Меню Рубрики

Кал на пцр как еще

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови. При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя. Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

  • отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
  • положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

  • если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
  • нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
  • за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии. Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С). При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР. Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С). Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР). После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые. Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

  1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
  2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

источник

Для того чтобы понять, что такое ПЦР кала, следует знать, что же такое кал. Кал — это совокупность отходов жизнедеятельности и непереваренных остатков пищи человека, которые выводятся наружу из организма человека через кишечник путем испражнения. Нормальное протекание данного процесса (выведения кала из организма) крайне важно, так как эти экскременты — не что иное, как отходы, засоряющие организм и мешающие ему нормально функционировать при их скоплении. Кроме того, по данному виду отходов можно многое узнать о самом организме. Например, по анализам кала можно узнать о пищеварительном тракте, о желчевыводящей системе, о бактериальном балансе толстой кишки, о наличии скрытых кровотечений из желудочно-кишечного тракта, а также выявить наличие нежелательных микроорганизмов в кишечнике.

Анализов кала довольно много, и каждый из них имеет свои цели назначения и несет свою информацию. Например, с помощью копрограммы можно проанализировать работу пищеварительной системы, то есть выявить ряд заболеваний желудка, кишечника, поджелудочной железы, желчного пузыря и печени. Тест на скрытую кровь показывает наличие скрытого кровотечения из различных отделов желудочно-кишечного тракта. Такой анализ проводят при подозрении таких заболеваний, как язва желудка или двенадцатиперстной кишки, а также опухолевые заболевания.

ПЦР диагностика кала применяется для диагностики инфекционных заболеваний (например, лямблиоз), в том числе и инфекций, которые передаются половым путем.

То есть с помощью ПЦР кал человека может донести важную информацию о состоянии других органов.

Преимущества у данного анализа следующие:

  1. Прямое определение наличия возбудителей (если другие анализы выявляют только отходы жизнедеятельности паразитов, то данный метод указывает на фрагмент ДНК последних).
  2. Высокая специфичность (при данном анализе выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК).
  3. Высокая чувствительность (ПЦР выявляет даже наличие единичной клетки вируса).
  4. Высокая скорость получения результата (результат данного исследования можно получить уже через 4-5 часов).

Полимеразная цепная реакция кала позволяет выявить целый ряд заболеваний, среди них СПИД, гепатиты, сифилис, хламидиоз, лямблиоз и др. Лямблиоз подразумевает наличие таких паразитов, как лямблии, широко распространен. Им болеют даже дети. Это обусловлено тем, что дети редко следят за гигиеной и часто, контактируя между собой, несколько небрезгливы. Причем это такое заболевание, при котором человек может даже и не знать, что болеет. То есть эти паразиты, находясь в организме человека, могут его абсолютно не беспокоить. И в настоящее время это считается нормальным. Данное состояние не лечат, пока оно спит. Но как только оно просыпается и дает о себе знать неприятными симптомами, необходимо обратиться к специалисту. На самом деле, даже если лямблии и не беспокоят, но каким-то случайным образом выявлены, лучше пройти лечение. А детям, которые часто находятся в коллективе, ПЦР кала на лямблию можно сдавать в регулярном порядке.

Если специалист назначил данный анализ, то перед его сдачей (за несколько дней) необходимо прекратить принимать слабительные препараты, ректальные свечи, масла, а также препараты, которые влияют на окраску кала (например, препараты с богатым содержанием железа). Для сбора материала используют только специальные стерильные контейнеры с палочкой. Ополаскивать или протирать чем-либо их не рекомендуется. При сборе экскрементов надо быть предельно аккуратным, чтобы не задеть внутреннюю часть контейнера рукой. Для сдачи анализа на ПЦР в калах не должна содержаться моча. Использование вспомогательных средств (например, клизмы) при испражнении для сдачи материала запрещено. Кал собирается в день сдачи, для чего должен быть собран в контейнер с помощью специально предназначенной для этого палочкой. Контейнер необходимо заполнить не более чем на 1/3.

Вот такие простые правила необходимо соблюдать при сборе материала для сдачи анализа ПЦР кала. Казалось бы, ничего сложного, но нарушение хотя бы одного из пунктов может исказить результат исследования, что может привести к лечению несуществующих паразитов.

источник

Тем, кто интересуется новыми способами диагностики, следует узнать, что такое метод ПЦР. Современные технические возможности в области лабораторных исследований предоставляют возможность выявлять множество заболеваний на начальных стадиях. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) считается на данный момент самым точным и новым методом.

ПЦР анализ — что это такое? Это метод использует принципы молекулярной биологии. Для исследования материала применяются особые ферменты, которые многократно и быстро копируют ДНК, РНК фрагменты возбудителей болезни. Существует разные виды ПЦР анализа в зависимости от исследуемого материала (кровь, моча, кал и т.д.). После обработки сотрудники лаборатории сравнивают с базой данных полученный результат, выявляют концентрацию, тип возбудителя.

Анализ на ПЦР помещают в специальный амплификатор (прибор), который нагревает и охлаждает пробирки с биоматериалом. Изменения температуры нужны для репликации фрагментов. Точность результата будет зависеть от точности температурного режима. Метод полимеразной цепной реакции помогает выявить:

  • инфекционный мононуклеоз;
  • ВИЧ;
  • цитомегаловирусную инфекцию;
  • вирусные гепатиты G, C, B, A;
  • инфекции/заболевания, передающиеся половым путем (ИППП/ЗППП): гарднереллез, трихомониаз, уреаплазмоз;
  • герпетическую инфекцию;
  • онкогенные вирусы;
  • листериоз;
  • хеликобактерную инфекцию;
  • клещевой энцефалит, боррелиоз;
  • туберкулез;
  • кандидоз.

На данный момент из-за новизны технологии анализ крови методом ПЦР все еще имеет высокую цену. Для подготовки биоматериала не нужно соблюдать определенные требования. Даже вызванные физическими нагрузками, стрессами, сменой рациона питания изменения состава не влияют на результат исследования. ПЦР анализ крови может испортить только прием антибактериальных средств, поэтому перед сдачей необходимо выдержать паузу между лечением и тестом.

ПЦР исследование крови – самый распространенный вариант диагностики хронических, острых инфекционных патологий при вирусном или атипичном проявлении. Серологические методы исследования имеют определенную трудность при проведении – определение наличия возбудителя проводится по наличию антител в организме человека. Результат мог быть ложноотрицательным, если состояние больного не давало время для их выработки.

В сфере гинекологии для исследования наличия инфекционных микроорганизмов используют ПЦР анализ мазка. Работа с материалом проводится по тому же принципу, что и с кровью: многократное увеличение фрагментов ДНК возбудителя, чтобы с легкостью его идентифицировать. Это же помогает обнаружить скрытые инфекции у женщины. Для проведения анализа могут быть взяты разные биологические жидкости: слюна, мокрота, моча, кровь. В гинекологии для точности определения чаще используется мазок со слизистой влагалища из цервикального канала.

Читайте также:  Кошки немного крови в кале

Для проведения ПЦР существуют определенные показания. Нередко его нужно сделать, чтобы выявить устойчивый к антибиотикам вид возбудителя. У женщин основными показаниями для диагностики по этому методу выступают:

  • беременность, которая протекает тяжело;
  • острая фаза ИППП;
  • если есть подозрение на переход ИППП в хроническую стадию;
  • поиск причин бесплодия.

Для выявления инфекции может быть назначен со стороны врача анализ кала на ПЦР. Для того, чтобы получить максимально достоверные результаты после теста, необходимо придерживаться следующих правил перед забором биоматериала:

  • за несколько суток прекратить прием слабительных препаратов: масла, свечи;
  • исключить медикаменты, которые дают специфическую окраску калу, к примеру, с содержанием железа.

Для забора следует использовать стерильную палочку и контейнер. Чем-либо их дополнительно протирать, ополаскивать не нужно. При сборе материала будьте осторожны, вы не должны задеть рукой внутренние стенки контейнера. Следите, чтобы в кале не было примесей мочи, нельзя использовать дополнительные вспомогательные средства для испражнения (клизма). Собирать материал нужно в день сдачи, хватит 1/3 объема контейнера. Данный метод диагностики имеет следующие преимущества:

  1. Анализ способен указывать на ДНК паразита, другие же тесты могут определять только остатки их жизнедеятельности.
  2. Высокая точность, будет установлен возбудитель.
  3. Ультрачувствительный анализ, который способен выявить даже одну клетку вируса.
  4. Результат исследования ПЦР будет готов через 4-5 часов.

При необходимости для проведения теста врач может взять для исследования мочу. Высокая точность открывает возможность работать с любой биологической жидкостью, из которой удается извлечь ДНК вируса. Чтобы сдать анализ мочи ПЦР, нужно придерживаться таких ограничений перед забором материала:

  • минимум за 1 день до процедуры прекратить половые контакты;
  • за 3 недели до сдачи должно быть окончено любое антибактериальное лечение, потому что медикаменты смажут картину;
  • сдавать анализ нужно натощак (жидкость тоже запрещена);
  • брать нужно первую утреннюю порцию материала.

Из вышенаписанного понятно, что такое ПЦР анализ и видны явные преимущества такого метода исследования. Еще один плюс данной диагностической процедуры – простота расшифровки результатов. Учитывая, сколько делается анализ ПЦР (сам процесс занимает около 5 часов, но лаборатория выдает данные через 1-2 суток), данный метод диагностики становится лучшим вариантом для определения множества инфекций. По результатам врач может сказать вам, что тест:

  1. Отрицательный – в исследуемом материале не было искомого возбудителя.
  2. Положительный – были найдены РНК, ДНК возбудителя.

Иногда проводится количественное определение микроорганизмов. Это необходимо при заболеваниях, которые вызывают условно-патогенные возбудители. Особенность этих вирусов в том, что проявляются они только при избыточном количестве и найти их обычными исследованиями крайне проблематично. Этот фактор важен для выбора терапевтической тактики, чтобы эффективно лечить вирусные инфекции, к примеру, гепатит, ВИЧ.

Чтобы понять до конца, что такое ПЦР диагностика инфекций и насколько она эффективна, нужно узнать, что она способна выделять до 12 возбудителей. Проводится текст только в лабораторных условиях. Для исследования применяют специальные ферменты, которые увеличивают во много раз количество РНК, ДНК фрагментов вируса. Анализ ПЦР на 12 инфекций способен выявить:

  • микобактерии туберкулеза;
  • ВИЧ;
  • цитомегаловирус;
  • гепатит C, G, B, A;
  • герпес 1, 2 типа;
  • вирус Эпштейн-Барра (инфекционный мононуклеоз);
  • инфекции, которые передаются половы путем, к примеру, хламидии;
  • листериоз;
  • ВПЧ;
  • кандидозную инфекцию;
  • хеликобактер пилори;
  • боррелиоз, клещевой энцефалит.

Этот диагностический метод помогает определить наличие вируса в крови. Это дает врачам возможность говорить о его наличии или отсутствии. Анализ ПЦР на гепатит С бывает двух видов: качественный и количественный. Первый вариант указывает только на его наличие и может иметь формулировку «обнаружен»/«не обнаружен». Этот вид теста имеет чувствительно в 10-500 МЕ/мл. Это говорит о том, что при низком содержании возбудителя в организме анализ будет «не обнаружено».

Количественный анализ более точный и покажет концентрацию инфекции в крови. Обозначается этот показатель как «вирусная нагрузка», измеряется в количестве вирусной РНК на конкретный объем крови. Расшифровка в разных лабораториях может отличаться. Помимо измерения в МЕ/мл используются единицы измерения «копии». Пересчитать копии на МЕ можно по формуле: 1 МЕ = 4 копии. Если в расшифровке значение присутствие вируса превышает 800 000 МЕ/мл (или 800*103), это говорит о высоком содержании возбудителя.

Делать тест следует в утреннее время. Это важно для того, чтобы не дать всему массиву мокроты, который образовался за ночь, выйти из желудка. Анализ ПЦР на туберкулез так же важен как ИФА, Манту, томографе. Тест помогает выделить наличие микобактерий, состояние мочи, общий иммуноглобулин, СОЭ, определить состояние легких на данный момент. Для точности получения результатов при анализе ПЦР необходимо проводить его с соблюдением следующих правил:

  1. Осуществляется посев 3 раза, но полную аспирацию содержимого желудка следует проводить только в условиях стационара.
  2. Выявляет микобактерии посев наличествующих масс в желудке менее чем в 50% диагнозов. Даже при получении оптимальных условий рекомендуется вместо них УЗИ.
  3. Даже при отрицательном характере результата не может быть полностью исключена вероятность развития туберкулеза с изменением СОЭ, иммуноглобулина или других показателей.
  4. Посев материалов при ПЦР менее восприимчив на патологические состояния, если получен он в рамках бронхоскопического обследования, который исключает подозрения на ТБ у ребенка.

Для многих людей данный диагноз считается смертельным приговором. По этой причине после частых половых связей человек становится более внимателен к сигналам, которые подает его тело (а иногда придумывает их). Самый надежный вариант получить подтверждение или опровержение данного заболевания – ПЦР анализ на ВИЧ. Тест можно использовать для определения следующих возможных проблем со здоровьем:

  1. Опровержение/подтверждение наличия ВИЧ в период серонегативного кона.
  2. Определение генотипа ВИЧ-1, ВИЧ-2.
  3. Уточнение описания патологического процесса при сомнительном результате иммуноблота.
  4. Заражение после переливания крови.
  5. Определения ВИЧ-статуса у детей, которые родились от матерей-носителей заболевания.
  6. Помогает установить наблюдение за вирусной загруженностью организма.

Вирус папилломы может быть выявлен у любого человека, долгое время он может находиться в латентном состоянии. Развитие провоцирует ослабление иммунитет, стрессы или эмоциональные всплески. Анализ ПЦР на ВПЧ помогает определить концентрацию вируса в крови. По этой причине рекомендуется проводить количественно определение, а не качественное. Эти данные помогут спрогнозировать вероятность развития злокачественного характера инфекции.

Методика диагностики наличия ВПЧ основывается на основном свойстве ПЦР выделять из материала ДНК вируса. Из-за высокой чувствительности теста даже небольшое количество бактерий будет обнаружено. Количественное исследование открывает врачам возможность установить степень опасности заболевания, составить прогноз на будущее. Эта диагностика обязательна для всех мужчин и женщин, которые обнаружили у себя кондиломы. Количественный анализ ПЦР поможет определить, что послужило причиной развития ВПЧ: временное снижение иммунитета или хроническое заболевание.

Данный вид диагностики в микробиологии помогает с высокой точностью проводить анализ ПЦР на герпес. Копирование фрагментов ДНК вируса будет происходить только, если в материале присутствует нужный ген. В данном случае тест по результатам проведения может указать на наличие или отсутствие возбудителя. Выявить его удастся даже при низкой концентрации в крови.

Еще один плюс анализа ПЦР в том, что он может определить герпетическую вирусную инфекцию сразу же после заражения, до появления клинической симптоматики. Можно определить тип герпеса (1 или 2), для сдачи анализа специфической подготовки не требуется, но врачи рекомендуют перед забором крови отказаться от:

При вынашивании ребенка очень важно провести данное исследования, чтобы поставить на учет состояние женщины. ПЦР анализ при беременности входит в перечень самых эффективных методов определения наличия разнообразных заболеваний. Провести тест нужно не только для выявления патологий, но и для определения вероятности заражения ребенка внутриутробно. Только благодаря ПЦР-диагностики стало возможным выявить степень прогрессирования, развитие множества инфекций внутри утробы матери.

Если вам интересно, как берут анализ ПЦР, то следует рассматривать каждый отдельный случай, учитывая тип биоматериала. Соскоб, мазок или забор крови имеет свои особенности, к примеру:

  • плазма сдается утром;
  • моча берется только первая утром, в лабораторных условиях в стерильный контейнер;
  • мазок или соскоб будет показателен только после воздержания от половых контактов не менее 3 суток;
  • нельзя сдавать мазок во время менструации и через 2 суток после нее.

Данный вид исследования относится к современным и высокотехнологическим способам диагностики. Сдавать анализы методом ПЦР следует в лабораториях, которые обладают всем необходимым комплексом для получения полноценных результатов. Не меньшую роль играют квалифицированные, подготовленные кадры. Отдайте предпочтение крупными, серьезным, известным лабораториям. Это поможет не только получить результаты быстро, но и обеспечит их достоверность.

Еще один вопрос, который часто интересует пациентов: сколько стоит анализ ПЦР? Из-за новизны метода, необходимости приобретения дорогостоящего оборудования цена на тест относительно высокая. На стоимость ПЦР влияет вид инфекции, на которую будут проверять человека. Ориентировочная цена и сроки выполнения тестов следующая:

  1. ИППП проверят за 1 день, цена – 400-500 рублей.
  2. Герпес, ВПЧ, вирус Эпштейна-Барра, цитомегловирус выявляют за сутки, цена – 300-500 р.
  3. Анализ на гепатит проводится за 5 дней, цена на качественный вариант – 500 р., количественный – 2000 р.
  4. Хеликобактер пилори выявляют за сутки, цена – 400 р.
  5. Антигены, антитела ВИЧ, цена – от 380 р.
  6. Качественный анализ РНК ВИЧ, цена – от 3 500 р.
  7. Количественный анализ РНК ВИЧ, цена – от 11 000 р.

источник

Заболевания, поражающие главным образом желудочно-кишечный тракт (ЖКТ), в большинстве своем могут приводить к тяжелым последствиям при отсутствии должного лечения. Для того чтобы вовремя выявлять зарождающуюся болезнь, врачи проводят специальные исследования, которые зачастую идентифицируют даже бессимптомный недуг на ранней стадии развития, позволяя своевременно предпринять должные меры по устранению проблемы.

К числу наиболее важных диагностических процедур относится анализ кала на хеликобактер – он дает возможность обнаружить патогенные организмы, паразитирующие в ЖКТ и вместе с тем препятствующие его нормальному функционированию.

Хеликобактерия – это болезнетворный одноклеточный организм со спиралевидным тельцем, дающим возможность беспрепятственно «ввинчиваться» в густую слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Живой патоген снабжен несколькими длинными жгутиками (от 4 до 6), с помощью которых передвигается по стенкам верхних отделов ЖКТ.

Данный паразит, в отличие от подавляющей части иных бактерий, превосходно себя чувствует, пребывая в кислой желудочной среде. Выделяемые хеликобактер пилори вредные токсичные вещества ежедневно воздействуют на слизистый слой ЖКТ, что может привести к воспалительным процессам, перфорации, эрозии, а также канцерогенезу (формированию онкологических очагов).

Что интересно, когда паразит хеликобактер чувствует опасность, он принимает вид свернувшегося шарика, покрытого плотной защитной оболочкой. Подобная форма позволяет пережидать неблагоприятные факторы окружающей среды, но одновременно разрушает пристеночные участки желудка с куда большей интенсивностью, создавая угрозу развития злокачественных образований.

Симптомы, указывающие на заражение хеликобактер пилори, дают о себе знать далеко не сразу, поэтому нередко та или иная болезнь, вызванная жгутиковыми организмами, выявляется довольно поздно, что влияет и на увеличение количества осложнений, и на длительность курса лечения.

Анализ кала на хеликобактер пилори, как правило, назначают людям, которых на протяжении длительного времени беспокоят симптомы, указывающие на сбой в работе желудочно-кишечного тракта. К признакам подобного рода относятся:

  • резкое снижение массы тела без каких-либо видимых предпосылок;
  • кислая отрыжка;
  • ощущение тяжести в области желудка;
  • диарея (регулярный жидкий стул);
  • обстипация (запоры);
  • желудочные боли после каждого приема пищи;
  • беспричинная потеря аппетита;
  • приступы изжоги;
  • метеоризм (чрезмерное скопление газов в ЖКТ, вызывающее вздутие);
  • постоянное урчание в животе, не связанное с голодом;
  • тошнота;
  • непереносимость пищи животного происхождения;
  • неутолимая жажда;
  • рвота, сопровождающаяся выделением крови;
  • повышенное слюноотделение;
  • неприятный запах изо рта;
  • дисфагия (затрудненный процесс глотания).

Если имеют место серьезные нарушения в функционировании желудка и кишечника, то вышеперечисленные симптомы могут сочетаться с мигренью, раздражительностью, анемией, общей слабостью, гипергидрозом (обильным выделением пота), бледностью кожных покровов, инсомнией (нарушением сна), тахикардией и высокой температурой (37–38 °C).

Помимо прочего, врачи настоятельно рекомендуют сдавать анализ кала на хеликобактер тем, у кого были выявлены следующие патологии:

  • атрофический гастрит;
  • дуоденит (воспаление двенадцатиперстной кишки);
  • диспепсия (несварение);
  • лимфома желудка;
  • железодефицитная анемия;
  • болезнь Менетрие (патологическое утолщение слизистых желудочных оболочек с дальнейшим поражением желез внутренней секреции, которое приводит к образованию множественных кист и аденом);
  • злокачественные образования, локализующиеся в ЖКТ;
  • тромбоцитопения (резкое снижение количества кровяных пластинок);
  • язва двенадцатиперстной кишки или желудка;
  • дисплазия кишечника.

Иногда пациенту требуется пройти исследование на хеликобактер, для того чтобы исключить различного рода отклонения перед назначением лекарственных препаратов, провоцирующих недостаточную выработку желудком соляной кислоты. Также диагностику осуществляют после основного курса антибиотикотерапии – это позволяет уточнить её результативность. В случае стагнации или ухудшения состояния специалисты корректируют тактику лечения.

На данный момент разработано 3 метода исследования кала на Helicobacter pylori, к которым и прибегают специалисты в лабораториях:

  • Культуральное исследование. Предполагает введение полученного биоматериала в питательную среду, способствующую размножению колониальных организмов. Идентифицированные представители хеликобактер пилори изучаются с применением различного рода химических красителей и лекарственных средств. Последние позволяют установить степень чувствительности хеликобактер к разным видам препаратов.
  • Иммунологический способ. К определенному количеству испражнений добавляют раствор с содержанием специальных белковых структур (антител), которые активно реагируют на наличие опасных антигенов хеликобактер, давая диагностам понять, что соответствующая проба заражена патогенными бактериями.
  • ПЦР (или полимеразная цепная реакция). Данный способ подразумевает выделение «вражеской» ДНК за счет особых ферментов с дальнейшим удвоением частицы дизоксирибунуклеиновой кислоты. Искусственная репликация ДНК осуществляется до тех пор, пока не будет получен полноценный генетический код, который затем сравнивают с имеющимся образцом хеликобактер пилори.
Читайте также:  Если в кале у грудничка красные пятна

Подавляющая часть медицинских лабораторий отдает предпочтение именно методу ПЦР, причиной тому служит более качественный и достоверный результат диагностики в сравнении с остальными типами исследования на хеликобактер. Более того, обработка данных такого анализа требует всего нескольких часов, т. е. итоговый бланк с показателями выдается пациенту или лечащему врачу на следующий день.

Нормой считается полное отсутствие возбудителей хеликобактер, которое выражается обычно несколькими способами:

  • надписью «не обнаружено» или «не выявлено»;
  • печатью «отрицательный» или «отсутствуют»;
  • цифрой «0»;
  • прочерком.

У ПЦР существует всего два варианта результатов – отрицательный и положительный, наличие последней пометки свидетельствует об обнаружении хеликобактер пилори. Аналогична ситуация и с остальными видами исследования. Иногда степень заражения хеликобактер обозначается плюсиками: чем выше уровень содержания болезнетворных жгутиковых паразитов, тем больше соответствующих значков фигурирует в бланке (их число варьирует от 1 до 4).

Качественная подготовка требует акцентирования внимания на 3 ключевых пунктах, а именно на изменении рациона питания, ограничении употребления лекарственных препаратов и правильном сборе биоматериала. Теперь обо всем чуть подробнее.

Для того чтобы итоговые показатели не подверглись искажению, необходимо исключить за 3–4 дня до анализа на хеликобактер пилори следующие виды продуктов питания:

  • напитки: алкоголь, газировка, крепкий чай и кофе;
  • овощи: редька, капуста, свекла, редис, помидоры, морковь, болгарский перец;
  • фрукты: персики, абрикосы, апельсины, мандарины, гранат, нектарины, хурма, манго, грейпфрут;
  • специи: карри, куркума;
  • соусы: кетчуп, соевый;
  • первые блюда: отруби, перловая, гречневая или бобовая каша.

Во время подготовки к исследованию на хеликобактер пилори лучше всего ввести в привычный рацион больше слизистых каш, кисломолочной и молочной продукции, пюре (из фруктов и овощей), легких супов. К числу предпочтительных напитков относятся отвар шиповника, зеленый чай, компоты, неконцентрированные соки из винограда или яблок, морсы и, конечно, обычная вода.

На самом деле анализ кала на хеликобактер предполагает полный отказ от каких-либо препаратов, особенно это касается:

  • ректальных свечей;
  • антацидов (Альмагеля, Викалина, Маалокса и пр.);
  • слабительных средств;
  • антибиотиков.

Если же некоторые лекарства требуют регулярного употребления, об этом обязательно нужно предупредить лечащего врача.

Для начала следует приобрести специальную емкость накануне анализа на хеликобактер. Стерильный контейнер приобретается либо у самих врачей, либо в аптечной сети. В случае отсутствия подобной возможности можно прибегнуть к помощи миниатюрной чистой баночки из стекла с плотно закрывающейся крышкой (лучше прокипятить такую тару перед использованием).

Стоит отметить, что биоматериал категорически запрещено собирать непосредственно из подгузника или унитаза, так как к калу могут налипнуть инородные бактерии, которые имеют обыкновение искажать результаты исследования. Перед актом дефекации желательно подмыться. С помощью пластмассовой ложечки, крепящейся к крышке приобретенной емкости, необходимо отделить несколько сегментов биоматериала, взятого из различных точек.

Тару следует наполнить на ⅓ или ¼, затем прикрутить крышку. Желательно собирать кал за 1–3 часа до анализа на хеликобактер пилори, однако при необходимости можно обернуть контейнер в цельный полиэтиленовый пакет и поставить его в холодильник (ни в коем случае не в морозильную камеру). Требуемый температурный режим – не выше 3–4 °C. Хранить пробу подобным образом следует не более 48 часов.

Многое зависит от метода диагностики, к которому прибегали специалисты при выявлении хеликобактер. Несовершенными типами исследования признаны культуральный и иммунологический способы, поскольку каждый из них не учитывает ряд нюансов, связанных с обнаружением патологических бактерий.

Например, первый метод далеко не всегда может предоставить подходящую питательную среду для колониальных паразитов хеликобактер. Не менее важный пункт – по мере продвижения по кишечному тракту одноклеточные представители хеликобактер пилори подвергаются негативному воздействию соков, поступающих из поджелудочной железы и желчного пузыря, что вынуждает их принимать кокковую (сферическую) форму, о которой ранее шла речь.

Если жгутиковые паразиты находятся в защитных капсулах (а именно там они и пребывают, попадая в каловые массы), их сумеет обнаружить достоверно только ПЦР, основанный на искусственном удвоении бактериальной ДНК. Именно этот способ считается максимально правдивым.

Существует только одно «но»: ДНК хеликобактер может выявиться даже в течение месяца после излечения, поэтому для уточнения физиологического состояния пациента потребуются дополнительные медицинские исследования. Если персонал лаборатории не пренебрегал мерами предосторожности при работе с биоматериалом, избегая случайного смешения различных проб, то итоговые показатели будут соответствовать реальному положению вещей.

источник

Копрограмма каловых масс помогает проанализировать функциональность органов пищеварения, диагностировать болезни желудочно-кишечного тракта. ПЦР кала чаще всего применяют для выявления в организме желудочно-кишечной инфекции.

Полное название – полимеразная цепная реакция. Метод относится к молекулярно-генетическому диагностированию, дает гарантию достоверных показателей.

Смысл анализа кала на ПЦР заключается в обнаружении клеток определенных болезнетворных микробов, идентифицировании разновидностей.

Для получения правдивых данных при подготовке соблюдают следующие условия:

  • исключают прием антибиотиков и других лекарственных средств, схожих действиями, за три дня до момента забора биологической массы;
  • в этот же период не пользуются ректальными свечами, слабительными средствами и другими препаратами, влияющими на желудочно-кишечную перистальтику;
  • не принимают лекарства и не употребляют продукты, после которых цветовой оттенок каловых масс изменяется;
  • для сбора фекалий используют стерильный контейнер. Материал оперативно доставляется в лабораторию.

Заключение по ПЦР обследованию подготавливается в течение суток.

Когда человеческий организм переживает проблемы с работоспособностью органов пищеварения, вероятной причиной этого считают присутствие паразитов – лямблий, аскаридов, Хеликобактера пилори и др.

Характерной симптоматикой, при которой назначается анализ кала методом ПЦР, считают:

  • признаки тошноты;
  • болевые ощущения тупого или острого характера в области живота;
  • тяжесть в полости желудка после каждого приема пищи;
  • отрыжки.

Данными свидетельствованиями подтверждается, что опасные микроорганизмы активизировались и начали размножаться. Пренебрегая самочувствием, человек в таком случае получает серьезные болезни – гастрит, язву и даже онкологию. В ряде случаев развиваются разные виды лимфом.

Перечисленные причины считаются поводом для посещения поликлиники, чтобы подвергнуть организм тщательному обследованию. Применяя разные методы, врачи не только выявляют причины, но и назначают нужные терапевтические курсы.

От оперативности сдачи биоматериала на проверку зависит быстрота избавления от болезни.

Существенным достоинством проверки кала считается оперативность. Анализ проводится за несколько часов, в то время как простая микробиологическая проверка длится больше суток.

Инфекционист, занимающийся болезнями инфекционного характера, назначает сдачу фекалий в случаях:

  • повышения температурного режима тела;
  • изменения оттенка кожного покрова, склер глазных яблок;
  • сыпи на коже;
  • нарушенности обычной консистенции каловых масс;
  • сильной утомляемости;
  • ощущений ломоты в теле;
  • рвотных рефлексов и поноса;
  • сильных болей в области живота.

Чаще всего инфекционные заболевания системы пищеварения случаются в летний сезон. Именно в это время редко соблюдаются требования личной гигиены, человек ест зрелые ягоды прямо с куста, пьет сырую воду. Кроме этого, рыбные и мясные изделия, несвоевременно помещенные в холодильную камеру, становятся причиной заражения. Еще один источник инфекций – насекомые, сосущие кровь.

Странно звучит, но именно чрезмерное потребление жидкости летом снижает способность человеческого организма противостоять инфекциям системы пищеварения, потому что водой сильно разбавляются желудочные соки, из-за чего снижается их бактерицидная способность.

Подобными свойствами отличается слюна человека, и следует тщательно разжевывать пищу до того момента, как она будет проглочена.

Иммунная система человека, если он полностью здоров, способна противостоять определенным инфекционным заболеваниям кишечного тракта. Но организм, часто подвергаемый стрессам и физическим нагрузкам, долго сопротивляться вредным паразитам не способен. Из этого следует, что наряду с личной гигиеной и правильным питанием стоит своевременное абстрагирование от различных переживаний.

Данный вид заболевания способен протекать без характерной симптоматики. Человек внешне выглядит здоровым, но является носителем проблемы.

Рассмотрим, как происходит заражение лямблиозом. Возможно это благодаря прямым контактам с носителями, питью воды из открытых источников, употреблению продуктов питания, пользованию бытовыми предметами.

Но главным источником заражения лямблиозом является человек. В его организме паразиты живут в тонком кишечнике и питаются переваренной пищей, употребляемой хозяином. Способны они селиться в виде цист в толстый кишечник, выводясь вместе с биологической массой наружу. В почвенном составе лямблия способна самостоятельно прожить не более двух недель.

Пациент направляется на сдачу кала на ПЦР, если испытывает проблемы следующего характера:

  • быстрая усталость;
  • сухость кожного покрова;
  • бледный вид;
  • вздутия в животе и метеоризмы;
  • плохой сон;
  • раздраженность.

Анализ ПЦР в лаборатории выполняется редко, но с помощью такого метода более точно выявляется ДНК лямблий, даже когда они находятся в состоянии покоя и не выделяют цист.

Есть мнение, что чаще всего паразитами заболевают люди, проживающие в странах «третьего мира», но оно ошибочное. Заражение возможно через плохо приготовленную еду, при контактировании с домашними животными, не прошедшими обработку от паразитов, свежесобранные и немытые фрукты и овощи.

Как гласят статистические данные, почти у семидесяти процентов людей в процессе обследования выявляются паразиты. Основными признаками болезни считаются:

  • симптоматика раздраженности кишечника, выраженная поносами, запорами, метеоризмом;
  • бессонница;
  • высыпания на кожном покрове без видимых причин;
  • болевые ощущения в суставах;
  • постоянное присутствие чувства недоедания;
  • переутомляемость, депрессии, общая подавленность.

Чтобы удостовериться, что органы человека не заражены яйцами глист, врач назначает сдачу биологического материала. Методика не слишком эффективная, для точного результата приходится сдавать три фекальных пробы. Но и после этого рассчитывать на точность результата не следует – паразиты могут находиться в спячке. Только анализ кала на ПЦР дает возможность выявлять паразитов, находящихся даже в неактивном образе жизни.

Желательно использовать стерильную емкость, приобретенную в любом аптечном киоске. Не прикасайтесь к чистой поверхности тары руками, чтобы не оставить там посторонних паразитов, способных внести недостоверность в материалы проверки.

Вместо специального контейнера разрешается отбирать кал в подходящую стеклянную емкость, предварительно прогретую в духовом шкафу.

Сбор кала выполняется с нескольких точек.

Отбор биоматериала на обследование с целью выявления лямблий не отличается от остальных анализов фекальных масс. Накануне исключается прием слабительных лекарственных средств и других препаратов, способных оказать негативное воздействие на окончательные результаты проверки и испортить клиническую картину.

Дневной рацион пациента накануне отбора пробы значения не имеет.

Как правило, забор фекалий выполняется утром. Лучше всего это делать непосредственно перед сдачей биологического материала в лабораторию, потому что хранение его запрещено.

Хранение биоматериала исключено по причине его высыхания и порчи за счет размножения паразитов. Если нет возможности сразу отправить фекалии на проверку, рекомендуется использовать специальные консерванты Сафаралиева или Турдыева. Средство заливается в емкость, предназначенную для хранения каловых масс, отобранных на исследование, после чего туда помещают фекалии.

Точный показатель такого анализа стремится к семидесяти процентам, и результат этот не самый лучший. Отсюда следует, что сдача кала на выявление лямблий выполняется не менее трех раз. Взрослым и детям это рекомендуется выполнять ежедневно в течение трех – четырех дней, потому что подтверждение жизнедеятельности паразитов может оказаться не в каждом фекальном комке. Многократное обследование повышает уровень точности проверки до девяноста процентов.

Кроме этого, каловые массы сдаются на исследование несколько раз, когда окончен терапевтический курс от лямблиоза. С помощью этого подтверждается окончательное избавление от инфекционного заболевания. Чтобы получить достоверную картину лечебного процесса, кроме сдачи на проверку кала назначают и другие способы диагностирования. К примеру, анализ фекалий дополняется обследованием крови на антитела к лямблиям.

При возникновении подозрений на присутствие в организме вредных паразитов рекомендуется обращаться к терапевту или гастроэнтерологу, которые оформят направление на обследование в поликлинике. При отсутствии свободного времени посещают частный медицинский центр, работающий на платной основе. В первом случае анализ биологического материала выполняется бесплатно, а во втором стоимость исследования зависит от разновидности и выбранного вами медцентра.

источник

Проведение диагностики различных инфекционных или паразитических процессов в организме может быть только с изучением состава кала. А значит может быть назначено эффективное лечение.

Если в организме все чаще наблюдаются проблемы, связанные с работой желудочно-кишечного тракта, то самым распространенным в данном случае основной причиной могут быть паразиты, такие как Хеликобактер пилори, лямблии, аскариды и т.д.

Основными симптомами в данном случае будут:

  • тошнота;
  • тупая или острая боль в животе;
  • чувство тяжести в желудке после приема пищи;
  • отрыжка.

Все это будет главным свидетельствовать о том, что бактерии Хеликобактер пилори, лямблии и прочие паразиты приступили к своему успешному размножению. Если не обращать внимание, то можно просто получить целый ряд серьезных заболеваний, таких как гастрит, язва желудка и двенадцатиперстной кишки и даже к раку. В некоторых случаях могут развиваться различные виды лимфом.

Читайте также:  Зеленая слизь в кале у грудничка фото

Именно по этой причине, следует обращаться в медицинские центры или в поликлиники для проведения обследования. Используя различные методы, специалисты позволят не только выяснить причину, но и помогут с лечением. И чем быстрее будут сданы все анализы, тем быстрее можно будет избавиться от проблемы.

Во время проведения комплексного исследования, одним из важных анализов является сдача анализов на ПЦР. Что такое ПЦР? Под полимеразной цепной реакцией понимается проведение культуральных и иммунологических анализов кала. Чаще всего это будут прямые методы проведения исследования, благодаря которым будет возможно получить результаты о том, есть ли в организме патологические агенты, такие паразиты как лямблии, хеликобактер пилори и т.д.

Для этого следует проводить анализ кала. При этом согласно методам комплексного исследования, будет выявляться присутствие продуктов жизнедеятельности различных видов паразитов или следы реакции иммунной системы организма на воздействие различных патогенов. Чаще всего, могут проводиться прямые исследования, позволяющие обнаруживать вредоносные микроорганизмы, а так же их ДНК.

Осуществляя различные виды анализов кала, для проверки его на наличие хеликобактериоза, будет проводиться не инвазивными или нетравматичными видами. Подобные виды исследований будут существенно отличаться от традиционных в таком случае сборе крови или проведении гастродуоденоскопии.

Методы, которые используют специалисты для определения наличия в организме паразитов и болезнетворных микроорганизмов, будут самыми различными. В их число входят такие методы анализа кала как культуральный и иммунологический.

При этом под культуральным методом будет пониматься проведение бактериологического посева. Его еще называют микробиологическим методом проведения исследования. В целом, он позволяет выявлять такие виды заболеваний как хеликобактер пилори, лямблии и т.д. За основу этого метода берутся исследования биологического материала. Для этого он будет помещаться в специфическую среду, которая будет наиболее подходящей для его роста и размножения, создавая колонию. Для каждого вида паразита существуют свои сроки для быстрого развития. Например, хеликобактер пилори или лямблии размножается за неделю. После этого начинаются лабораторное изучение культуры. Одновременно с этим специалисты будут искать специфичный антиген, свойственный для данного вида.

источник

ПЦР, или полимеразная цепная реакция, является сложным лабораторным методом, который широко используется в медицине и других научных отраслях. ПЦР-диагностика в свое время стала настоящим прорывом в науке.

Количественная ПЦР – это такая разновидность ПЦР, которая проводится в режиме реального времени.

Под этим понимается вариант ПЦР, при котором постоянно регистрируется кинетика реакции, позволяющая качественно оценивать в сложной молекулярной смеси содержание конкретных нуклеотидных последовательностей ДНК.

Количественный метод ПЦР рассмотрим подробнее ниже.

Для диагностики инфекций особенно часто применяются культуральные и серологические методы. Под первым определяются антитела к инфекционному возбудителю в сыворотке крови. При втором биологический материал, взятый от больного человека, применяют для засевания специфической среды, которая благоприятна для роста колоний возбудителя. Диагностика и в том, и в другом случае может длиться дни или недели.

Обследование ПЦР может проводиться с разными биологическими материалами, которые получают от больного человека. В виде образцов выступают кровь и прочие патологические, физиологические и биологические среды и жидкости. Можно сделать ПЦР кала или мочи.

Методом количественной ПЦР чаще всего диагностируют атипичные и вирусные инфекции, поскольку они могут не поддаваться простой диагностике из-за специфики спровоцированного ими патологического процесса. Для определения таких инфекций нужно время, на протяжении которого в организме начинают вырабатываться антитела, определяемые серологическими методами. Но это неприемлемо в ряде случаев.

Способ проведения ПЦР – лабораторное установление инфекции в образцах, изолированных от пациента (ин витро).

Чтобы провести полимеразную цепную реакцию, требуется набор особых реактивов.

Исследуемый материал вносится в пробирки с реактивами. Пробирки ставят в специальный аппарат – амплификатор ПЦР, который предназначен для амплификации (повышения количества) искомых фрагментов РНК или ДНК, ПЦР амплификатор работает в циклическом режиме. При любом цикле, если в образцах имеется последовательность РНК или ДНК возбудителя, то в растворе все больше накапливаются копии частиц данных нуклеиновых кислот. Определить можно и присутствие возбудителя, и количество его в образцах.

Качественный анализ методом ПЦР позволяет получить такой результат:

  • отрицательно, когда искомый возбудитель не обнаружен в образцах;
  • положительно, если в образцах найдены последовательности, которые характерны для определенного возбудителя.

При положительном результате ПЦР можно говорить с 95%-ной точностью о наличии диагностируемой инфекции. При этом точность наборов ПЦР, применяемых диагностической целью, доходит до 100%.

Обычно 5% неправильных результатов определяются человеческим фактором. Например, нарушения техники проведения анализа и правил хранения реактивов могут в значительной степени уменьшить точность исследования.

Количественная ПЦР определяет понятие вирусной нагрузки. Можно определить при этом, сколько в образцах, взятых у пациента, было комплектов ДНК возбудителя.

Тяжесть инфекции прямо пропорциональна повышению их количества. Также можно определить успешность терапии по уменьшению вирусной нагрузки.

Сдача количественной ПЦР проводится в клинике, преимущественно с утра. Пациенту во время визита к врачу скажут, что необходимо сдавать: соскоб, мазов, мочу или кровь. ПЦР может определить возбудителей вне зависимости от уровня загрязнения материала.

Для положительного анализа в теории требуется присутствие всего лишь одного возбудителя в образцах. На практике же стараются создать еще более благоприятные условия. Существуют для этого некоторые рекомендации:

  • если сдают соскоб или мазок из половых органов, нужно воздержаться от интимной связи за три дня до исследования;
  • нельзя перед анализом спринцеваться с антибактериальными препаратами или подмываться;
  • за три часа до взятия из уретры мазка нужно потерпеть и не опорожнять кишечник.

При сдаче крови пациентом таких правил можно не придерживаться.

Как расшифровываются результаты количественного анализа ПЦР?

В ряде клинических ситуаций появляется проблема эффективности проводимого лечения и/или динамики процесса патологии. Такие вопросы особенно актуальны при обследовании людей с хроническими инфекциями (вирус человеческого иммунодефицита, гепатиты В и С). При диагностике основываются на том, что накопление ампликонов (ПЦР продуктов) пропорционально наличию копий искомого гена в анализируемой пробе.

Конечно, учет результатов проведения количественной ПЦР делается посредством гель-электрофореза с исследованием интенсивность специальных сигналов ПЦР. Также обязательным условием верной количественной оценки полученных результатов являются положительные надежные контрольные пробы, содержащие известное количество копий искомого гена (к примеру, на одну ПЦР-реакцию тысяча копий гена гепатита С). Несколько последовательных разведений количественного контроля позволяет создать калибровочные кривые, и по ним оценивается содержание в клинических образцах генокопий.

В определении количественной ПЦР ключевым достижением стало создание флуоресцентных ДНК-зондов, добавляющихся в реакционную смесь одновременно с простыми праймерами и позволяют отслеживать во времени процесс ПЦР, то есть real-time-ПЦР.

Под методологией TaqMan понимается синтез флуоресцентных ДНК-зондов, которые специфичны к средней части ампликона и имеют две метки на концах. Одной из них является флуоресцентная метка, вторая – молекула-гаситель данной флуоресценции.

Особый прибор, представляющий собой гибрид флуориметра и термоблока-амплификатора, производит постоянные замеры в каждой пробирке флуоресценции (принцип real-time-ПЦР). После 20-40 циклов ПЦР в результате для каждого образца будут получены индивидуальные кривые. Количество копий искомого гена, который содержится в исследуемом образце, может быть вычислено по калибровочным кривым с контрольными образцами.

Также важной особенностью осуществления ПЦР флуоресцентным методом является то, что пробирки со смесью ПЦР нет необходимости открывать при учете результатов. За счет этого снижается возможность заражения продуктами амплификации помещений, и необходимость в выделении особых рабочих областей для проведения электрофореза отпадает.

Что показывает расшифровка количественной ПЦР?

Посредством такого метода, как количественная ПЦР, находят качественные изменения в генах: вставки, делеции и точковые мутации. Но при некоторых наследственных нарушениях соответствующие симптомы появляются в ответ на изменение содержания определенных генов.

Благодаря количественному анализу получают числовой результат, чаще всего в МЕ/мл. Это значит, что в одном миллилитре исследуемого образца найдено определенное количество копий РНК или ДНК возбудителя, измеряемое в международных единицах.

В зависимости от величины диагностируется тяжесть инфекции. Для установления вирусной нагрузки обычно исследуют кровь, поскольку вирусы при заболевании свободно двигаются в крови.

Количественная ПЦР в анализе крови обладает двумя особенностями.

  1. Анализ проводится в присутствии праймеров или дезоксирибонуклеозидтрифосфатов, которые мечены посредством флуоресцентной или радиоактивной метки для точного определения содержания сформировавшегося продукта ПЦР.
  2. В процессе ПЦР следует рано завершать реакцию, пока не появилось слишком много продуктов ПЦР. Связано это с тем, что на конечной стадии насыщения, когда становится очень много продуктов ПЦР, лимитирующими звеньями данной реакции выступают как сам фермент, так и субстраты. Окончание очередного цикла ПЦР в таких условиях уже не характеризуется удвоением количества продуктов ПЦР, нивелируются незначительные количественные отличия между различными пробами, довольно четко определяемыми на ранних этапах после прохождения ряда циклов реакции.

ПЦР-исследование имеет стоимость, которая зависит от того, какая именно инфекция будет проверена, от методики анализа и исследуемого материала. Чтобы определить одну инфекцию, придется отдать в пределах 200-800 рублей. Также добавляется плата за взятие биоматериала – примерно 400 рублей.

источник

Все чаще в современной лабораторной диагностике прибегают к ПЦР методу, вместо привычных бактериологических или клинических анализов. В основе полимеразной цепной реакции лежит принцип многократного увеличения мельчайших частиц фрагментов ДНК возбудителя в пробе пациента, проводимого в лабораторных условиях.

Справка. ПЦР диагностика сравнительно «молодой» метод исследования. Ему чуть больше 30 лет. Американский ученый Керри Мюллис получил Нобелевскую премию за изобретение полимеразной цепной реакции.

Преимущество метода ПЦР диагностики в высокой точности анализа, позволяющей выявить возбудителей при небольших концентрациях. Кал исследуют на патогенные микроорганизмы, простейшие, гельминты.

  • В таблице ниже перечислены микроорганизмы, идентифицируемые при ПЦР диагностике, и вызываемые ими заболевания:

Rotavirus, Astrovirus, Enterovirus

Язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки

  • ПЦР методом выявляются простейшие — Giardia lamblia, возбудители лямблиоза. Цисты лямблий не выделяются с фекалиями постоянно. Чтобы их обнаружить обычным методом флотации, с последующей микроскопией, необходимо сдавать образцы в течение 5-7 дней. Полимеразная цепная реакция позволяет обнаружить лямблии с одной пробы биологического материала.
  • Также эта методика применяется для обнаружения различных гельминтов: нематод (острицы, аскариды), трематод (паразитирующих в печени, поджелудочной железе и ЖКТ), цестод (ленточные черви).

Результаты анализа после сдачи готовы в течение суток. ПЦР анализ кала указывает на наличие или отсутствие инфекционного возбудителя, простейших или гельминтов.

Справка. При методе полимеразной цепной реакции выявляется наличие возбудителя по следам его жизнедеятельности. Поэтому в представленном биоматериале, например, может не быть гельминтов, или их яиц, но ПЦР анализ покажет положительный результат, обнаружив ДНК паразитов.

В лабораториях предлагают комплексное обследование сразу на несколько возбудителей, так называемые профили. Одинаковые расстройства со стороны ЖКТ – тошнота, рвота, диарея, могут быть вызваны и патогенными микроорганизмами, и гельминтами. Комплексный ПЦР анализ позволяет ускорить постановку диагноза.

Противопоказаний для сдачи анализа кала для ПЦР диагностики не существует. Следует соблюсти некоторые требования перед забором биологического материала:

  1. Допускается для анализа кал, полученный естественным путем. Материал после клизмы непригоден.
  2. Не допускается сдача анализа после проведения рентгеновского обследования, с использованием контрастных веществ.
  3. Образец собирается до начала лечением антибиотиками.
  4. Следует прекратить прием препаратов, влияющих на работу ЖКТ, за 3-4 дня.
  5. Необходимо отменить введение ректальных свечей за несколько дней до сдачи биологического материала и препаратов, окрашивающих кал (висмут, железо).

Важно! Анализ кала для ПЦР диагностики сдается только в специальной таре. Необходимо заранее получить контейнер у лечащего врача, в лаборатории или приобрести в аптеке.

Правила сбора биологического материала для анализа простые. Их соблюдение обеспечит точность результата:

  • Необходимо собрать кал, полученный в день исследования.
  • Нельзя нарушать стерильность транспортного стаканчика.
  • Кал переносится из судна в емкость для транспортировки с помощью ложечки.
  • Следует на треть заполнить контейнер биологическим материалом.
  • Не допускайте попадание мочи в контейнер.
  • Образец доставляется в лабораторию в течение трех часов после сбора.
  • Нужно обеспечить охлаждение емкости с материалом во время транспортировки, если нет возможности доставить пробу в течение трех часов.
  • Допускается хранение биологического материала в холодильнике (2-8° С) до 24 ч.

Важно! Нельзя прикасаться руками к внутренней поверхности контейнера, крышки, ложечки, во время сбора анализа.

ПЦР диагностика очень чувствительный метод. Иногда он дает «ложноположительный» результат, если на лабораторной посуде будет присутствовать хоть небольшой фрагмент чужеродной ДНК. ПЦР многократно размножит эту ДНК и выдаст неверный результат. Этот недостаток метода решается использованием одноразовой посуды и соблюдением правил сбора материала.

Стоимость процедуры можно посмотреть в прайс-листе лаборатории.

Для записи на сдачу анализов заполните форму ниже и отправьте заявку. С Вами свяжется администратор клиники и уточнит желаемое время визита и все необходимые данные.

Результаты анализов можно получить непосредственно в клинике при личном визите пациента либо заранее оставить администратору свой адрес электронной почты и мы вышлем их на этот email.

источник