Исследование кала метод нативного мазка

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Предметные стекла.
2. Покровные стекла.
3. Стеклянные палочки длиной 15-20 см с оплавленными концами.
4. Чашки Петри.
5. Йодистый калий.
6. Йод.
7. Нейтральрот.
8. Бриллиантгрюн.
9. Судан III.
10. Этиловый спирт 96°.
11. Дистиллированная вода.
12. Дезинфицирующие растворы.

Препараты для микроскопии готовят из растертого с водой кала и из видимых примесей (если они имеются) . Стеклянную палочку с оплавленным концом вносят в растертый кал. Взятую каплю материала помещают на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и слегка придавливают его сверху.

Из видимых примесей готовят второй препарат с помощью шпателя и иглы. Слизь, кровь, остатки пищи и другие образования помещают на предметное стекло рядом с первым препаратом, приготовленным из растертого кала, и накрывают покровным стеклом (слизистые клочки предварительно промывают водопроводной водой).

Для лучшего распознавания и выявления микроскопических элементов кала окрашивают три препарата: первый — реактивом Люголя, второй — смесью нейтральрот + бриллиантгрюн, третий — Суданом III.

Реактивы для окраски препаратов готовят следующим образом:

1. Реактив Люголя: к 2 г йодистого калия, помещенного в колбочку емкостью 50 мл, приливают около 1 мл дистиллированной воды, прибавляют 1 г кристаллического йода и дистиллированной воды до метки 50 мл.
2. Раствор краски судан III: растворяют 2 г краски судан III в 10 мл 96° спирта и приливают 90 мл 80° спирта или ледяной уксусной кислоты до получения ярко-красного окрашивания.
3. 1% водный раствор нейтральрота: в колбочку на 100 мл помещают 1 г краски нейтральрот и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.
4. 2% водный раствор бриллиантгрюна: 2 г краски бриллиантгрюн помещают в колбочку на 100 мл и доливают дистиллированной водой до метки 100 мл.

Техника окраски препаратов . К препарату прибавляют 1-2 капли соответствующего реактива, затем вновь накрывают его покровным стеклом и изучают под микроскопом. Техника изучения препаратов кала под микроскопом такая же, как и препаратов мочи.

Элементы, обнаруживаемые при микроскопическом исследовании препаратов кала, подразделяют на три группы: а) элементы пищи (животного и растительного происхождения), б) элементы кишечной стенки и в) кристаллические образования.

К первой группе относятся:
а) Мышечные волокна (рис. 19). Имеют (в нормальном кале) вид неправильных четырехугольников или округлых образований желтой окраски (цвет охры), в центре окрашены более интенсивно, чем по краям, при окраске раствором Люголя принимают цвет красного дерева. Непереваренные или недостаточно переваренные мышечные волокна имеют ясно выраженные углы, а также поперечную и продольную исчерченность, подобпые волокна можно видеть изолированно и в виде групп, соединенных между собой.

б) Соединительная ткань (рис. 20). Имеет вид перекрещивающихся тонких волоконец, встречающихся изолированно или в сочетании с группами мышечных волокон.

Рис. 20. Соединительная ткань в виде густых скоплений эластических волокон.

в) Жир нейтральный (рис. 21, 1) имеет вид бесцветных или слегка желтоватых капель разной величины или крупных лужиц. Будучи окрашены Суданом III, становятся красными, оранжевыми или желтыми.

Рис. 21. Жиры (1), жирные кислоты (2), мыла (3, 4) в испражнениях.

г) Жирные кислоты (рис. 21, 2). Представляют собой кристаллы, имеющие вид иголок, лежащих поодиночке или собранных в пучки. При окраске Суданом III не окрашиваются (капли и глыбки окрашиваются так же, как и жиры), смесью 1% раствора нейтральрота и 2% раствора бриллиантгрюна окрашиваются в красный цвет.

д) Мыла (рис. 21, 3-4) — кальциевые и магниевые соли жирных кислот. Встречаются в виде глыбок или игольчатых кристаллов, более коротких, чем жирные кислоты, и чаще сгруппированных в пучки. Мыла Суданом III не окрашиваются, а смесыо 1% раствора нейтральрота и 2% раствора бриллиантгрюна окрашиваются в зеленый цвет.

е) Крахмал (рис. 22, 3). Крахмальные зерна округлой или овальной формы, лежат изолированно, каждое зерно сильно преломляет свет. В зависимости от степени переваривания зерен концентрическая исчерченность может быть выражена по-разному. Встречают крахмальные зерна и внутри крахмалистой клетки (картофель, бобы). Раствором Люголя неизмененные крахмалыные зерна окрашиваются в синий цвет, а измененные — в лилово-красноватый.

ж) Дрожжевые грибки . Это образования овальной формы, снабженные почковидными отростками. Раствором Люголя окрашиваются в желтовато-красный цвет.

з) Растительная клетчатка (рис. 22). Перевариваемая клетчатка — крупные прозрачные, как правило, неокрашенные образования неправильной формы, имеющие ячеистое строение (картофель, фасоль, каштан и др.). Неперевариваемая клетчатка (оболочка хлебных зерен, растительные сосуды, волоски, пласты эпидермы и пр.) имеет широкие, утолщенные межклеточные пространства, двуконтурные клетки, непрозрачна, окрашена в коричневый или желтый цвет.

Вторую группу составляют:
а) Слизь — прозрачная гомогенная масса. Как правило, встречается с лейкоцитами, эритроцитами и эпителием. Слизь из верхних отделов кишечника смешана с каловыми массами.

б) Лейкоциты . Могут быть неизмененными, но чаще подвергаются распаду и изменяются. Лучше различать их в окрашенных (раствором Люголя, Суданом III и пр.) препаратах. Эозинофилы содержат однородную, сильно преломляющую свет зернистость. Среди эозинофилов иногда обнаруживают кристаллы Шарко-Лейдена.

в) Эритроциты . Могут быть неизмененными и выщелоченными. Кровь может выделяться с калом и в виде аморфного распада, окрашенного в буроватый цвет.

г) Эпителий . Клетки различной формы и величины: 1) плоский эпителий (выстилающий заднепроходное отверстие) — полигональной формы, с маленьким ядром; 2) эпителий, выстилающий слизистую оболочку кишечника, — цилиндрической формы с четко контурированным ядром. Иногда они могут быть измененной формы и различной величины с жировым перерождением и вакуолизацией. При злокачественном перерождении имеют вид полиморфных клеток с большим пузырьковидным ядром и с грубозернистой, вакуолизированной протоплазмой, располагающихся отдельно и группами.

В третью группу входят кристаллические образования:
а) Кристаллы трипельфосфата .
б) Кристаллы оксалатов .
в) Билирубин .
г) Гематоидин .

Подробное описание указанных элементов дано в теме «Микроскопическое исследование мочи».

д) Кристаллы закиси висмута (рис. 23, 2) — темно-бурые, прямоугольные или ромбические образования. Обнаруживаются после приема солей висмута.

е) Соли бария (рис. 23, 1) — однородные мелкие бесцветные глыбки. Встречаются в течение нескольких дней после проведения рентгенологического исследования желудка.

ж) Частицы угля (рис. 23, 3). Окрашены в черный цвет, по форме напоминают кристаллы висмута.

Pиc. 23. Соли бария (1), висмута (2), уголь (3).

источник

Сайт предоставляет справочную информацию исключительно для ознакомления. Диагностику и лечение заболеваний нужно проходить под наблюдением специалиста. У всех препаратов имеются противопоказания. Консультация специалиста обязательна!

Анализ кала на глисты правильно называется анализом на яйца глист, поскольку в ходе выполнения манипуляции сотрудник диагностической лаборатории исследует фекалии на предмет наличия яиц различных паразитических червей, которые могут поражать органы и ткани человеческого организма. А поскольку собирательное название всех паразитических червей – это глисты, то основной целью анализа является обнаружение или подтверждение отсутствия яиц данных паразитов.

Дело в том, что в различных органах и тканях человеческого тела может паразитировать около 250 видов червей (глистов), которые размножаются, откладывая яйца. Именно эти яйца попадают в кишечник и выделяются наружу вместе с фекалиями. Изучение мазка каловых масс под микроскопом позволяет увидеть глазом личинки и яйца различных паразитических червей, тем самым, диагностировав их наличие. То есть, анализ кала на яйца глист представляет собой метод диагностики гельминтозов – заболеваний, вызываемых паразитическими червями (глистами).

Анализ кала на яйца глист сдается в двух возможных случаях:
1. Подозрение на заражение гельминтами (гельминтоз);
2. Барьерный анализ.

Барьерный анализ представляет собой обязательное исследование, включенное в рутинную процедуру обследования людей, поступающих на работу, связанную с продажей, обработкой или хранением продуктов питания, контактами с людьми и прочими сферами деятельности, в которых возможна передача гельминтов окружающим. В данной ситуации анализ кала на яйца глист является скрининговым, то есть, используемым для массовой и быстрой диагностики гельминтозов у многих людей. Коротко можно сказать, что в качестве обязательного барьерного анализа кал на яйца глист сдается для оформления санитарной книжки и при поступлении в детский сад, школу, бассейн или перед плановой госпитализацией в стационар. Данный анализ необходимо сдать, поскольку человек будет контактировать с окружающими, а если он инфицирован гельминтозом, то может заразить других, тем самым, распространив заболевание.

Вторым показанием для сдачи анализа кала на яйца глист является подозрение на заражение какими-либо гельминтами. Подозрение на гельминтоз (заражение паразитическими червями) возникает при наличии у человека различных вариабельных симптомов нарушения работы различных органов при отсутствии соответствующего заболевания. Дело в том, что паразитические черви (гельминты) могут поражать различные органы и ткани, например, кишечник, мочевой пузырь, уретру, головной мозг, печень, сердце, лимфатические узлы и другие, вызывая симптоматику различных заболеваний. Если в ходе обследования не обнаруживается заболевания органа, со стороны которого имеются патологические симптомы, то возникает закономерное подозрение на гельминтоз, которое требует подтверждения или опровержения. Именно с целью подтверждения или опровержения гельминтоза сдается анализ кала на яйца глист в такой ситуации.

Анализ кала на яйца глист показан к сдаче при наличии у человека следующих симптомов:

• Воспалительные заболевания органов желудочно-кишечного тракта (например, боль в желудке, поносы, запоры, метеоризм и т.д.);
• Утомляемость;
• Раздражительность;
• Тревожный сон;
• Бруксизм (скрип зубами);
• Зуд в области анального отверстия;
• Вульвовагинит у женщин;
• Инфекции мочевыводящих путей;
• Отставание в росте и массе тела у растущих детей и подростков;
• Повышенное количество эозинофилов в крови;
• Аллергический синдром неясной природы, при котором не удается выявить аллерген, вызывающий патологическую реакцию со стороны организма;
• Частый простудные заболевания и вирусные инфекции.

При наличии каких-либо указанных симптомов необходимо сдать анализ кала на яйца глист, поскольку они являются достаточными факторами для подозрения на гельминтоз. Однако только анализа кала может быть недостаточно для диагностики гельминтоза, и при подозрении на паразитоз придется сдавать пробы желчи, мокроты, дуоденального содержимого и других биологических секретов организма человека, в которых могут оказаться яйца или личинки паразитарных червей.

Перед сдачей кала на яйца глист следует в течение недели не принимать касторовое или минеральное масло, антибиотики, противодиарейные и противопаразитарные средства, а также препараты висмута и магния. Также в течение 7 – 14 дней перед сдачей кала на яйца глист не рекомендуется производить ирригоскопию.

Кроме того, необходимо психологически и морально настроиться на то, что для качественной диагностики гельминтозов понадобится на одна, а три или шесть проб кала, которые необходимо будет сдавать ежедневно или через 1 – 2 дня. Обычно необходимо три пробы кала, но если имеется подозрение на дизентерийную амебу или лямблии, то оптимально сдать шесть проб фекалий.

Рекомендуется заранее подготовить посуду для пробы кала. В настоящее время уже не используются привычные многим людям с детских лет спичечные коробки, поскольку лаборатории выдают специальные пластиковые контейнеры с закручивающейся крышкой. Если в лаборатории контейнер не выдали, то его можно купить в обычной аптеке. Лучше использовать именно такой одноразовый контейнер, а не какую-либо имеющуюся дома посуду или коробку, поскольку в них могут оказаться личинки или яйца паразитов, занесенные случайно грязными руками, которые при исследовании будут выявлены и, таким образом, человек получит ложноположительный результат.

Более никакой специальной подготовки к сдаче анализа кала на яйца глист производить не нужно.

Перед дефекацией необходимо помочиться, чтобы моча не попала на каловые массы. Затем необходимо, не подмывая кожу анального отверстия, покакать в какую-либо емкость, откуда удобно будет набирать пробы кала (например, горшок, таз и т.д.).

Из всей массы кала необходимо собрать небольшой объем, соответствующий примерно двух чайным ложкам, забирая пробы с разных частей фекалий специальной палочкой, припаянной к крышке стерильного контейнера. Если контейнера для кала нет, то можно собирать пробы обычной спичкой или палочкой. Оптимально взять 3 – 4 небольших кусочка с боков, передней и задней частей верхней поверхности, а также изнутри фекальных масс. Все забранные части кала помещают в контейнер и плотно закрывают крышку. К контейнеру приклеивают бумажку с фамилией, именем и отчеством и быстро транспортируют в лабораторию.

Для наиболее точных результатов оптимально сдать пробы кала на яйца глист в лабораторию в течение 30 – 45 минут после дефекации и их забора. Однако если в течение такого короткого срока сдать пробу кала в лабораторию невозможно, то это можно сделать в течение максимум 5 – 8 часов, обязательно сохраняя фекалии в холодильнике при температуре +4 +8 o С. Если пробы кала дольше 60 минут пролежали не в холодильнике, а в теплом помещении, то они не пригодны для сдачи на яйца глист. В таком случае придется выбросить испорченную пробу и собрать новую после следующей дефекации.

Для точной и исчерпывающей диагностики необходимо сдать всего три пробы кала. Причем собирать пробы можно ежедневно или через 1 – 2 дня. Итоговый результат исследования можно получить только после исследования трех проб.

В норме результат анализа кала на яйца глист во всех трех пробах должен быть отрицательным. Это означает, что яйца гельминтов не обнаружены, и человек не заражен паразитическими червями.

Положительный результат хотя бы в одной из проб кала является показателем того, что у человека обнаружены гельминты, и, следовательно, он заражен паразитическими червями. В такой ситуации потребуется пройти курс лечения и через месяц после его окончания сдать повторный анализ кала.

Если результат анализа кала на яйца глист положительный, то в нем указано, какой именно вид паразитических гельминтов был обнаружен. Примерная формулировка положительного анализа кала на яйца глист следующая: «Положительно, яйца аскарид». В каждой лаборатории формулировка может незначительно варьироваться, но в ней обязательно будет присутствовать термин «положительно», означающий наличие паразитических червей, и название вида гельминтов, яйца которых были обнаружены.

Выявление паразитарных червей в пробах кала в лаборатории осуществляют при помощи методов копроовоскопии (гельминтоовоскопии), то есть обнаружения яиц гельминтов. В лабораториях для диагностики паразитов у человека обычно используют три основных метода копроовоскопии:
1. Микроскопия нативного мазка;
2. Метод Фюллеборна;
3. Метод Талемана.

Обычно пробу кала последовательно подвергают всем трем методам копроовоскопии. Причем в первую очередь производят микроскопию нативного мазка, а затем в произвольном порядке делают пробу Фюллеборна и Талемана.

Проба Фюллеборна заключается в смешивании фекалий с соленой водой, которая имеет высокую плотность и удельный вес, за счет чего яйца гельминтов всплывают на ее поверхность. Для проведения пробы 10 г кала размешивают со 100 мл 50% раствора поваренной соли. Раствор готовят следующим образом – 450 – 500 г соли растворяют в 1 литре воды, нагрев ее до температуры 50 – 70 o С.

Смесь кала с соленой водой ставят в спокойное место на 1 – 1,5 часа, чтобы яйца гельминтов всплыли на поверхность раствора. По прошествии необходимого количества времени появившуюся на поверхности пленку снимают петлей и наносят ее на предметное стекло. Пленку закрывают покровным стеклом и изучают под микроскопом.

Проба Талемана представляет собой смешивание кала с соляной кислотой и эфиром, при помощи которых выделяют яйца глистов. Для производства пробы Талемана небольшое количество кала смешивают с 3 – 4 мл 30% соляной кислоты и 15 – 20 мл дистиллированной воды. Затем к взвеси кала добавляют 1 – 1,5 мл эфира, тщательно перемешивают и закрывают сосуд плотно притертой или резиновой крышкой. Затем сосуд несколько раз опрокидывают горлом вниз, перемешивая содержимое. После этого взвесь фильтруют через один слой марли и центрифугируют. Полученный после центрифугирования осадок помещают на предметное стекло, закрывают покровным стеклом и изучают под микроскопом.

Если хотя бы в одной пробе были обнаружены яйца гельминтов, то результат анализа считается положительным.

Сдать анализ кала на глисты можно в любой клинико-диагностической лаборатории в муниципальной поликлинике или больнице. Однако для максимально достоверного результата рекомендуется сдавать анализ кала в специализированных бактериологических лабораториях, которые имеются при санитарно-эпидемиологических службах каждого города или района.

Кроме того, сдать анализ можно в частной лаборатории или клинике, имеющей лицензию на проведение подобного диагностического исследования.

Автор: Наседкина А.К. Специалист по проведению исследований медико-биологических проблем.

источник

В клинической практике осуществляется макроскопическое, микроскопическое и химическое исследование кала. Важнейшим условием является методически правильный сбор материала. Кал доставляется в лабораторию для исследования в количестве, по­лученном за одну дефекацию, свежевыделеным, в чистой сухой стеклянной или парафинированной посуде.

Копрологическое исследование проводится на обычной дие­те, на которой находится больной. При отсутствии патологиче­ских изменений в копрограмме, но наличии клинических симпто­мов, указывающих на нарушение функций кишечника, копрологическое исследование повторяется с применением нагрузочных диет. Эти диеты способствуют выявлению нарушений пищеварения. Сада относятся диеты Шмидта и Певзнера.

Диета «Шмидта включает 1-1,5 л молока, 2-3 яйца всмятку, 125 г. слабо прожаренного рубленного мяса, 200-250 г.картофе­ля, слизистого отвара, 100г. белого хлеба, 50 г масла.

Диета Певзнера включает 400 г хлеба, из них 200 г черно­го, 250 г мяса, жареного куском, 100 г масла, 40 г сахара, гречневая и рисовая каши, жареный картофель, морковь, салат, компот.

При подготовке больного для исследования на скрытую кровь в кале в течение 3-4 дней исключают мясо, рыбу, вое ви­ды зеленых овощей, а также помидоры.

Макроскопическое исследование кала

При макроскопическом исследовании определяются физические свойства кала: количество, форма, цвет, примеси.

Количество кала у здорового человека за сутки составляет 120-200 г. При патологических состояниях, сопровождающихся на­рушением усвоения пищи (хронический энтерит, хронический панк­реатит) количество кала увеличивается в сутки — полифекалия. Форма нормального кала цилиндрическая, колбасовидная, консистенция плотноватая. Такой кал называется оформленным. Не­оформленный, жидкий кал наблюдается при поносах; фрагментированный, в виде плотных округлых комочков («овечий») – при запорах. Лентовидный кал может быть вследствие сужения просвета прямой кишки (опухоль, большой полип, воспалительная стрикту­ра).

Цвет нормального кала коричневый и обусловлен наличием пигмента стеркобилина. Изменения цвета кала имеют определенное диагностическое значение. Черный, дегтеобразный кал появляется при гастродуоденалыных или кишечных кровотечениях, он обусло­влен превращением гемоглобина в сернистое железо. Белый или глинистый кал отмечается у больных с желтухами при обтурации (полной или частичной) желчных путей. Ярко-желтая окраска ка­ла зависит от наличия в нем лира, чаще наблюдается при хрони­ческих энтеритах, хронических панкреатитах. Следует помнить, что цвет каловых масс может изменяться при приеме некоторых лекарственных препаратов. Барий придает калу светло-желтый или белый цвет, карболен и висмут — черный, пурген — красноватый. При холере испражнения имеют вид рисового отвара, при брюшном тифе — горохового супа.

В кале могут обнаруживаться примеси непереваренной пищи — кусочки мяса, овощей. Это монет быть следствием нарушения процессов переваривания пищи в желудке, кишечнике, недостаточности функции поджелудочной железы, а также у лиц с нарушнием функций жевательного аппарата. Слизь в кале обнаружива­ется при острых и хронических воспалительных процессах в дистальных отделах толстой кишки, а также при дискенезиях ки­шечника. Кровь может обнаруживаться в виде прожилок, слизисто-кровянистых комочков или в виде сгустков. Это бывает при острых и хронических колитах (особенно язвенном), опухолях, геморрое, трещинах заднего прохода. Иногда в кале могут быть обнаружены гельминты или членики гельминтов.

Микроскопическое исследование кала

Реактивы: I. Раствор Судана Ш. Порошок судана тщательно растирают со спиртом в ступке. Затем постепенно приливается уксусная кислота. Цвет реактива ярко-красный. Препарат филь­труют.

2. Раствор Люголя йода I г, йодистого калия 2 г, дистил­лированной воды 50 мл. Растворить йод в растворе йодистого ка­лия с небольшим количеством вода, затем прибавить остальное количество вода.

Для микроскопического исследования кала готовят три пре­парата: нативный, окрашенный раствором Люголя (для выявления крахмала), окрашенный Суданом Ш (для выявления жиров).

Кусочек кала величиной, с лесной орех помещают в ступку, добавляют немного водопроводной вода и растирают до консистен­ции жидкой кашицы. Капли приготовленной эмульсии стеклянной палочкой наносят на предметные стекла и готовят нативный пре­парат. Для приготовления окрашенных препаратов раствором Люголя или Судана Ш, каплю эмульсии краем покровного стекла смешивают с каплей реактива и накрывают покровным стеклом. Затем препараты микроскопируют.

При микроскопическом исследовании различают следующие элементы: остатки пищи, элементы слизистой оболочки кишечника.

К остаткам пищи относятся мышечные волокна (измененные и неизмененные), соединительная ткань, растительная клетчат­ка, аир.

Мышечные волокна различают неизмененные (сохранившие по­перечную исчерченность) и измененные (утратившие поперечную исчерченность). В нормальном кале может быть небольшое коли­чество измененных мышечных волокон. При появлении большого количества неизмененных мышечных волокон можно предполагать недостаточную выработку пепсина в желудочном соке; увеличение количества измененных мышечных волокон свидетельствуют о недо-статочной выработке трипсина, пептидаз, что бывает при хрони­ческих панкреатитах, хронических энтеритах.

Увеличение мышечных волокон в кале называется креатореей.

Соединительная ткань обнаруживается в кале в виде волокон слегка преломляющих свет. В норме она не обнаруживается. Появ­ление в кале наблюдается при секреторной недостаточности же­лудка, недостаточности внешнесекреторной функции поджелудоч­ной железы, при плохом прожевывании пищи.

Растительная клетчатка и крахмал — остатки углеводной пи­щи. Различают два вида клетчатки — неперевариваемую и перева­риваемую. Неперевариваемая клетчатка в кишечнике не расщепляется и выделяется неизменной. К ней относятся грубые части растительной пищи — кожица, сосуды, волоски. Неперевариваемая клетчатка имеет разнообразные резкие очертания, правильный рисунок. Перевариваемая клетчатка состоит из круглых больших клеток, имеющих тонкую оболочку и ячеистое строение. В нормальном кале перевариваемая клетчатка отсутствует. Обнаружи­вается в кале при ускоренной эвакуации, при дисбактериозе, когда нарушается состав микрофлоры илеоцекальной области, где происходит расщепление клетчатки. Крахмал распознается в окра­шенных раствором Люголя препарата. Он может находиться внутриклеточно и внеклеточно в виде зерен различной величины фиолетового или красноватого цвета. Увеличение, количества крахмала — амилорея. Внеклеточный крахмал обнаруживается при недостаточной амилолитической функции поджелудочной железы, тонкой кишки, внутриклеточный — при недостаточном расщеплении микробными ферментами в слепой кишке.

Жиры в кале обнаруживаются в виде нейтрального жира, жир­ных кислот и мыл (солей жирных кислот). Нейтральный жир имеет вид капель оранжевого цвета (oкраска Суданом Ш), жирные ки­слоты обнаруживаются в виде капель, кристаллов игл и глыбок, мыла — в виде кристаллов игл и глыбок. Увеличение в кале ней­трального жира (стеаторея) наблюдается при недостаточной ли-политической функции поджелудочной железы, жирных кислот и мыл — при нарушениях всасывания в тонкой кишке, расстройствах желчеотделения.

Элементы слизистой оболочки кишечника — слизь, эритроци­ты, лейкоциты, эпителиальные клетки, клетки злокачественных опухолей.

Слизь имеет вид светлых тяжей. В норме обнаруживается редко. Количество слизи увеличивается при патологических про­цессах в дистальных отделах толстой кишки (колит, дизентерия, язвенные иопухолевые процессы).

Лейкоциты — располагаются в слизи группами или тяжами. Они бывают при воспалительных процессах в прямой, сигмовидной кишке (дизентерия, амебиаз, язвенный колит, колиты).

Эритроциты — обнаруживаются в виде желтоватых дисков при язвенных, воспалительных процессах, при трещинах заднего про­хода, опухолях толстой кишки, геморрое.

По совокупности выявляемых при копрологическом исследова­нии признаков выделяются определенные синдромы, соответствую­щие расстройствам различных отделов пищеварительного аппарата.

1. Гастрогенный синдром. Развивается у больных хроническими гастритами с секреторной недостаточностью, когда уменьшается выработка соляной кислота и пепсина. Кал чаще всего оформлен. Микроскопически определяются неизмененные и измененные мышеч­ные волокна, соединительная ткань, перевариваемая клетчатка. 2. Энтеральный синдром недостаточности пищеварения. Чаще всего развивается у больных хроническим энтеритом, когда нару­шаются пищеварительная к всасывательная функции тонкой кишки. Кал неоформленный, светло-жёлтый, микроскопически в нем опре­деляются жирные кислоты, реже нейтральный жир); в значительном количестве изменённые мышечные волокна, внеклеточный крахмал. 3.Панкреатический синдром или синдром недостаточности панкреатического пищеварения. Макроскопически кал такой же как и при энтеральном синдроме. Миикроскопически в большом ко­личестве определяются нейтральный жир, внеклеточный крахмал, измененные мышечные волокна.

4.Илеоцекальный синдром. Развивается у больных с нарушения­ми процессов пищеварения в проксимальных отделах толстой киш­ки — при колитах, дисбактериозе, кишечника. Кал чаще всего неоформленный, золотисто-желтого цвета. Микроскопически в большом количестве выявляются внутриклеточный крахмал, перева­риваемая клетчатка, обильная иодофильная флора.

5. Дискинетический коли-дистальный синдром. Отмечается у больных с нарушениями двигательной функции толстой кишки, обычно при запорах. Макроскопически кал фрагментирован, неред­ко окутан слизью. Микроскопически определяется дескваамированный эпителий кишечника, единичные лейкоциты, практически нет остатков пищевых продуктов.

6. Дистально — колитический синдром. Отмечается в тех случаях, когда выражены воспалительные изменения в дистальных отделах толстой кишки. Кал не оформлен, содержит слизь, прожилки крови, микроскопически определяются лейкоциты, эритроциты, десквамировшшый эпителий.

Химическое исследование кала

При клиническом анализе кала химическое исследование обычно ограничивается определением Скрытой крови в кале. Принцип: каталитическое свойство гемоглобина и окисление ве­ществ в присутствии окислителей (перекись водорода, скипидар) с образованием цветной реакции.

Бензидиновая проба (реакция Грегерсена).

2. Раствор уксусной кислоты 50%, перед употреблением много бензидина (на кончике ножа) растворяют в 5 мл уксусной кислоты.

3. Раствор перекиси водорода (3%) или лучше пергидроль, разведенный в 10 раз.

Неразведенный кал наносят толстым слоем на предметное, стекло, добавляют 2-3 капли раствора бензидина в уксусной ки­слоте и столько же перекиси водорода. Перемешивают стеклян­ной палочкой. Положительная реакция на кровь дает зеленое или сине-зеленое окрашивание в течение первых 2 минут.

Положительные реакции на скрытую кровь обнаруживают при так называемых скрытых «оккультных» кровотечениях у больных язвенной болезнью, при злокачественных распадающихся опухолях желудочно-кишечного тракта.

Приводим некоторые примеры исследования кала при заболе­ваниях пищеварительной системы.

Больной П. Клинический диагноз: хронический энтероколит с преимущественным поражением тонкой кишки. Копрограмма. Кал жидкой консистенции, светло-желтый. Гироскопически: изменен­ные мышечные волокна в большом количестве, жирные кислоты в большом количестве, внеклеточный крахмал в (бльшом количестве, нейтральный жир — единичные капли.

Больная С. Клинический диагноз: неспецифический язвенный колит. Копрограмма: кал жидкий, даёт коричневый, слизь. Микро­скопически: лейкоциты 10-20 в поле зрения, эритроциты 20-30 в поле зрения, клетки эпителия 10-15 в поле зрения.

Больная И. Клинический диагноз: хронический энтероколит с преимущественным поражением толстой кишки: вне обострения, выраженный дискинетический синдром (запоры). Копрограмма: кал фрагментирован. Микроскопически: клетки кишечного эпителия единичные в поле зрения, растительная клетчатка неперевариваемая — единичные волокна.

Больная 3. Клинический диагноз: хронический рецидивирующий панкреатит. Копрограмма: кал неоформленный, светлый. Микроскопически: нейтральный жир в большом количестве, внеклеточный., крахмал в большом количестве, измененные мышечные волокна в большом количестве.

Алексеев-Беркман И.А. Клиническая копрология,- Л., 1954. Василенко В.X., Гребенев А.Л., Михайлова Н.Д. Пропедевти

ка внутренних болезней. — М.; Медицина, 1974. Козловская Л.В., Мартынова М.А, Учебное пособие по клиническим лабораторным методам исследования.- М.: Медицина, 1975.

Справочник по клиническим лабораторным методам исследова ния. — М.; Медицина, 1968.

Неменова Ю.М. Метода лабораторных клинических иеследо -ваний. — М.: Медицина, 1972.

Лабораторные метода клинического исследования. — Варшава! 1965.

Фиюон-Рыос Ю.И. Современные метода исследования желудоч­ной секреции. Л.: Медицина, 1972.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Увлечёшься девушкой-вырастут хвосты, займёшься учебой-вырастут рога 9653 — | 7596 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте, носовой и влагалищной слизи, содержимом подногтевых пространств, биопсированных кусочках ткани.

Косвенные методы: выявление вторичных изменений, возникающих в организме человека в результате жизнедеятельности паразита, серологическими реакциями, общим исследованием крови, мочи.Наиболее распространенными методами исследования фекалий являются гельминтоовоскопические и протозооскопические.

При диагностике нельзя каким-либо одним методом выявить яйца или личинки всех видов гельминтов, обитающих в пищеварительной системе человека. Так, при использовании метода флотации в поверхностную пленку не всплывают (из-за высокого удельного веса) яйца трематод, в некоторых случаях неоплодотворенные яйца аскарид. В кале очень редко можно обнаружить яйца остриц, онкосферы тениид, которые выявляются специальными методами исследований: соскоб с перианальных складок для остриц и тениид, методы осаждения для трематод (яйца описторха и др.). Поэтому для целенаправленного обследования больного на гельминтозы врач в направлении должен указать, на какие гельминты следует обратить основное внимание (диагноз), что позволит лаборанту выбрать соответствующую методику для выявления данного вида гельминта. Фекалии, взятые из разных мест испражнений в количестве не менее 50 граммов (чайная ложка) в чистую стеклянную посуду, должны быть отправлены в лабораторию не позднее чем через сутки после дефекации и исследованы в день поступления.

В случае необходимости сохранения кала до следующего дня его помещают в холодное место (0-4°С) или заливают одним из консервантов.

Перед исследованием кал перемешивают палочкой, чтобы яйца гельминтов оказались равномерно распределенными в общей массе.

При обнаружении в препарате яиц какого-либо гельминта просмотр не прекращают, т.к. может быть двойная или тройная инвазия.

Контроль за эффективностью лечения гельминтозов осуществляется путем исследования фекалий на яйца гельминтов через 2-3 недели или через 2-3 месяца после лечения в зависимости от обнаруженного гельминта.

Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы.

Часто на поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; выделяются с калом аскариды; иногда люди сами замечают отхождение гельминтов. У больных дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца (в виде «лапши»), а у инвазированных тениидами (свиной или бычий цепень) с калом часто отходят членики гельминтов ( в виде «белых обсечек») или они активно выползают из анального отверстия.

Макроскопический метод является основным для дифференциальной диагностики тениидоза и тениаринхоза (в сочетании с опросом).

Из специальных макроскопических методов применяется метод последовательного промывания фекалий.

Фекалии размешиваются в воде для получения равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении их тщательно просматривают отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. Пинцетом или препаровальной иглой извлекают все подозрительные белые частицы, крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, и рассматривают их под лупой между двумя предметными стеклами. Мелких гельминтов или головки цестод рассматривают под лупой в капле глицерина или под микроскопом.

При использовании этого метода для диагностики члеников свиного, бычьего цепней, широкого лентеца отмытые членики помещают между двумя стеклами и, просматривая на свет под лупой или малым увеличением микроскопа, определяют видовую принадлежность по строению матки (у зрелого членика свиного цепня от центрального ствола отходят 8-12 боковых ответвлений, а у бычьего цепня 18-32, чаще 28-32, у широкого лентеца членики больше в ширину и матка в центре в виде «розетки»). Если матку плохо видно, то ее предварительно можно подержать некоторое время в 50% растворе глицерина, после чего даже запустевшие стволы матки просматриваются хорошо.

При определении этих цестод по строению отошедших головок их с шейкой осторожно кладут в каплю глицерина между предметными стеклами (или покрывают покровным стеклом) и, не передавливая, рассматривают под микроскопом при малом увеличении.

Для установления вида обнаруженного паразита необходимо знать биолгическое строение половозрелых форм, фрагментов и их размеры.

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся методы нативного мазка, нативный мазок раствором Люголя, методы толстого мазка под целлофаном по Като, закручивания (по Шульману) и перианального соскоба.

Сложные методы являются более эффективными и основаны на концентрации яиц в препаратах. Они включают в себя предварительную обработку фекалий жидкими реактивами, в результате чего яйца гельминтов или выпадают в осадок, или всплывают на поверхность жидкости.

К сложным методам относятся методы обогащения:

а) флотационные (когда удельный вес яиц меньше удельного веса солевого раствора и яйца всплывают в поверхностную пленку);

б) седиментационные (когда удльный вес яиц больше удельного веса солевых растворов и яйца оседают в осадок).

Специальными методами обнаружения яиц и личинок гельминтов, цист и вегетативных форм простейших являются методы соскоба, флотации, седиментации, ларвоскопии, протозооскопии, исследование желчи и методы окраски мазков кала, мокроты и др.

Простые методы исследования фекалий

Нативный мазок. Небольшую частицу испражнений берут деревянной палочкой из различных участков доставленной порции, хорошо растирают на предметном стекле в капле 50%-ного раствора глицерина и делают на 2-3 предметных стеклах тонкий мазок. Просматривают под микроскопом не менее 3 препаратов. Недостаток метода: просматривается малое количество материала, поэтому как самостоятельный метод не применяется.

Метод закручивания (Шульмана). 2,0-3,0 г испражнений кладут в стаканчик, тщательно размешивают стеклянной палочкой с 5-кратным объемом физиологического раствора или дистиллированной воды, производя быстрые движения в течение 2-3 мин, и быстро вынимают палочку из смеси. Каплю смеси на конце палочки переносят на предметное стекло и микроскопируют. Принцип центробежной силы вызывает скопление яиц и личинок на палочке.

Метод толстого мазка по Като с целлофаном. Химические реактивы:100%-ный глицерин, 6%-ный раствор фенола (100 мл воды + 6 г фенола), 3%-ный раствор малахитовой зелени (2,5 мл дистиллированной воды + 75 мл малахитовой зелени).

Приготовление рабочего раствора: 100 мл 6%-ного раствора фенола + 100 мл чистого глицерина + 1,2 мл 3%-ного раствора малахитовой зелени.

Приготовление целлофановых полосок: нарезаются полоски из целлофана, размер которых соответствует предметному стеклу. Целлофан должен быть гидрофильный (пригоден целлофан, который горит; если плавится, то непригоден). В рабочем растворе можно обработать до 5 тыс. полосок. Срок экспозиции целлофановых полосок до готовности к употреблению в рабочем растворе не менее 24 час.

Ход исследования. На предметное стекло наносят 50 мг фекалий (с крупную горошину), растирают индивидуальной палочкой (стеклянной, деревянной), накрывают целлофановой полоской и сверху притирают резиновой пробкой до получения равномерного толстого мазка. Препарат высушивают при комнатной температуре в течение часа или в термостате при 40°С в течение 20-30 мин и микроскопируют (время выдержки можно увеличить при комнатной температуре до 5-6 час и более).

По эффективности данный метод приближается к методу флотации, но выявляет инвазию интенсивную и средней интенсивности.

Применяется как самостоятельный метод диагностики и рекомендуется для массового обследования населения.

В клинико-диагностических лабораториях применяется как унифицированный метод диагностики гельминтов при отсутствии в направлениях врачей конкретных диагнозов.

Методы перианального соскоба и нативного мазка с раствором Люголя описаны в разделе специальных методов.

Сложные методы обогащения фекалий

В основу методов обогащения положена разность удельного веса яиц гельминтов и применяемого солевого раствора.

При применении метода флотации могут быть использованы следующие солевые растворы:

1. Раствор нитрата свинца PbNO3 (азотнокислого свинца) с плотностью 1,5. Готовится из расчета 650 г вещества на 1 л воды. Соль растворяют порциями в горячей воде в эмалированной посуде, подогревая на плите и постоянно помешивая до полного растворения. Фильтровать раствор не обязательно. Раствор готовят в день исследования, так как со временем он дает осадок, и плотность его начинает падать уже через 24 ч. Если раствор приготовлен в большом количестве, то в последующие дни перед исследованием его подогревают, размешивая осадок. Приготовление раствора производится в вытяжном шкафу, так как нитрат свинца – соль тяжелого металла.

2. Раствор нитрата аммония NH4NO3 (гранулированной или обычной аммиачной селитры) с плотностью 1,3 готовят так же, как и предыдущий, но из расчета 1500 г вещества на 1 л горячей воды.

3.Раствор нитрата натрия NaNO3 или азотнокислого натрия с плотностью 1,38-1,4 готовят из расчета 1000 г вещества на 1 литр горячей воды.

4. Раствор тиосульфата натрия Na2S2O3×5H2O (гипосульфита натрия) с плотностью 1,4 готовят из расчета 1750 г вещества на 1 л горячей воды.

5. Раствор сульфата натрия Na2SO4 (английской соли) с плотностью 1,26-1,28 готовят из расчета 920 г вещества на 1 л горячей воды.

6. Раствор хлорида цинка ZnCl2 (хлористого цинка) с плотностью 1,82 готовят из расчета 2000 г вещества на 1 л горячей воды. Остывший раствор не кристаллизуется.

7. Насыщенный раствор хлорида натрия NaCl (поваренная соль) с плотностью 1,18-1,2. На ! л воды добавляют 400-420 г соли порциями в эмалированное ведро с кипящей водой, постоянно размешивая до полного растворения. При остывании раствора выпадают кристаллы хлорида натрия.

Удельный вес флотационных растворов измеряется аэрометром только после полного остывания раствора при комнатной температуре.

Методы флотации наиболее эффективны для обнаружения яиц карликового цепня, власоглава, анкилостомид, аскарид, широкого лентеца.

Поверхностную пленку можно снимать с помощью проволочной петли или предметного стекла.

В насыщенном растворе поваренной соли пленку можно исследовать через 30-40 мин, в растворе аммиачной селитры – через 10-20-30 мин после отстаивания.

При снятии пленки проволочной петлей исследуют не менее 8 капель.

Предметные стекла снимают с пленки больше яиц, чем проволочные петли. Стекло должно соприкасаться с жидкостью флотационного раствора, которую добавляют в стаканчик пипеткой. После отстаивания стекло снимают, кладут смоченной поверхностью вверх на стекло большего размера и исследуют под микроскопом. Предметные стекла перед использованием обязательно обезжиривают.

Методы флотации известны по фамилиям их авторов (Калантарян, Фюллеборна и др.). Принципиально их методики различаются только по удельному весу применяемого флотационного раствора.

Для проведения исследований необходимо иметь: предметные стекла, химические стаканчики, проволочные петли, кюветы, чашки Петри, пипетки, груши, стеклянные или деревянные палочки.

Ход исследования. 5 г фекалий заливают 10-кратным количеством флотационного раствора (лучше удельным весом 1,38-1,40), тщательно размешивают, снимают сверху не растворяющиеся крупные частицы и оставляют взвесь на 10-15 мин. Затем пленку снимают либо петлей на предметное стекло, либо предметным стеклом. Для разведения испражнений лучше взять стаканчики емкостью 30-50 мл, налить раствор вровень с краями (или недоливать 2-3 мм) и смесь покрыть предметным стеклом, а затем пипеткой добавить флотационный раствор до его соприкосновения с предметным стеклом. Через 10-20 мин стекло быстро снять и оставшуюся на нем пленку микроскопировать без покровного стекла.

Методы седиментации применяются для выявления в кале яиц геогельминтов, биогельминтов и как специальные методы исследования на описторхоз.

Метод Горячева-Золотухина (упрощенный метод Горячева). Около 1,5 г кала размешивают в химическом стаканчике в 3-4 мл воды. Полученную взвесь фильтруют через два слоя марли в центрифужную пробирку, наслаивая осторожно сверху на имеющиеся в ней 4-5 мл насыщенного раствора поваренной соли. Пробирки ставят в штатив на 15-20 ч. За это время тяжелые яйца трематод оседают. Получают два четко разграниченных слоя. Осадок микроскопируют.

Эфир-формалиновый метод. Применяется для диагностики всех кишечных инвазий и как специальный метод на простейшие и яйца описторхов.

Оборудование: центрифуга на 3000 об/мин; центрифужные градуированные пробирки, воронки; металлическое ситечко (чайное) или двухслойный бинт; предметные и покровные стекла; деревянные (или стеклянные) палочки; вата, бинт.

Химреактивы: 10%-ный раствор формалина (1 часть раствора формалина аптечного и 4 части дистиллированной воды); этиловый эфир (медицинский).

В центрифужные пробирки наливают 7 мл 10%-ного раствора формалина и помещают 1 г фекалий (такое количество фекалий, чтобы раствор в пробирке поднялся до 8 мл). Фекалии смешивают с формалином до образования однородной смеси, а затем через металлическое ситечко (или двухслойную марлю, бинт) переливают в другую центрифужную пробирку (если на ситечке остались фекалии, то ситечко надо ополоснуть формалином). Добавить 2 мл эфира в эту центрифужную пробирку, закрыть пробкой и энергично встряхивать в течение 30 сек.

Смесь центрифугируют при 3000 об/мин в течение одной минуты (можно в течение двух минут при 1500 об/мин). За счет реакции эфир-формалина происходит коагуляция белков в виде пробки вверху пробирки, а в осадок выпадают яйца гельминтов. Слой коагулянта убирают, сливается надосадочная жидкость, осадок наносится на предметное стекло прямо из пробирки или пастеровской пипеткой, накрывается покровным стеклом и просматривается под микроскопом.

Метод эфир-уксусного осаждения. Принцип эфир-уксусного осаждения яиц гельминтов заключается в последовательной обработке проб фекалий 10%-ным водным раствором уксусной кислоты и эфиром. Уксусная кислота лучше других химических соединений эмульгирует пробу фекалий. Она проникает в непереваренные частицы, состоящие преимущественно из клетчатки, которые при большом содержании мешают исследованиям, выпадая в осадок после центрифугирования. Последующее добавление в пробирку эфира и перемешивание приводит к извлечению из содержимого пробирки уксусной кислоты вместе с пропитанными ею каловыми частицами. Так как удельный вес смеси эфира с уксусной кислотой меньше удельного веса воды, пробы кала, обработанные этими веществами, всплывают, а яйца гельминтов, обладающие большим удельным весом, оседают.

Количество осадка, полученного после эфир-уксусного осаждения, в 3-4 раза меньше, чем после эфир-формалинового. Это значительно облегчает обнаружение в нем яиц гельминтов и позволяет исследовать осадок целиком при навеске в 0,5-1 г. Токсичность эфир-уксусного метода в 5 раз ниже.

Ход исследования. В градуированную центрифужную пробирку наливают 7 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и вносят навеску кала 1 г (т.е. такое количество кала, при котором раствор уксусной кислоты поднимается до 8 мл). Тщательно размешивают стеклянной или деревянной палочкой. Процеживают через воронку с двумя слоями марли в другую центрифужную пробирку. К эмульгату добавляют 2 мл этилового эфира (т.е. до 10 мл). Пробирки закрывают резиновой пробкой (можно от пенициллинового флакона) и встряхивают 15 сек. Убрав пробку, пробирки центрифугируют в течение одной минуты при 3000 об/мин в течение 2 мин. Надосадочную жидкость из пробирки сливают. В некоторых случаях образовавшаяся каловая пробка мешает сливу надосадочной жидкости. В этом случае стеклянной или деревянной палочкой отделяют пробку от стенок пробирки. Осадок пипеткой целиком переносят на предметное стекло и микроскопируют под покровным стеклом при малом увеличении. Осадок, как правило, небольшой, бесцветный. Яйца гельминтов, особенно мелкие яйца трематод, хорошо обнаруживаются.

Химико-седиментационный метод. Принцип исследования основывается на осаждении яиц из пробы фекалий в солевом растворе с удельным весом 1,15. Сущность метода заключается в непосредственном центрифугировании пробирки, в которой на раствор азотнокислого натрия (уд. вес 1,16) наслоена пробка кала, эмульгированная в 1%-ном растворе уксусной кислоты. Высокий удельный вес солевого раствора и выделяемые за счет химической реакции пузырьки, пронизывающие слой гомогенизированного кала, препятствуют его осаждению. Яйца гельминтов выпадают в осадок с небольшим количеством клетчатки. Осадок можно очистить от оставшегося детрита, обработав его 10%-ным раствором уксусной кислоты и эфиром. В этом случае остаются только одни яйца гельминтов, что значительно облегчает их выявление.

Ход исследования. В градуированную центрифужную пробирку наливают 6 мл раствора азотнокислого натрия с удельным весом 1,15. В другую пробирку наливают 7 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты. Вносят пробу фекалий (до метки 7,5 мл при пробе 0,5 г и до 8 мл при пробе в 1,0 г). Тщательно перемешивают пробу стеклянной палочкой. Процеживают через воронку с одним слоем марли, наслаивая на раствор азотнокислого натрия. Пробирку с наслоенным фильтратом центрифугируют при 1500-2000 об/мин в течение 5 мин. Быстрым переворачиванием пробирки сливают надосадочную жидкость. В пробирку с осадком добавляют 3-4 мл 10%-ного раствора уксусной кислоты и 0,5 мл эфира, закрывают резиновой пробкой и встряхивают. Проводят повторное центрифугирование в течение 1 мин. Сливают надосадочную жидкость. Осадок переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

ГЕЛЬМИНТОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ЖЕЛЧИ, ДУОДЕНАЛЬНОГО СОДЕРЖИМОГО, МОКРОТЫ, КРОВИ, МОЧИ И МЫШЦ

Обнаружение яиц и личинок гельминтов в дуоденальном содержимом и желчи. Исследование желчи и дуоденального содержимого производится при подозрении на гельминтозы печени и желчного пузыря (описторхоз, клонорхоз, дикроцелиоз) и двенадцатиперстной кишки (стронгилоидоз).

Ход исследования. Дуоденальное содержимое и желчь (порции А, В, С) получают обычным путем при помощи зондирования. Для порции В рекомендуется обязательно получать рефлекс желчного пузыря введением через зонд 33% раствора сернокислой магнезии. Из исследуемой жидкости выбирают и просматривают под микроскопом плавающие в ней хлопья, а затем смешивают ее с равным количеством серного эфира. Смесь тщательно взбалтывают и центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а весь осадок исследуют под микроскопом.

При отсутствии гноя и слизи желчь и дуоденальное содержимое центрифугируют, не смешивая с эфиром.

Исследование мокроты. В гельминтологической практике исследование мокроты проводится с целью лабораторной диагностики парагонимоза. Иногда при этом выявляются яйца шистосом, личинки аскариды, элементы эхинококкового пузыря.

Из мокроты готовят нативный мазок на предметном стекле, который исследуют под микроскопом.

При обильном содержании в мокроте гноя ее смешивают с 0,5% раствором едкого натра или едкого калия, встряхивают в течение 5 минут и центрифугируют. Осадок микроскопируют.

Исследование крови. Кровь исследуют при подозрении на наличие у больного филяриозов.

В связи с тем, что при некоторых видах филяриозов (лоаоз, вухерериоз, вызванный субпериодическим штаммом) личинки (микрофилярии) бывают в периферической крови только днем, а при некоторых (бругиоз, вухерериоз, вызванный периодическим штаммом) – только ночью, соответственно в это время берут кровь для анализа.

Техника забора крови, приготовления препаратов (тонкий мазок и толстая капля), их окрашивания (по Романовскому) и исследование аналогичны таковым при лабораторной диагностике малярии.

Микрофилярии разных видов отличают по длине, ширине, изгибу тела, наличию или отсутствию чехлика, форме хвостового конца, расположению ядерной субстанции в теле и хвостовом отделе личинок.

Исследование мочи. Мочу подвергают паразитологическому исследованию при лабораторной диагностике мочеполового шистосомоза. Иногда в моче могут быть обнаружены элементы пузырной личинки эхинококка, а также яйца гельминтов, попавшие с промежности.

Ход исследования. Мочу отстаивают не менее 30 мин, затем верхний слой сливают, оставляя 10-15 мл осадка, которые разливают в центрифужные пробирки, и центрифугируют в течение 1-2 мин. Слив надосадочную жидкость, осадок переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.

ИССЛЕДОВАНИЕ БИОПТАТОВ МЫШЦ

Метод трихинеллоскопии. Необходимость в исследовании биоптатов мышц больного возникает при подозрении на трихинеллез.

Биопсия проводится по общим правилам. Обычно делают биопсию дельтовидной мышцы. При паталогоанатомическом исследовании можно делать биопсию мышц диафрагмы, пищевода, языка, жевательных и межреберных мышц, сгибателей конечностей, мышц глазного яблока, так как они наиболее интенсивно поражаются личинками трихинелл.

В лаборатории биопсированный кусочек мышц разрезают на очень мелкие кусочки (микротомом), которые помещают между двумя стеклами, раздавливая мышечные волокна, и исследуют под микроскопом. В настоящее время для этой цели широко используются специальные микроскопы – трихинеллоскопы.

В случае трихинеллеза при трихинеллоскопии по ходу мышечных волокон обнаруживаются резко выделяющиеся овальной формы (похожие на лимон) трихинеллезные капсулы. Средняя величина капсул у человека составляет 0,4 х 0,26 мм. В капсуле, как правило, содержится одна спирально свернутая в 2,5 оборота трихинелла. При высокой интенсивности инвазии в одной капсуле может быть 2 или 3 личинки. Смежные с капсулой мышечные волокна теряют свою поперечную исчерченность и принимают гомогенный вид.

Таким же способом исследуют мясо или мясные продукты, явившиеся причиной заражения.

Метод переваривания мышц. Метод более эффективен.

Ход исследования. Исследуемые мышцы мелко измельчают и заливают искусственным желудочным соком в соотношении 1:15-20. Полученную смесь помещают в термостат при 37°С на 12-16 ч. По истечении этого срока микроскопируют осадок, в котором среди массы остатков переваренных мышечных волокон обнаруживаются личинки трихинелл в свободном состоянии.

Искусственный желудочный сок можно приобрести в аптеке или приготовить в лаборатории. Для этого к 1 л дистиллированной воды добавляют 10 мл концентрированной хлористоводородной кислоты; перед использованием к 1 л разведенной кислоты добавляют 30 г пепсина.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Количественные методы исследования применяются при определении интенсивности инвазии, оценке эффективности различных антигельминтных препаратов, определении качества дегельминтизации, контроле проводимых массовых лечебно-профилактических мероприятий и др.

В связи с тем, что количество яиц, выделяемых каждым гельминтом, зависит от его возраста, применения больным лечебных препаратов, качества пищи, общего состояния больного и т.д., результаты, получаемые при количественных методах диагностики гельминтозов, не являются абсолютно достоверными, а позволяют лишь приближенно судить о количестве гельминтов, паразитирующих в кишечнике обследуемого лица.

Количественное определение яиц гельминтов проводится двумя методами: методом Столла и методом Красильникова и Волковой (1974).

Метод Столла. Для проведения исследования необходимо иметь микроскоп, стеклянную колбу с отметкой 56 и 60 мл, мерный цилиндр, стеклянные бусы, резиновую пробку для колбы, градуированные пипетки, предметные стекла и 0,4% раствор едкого натра.

Ход исследования. В колбу мерным цилиндром наливают децинормальный раствор едкого натра (примерно 0,4% концентрации) до метки 56 мл и добавляют испражнения до тех пор, пока уровень жидкости не достигнет отметки 60 мл (т.е. 4 мл испражнений). Смесь тщательно взбалтывают со стеклянными бусами в течение 1 минуты, закрыв сосуд резиновой пробкой (можно перемешать и палочкой). Тотчас после взбалтывания набирают градуированной пипеткой 0,075 мл смеси (в ней содержится 0,005 мл испражнений), переносят на предметное стекло и подсчитывают количество яиц в препарате под микроскопом. Чтобы определить количество яиц в 1 г испражнений, обнаруженное число умножают на 200.

Сравнение числа яиц в препарате, обнаруженное у больного до проведения лечения и после него позволяет судить об эффективности дегельминтизации.

Метод Столла прост, дает сравнимые результаты при всех гельминтозах, возбудители которых систематически выделяют яйца в кишечник больного. Однако недостатком метода является его относительно низкая чувствительность, особенно при слабой интенсивности инвазии.

Метод Красильникова-Волковой. При исследовании этим методом не менее 1 г фекалий смешивают в стеклянной колбочке или большой пробирке с 1% раствором «Лотоса» (или 1,5% раствором «Экстры») в соотношении 1:10. Взвесь тщательно взбалтывают до образования гомогенной суспензии, затем быстро набирают градуированной пипеткой 0,1 мл взвеси (что равняется 0,01 г фекалий) и переносят на предметное стекло. Препарат покрывают покровным стеклом или целлофановой пластинкой (20 х 30 мм), выдержанной не менее одних суток в 50% водном растворе глицерина.

Подсчитывают число яиц во всем препарате. Для расчета количества яиц в 1 г фекалий полученное число надо умножить на 100.

Этот метод имеет ряд преимуществ перед методом Столла. Во-первых, он более чувствителен и позволяет выявлять гельминтов при слабой степени инвазии. Во-вторых, он очень удобен при массовых обследованиях, так как растворы детергентов, являясь консервантами яиц гельминтов, позволяют проводить исследования и не совсем свежего материала. Однако обязательным условием при этом является сбор фекалий непосредственно в раствор детергента.

Для количественного исследования можно применять любой из описанных унифицированных качественных методов, основанных на принципе всплывания яиц. Но в этом случае для анализа должно быть взято одно и то же количество фекалий, один и тот же объем флотационного раствора. Расчет степени инвазии можно произвести, зная количество яиц в 1 г фекалий, по приведенной таблице.

Интенсивность инвазии в зависимости от числа яиц гельминтов

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ

Эти методы, основанные на выявлении специфических антител в сыворотке крови, применяются с диагностической и скрининговой целями.

К серологическим методам относятся:

— реакция кольцепреципитации (РКП) (трихинеллез, цистицеркоз);

— реакция кольцепреципитации в пробирках на холоде (трихинеллез, цистицеркоз);

— реакция микропреципитации на живых личинках (трихинеллез, аскаридоз);

— реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) (трихинеллез, эхинококкоз, альвеококкоз, цистицеркоз и др.);

— реакция агглютинации латекса (РАЛ) (эхинококкоз, альвеококкоз, трихинеллез, тениаринхоз и др.);

— реакция связывания комплемента (РСК) (трихинеллез, эхинококкоз, цистицеркоз);

— реакция энзим-меченных антител (РЭМА) (эхинококкоз, онхоцеркоз, шистосомозы, трихинеллез, токсокароз);

— иммуноферментный анализ (ИФА) (трихинеллез, описторхоз, токсокароз, токсоплазмоз и др.).

Для постановки серологических реакций выпускаются стандартные антигены или же они готовятся самостоятельно (например, из эхинококковых пузырей овец), выпускаются специальные тест-системы для ИФА.

Серологические реакции нередко представляют большую ценность, однако имеют меньшее значение при диагностике отдельных паразитозов. При высокой интенсивности циркуляции паразитов серологические реакции могут служить ценным методом скрининга, позволяющим затем проводить целенаправленные паразитологические исследования или исключать наличие паразитов у обследованных. Отсутствие желаемой специфичности большинства серологических реакций объясняется химической сложностью применяемых антигенов. Определенную проблему при постановке этих исследований представляют перекрестные реакции, которые с различной частотой дают паразиты, принадлежащие к основным группам (трематоды, цестоды, нематоды). Следует также учитывать возможность перекрестных реакций при инвазированности паразитами животных.

Специальные методы исследования на энтеробиоз, тениаринхоз, тениоз

Соскоб с перианальных складок. Для получения соскоба с перианальных складок можно применять деревянный шпатель, целлофановую полоску, целлюлозную бумагу или ленту, глазные палочки со специальным клеевым слоем:

а) соскоб деревянным шпателем (шпатель – уплощенная спичка или палочка), смоченным 1% раствором глицерина (или 0,5% раствором питьевой соды), производится легким соскабливанием с поверхности перианальных складок по всей окружности анального отверстия. Полученный соскоб переносят краем покровного стекла с конца шпателя на предметное стекло в каплю 50% раствора глицерина, накрывают этим же покровным стеклом и микроскопируют. Недостатком метода является недостаточная выявляемость яиц и раздражающее действие;

б) по методу Торгушина делают смыв ватным тампоном на деревянном или другом шпателе, смоченном 50% раствором глицерина, и готовят мазок на предметном стекле в капле глицерина;

в) по методу Кеворковой в центрифужную пробирку наливают около 5 мл кипяченой воды, помещают в него шпатель (палочку) с ватным тампоном. Перед взятием материала тампон слегка отжимают о внутреннюю стенку пробирки, обтирают им перианальные складки и вкладывают шпатель с тампоном в пробирку. Тщательно взбалтывают тампон в пробирке, смыв центрифугируют 3 мин и полученный осадок исследуют под микроскопом;

г) соскоб липкой лентой по Грэхэм. Часть липкой ленты (прозрачная полиэтиленовая лента с липким слоем для детского творчества, но лучше использовать операционную пленку ЛПО-1, ЛПО-2) длиной 8-10 см приклеивают липким слоем к перианальным складкам кожи, держа за концы, а затем переносят ее на предметное стекло липким слоем вниз (концы ленты, выходящие за края стекла отрезают), стекла нумеруются, а в журнале записываются данные больного и номер стекла. В лаборатории ленту с одного конца отклеивают на большом протяжении, капают под нее 1-2 капли вазелинового масла или глицерина (для устранения оптических дефектов) и микроскопируют;

д) соскоб с помощью стеклянных глазных палочек, поверхность которых покрыта специльным клеевым составом. Глазные палочки устанавливаются в специальный штатив. Забор материала производится путем соприкосновения плоской части лопаточки к коже перианального отверстия. Затем палочка снова укрепляется в штатив для транспортировки. Микроскопия проводится непосредственно на лопаточке с обеих сторон (без предметных и покровных стекол) с предварительным креплением в кассеты при малом увеличении (окуляр х 10, объектив х 8). По окончании работы палочки дезинфицируются кипячением в мыльном растворе, а штатив и кассеты обрабатываются спиртом и промываются мыльно-содовым раствором. Состав клея: клеол – 10 г, касторовое масло – 2,5 г, этиловый эфир – 5 г, этиловый спирт 96% — 2,5 г.

Лопаточки обмакиваются в раствор клея, затем высушиваются на воздухе при комнатной температуре. Образовавшаяся на поверхности клейкая пленка сохраняется в течение нескольких дней.

Метод удобен при массовом обследовании детского населения на энтеробиоз и взрослого населения на тениидозы.

Дополнительно к методу соскоба при тениаринхозе и тениозе применяются также метод опроса и описанный выше макроскопический метод (при выявлении члеников).

Специальные методы исследования на стронгилоидоз

Применяют эфир-уксусный метод для обнаружения яиц (см. выше) и метод Бермана для обнаружения личинок в испражнениях.

Метод Бермана. Исследуют свежий кал, лучше после принятия слабительного. Пробу фекалий 5 г помещают на металлическое сито (сетку внутри выстилают двумя слоями марли) в стеклянную воронку, закрепленную в штативе. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку с зажимом (аппарат Бермана).

Сетку с испражнениями приподнимают и в воронку наливают нагретую до 40-50°С воду таким образом, чтобы нижняя часть сетки была погружена в воду и кал покрылся водой целиком. Через 2-4 ч зажим на резиновой трубке быстро открывают, и жидкость спускается в центрифужную пробирку. После центрифугирования (1-2 мин) верхнюю часть жидкости быстро сливают, а осадок в количестве 1 мл наносят тонким слоем на предметное стекло и микроскопируют под малым увеличением микроскопа.

Метод ИМП и ТМ. В химический стаканчик помещают порцию фекалий величиной с орех, заливают теплым 40°С физраствором, чтобы фекалии покрылись раствором, оставляют на 20 мин. Через 20 мин сливают жидкость в чашку Петри и просматривают под бинокулярным микроскопом МБС.

Для диагностики стронгилоидоза, особенно для контроля за эффективностью лечения, рекомендуется сочетать метод Бермана с исследованием дуоденального содержимого.

Специальные методы исследования на нематодозы

В анамнезе обращается внимание на отношение к огородничеству, садоводству. Употребление в пищу сырых овощей, салатов, приготовленных из этих овощей.

Клинические проявления ранней фазы аскаридоза обусловлены аллергическими перестройками организма. Ранняя или миграционная личиночная стадия аскаридоза протекает нередко при наличии лихорадки с температурой тела до 38° и выше, с симптомокомплексом поражения легких, наличием выраженной эозинофилии крови. В большинстве случаев у детей первыми признаками заболевания являются недомогание, слабость, периодические головные боли, потливость, иногда боли в мышцах, суставах. Нередко появляется обильная сыпь типа крапивницы с сильным или умеренным зудом. Диагноз ранней фазы подтверждается рентгенологическими исследованиями на наличие в легких летучих эозинофильных инфильтратов Леффлера. В мазках свежевыделенной мокроты нередко обнаруживаются эозинофильные клетки, эритроциты, кристаллы Шарко-Лейдена и личинки аскарид.

При кишечной имагинальной стадии аскаридоза отмечается сочетание проявлений со стороны желудочно-кишечного и астенического синдромов, энтероколитический болевой симптомы. У детей нередко отмечается снижение в весе, порой довольно значительно. Тошнота, повышенная саливация, раздражительность, задержка психомоторного развития, снижение интеллекта.

источник