного образца синтетического красителя имеет массовую концентрацию основного красящего вещества 1 г/дм 3 .

Срок хранения растворов контрольных образцов синтетических красителей в плотно закрытых склянках при температуре 2°С — 8°С — 3 мес.

9.4.1 Рабочие градуировочные растворы (массовой концентрацией 0, 025 и 0, 050 г/дм 3 ) готовят из растворов контрольных образцов синтетических красителей по 9.3.1. Для этого вносят в две мерные колбы (с пришлифованными пробками) вместимостью 100 см 3 пипетками по 2, 5 и 5 см 3 раствора контрольных образцов синтетического красителя соответственно, затем доводят объемы растворов в колбах до метки дистиллированной водой, закрывают колбы пробками и тщательно перемешивают.

Срок хранения растворов в плотно закрытых склянках не более двух недель при температуре 2°C — 8°С.

9.4.2 Градуировочные растворы концентрацией 0, 025, 0, 050 г/дм 3 отбирают мерной пипеткой в объеме 0, 8 см 3 в пробирку Эппендорфа и центрифугируют 4 мин при 6000 об/мин для удаления растворенного воздуха. Проводят измерение (см. 9.2). Градуировочную характеристику получают, обрабатывая полученные экспериментальные данные при помощи программного обеспечения. Градуировка признается удовлетворительной, если коэффициент корреляции, рассчитанный программой, будет не менее 0, 99. Градуировка прибора обязательно проводится заново в следующих случаях:

при замене хотя бы одного из компонентов буферного раствора;

при изменении рабочего напряжения;

при изменении времени ввода пробы и давления ввода;

при отрицательных результатах контроля стабильности градуировочной характеристики. Пример электрофореграммы приведен в приложении В.

9.4.3 Приготовление раствора для контроля стабильности градуировочной характеристики

В мерную колбу вместимостью 100 см 3 вносят по 1 см 3 контрольных образцов синтетических красителей кармуазин (азорубин, Е122) и красный очаровательный AC (Е129), разбавляют до метки дистиллированной водой и перемешивают. Действительное значение массовой концентрации синтетических красителей составляет 0, 010 г/дм 3 .

Срок хранения раствора в плотно закрытых склянках из темного стекла не более двух недель при комнатной температуре. Контрольный раствор используется для проверки работоспособности прибора и для контроля стабильности градуировочной характеристики.

Исследуемые пробы разбавляют в 10 — 50 раз дистиллированной водой до концентрации анализируемых синтетических красителей не более 0, 050 г/дм 3 и центрифугируют 4 мин при 6000 об/мин. Измерение проводят по 9.2.

В случае затруднения идентификации какого-либо красителя рекомендуется использовать метод добавок. Для этого в анализируемую пробу вносится этот краситель с расчетом на увеличение концентрации на (100±50)%, и измерение повторяется. Увеличение высоты соответствующего пика свидетельствует о правильной идентификации.

11.1 Используя электрофореграмму подготовленных проб (см. раздел 10), при помощи программного обеспечения к прибору рассчитывают массовую концентрацию соответствующих синтетических красителей по установленным градуировочным зависимостям (см. 9.4.2). Массовую концентрацию синтетических красителей в исследуемой пробе X, г/дм 3 , вычисляют по формуле

где k — коэффициент разбавления пробы (раздел 10);

С — концентрация красителя, найденная по градуировочному графику, г/дм 3 .

11.2 За окончательный результат определения принимают среднеарифметическое значение Х_ср, г/дм 3 , двух параллельных определений массовой концентрации красителя, полученных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

где Х_макс — максимальная массовая концентрация красителя в пробе, г/дм 3 ;

Х_мин — минимальная массовая концентрация красителя в пробе, г/дм 3 ;

Х_ср — среднее значение двух параллельных измерений массовой концентрации красителя в пробе, г/дм 3 ;

r — значение предела повторяемости (см. таблицу), %.

11.3 Результат анализа представляют в виде

где Х_ср — среднеарифметическое значение двух определений массовой концентрации красителя в пробе, признанных приемлемыми, г/дм 3 ;

Δ- границы абсолютной погрешности определения, г/дм 3 , при доверительной вероятности Р = 0, 95.

11.4 Границы абсолютной погрешности Δ вычисляют по формуле

где δ — границы относительной погрешности измерения (см. таблица 1), %;

X — среднеарифметическое значение двух определений массовой концентрации синтетических красителей в исследуемой пробе, г/дм 3 .

Числовое значение результата определения должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение границы абсолютной погрешности.

Приложение А
(обязательное)

Наименование синтетического красителя

Удельный коэффициент светопоглощения,

источник