Методы исследования кала на сальмонеллез

Помимо сальмонелл – возбудителей брюшного тифа и паратифов А и В, описано более 2400 патогенных сероваров сальмонелл, вызывающих у человека острые гастроэнтериты, тифоподобные и септикопиемические формы заболевания, объединенных под названием сальмонеллез. Основными воз­будителями сальмонеллеза являются Salmonellaсероваров enteritidis, typhimurium, choleraesuis, haifa и т.д.

Бактериологический метод является ведущим методом в лабораторной диагностике сальмонеллеза (схема 10). Культуры сальмонелл чаще всего удается выделить из испраж­нений больных, несколько реже — из рвотных масс и промывных вод желудка, еще реже — из крови, мочи и желчи. Выделение сальмонелл из крови, костного мозга, спинномозговой жидкости, рвотных масс и промывных вод желудка подтверждает диагноз сальмонеллеза. У бактерионосителей сальмонеллы можно обнаружить в кале, моче, желчи.

Исследуемый материал засевают на чашки с висмут-сульфитным агаром и в среды накопления (маг­ниевую, селенитовую), из которых через 6— 10 ч делают пересев на висмут-сульфит агар. Посевы выращивают при температуре 37 0 С, на второй день отбирают колонии черного цвета и пере­севают на среду Олькеницкого (или Ресселя) для накопления чистой культуры. На 3-й день исследования выделенные чистые культуры пересевают в сре­ды «пестрого» ряда и ставят РА с поливалентными и групповыми (А, В, С, Д, Е) адсорбированными сальмонеллезными сыворотками. Если получен положительный результат с одной из групп сывороток, проводят РА с адсорбированными О-сыворотками, характерными для данной группы, а затем с монорецепторными Н-сыворотками (неспецифической и специфической фазами) для определения серогруппы и серовара сальмонеллы в соответствии со схемой Ка­уфмана-Уайта.

На 4-й день исследования учитывают изменения сред «пестро­го» ряда (табл. 10). Возбудители сальмонеллеза так же, как сальмонеллы паратифа В, не ферментируют лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу, маннит и мальтозу с образованием кисло­ты и газа, не образуют индола и (за небольшим исключением) выделяют сероводород.

Схема 10. Микробиологическая диагностика сальмонеллезов.

Биопроба.Материалом от больного производят пероральное заражение белых мы­шей, которые через 1-2 дня погибают от септицемии. При посеве крови из сердца и материала из внутренних органов выделяется культура сальмонелл.

Серологическое исследование —исследование с помощью РНГА парных сывороток крови больных, взятых с интервалом в 7-10 дней с сальмонеллезными поливалентными и группо­выми (группы А, В, С, Д, Е)диагностикумами. Диагностическое зна­чение имеет повышение титра антител в четыре и более раз.

Самостоятельная работа студентов

Изучить основные этапы бактериологического исследования метода диагностики сальмонеллёзов.

1. Учет посевов сальмонелл на среде Левина и Олькеницкого (демонстра­ция).

2. Контроль чистоты наделенной культуры сальмонелл (со среды Олькеницкого приготовлен мазок, окрашен его по Граму). Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные микропрепараты возбудителей сальмонеллёзов S.entericaspp. enterica ser. enteritidis, typhimurium, choleraesuis.Возбудители сальмонеллёзов — идентичные по морфоло­гии грамотрицательные палочки с закругленными концами.

3. Идентификация выделенной культуры возбудителя:

— по антигенным свойствам – учет ориентировочной реакции агглютинации на стекле с диагностическими монорецепторными сальмонеллезными агглютинирующими О- и Н сыворотками в соответствии со схемой Кауфмана-Уайта;

— по биохимическим свойствам — определение биохимической активности изучаемой культуры по «пестрому» ряду Гисса или Пешкова (демонстрация). Обратить внимание на расщеп­ление глюкозы, отсутствие расщепления лактозы и сахарозы.

— по фаголизабельности (учет пробы с фагом — демонстрация)

4. Определение чувствительности выделенной культуры к ан­тибиотикам методом бумажных дисков (демонстрация).

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Только сон приблежает студента к концу лекции. А чужой храп его отдаляет. 8726 — | 7461 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Сальмонеллезы — не одно, а группа острых заболеваний, которые чаще всего проявляются поражением органов пищеварения. Болеют не только люди, но и птицы, животные. По госпитальной статистике на сальмонеллезы приходится больше половины случаев всех инфекционных заболеваний.

Болезнь чаще всего регистрируется как вспышка в родовспомогательном учреждении, в детских садах, лагерях отдыха. Дети — наиболее чувствительный к заражению контингент, особенно грудного возраста.

Поэтому анализ на сальмонеллез включен в перечень обязательных осмотров людей, которые оформляются на работу в учреждения, связанные с обслуживанием детей, пищеблоки. Своевременно выявить заболевание у носителей необходимо для предотвращения его распространения.

Другой опасный контингент — люди со сниженным иммунитетом. Их наибольшее число находится на лечении в больницах разного профиля. Заражение человека в условиях стационара отличается от других случаев высокой устойчивостью возбудителя инфекции к лекарственным препаратам и сложным лечением.

В 1880 году впервые выделена сальмонелла у больного брюшным тифом. Дальнейшее изучение позволило обнаружить почти аналогичные бактерии у свиней, кур, других животных. Оказалось, что возбудители сальмонеллеза чаще всего находят у пациентов с клинической картиной острого отравления или гастроэнтерита.

Данные современных микробиологических исследований позволяют разделить класс сальмонелл на два вида и выделить 7 подтипов. Раньше считалось, что их значительно больше, но иммунологическим изучением возбудителей доказана многочисленная разновидность, связанная с антигенным составом (до 2500).

Диагноз сальмонеллеза ставится после выявления конкретной причины у больного. Для человека основным поражающим видом является подвид Еnterica. Он выявлен у 99% заболевших. Подтип сальмонеллы Typhimurium — способен вызвать тяжелое распространенное (генерализованное) поражение с наличием возбудителя в крови.

Редко обнаруживаются такие варианты, как:

Сальмонеллы имеют вид палочек, по отношению к окраске Грамм-отрицательны. Хорошо двигаются. Способны образовать защитную капсулу из полисахаридов. Относятся к факультативным (условным) анаэробам, то есть способны жить как в кислородной среде, так и без него. Энергию получают в результате окислительно-восстановительных реакций соединений, добытых из организма носителя.

Биохимические свойства положены в основу создания питательных сред. Сальмонеллы способны расщеплять многие углеводы (кроме лактозы, сахарозы), включая глюкозу, мальтозу, арабинозу, и образовывать при этом кислоту и газ.

Отдельные типы имеют отличительные свойства, что также используется в микробиологической диагностике. Например, Тyphi не образует газ, а Paratyphi A не выделяет индол. Все сальмонеллы расщепляют белок до сероводорода. Не имеют фермента оксидазы, содержат каталазу.

Сальмонеллы отличаются живучестью и сохранением заразности :

• в реках и открытых водоемах — 120 суток;
• соленой морской воде — месяц;
• земле до 9 месяцев;
• пыли домашнего происхождения — до 1,5 лет;
• колбасе и мясных изделиях — от 2 до 4 месяцев;
• при заморозке мяса — 12 месяцев;
• яйцах — 1 год;
• в скорлупе — почти месяц.

Сальмонеллы используют такие продукты, как молоко, творог, сметану, фарш в качестве питательной среды, где активно размножаются.

Степень заразности определяется факторами вирулентности сальмонелл. К ним относятся:

• синтез особых белков, способствующих проникновению возбудителя вовнутрь эпителиальных клеток кишечника и обеспечивающих выживаемость;
• стимуляция сальмонеллами цитокинов и хемокинов к воспалительной реакции;
• разрушение макрофагов крови человека;
• размножение внутри макрофагов с выделением эндотоксинов;
• действие эндотоксинов способствует поражению сосудов и нервных окончаний кишечника, повышает проницаемость клеток;
• стимуляция выделения хлоридов и выраженной диареи.

Иммунная диагностика сальмонеллеза имеет богатые возможности благодаря наличию у возбудителя выраженных антигенных свойств. По ним можно типировать вид сальмонеллы. Различают 3 основных антигена:

• О-антиген — выдерживает длительное кипячение (2,5 часа), имеет свойства эндотоксина;
• Н-антиген — находится в жгутиках, разрушается при нагревании выше 75 градусов, состоит из белка флагеллина. Существенным отличительным признаком от других энтеробактерий является способность выделять по фазам оба антигена.
• К-антиген — содержится в капсуле.

Vi-антиген характерен только для возбудителей тифа и паратифа. По антигенной преобладающей структуре Ф. Кауфман и П. Уайт в 2001 году предложили классификацию сальмонелл, которая используется и поныне.

Серологическое исследование считается довольно трудоемким, поэтому используется редко в виде реакции гемагглютинации, при помощи эритроцитарных диагностикумов. Определяется не только наличие антител, но и их титр. Для анализа достаточно 1–2 мл крови. Ее разводят изотоническим раствором и добавляют диагностикум с О-антигеном.

Имеет значение результат при определении антител в разведении 1/100 и росте титра в динамических исследованиях почти в 4 раза.Более чувствительной считается реакция непрямой гемагглютинации.

Возможны отрицательные результаты:

• в случаях легких форм болезни;
• наоборот, при тяжелом течении сальмонеллеза, у новорожденных и грудничков.

С помощью ИФА можно исследовать титр антител в крови, раздельно подсчитать его для специфических антител. Наличие высокого показателя М-иммуноглобулинов всегда указывает на активный инфекционный процесс.

Способ иммуноферментного анализа (ИФА) проводят в специальных лабораториях по контролю за эпидемиологической ситуацией. Они представляют эпидемиологам свои данные о выявлении нового подтипа возбудителя.

Где сдать кровь на иммунологический анализ на конкретной территории подскажет врач инфекционист или эпидемиолог. Частные лаборатории типа «Инвитро» проводят анализ по желанию посетителя.

Анализ также проводится при выздоровлении пациента от сальмонеллеза с помощью парных сывороток с интервалом в неделю. При этом особенно важно выявить бактерионосительство:

• острое — три месяца после заболевания;
• хроническое — более трех месяцев;
• транзиторное — одно-, двухкратный положительный высев сальмонелл из кала без симптоматики и выявления антител.

Лабораторная диагностика сальмонеллеза основывается на бактериологическом способе исследования кала. Он гораздо доступнее и достаточно информативен. Проводится в эпидемиологических лабораториях по направлению врача.

Учитываются способности возбудителя:

• расти на самых простых питательных средах при температуре 8–45 градусов;
• образовывать равномерное помутнение в жидкой среде;
• давать полупрозрачные бесцветные колонии на мясопептонном агаре.

Существуют селективные среды. Так называют добавление специфических веществ, при которых выживают только колонии сальмонелл. К ним относятся любые среды с желчью, селенитовый бульон, висмут-сульфит-агар. Дифференциально-диагностическими средами считаются лактозосодержащие варианты: Эндо, Левина, МакКонки. Колонии вырастают бесцветными, поскольку сальмонеллы неспособны раcщеплять лактозу.

Сальмонеллы можно выявить в фекалиях, рвотных массах, моче, промывных водах из желудка, в крови и спинномозговой жидкости. Оптимальным считается посев крови в течении периода повышения температуры. Из локтевой вены достаточно взять около 7 мл крови, провести засев в желчный бульон или на среду Рапопорта.

Бак анализ включает обязательное исследование биохимических свойств возбудителя, изучение строения под микроскопом. При определении длительности исследования приходится учитывать не только работу лаборантов, но и сколько времени занимает рост колоний.

Обычно результат выдается спустя неделю. Положительные данные получают при бак исследовании у 40–80% пациентов с симптомами сальмонеллеза. Максимальная высеваемость приходится на первые 7 дней заболевания.

При эпидемиологическом расследовании вспышки сальмонеллеза по указанию врача для анализа берутся:

• остатки приготовленных блюд;
• продукты, использованные в кулинарной обработке;
• смывы с кухонного оборудования, тарелок;
• при выявлении заражения в медицинском учреждении — смывы с рук персонала, оборудования.

Для определения кому и как сдавать анализ на сальмонеллез учитываются возможные источники возбудителя. Больной человек с легкой формой или носитель — выявляется при обследовании всего персонала, круга контактных лиц взятием мазка кала на дизгруппу.

В исследование включены наиболее распространенные инфекционные заболевания, проявляющиеся одинаковой клинической картиной (понос, температура, боли в животе, рвота):

• дизентерия,
• сальмонеллез,
• амебиаз,
• ротавирусная инфекция.

Забор материала проводится из анального отверстия только под контролем медицинского работника в инфекционном кабинете стерильной тонкой ватной палочкой. В случае выявления сальмонелл или других инфекционных агентов сотрудника отстраняют от работы на срок лечения и получения контрольных отрицательных результатов.

Домашние птицы (куры, утки, индюки) — являются источником заражения человека в половине случаев. Сальмонеллы находятся внутри кишечника или в крови птицы, проникают сквозь скорлупу яиц несущихся особей. Заражение происходит при употреблении невареных яиц. Недостаточной температуре кулинарной обработки.

Домашние животные (кошки, собаки, хомячки, мыши), а также скот (свиньи, коровы) могут быть носителями инфекции. Они передают сальмонелл через загрязненную калом, слюной, мочой внешнюю среду. Детям достается возбудитель с грязными руками. До 20% случаев заражения зависят от употребления свинины, говядины.

Мясо может заразить больной человек в процессе транспортировки, хранения, переработки.

Диагностика сальмонеллеза учитывает:

• клиническое течение и особенности симптоматики;
• уточнение очага распространенности;
• обследование контактных лиц;
• выявление нарушения санитарных норм;
• исследование продуктов питания.

Особую опасность представляют групповые случаи заболевания в род. домах, психиатрических стационарах, домах престарелых и инвалидов. Сальмонеллез может привести к прерыванию беременности у будущей матери, смертельному исходу младенцев.

Принимаются решения о временном закрытии торговых точек, стационаров или перепрофилизации в инфекционное отделение, обработке помещений дезинфицирующими жидкостями. Виновников наказывают административными мерами, штрафами. От того насколько быстро сделают свою работу эпидемиологи зависит недопущение распространения инфекции на территории.

Клиническая диагностика сальмонеллеза основана на учете специфических симптомов и отличительных признаков с другими похожими заболеваниями.

К типичным признакам сальмонеллеза относятся проявления острого поражения желудка и кишечника:

• начало внезапное, тяжесть быстро нарастает;
• повышение температуры, озноб;
• рвота съеденной пищей и желчью в первые часы заболевания;
• головная боль;
• максимальная болезненность в эпигастрии при гастритической форме, по ходу кишечника при гастроэнтеритическом течении, в правой подвздошной области в случае гастроэнтероколита;
• язык сухой, обложен густым налетом;
• скопление газа и урчание в кишечнике;
• понос с зеленоватыми фекалиями и зловонным запахом, примесью слизи и крови.

Для детей до года характерны обезвоженность организма, увеличение печени и селезенки, сонливость, вялость из-за токсического воздействия на мозг, возможны судороги.

В анализе крови наблюдается значительный лейкоцитоз со сдвигом формулы влево, рост СОЭ. В большинстве случаев на этой стадии инфекционный процесс может завершиться.

Тяжелое течение (тифоподобное) наблюдается при попадании возбудителя сальмонеллеза в кровяное русло, сопровождается септическим состоянием, выраженной интоксикацией, розеолезной сыпью. Сальмонеллы при этом способны вызывать дистрофию в селезенке и печени, сформировать очаги вторичного гнойного воспаления по всему телу.

Признаки сальмонеллеза важно отличить от очень похожих симптомов дизентерии, холеры, острого аппендицита, тромбоза мезентериальных сосудов, отравления мышьяком и ядовитыми грибами.

Для дизентерии более характерны тенезмы (ложные позывы к дефекации), скудный стул из слизи с кровью, спазм сигмовидной кишки, определяемый пальпаторно в подвздошной области слева, редкая рвота.

• водянистым стулом без запаха, с видом «рисового отвара»;
• отсутствием болей в животе и болезненности при дефекации;
• многократной рвотой, которая проявляется позже поноса;
• нормальной или пониженной температурой тела;
• отсутствием ознобов;
• выраженными признаками дегидратации.

К признакам острого аппендицита относятся:

• боль начинается в эпигастрии и переходит в подвздошную область справа;
• по характеру боль постоянна, не уменьшается после поноса, усиливается при кашле;
• наличие симптомов раздражения брюшины;
• чаще запор, если понос, то 3–4 раза без примесей;
• рвота не всегда, 1–2 раза в начале заболевания;
• в крови выраженный лейкоцитоз, при наблюдении усиливается.

Для тромбоза мезентериальных сосудов необходимо следующие сочетание признаков:

• пожилой возраст пациента;
• наличие выраженного атеросклероза сосудов;
• проявления ишемии судя по клинической картине болей в сердце и на ЭКГ;
• в отличии от сальмонеллеза боль невыносимая по интенсивности;
• отсутствие определенной локализации болей;
• жидкий стул без запаха с примесью крови;
• вздутие живота;
• нет признаков обезвоживания;
• нарастающий лейкоцитоз в крови.

При отравлении мышьяком наблюдаются:

• головные и мышечные боли;
• судорожный синдром;
• рвота носит упорный характер, ощущается запах чеснока;
• в жидком стуле много слизи;
• боль в животе без четкой локализации;
• сухость, жжение во рту;
• металлический привкус;
• отечность лица;
• выраженный конъюнктивит;
• возможны парезы и параличи.

Для отравлений грибами в отличии от сальмонеллеза характерны:

• связь с приемом в пищу грибных блюд (перед проявлением симптомов может пройти от одного до трех часов);
• бурное начало сразу всех признаков;
• боли в животе по типу сильных схваткообразных колик;
• тошнота, рвота, бледная поганка вызывает неукротимую рвоту;
• слюнотечение;
• стул водянистый с кровью;
• сильная головная боль, слабость из-за интоксикации;
• головокружение, падение артериального давления;
• расстройства психики с галлюцинациями, бредом, сопорозным состоянием;
• желтушность кожи.

Такое многообразие симптоматики сальмонеллезной инфекции способствует соучастию в процессе диагностики врачей разных специальностей. Сходство признаков часто требует консультации хирурга, кардиолога, у женщин — гинеколога. При этих заболеваниях важным аргументом в пользу сальмонеллеза служат положительные результаты посева, серологических и иммунных тестов.

источник

Исследование для выявления возбудителей кишечных инфекций рода Salmonella, в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) бактерий в образце кала.

Возбудители сальмонеллеза, ПЦР.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

1. Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
2. Не использовать слабительные препараты, ректальные свечи, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонны, пилокарпина и др.) и на окраску кала (железа, висмута, сернокислого бария), за 72 часов до сдачи кала.

Общая информация об исследовании

Salmonella (cальмонеллы) – это род грамотрицательных бактерий, насчитывающий свыше 2000 серотипов. Сальмонеллы попадают в организм при употреблении зараженной воды, яиц или мяса и способны вызывать сальмонеллез – острую кишечную инфекцию. При поражении кишечника и абдоминальных лимфатических узлов развивается сальмонеллезный гастроэнтерит, который сопровождается тошнотой, рвотой, диареей, спастическими болями в животе и лихорадкой. Если инфекция генерализуется, в 5-10 % случаев возможны тромбоэмболические осложнения, сальмонеллезный сепсис и менингит, пневмония, эндартериит, эндокардит, пиелонефрит. При поражении клеток ретикулоэндотелиальной системы развивается системная инфекция – брюшной тиф с лихорадкой, нарушением стула, сыпью в области живота и грудной клетки и симптомами поражения центральной нервной системы (заторможенностью, нарушением сознания и бредом).

Возможно бактерионосительство – острое (выделение возбудителя в течение 3 месяцев после выздоровления), хроническое (выделение возбудителя более 3 месяцев с момента выздоровления) и транзиторное (однократный положительный результат бактериологического или серологического исследования при отсутствии клинических проявлений заболевания). Для диагностики сальмонеллеза, наряду с серологическими и бактериологическими исследованиями, используется метод полимеразной цепной реакции, позволяющий выявить ДНК бактерий рода Salmonella.

Для чего используется исследование?

• Чтобы определить текущую инфекцию, вызванную бактериями рода Salmonella.
• Для выявления бактеpионосителей, в том числе сpеди pаботников пищевых пpедпpиятий.

Когда назначается исследование?

• Когда есть подозрение на инфекцию, вызванную бактериями рода Salmonella.
• При обследовании pаботников пищевых пpедпpиятий, чтобы выявить бактеpионосителей (например, пpи поступлении на pаботу новых сотрудников).
• Если у пациента есть заболевание, протекающее со сходными с сальмонеллезом симптомами:
  • повышение температуры (иногда до 39 °С и выше),
  • общая слабость,
  • головная боль,
  • озноб,
  • тошнота, рвота,
  • боли в эпигастральной и пупочной областях,
  • расстройство стула (диарея).

Референсные значения: отрицательно.

• Наличие ДНК бактерий рода Salmonella в кале, что указывает на острую инфекцию или хроническое бактерионосительство.

• Отсутствие ДНК бактерий рода Salmonella, что чаще всего означает отсутствие вызываемых этими бактериями заболеваний.



• Дети, пожилые люди, а также лица с сопутствующими заболеваниями желудочно-кишечного тракта и нарушениями в иммунной системе входят в группу риска по развитию сальмонеллеза, особенно генерализованных форм.
• Для постановки диагноза «сальмонеллез» обязателен положительный результат бактериологического или серологического исследования.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, терапевт, врач общей практики, гастроэнтеролог.

источник

Сальмонеллез – кишечная инфекция, от которой страдают люди, животные, птицы. Актуальность сальмонеллеза обусловлена высокими показателями заболеваемости. В процессе заражения сальмонеллой возникает своеобразная диарея и пищевая токсикоинфекция (острое желудочно-кишечное заболевание). Длина палочки сальмонеллы составляет 2-4 мкм. Она не имеет защитную оболочку, но не поддается влиянию некоторых химических и физических факторов. Например, выдерживает в течение 25-45 минут температуру 70 градусов. Симптомы заражения сальмонеллой могут быть ярко выражены, а могут напоминать заражение другими паразитами. Поэтому для правильного лечения необходимо пройти лабораторную диагностику, сдать необходимые анализы, которые могут подтвердить или опровергнуть наличие сальмонелл в организме.

Практически во всех случаях сальмонеллез путают с отравлением. Последнее вылечить самостоятельно можно, но не сальмонеллез. Он лишь будет прогрессировать. После диагностики сальмонеллеза врач назначает специальную терапию.

Педиатр, инфекционист, терапевт общей практики, семейный врач, гастроэнтеролог – абсолютно любой доктор может назначить анализ на сальмонеллез. У вас всегда есть выбор: будет это частный диагностический центр или государственное медицинское учреждение. Про все нюансы анализа (смывы, анализ крови, анализ кала) вам должен рассказать направляющий врач.

Как правило, лабораторная диагностика сальмонеллеза проводится 2 раза (первичный и повторный анализ) в одной и той же лаборатории. Это делают для того, чтобы получить достоверный результат, ведь различные лаборатории могут использовать разную среду и ответ может не совпадать.

Обратиться к врачу и пройти лабораторную диагностику сальмонеллеза необходимо в следующих случаях:

• проявление кишечной инфекции, отравления,
• для исключения аппендицита, острого калькулезного холецистита (камни в желчном пузыре), тромбоз сосудов брюшной полости, инфаркт миокарда,
• с целью обследования и профилактики, наблюдение за потенциальными или ранее выявленными очагами инфекции.

Сальмонелла может попасть в организм через мясо домашней птицы (утки, куры), также она проникает через скорлупу в яйцо. Дикие животные, птицы, рыбы, раки, моллюски, домашний скот, коты, собаки, грызуны также являются носителями сальмонеллы. Бактерии выходят вместе с молоком, калом, мочой, слюной, таким образом загрязняя все вокруг.Актуальность сальмонеллеза обусловлена его глобальным распространением.

ПЦР – это методика, которая позволяет выявить остатки ДНК сальмонелл в кале. Перед анализом необходимо заранее подготовиться. Для этого исключаются все медикаменты, которые имеют хоть какое-то влияние на кишечник за 3-е суток до сдачи анализа. Также следует исключить препараты, которые способны менять цвет кала.

Мазок на дизгруппу– это специальное лабораторное исследование, которое назначает врач в случаях подозрения на острую кишечную инфекцию. Благодаря такому анализу выявляется наличие любых микроорганизмов. Также можно определить их чувствительность к антибиотикам. После результатов мазка на дизгруппу доктор назначает домашнее или стационарное лечение. Как правило, после лечения обязательно делается повторный мазок для того, чтобы убедится, что здоровью больше ничего не угрожает.

Такой способ определения наличия сальмонелл в организме и их прироста на сегодняшний день является самым распространенным. Для этого делают анализ кала. Важно чтобы кал был свежим. Например, вы сдаете анализ на сальмонеллез в 10 утра, тогда фекалии должны быть утренними. Таким образом, вы получите точный результат. Иногда исследуются рвотные массы, моча, желчь, гной из очага воспаления, вода после промывки желудка, кишечника.

В процессе этой диагностики исследуется венозная кровь, а именно наличие в ней антител. В организме зараженного сальмонеллой человека начинают вырабатываться антитела. Анализ крови проводится при явных кишечных симптомах отравления. Также это обследование стоит пройти людям, которые были в близком контакте с зараженным.

Для точного проведения серологической диагностики анализ на сальмонеллез берется несколько раз с интервалом 5-7 дней. 1:200 – минимальный титр антител (предельное разведение пробы сыворотки крови), который должен быть у здорового человека.

Анализ крови занимает намного меньше времени и сил, чем диагностирование при помощи бактериального посева кала. Перед анализом важно ничего не есть целые сутки. Также стоит поберечь себя от стресса и физических нагрузок.

Нормой будет считаться полное отсутствие антител. При этом, обследуемый ранее не болел сальмонеллезом – это важное условие. На начальной стадии заражения антитела могут отсутствовать, поскольку иммунитет человека еще не отреагировал. Поэтому для большой точности анализ крови повторяют спустя 6-7 суток.

Найденные антитела говорят лишь о заражении. Людям, которые ранее уже вылечились от сальмонеллеза не стоит исключать повторное заражение. В организме у человека вырабатывается иммунитет лишь на тот вид сальмонелл, которые были предыдущей причиной заражения. Сегодня медицине известны несколько видов.

У больного титр антител в крови в течение 10 дней увеличивается в 4 раза. В различных лабораториях могут быть разные значения. Поэтому он определяется и подсчитывается для более точного результата. Незначительное и стабильное количество титра антител говорит о том, что в прошлом человек перенес сальмонеллез, но на сегодняшний день абсолютно здоров.

Для этой процедуры берут небольшое количество крови с вены. После чего смешивают со специальным гелем в пробирке. Благодаря ему активируется процесс свертывания крови. Для получения полной картины заболевания обязательно берется общий и биохимический анализ крови. Таким образом, определяется степень интоксикации, изменение объема электролитов в крови, обезвоживание.

При сальмонеллезе присутствуют определенные изменения кала. Это свидетельствует о том, что бактерии начали влиять на функции и состояние кишечника, а именно:

• выделение с калом крови, лейкоцитов, эритроцитов,
• объем крахмала в организме увеличивается,
• увеличивается количество мышечных волокон, не переваренных в зараженном сальмонеллами желудочно-кишечном тракте.

Серологическое исследование делается на протяжении 5-7 дней, а диагностика методом ПЦР займет сутки. Сколько понадобится времени, прежде чем придет ответ зависит только от того, какой анализ был назначен. Лишь доктор поставит правильный диагноз и назначит необходимое лечение на основе жалоб, осмотра и результатов диагностики.

источник

Лабораторная диагностика сальмонеллеза у детей, взрослых и беременных — виды анализов и сколько времени делают

Кишечная инфекция, вызванная сальмонеллами, провоцирует такое неприятное заболевание, как сальмонеллез. Для выявления патогенной флоры необходим бак посев, другие виды лабораторных исследований организма. Кал на сальмонеллез сдают в лабораторию, а по результатам врач назначает эффективное лечение в домашних условиях или стационаре.

При возникновении подозрения на сальмонеллез необходим комплексный подход к проблеме, который включает ряд лабораторных исследований. Это хорошая возможность определить характер опасной инфекции, степень ее распространения и способы, как ускорить процесс выздоровления. Комплексная диагностика сальмонеллеза предусматривает медицинской практикой следующие анализы:

• бактериологический посев для определения присутствия, количества и роста вредных сальмонелл;
• серологический метод для точного выявления антител с подробным исследованием венозной крови;
• копрологическое исследование для выявления характерных сальмонеллезу изменений в структуре каловых масс;
• забор крови на анализ с целью обнаружить антитела к сальмонеллезу. Метод неинформативный при раннем инфицировании;
• иммунофлюоресцентный метод является современной экспресс-методикой;
• иммунохроматографический анализ для определения связи между возбудителем и антителом на клеточном уровне;
• исследование смыва с посуды, яичной скорлупы для выявления характера патогенного возбудителя;
• реакция связывания комплемента для выявления антител к сальмонеллам;
• анализ на дизгруппу для выявления в организме сальмонеллеза или дизентерии.

Отдельно стоит выделить последнее лабораторное исследование, которое для врача является особенно информативным. Посев кала на дизгруппу необходимо выполнить, если пациент мучается от прогрессирующих симптомов диспепсии, очевидных признаков интоксикации организма. Пациенту придется брать стерильную емкость для забора и хранения биологического материала, а после выполнения анализа отправиться в лабораторию за самим исследованием и результатами. Цена такой услуги варьирует в пределах 500 рублей, что доступно всем заинтересованным своим здоровьем пациентам.

Чтобы определить присутствие болезнетворных бактерий, первым делом необходим общий анализ крови. При подозрении, что развивается сальмонеллез, это нужное и информативное лабораторное исследование, для выполнения которого требуется исключительно венозная кровь. Ее порция помещается в специальную пробирку с содержанием вещества для свертывания, после врач наблюдает за реакцией биологического материала. Дополнительно проводится биохимический анализ крови, чтобы отследить поведение патогенной флоры.

Фекалии – это биологический материал, забор которого позволяет провести серологическое обследование на брюшной тиф и другие инфекционные заболевания. Таким способом можно обнаружить патогенного возбудителя, степень патологического процесса, спрогнозировать клинический исход. Пациенту предстоит пройти следующие лабораторные исследования, методики.

Такой метод помогает определить степень повреждения кишечника и функции органов ЖКТ при повышенной активности бактериальной флоры. Копрограмма кала предоставляет врачу следующую информацию о прогрессирующем недуге:

• количество мышечных волокон увеличивается;
• объем крахмала и неправильной клетчатки увеличивается;
• лейкоциты, кровь, лейкоциты не радуют своим присутствием.

Чтобы ответ был достоверным, утреннюю порцию кала собирают в стерильную пластиковую емкость и направляют в лабораторию. Биологический материал можно собрать на анализ и накануне вечеров, но важно помнить о допустимом способе хранения. Каловые массы в герметичном состоянии могут без снижения качество сохраняться в холодильнике на протяжении 24 часов – не более. В противном случае диагностика сальмонеллеза не отличается высокой точностью.

Реакция пассивной гемагглютинации является вспомогательной диагностикой кишечной инфекции. Если бактериологическое исследование показало отрицательный результат, РПГА с сальмонеллезным диагностикумом помогает поставить клинический диагноз. Чтобы положительный результат был достоверным, повторное лабораторное исследование проводится повторное через 7-10 дней. Использование пассивной гемагглютинации уместно после длительного заражения, иначе концентрация антител ничтожна мала.

Врач выполняет забор крови, дополнительно исследует порцию каловых масс. При правильной подготовке этот процесс занимает не так много времени, при этом обеспечивает достоверный результат. Перед тем как берут анализ на сальмонеллез, специалист изучает жалобы человека, проводит сбор данных анамнеза и дает направление для прохождения указанного анализа. Если это кал, его забор производится в домашних условиях, а кровь из вены добывает профессиональная медсестра лабораторным путем.

Это морально устаревший метод диагностики, который используют благодаря его универсальности. Биологическим материалом может быть не только кал, но и рвотные массы, желчь или воды желудка. Бак посев на дизгруппу проводится в лабораторных условиях при использовании только свежей порции каловых масс. Таким способом можно выявить не одного, а целую группу кишечных возбудителей, способствующих развитию дизентерии и не только. Проводят такое исследование в любом диагностическом центре, при этом определяют доминирующий тип сальмонеллы, степень ее активности.

Антитела к сальмонеллам характеризуют присутствие заболевания. Лабораторным методом можно определить наличие остатков ДНК патогенной флоры, а для этого необходим забор венозной крови. Такой анализ для выявления сальмонелл необходим при очевидных признаках расстройства пищеварения, при этом проводится в комплексе с бактериологическим методом. Серологические исследования крови на антитела не требует предварительной подготовки, но важно понимать: если пациент ранее переболел сальмонеллезом, в его крови по-прежнему присутствуют антитела к сальмонеллам.

Чтобы в патологический процесс не было вовлечено внутриутробное развитие плода, необходимо провести анализ на сальмонеллез при беременности. Некоторые пациентки не догадываются об инфекции, поэтому не думают о лечении. Такое промедление беременных только вредит ребенку, а на свет может появиться инвалид. Чтобы этого не произошло, энтеробактерия выявляется лабораторным методом. Указанный мазок лучше провести еще при планировании беременности, чтобы в случае необходимости своевременно пролечиться. Только после этого можно благополучно планировать зачатие.

Поскольку подрастающее поколение попадает в группу риска, проведение профилактических мероприятия должно быть систематическим. При первых подозрениях о прогрессирующем заболевании необходима комплексная диагностика сальмонеллеза у детей, которая ускоряет процесс постановки диагноза, определения схемы интенсивной терапии. Это однозначно следующие методики:

1. Серологический метод. Его задействуют через 7 дней с момента заболевания, а после повторяют еще через неделю эффективного лечения.
2. Бактериологический метод, который предоставляет достоверное заключение пациенту через 3-4 дня.
3. Экспресс-диагностика сальмонеллеза, представленная в медицинской практике реализацией иммунофлуоресцентного метода.

Делать анализ положено при первых признаках сальмонеллеза, причем это не одно лабораторное исследование, а целый комплекс. При подозрении такого токсичного отравления необходима диагностика с помощью ПЦР, которую врачи выполняют в течение суток, а потом предоставляют пациенту результаты на руки. Серологическое исследование проводится на протяжении 5-7 суток и копрологическое исследование тоже. Вопрос, сколько дней делается анализ на сальмонеллез, индивидуальный для каждого диагноза, поэтому первым делом требуется явиться на осмотр к лечащему врачу.

Если наблюдаются предпосылки к сальмонеллезу, необходимо сдать анализы. Врач сообщает, сколько предстоит ждать результатов, а в указанный день объяснит полученную в руки расшифровку. Если анализы на сальмонеллез показывают отсутствие антител, это значит, что проблема со здоровьем полностью отсутствует. Для большей уверенности, не помешает выполнить повторный мазок, например, еще через неделю. Только так можно не сомневаться, что сальмонеллез отсутствует.

Если ответ положительный, взрослому пациенту и ребенку предстоит незамедлительное лечение. Острый приступ отравления сопровождается интоксикацией организма, поэтому предстоит устранить неприятные симптомы, избавиться от остатков инфицированной пищи, как основного провоцирующего фактора. Выполненный анализ крови предоставляет следующие перемены в составе биологической жидкости:

• количество лейкоцитов повышено
• наблюдается сдвиг в формуле влево;
• повышение показателя СОЭ;
• эритроцитоз;
• диагностический титр при РПГА – 1:200;
• нарастание титра антител в парных сыворотках;
• присутствие сальмонеллезных О и Н – монодиагностикумов.

Ребенку проводить анализ необходимо строго по показаниям, но также не исключена необходимость проведения лабораторного исследования при поступлении в детский сад, другое учебное заведение. Чтобы взять путевку в лагерь или на стационарное лечение, важно выполнить мазок на сальмонеллез. Такой метод обследования может использоваться и в других инстанциях. Например, взрослым положено сдать анализ на брюшной тиф для санкнижки при оформлении на новое место работы. Чаще указанное исследование проводится на платной основе.

При подозрении на очаг патологии пациент отправляется к лечащему врачу или вызывает карету скорой помощи. Для санкнижки лучше обратиться в платный медицинский центр, тем более, цена анализа доступна для всех желающих. В Москве есть ряд лабораторий, которые с максимальной точностью проводят лабораторные исследования, предоставляют на руки информативные результаты. Вот примерные расценки платной услуги в разных медицинских учреждениях столицы.

Название медицинского центра

Название лабораторного исследования на сальмонеллез

источник

Диагностика и сдача анализов при сальмонеллезе, это единственный способ распознать опасное кишечное заболевание. Заниженная пищевая культура человека, несоблюдение гигиенических и санитарных норм способствуют проникновению инфекции в организм. Обнаружить подселение бактерий salmonella, можно только проведя подробное исследование крови и кала больного человека. Диагностика и анализы при сальмонеллезе занимают минимальное количество времени, так как лечение должно начаться незамедлительно после начала симптоматичного процесса.

Инфекция сальмонеллеза, это следствие передачи кишечной бактерии от зараженного животного к человеку. Инфицирование происходит путем контакта с испражнениями больного животного, либо через продукты его производства — молоко, яйца, мясо. Причем, при большинстве видов переработки, сальмонелла продолжает вести себя активно и размножаться. Лишь кипячение и прямое воздействие ультрафиолета уничтожают ее сразу.

Попадая в желудочно-кишечную среду человека, бактерия, в период своего распада выбрасывает в организм крайне токсичное вещество — эндотоксин. Проникая в кровь, этот элемент воспринимается организмом человека, как отравление, со всеми проистекающими отсюда осложнениями. Не вовремя начатое лечение, либо игнорирование симптоматики, часто заканчивается смертью зараженного человека.

Уберечься от сальмонеллеза, как от фактора, иногда не зависящего от человеческой бдительности, невозможно. От этого острого заболевания не существует вакцинаций и не предусмотрено профилактических медицинских мер.

На фоне общего риска, выделяют несколько групп людей, имеющих долю вероятности заражения больше, чем остальные:

• маленькие дети активного возраста 2-5 лет;
• люди пожилого возраста;
• перенесшие операцию по удалению селезенки или желудка;
• любители употребления в пищу сырых птичьих яиц;
• фермеры, прочие лица, часто контактирующие с домашней птицей;
• пациенты с раковыми заболеваниями, а также, страдающие иммунодефицитом;
• периодически путешествующие люди.

Невозможно контролировать ситуацию вокруг себя настолько, чтобы предотвратить контакты с людьми, подвергшимися возможному заражению. Поэтому, в жизни не исключены случаи необходимости пройти бактериологическое обследование, в связи с выявлением больного человека в привычном окружении. Подлежит контролю, в отношении контактеров, первая неделя после диагностирования сальмонеллеза у зараженного человека. Диагностические меры назначаются на 2-ой, 5-ый и 7-ой день.

Методы диагностики для подтверждения первоначального диагноза сальмонеллеза, включают в себя следующие меры:

• Осмотр врачом и сбор жалоб;
• Общие анализы крови и кала;
• Бактериологическое исследование;
• Антибиотикограмма;
• Серологическое исследование.

Болезнь по-разному переносится взрослыми людьми и особенно тяжело — детьми до двух лет и лицами, уже имеющими заболевания желудка или кишечника в анамнезе жизни. Симптомы могут проявиться как в первые же сутки после заражения, так и в течение последующих трех, причем и острота и алгоритм поступления признаков значительно отличаются.

1. Сальмонеллезный гастрит ведет в симптоматике:

• общим ухудшением самочувствия, резкой потерей работоспособности и незначительным повышением температуры;
• боли в подреберном участке живота;
• обильная повторяющаяся рвота;
• понос отсутствует.

1. Гастроинтестинальная форма, это самый распространённый вид сальмонеллеза:

• предобморочные состояния, общая слабость;
• пронзительная боль в животе;
• нарушение терморегуляции;
• рвота возможна, но не обязательна;
• как последний признак — возникает сильный понос.

1. Сальмонеллезный сепсис показывает самую тяжелую клиническую картину:

• резко скачкообразное повышение температуры тела;
• обильное потоотделение, озноб;
• тянущие боли в икроножных мышцах;
• возможны обмороки, возбудимость;
• побледнение кожных покровов, высыпание в виде красных пятен.

Даже в тяжелом состоянии пациента, ни один из видов лабораторных или аппаратных исследований не начнется прежде, чем врач не соберет определенный набор общих данных. Параллельно с опросом, происходит осмотр больного, на наличие «острого живота», изменения цвета кожных покровов. В ходе расспросов, врач попытается выяснить у пациента:

• как давно замечены первые признаки болезни?;
• какие это признаки?;
• употреблялись ли перед появлением симптоматики какие-либо пищевые продукты и какие?;
• имеется ли у кого-то из окружения больного похожая клиническая картина?;
• какова частота рвотных позывов и стула?

Дальнейшее диагностирование происходит лабораторным способом, через сбор биологического материала поступившего пациента.

Это методика подразумевает сбор сразу нескольких видов исследуемого материала:

• кровь;
• моча;
• фекалии;
• частицы рвотных масс;
• смывы из желудка.

В экстренном порядке, лаборантами делается посев собранных элементов на питательные среды бактериального возбудителя:

• посевом кала и мочи выявляется среда обогащения и питательные элективные среды;
• посев крови, с применением желчного бульона с концентрацией от 10 до 20%, также проходит окрашивание в чашке Петри и изучается на рост бактериальных колоний.

При заборе материала для анализа, соблюдаются следующие условия:

• образец отбирается с самой разжиженной части естественного выделения больным;
• высевают образцы в долях 1:5 испражнений и высеваемой среды соответственно.

В случае образования вспышки инфекции в месте длительного пребывания (школа, интернат, детсад), сбор образцов производится с пищевых отходов и смыва с предметов посуды.

Результат серологического метода составляется по показателям двух исследований: РНГА — реакции непрямой гемагглютинации и РА — реакции агглютинации. Проводится изучение на основании забора венозной крови, разведенной раствором натрия хлорида и диагностикума (вещества, содержащего антигены salmonella).

Реакция агглютинации подтверждается, если показатель титра антител 1:200. Реакция непрямой гемагглютинации положительна при показании титра 1:600.

Общий анализ кала (копрограмма) не дает контрольной информации при диагностике, но только он обнаруживает воспаление, происходящее в кишечнике и произвести проверку на наличие лейкоцитов.

К сдаче этого анализа, если он производится не экстренным образом, требуется подготовка. За 72 часа до забора, запрещается принимать лекарственные средства, воздействующие на функции желудочно-кишечного тракта, а также могущие повлиять на изменение цвета фекальных масс.

Кроме того, при сдаче кала ребенка, нужно проследить, чтобы материал на обследование подавался свежим. При методе ПЦР, который будут использовать лаборанты для вычисления ДНК бактерий salmonella, срок с момента испражнения имеет решающее значение.

Измененная в результате деятельности бактерий структура кала, будет характеризоваться следующими показателями:

• число мышечных волокон увеличено;
• в не переработанных остатках пищи присутствует значительное количество крахмала;
• в фекалиях обнаружена кровь, эритроциты и лейкоциты.

В зависимости от выбранной методики исследования, время на получение результатов и их расшифровку может длиться от 1 до 7 дней.

Данное исследование определяет ход дальнейшего лечения, так как оно помогает определить, к какому виду антибиотика бактерии восприимчивей всего. Проводится антибиотикограмма в чашке Петри под постоянным воздействием различных препаратов.

Для проведения анализа используются специальные диски из бумаги, с нанесенным на них антибиотическим средством. Диски помещают в среду, зараженную сальмонеллезом. При качественном воздействии на болезнетворные бактерии, их размножение и активность вблизи антибиотика останавливается, в противном случае — продолжает расти.

Непосредственная борьба с сальмонеллезом невозможна по одной причине — из-за отсутствия прямого противника, то есть, одной конкретно выделенной бактерии. Разновидностей этой инфекции настолько много, что составление какой-то отдельной вакцины не сыграет роли, ведь при диагностировании тогда, огромное количество времени терялось бы еще и на определение вида сальмонеллы.

Единственной разумной мерой профилактике остаются азы пищевой и санитарной культуры:

• соблюдение необходимого времени готовки так, чтобы мясо, рыба, яйца не оставались частично сырыми;
• не совершать покупки продуктов в местах, не оборудованных витринами и холодильными установками;
• не пастеризованное молоко необходимо кипятить;
• не использовать продукты питания дольше указанного на них срока;
• не пить воду из открытых источников;
• овощи, фрукты, которые нужно употребить свежими, обдавать горячей проточной водой.

Лето — самое опасное время, учитывая риск заражения сальмонеллезом. Даже приготовленное по всем правилом блюдо, оставленное в условиях летнего зноя на несколько часов, становится благоприятной средой для возникновения и размножения инфекции.

Бактерии поджидают человека везде — на огороде, среди только что сорванных овощей, на полке магазина, среди банок маринадов с истекшим сроком годностей, в кондитерском изделии со сливочным кремом с использованием некачественного масла.

Только полное владение информацией сможет уберечь вас от заболевания, против которого единственной и надежной прививкой является бдительность.

источник

Среди различных инфекционных поражений организма особое место занимает сальмонеллез – острое заболевание, которое сопровождается сильной интоксикацией и желудочно-кишечным расстройством. Возбудители инфекции – бактерии из рода сальмонелл. Отличительной чертой данной патологии является то, что диагностика сальмонеллеза – довольно сложная задача для врачей, поскольку подтвердить присутствие инфекции можно только лабораторным путем.

Основные носители данной инфекции – животные. Причем сальмонеллез у животных может протекать скрытно и продолжаться в течение долгих лет. Как правило, в организм человека сальмонелла попадает с пищей через продукты питания – молоко, яйца, рыбу, мясо. Также источником заражения может стать плохо очищенная вода из водопровода, либо вода из открытых водоемов. После проникновения в организм человека сальмонеллы «поселяются» в слизистой оболочке тонкой кишки и начинают выделять токсины, которые и являются причиной развития интоксикации, боли, диареи.

Проявления сальмонеллеза могут начаться уже через 6 часов после заражения, хотя нередко инкубационный период длится 2 – 3 суток. Ярко выраженные симптомы: недомогание, сильная слабость, головная боль, озноб, высокая температура тела (38 – 39°), тошнота, рвота, боль (преимущественно схваткообразная) в животе. Развивается сильнейшая диарея, причем стул пенистый, жидкий, зеленоватого цвета и зловонного запаха. Случается, что через пару дней в выделениях наблюдаются примеси крови и слизи. Острое течение болезни длится 2 – 10 дней. Осложнениями сальмонеллеза могут быть инфекционно-токсический шок, реактивный полиартрит, токсическое расширение тонкой кишки, перитонит. Основные методы диагностики этого инфекционного поражения организма: бактериологический и серологический (включая ИФА – иммуноферментный анализ).

При данном методе лабораторного исследования исходным материалом для обнаружения сальмонелл являются кровь, моча, промывные воды желудка, рвотные массы, каловые испражнения и даже спинномозговая жидкость. Сущность бактериологического метода: посев собранного материала на питательные среды. Это основной способ выявления инфекций при любых кишечных бактериальных заболеваниях. В частности, посев желчи, мочи, кала проводят на так называемые среды обогащения (среду Кауфмана, Мюллера и т.п.), либо на питательные элективные среды (висмут-сульфитный агар, среду Плоскирева и др.). А для посева крови используют 10 – 20% специальный желчный бульон. При бактериологическом исследовании самый высокий процент положительных результатов наблюдается в первую неделю после заражения.

Особенность серологического метода – обнаружение в крови зараженного человека специфических антител и исследование их титра. Для этой цели используют такие методики, как реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) или реакцию агглютинации (РА). На практике чаще применяют реакцию РНГА, обладающую более высокой чувствительностью. Взятую из пальца или вены кровь (1 – 2 миллилитра) разводят раствором (изотопическим) хлорида натрия с последующим добавлением диагностикума, который содержит антигены сальмонелл. Если наблюдается нарастание титра специфических антител в 2 – 4 раза и больше, то диагностируют сальмонеллез.

В настоящее время при исследовании мочи и надосадочной жидкости (копрофильтратах) применяется более перспективный и эффективный серологический метод обнаружения специфических антител – иммуноферментный анализ (ИФА). Он позволяет определить специфические иммуноглобулины различных классов – A, G, M. В частности, наличие антител класса М говорит о том, что в организме активно протекает инфекционный процесс.

Конечно, диагностику сальмонеллеза необходимо проводить как можно быстрее, поэтому при тяжелых расстройствах желудочно-кишечного тракта, сопровождаемых высокой температурой тела, рвотой, диареей, следует немедленно обращаться к врачу. Лечение сальмонеллеза длительное, а в тяжелых случаях больного помещают в стационар. Зараженному человеку нужно снять воспаление, вывести токсины, уничтожить возбудителя инфекции. Поэтому, кроме антибиотиков, используются самые разные лекарственные препараты. Кроме основного лечения, назначаются витаминотерапия и строгая диета. Берегите себя!

источник

Заплатить налоги необходимо до 2 декабря. Если у вас есть вопросы о порядке уплаты или расчете налогов, присылайте их на editor@garant.ru. Ответы на самые популярные из них мы опубликуем на портале ГАРАНТ.РУ.

Программа, разработана совместно с ЗАО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу, выдаются удостоверения установленного образца.

Об актуальных изменениях в КС узнаете, став участником программы, разработанной совместно с ЗАО «Сбербанк-АСТ». Слушателям, успешно освоившим программу выдаются удостоверения установленного образца.

Обзор документа

Методические указания МУ 4.2.2723-10 «Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 13 августа 2010 г.)

Методические указания МУ 4.2.2723-10
«Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды»
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 13 августа 2010 г.)

Дата введения: 2 сентября 2010 г.

1.1. Настоящие методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами организаций здравоохранения и других заинтересованных организаций.

1.2. В настоящих методических указаниях определен порядок проведения лабораторных исследований в целях обнаружения сальмонелл в клиническом материале, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.

1.3. Настоящие методические указания распространяются только на лаборатории, имеющие право на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и удовлетворяющие требованиям к помещениям и оборудованию в соответствии с СанПиН 1.3.2322-08.

ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота

ПЦР — полимеразная цепная реакция

Н-антиген — жгутиковый антиген, представляющий собой термолабильный белок

О-антиген — соматический антиген, представляющий собой липополисахарид клеточных мембран

Смесь О-сывороток — диагностические адсорбированные сыворотки сальмонеллезные

R-форма — шероховатая форма

RAPD — амплификация с произвольными (случайными) праймерами

ISO-6579 — международная организация стандартизации

MLST — мультилокусное секвенирование-типирование

PFGE — электрофорез в пульсирующем поле

VNTR — амплификация тандемных повторов с переменной копийностью

SS-агар — сальмонелла-шигелла агар

РПГА — реакция пассивной гемагглютинации

AFLP — оценка полиморфизма длины фрагментов амплификации

МУ по микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями — 1984 г.

МУ «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды» — 1990 г.

ГОСТ Р 52814-2007 (ИСО 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella.

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологического анализа.

ГОСТ 26669-85. Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологического анализа.

ГОСТ Р 50455-92 Мясо и мясные продукты. Обнаружение сальмонелл (арбитражный метод).

ГОСТ Р 51448-99 (ИСО 3100-2-88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований.

ГОСТ 9792-73 «Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб».

ГОСТ 7702.20-95 «Субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб».

ГОСТ Р 52833-2007 (ИСО 22174-2005). Микробиология пищевой продукции и кормов для животных. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для определения патогенных микроорганизмов. Общие требования и определения.

ГОСТ 30705-2000 «Продукты молочные для детского питания. Методы микробиологического анализа».

МУ 4.2.1884-04 Санитарно-микробиологический и санитарно-паразитологический анализ воды поверхностных водных объектов.

МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

МУ 1.3.1888-04 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности».

Информационное письмо МЗ РСФСР № 10/11-3223 от 28.08.1987 г.

«Методы контроля бактериологических питательных сред». Методические указания. МУК 4.2.2316-08.

«Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08.

«Методы контроля. Бактериологические и микробиологические факторы. Техника сбора и транспортировки биоматериала в микробиологические лаборатории» МУ 4.2.2039-05.

Инструкция по применению набора реагентов «Диагностикум эритроцитарный сальмонеллезный О-антигенный жидкий» от 22.08.2008 № 6854-Пр/08.

«Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» СанПиН 2.3.2.1078-01.

«Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений» СП 2.1.7.728-99.

Приказ № 535 от 22 апреля 1985 г. «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».

Laboratory Protocol «Isolation of Salmonella spp. From Food and Animal Faeces» *Ed June 2010. WHO Global Foodborhe Infections Network.

Antigenic formulae of the Salmonella serovars, 2007, *edition WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Salmonellа.

5.1. Средства измерений и вспомогательное оборудование

5.1.1. Центрифуга лабораторная

5.1.2. Шкаф сушильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры *°С по НД

5.1.3. Шкаф холодильный любого типа, обеспечивающий постоянство температуры по НД

5.1.4. Весы лабораторные аналитические общего назначения и образцовые по ГОСТ 24104-88 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, не ниже 2 -го класса точности

5.1.5. Дозаторы пипеточные по ТУ 64-16-55-90 с диапазоном объема доз 20-200 мкл, 200-1000 мкл и дискретности установки доз 5 мкл

5.1.6. Дистиллятор тип ДЭ-4-2 по НД

5.1.8. Гомогенизатор ножевой или перистальтический типа «Стомайкер»

5.1.9. Ступки фарфоровые с пестиками

5.2. Лабораторная посуда и инструменты

5.2.1. Посуда мерная лабораторная по ГОСТ 1770-74; цилиндры исполнения 2 вместимостью 1000 *, цилиндры исполнения 3 вместимостью 25 * и 100 *, пробирки исполнения 1 вместимостью 10 *, колбы исполнения 2 вместимостью 100 *, 500 * и 1000 *.

5.2.2. Пипетки 2-1-50 или 2-2 -50 по ГОСТ 20292-74

5.2.3. Посуда лабораторная стеклянная по ГОСТ 25336-82; колбы конические вместимостью 50 — 1000 *.

5.2.4. Пинцеты, скальпели, ножницы.

5.2.5. Автоматические пипетки на 50, 100 мкл и 1 мл, с наконечниками

5.3.Перечень рекомендуемого оборудования для проведения ПЦР-исследований*

иологической безопасности II тип А).

5.3.1. Ламинарный бокс (например, «БАВп-01-«Ламинар-С»-1,2″, «Ламинарные системы», Россия, класс б

5.3.2. Программируемый амплификатор (например, «Терцик» («ДНК-Технология», Россия), «Gradient Palm Cycler» («Corbett Research», Австралия), «MAXYGENE» («Axygen», США), «GeneAmp PCR System 2700» («Applied Biosystems») или аналогичные).

5.3.3. Программируемый амплификатор с системой детекции флуоресцентного сигнала в режиме «реального времени» — при работе с «ПЦР-комплект» вариант FRT (например, «Rotor-Gene» 3000/6000 («Corbett Research», Австралия), «Rotor-Gene Q» («Qiagen», Германия), «iQ5» («Bio-Rad», США), «Mx3000P» («Stratagene», США), «ДТ-96» («ДНК-Технология», Россия) или аналогичные).

5.3.4. Флуоресцентный ПЦР-детектор (например, «AЛА-1/4» («BioSan», Латвия), «Джин» («ДНК-Технология», Россия) или аналогичные).

5.3.5. Термостат для пробирок типа «Эппендорф» от 25 до 100°С (например, «ТЕРМО 24-15», «Биоком», Россия).

5.3.6. Микроцентрифуга для пробирок типа «Эппендорф» до 16 тыс об/мин (например, «MiniSpin», «Eppendorf», Германия).

5.3.7. Вортекс (например, «ТЭТА-2», «Биоком», Россия).

5.3.8. Вакуумный отсасыватель медицинский с колбой-ловушкой для удаления надосадочной жидкости (например, «ОМ-1», г. Ульяновск, Россия).

5.3.9. Набор электронных или механических дозаторов переменного объема (например, «Ленпипет», Россия).

5.3.10. Одноразовые полипропиленовые завинчивающиеся или плотно закрывающиеся микропробирки на 1,5 мл (например, «Axygen», США).

5.3.11. Штативы для наконечников (например, «Axygen», США) и микропробирок на 1,5 мл (например, «ИнтерЛабСервис», Россия).

5.3.12. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема до 200 мкл (например, «Axygen», США).

5.3.13. Одноразовые наконечники для дозаторов переменного объема с аэрозольным барьером до 200 мкл и до 1000 мкл (например, «Axygen», США).

5.3.14. Холодильник от 2 до 8°С с морозильной камерой не выше минус 16°С.

5.3.15. Отдельный халат и одноразовые перчатки.

5.3.16. Емкость с дезинфицирующим раствором.

5.3.17. Камера для горизонтального электрофореза объёмом не более 400 мл (например, «SE-2», «Хеликон», Россия).

5.3.18. Источник постоянного тока с напряжением 150-460 В (например, «Эльф-4», «ДНК-Технология», Россия).

5.3.19. Ультрафиолетовый трансиллюминатор с кабинетом для просмотра гелей (например, «Биоком», Россия).

5.3.20. Видеосистема с цифровой камерой для регистрации результатов и передачи изображения (например, «Биотест-1», ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия; «BioRad», США).

5.3.21. Аквадистиллятор. (например ДЭ-4-2Э, Завод медицинского оборудования, г.Саранск.)

5.3.22. Микроволновая печь для плавления агарозы.

5.3.23. Колба коническая из термостойкого стекла (ГОСТ 21400-75) для плавления агарозы на 250 мл.

5.3.24. Мерный цилиндр на 1 л (ГОСТ 1770-74).

5.3.25. Пластиковая ёмкость на 5 л для дезактивации буфера и гелей, содержащих бромид этидия.

Сальмонеллезы — инфекционные болезни, возбудителями которых являются представители рода Salmonella. Они характеризуются значительным полиморфизмом клинического течения с преимущественным поражением желудочно-кишечного тракта, возможной генерализацией и различной степенью выраженности симптомов общей интоксикации и обезвоживания.

Лабораторным критерием диагноза является выделение возбудителя (сальмонеллы) из испражнений, мочи, крови, рвотных масс и промывных вод больных, а при необходимости и наличии специальных показаний и из желчи, дуоденального содержимого, спинномозговой жидкости и секционного материала.

В особых случаях (вспышки сальмонеллезов) диагноз может быть поставлен на основе клинико-эпидемиологических данных с дополнительными позитивными результатами серологических и молекулярно-генетических исследований.

Таксономия и культурально-ферментативные свойства сальмонелл

Род Salmonellа входит в семейство Enterobacteriaceae и состоит из микроорганизмов, родственных по фенотипическим и генотипическим свойствам. Ферментативные свойства сальмонелл положены в основу их подразделения на подвиды. Согласно последним данным род Salmonellа представлен двумя видами — S.enterica и S.bongori.

Сальмонеллы вида S.enterica делятся на несколько подвидов и обозначаются следующими символами:

Подвид I — или название серовара для сероваров вида S.enterica подвида enterica.

Для представителей других подвидов вида S.enterica введены следующие обозначения:

Подвид II — для сероваров S.enterica subsp. salamae

Подвид IIIa — для сероваров S.enterica subsp. arizonae

Подвид IIIb — для сероваров S.enterica subsp. diarizonae

Подвид IV — для сероваров S.enterica subsp. houtenae;

Подвид VI — для сероваров S.enterica subsp. indica

V — Вид S.bongori — для серовара S.bongori subsp. bongori. Все серовары вида S.bongori имеют символ V.

Деление на подвиды имеет определенное эпидемиологическое значение так как основным, естественным резервуаром сальмонелл подвидов 1 и 2 служат теплокровные животные, а для представителей остальных подвидов (IIIa, IIIb, IV, VI и вида S.bongori (V) — хладнокровные животные и окружающая среда. Определение и название подвидов не является обязательными в клинической микробиологической практике. Необходимым для идентификации является только название серовара подвида enterica. В клинической практике возможно использование двух вариантов названий:

1. Salmonellа ser Typhimurium

Серовары других подвидов вида S.enterica и вида S.bongori обозначаются номером подвида и их антигенной формулой:

Это значит, что штамм с такой антигенной характеристикой относится к виду enterica subsp. salamae;

При написании серовара сальмонелл используется начальная заглавная буква, а при обозначении вида или подвида — прописная (лабораторный протокол ВОЗ, 2010 г.).

Сальмонеллы каждого подвида разделяются на серологические варианты по О- и Н- антигенной характеристике.

Современная схема Кауфмана-Уайта насчитывает 2579 серологических вариантов (2007 г., девятое издание).

Число сероваров сальмонелл, входящих в каждый подвид:

Сальмонеллы — лактозонегативные грамотрицательные палочки. Подвижные, имеют перитрихиальные (по всей поверхности клетки) жгутики, за исключением S.Gallinarum. D-глюкозу ферментируют с образованием кислоты и газа. (S.Typhi газа не образуют) Ферментируют рамнозу, ксилозу, арабинозу, мальтозу, дульцит, сорбит, трегалозу, маннит. Сальмонеллы — оксидазонегативные, каталазопозитивные, индол и Фогес-Проскауэр (VP) негативные, метиловый красный и цитрат позитивные, продуцируют сероводород и не расщепляют мочевину.

Они являются факультативными анаэробами, хорошо растут на обычных питательных средах, за исключением нескольких сероваров (S.Paratyphi A, S.Choleraesuis, S.Typhisuis, S.Sendai, S.Gallinarum и некоторых других). Оптимальной температурой роста является 37°С, реакция среды слабощелочная (рН 7,2-7,4).

При более низкой температуре (20°С) или более высокой (42°С) и при более кислой или более щелочной реакции среды (рН от 4,1 до 9,0) они способны размножаться, но значительно медленнее, чем при оптимальных условиях. При температуре ниже 5°С их рост полностью прекращается.

Сальмонеллы обладают сравнительно высокой степенью устойчивости к воздействию различных факторов внешней среды. В жидкой среде при прогревании до 70°С они погибают через 5-10 минут, а при кипячении моментально.

В то же время они хорошо сохраняются в различных пищевых продуктах (молоке, мясе, на поверхности и внутри яиц и др.). Соление и копчение оказывают на сальмонеллы относительно слабое действие.

Факторами передачи возбудителей инфекции при сальмонеллезах являются, как правило, продукты животного происхождения, в том числе молоко и молочные продукты. В настоящее время чаще всего заболевания возникают при употреблении в пищу инфицированных яиц или продуктов, в состав которых входят яйца, в том числе кремово-кондитерских изделий. Ряд заболеваний связан с инфицированным сальмонеллами мясом и мясопродуктами. Чаще всего это мясо домашних птиц (куры, утки, гуси, индейки), а также крупного рогатого скота и свинина, которые нередко являются причиной заболевания людей сальмонеллезом.

Известны вспышки сальмонеллеза, связанные с употреблением рыбы и рыбных продуктов, в том числе рыбы горячего копчения и сельди пряного посола, хотя доля их в общем числе вспышек сальмонеллезной этиологии невелика.

Инфицированными могут быть и продукты растительного происхождения (овощи, фрукты, ягоды), а также дрожжи, кондитерские красители и даже наркотические средства (марихуана).

Наибольшую опасность как возможные факторы передачи возбудителя инфекции представляют такие продукты и блюда, которые после приготовления не подвергаются термической обработке и могут храниться длительное время, в том числе и при комнатной температуре.

Необходимо учитывать, что в качестве факторов передачи возбудителя инфекции при сальмонеллезах могут оказываться продукты питания, инфицированные небольшими дозами сальмонелл.

Так, известны отдельные случаи заболевания сальмонеллезами и даже вспышки, когда заражающая доза не превышала несколько десятков микроорганизмов.

Следует учитывать и то, что даже при интенсивном размножении сальмонелл в пищевых продуктах они не изменяют ни вкуса, ни запаха, ни их внешнего вида.

Основными критериями эпидемиологической значимости определенных продуктов питания является обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах или других объектах внешней среды.

Следует подчеркнуть, что в последние 20 лет во всем мире и в нашей стране широко распространилась Salmonella Enteritidis. Представители этого серовара вызывают пищевые вспышки сальмонеллеза при низкой дозе указанных микроорганизмов в продукте, а заболевания отличаются, как правило, более манифестным клиническим течением.

В настоящее время известны ряд схем, используемых в различных странах для выделения сальмонелл. В идеале для этого должны быть выбраны высокочувствительные и специфичные методы. В то же время эти методы должны быть простыми, быстрыми и недорогими.

Сложности с выделением сальмонелл связаны с наличием в кишечной флоре * конкурентных микроорганизмов 300-400 видов, травмированием клеток при их транспортировке, перемежающимся выделением с испражнениями. Для преодоления этого при выделении сальмонелл обязательно используются среды обогащения.

Рекомендуемые в настоящее время стандартные приемы выделения сальмонелл должны соответствовать ISO-6579, однако не исключается возможность использования и некоторых других методов.

Так, рекомендовано кроме указанных в ISO-6579 сред обогащения использовать селенитовую среду, или селенит-цистин-бульон, а в качестве дифференциально-диагностических сред кроме широко используемых в России среды Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агара, применять ксилозо- лизин-деоксихолат агар, бриллиант-грюн агар, SS-агар, Мак-Конки агар в случае их соответствия требованиям реализации на отечественном рынке.

Исследование на сальмонеллез проводят с целью диагностики заболеваний, выявления сальмонеллоносительства, определения соответствия гигиеническим требованиям безопасности пищевых продуктов, выявления обсемененности объектов внешней среды, а также при расследовании вспышек сальмонеллезов с целью установления источников и факторов передачи возбудителей инфекции.

8.1. Взятие и транспортировка

8.1.1. Для исследования на наличие сальмонелл отбирают испражнения, рвотные массы и промывные воды желудка, кровь, мочу, а при наличии специальных показаний — желчь, дуоденальное содержимое, спинномозговую жидкость и секционный материал.

8.1.2. Патологический материал следует доставлять в лабораторию в возможно короткий срок, но не позднее 12 ч. после отбора, испражнения (фекалии) — не позднее 3-4 ч.; кровь высевают у постели больного.

В случае невозможности доставки в установленные сроки материал посылают в консерванте или в транспортной среде. Такой материал до исследования хранят при 4-6°С не более 24 ч.

При отборе проб необходимо исключить возможность контаминации их за счет смежных областей кожи, других органов, внешней среды и т.п.

8.1.3. Испражнения собирают сразу после дефекации с помощью стерильной стеклянной палочки или деревянного шпателя. При наличии патологических примесей (слизь, кровь, гной и т.п.) их включают в отбираемую пробу. В случае невозможности получения испражнений после дефекации материал берут непосредственно из прямой кишки с помощью «зонд тампона», вводя его в кишку на 8-10 см. Тампон помещают в пробирку с консервантом.

8.1.4. При профилактических обследованиях здоровых лиц на сальмонеллоносительство накануне взятия испражнений для исследования можно применить солевое слабительное (25-30 г магнезии сульфата — *), растворенное в теплой воде. Не принимается для исследования на сальмонеллоносительство материал, взятый на дому в отсутствии медицинского работника.

8.1.5. Кровь для исследования берут в начале заболевания, а также повторно в период лихорадки или в разгар рецидивов стерильным шприцем из локтевой вены в объеме 2-10 мл (в зависимости от возраста пациента); в более поздние сроки или при слабовыраженной клинической картине — 15-20 мл. Взятую кровь высевают у постели больного.

У детей до одного года кровь берут в доступных количествах из пальца, пятки или мочки уха.

8.1.6. Рвотные массы и промывные воды желудка отбирают при заболевании, сопровождающемся соответствующей симптоматикой, в объеме до 100 мл. Для исследования используют первые порции промывных вод, полученные без применения бактерицидных средств.

В случае кислой реакции (рН

Методические указания МУ 4.2.2723-10 «Лабораторная диагностика сальмонеллезов, обнаружение сальмонелл в пищевых продуктах и объектах окружающей среды» (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 13 августа 2010 г.)

Текст методических указаний приводится по официальному изданию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Москва, 2010 г.

1. Методические указания разработаны ФГУН «ЦНИИ эпидемиологии» Роспотребнадзора (С.Ш. Рожнова, А.Т. Подколзин).

2. Утверждены и введены в действие Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 13.08.2010 г.

3. Введены впервые взамен МУ «Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных, обнаружение сальмонелл в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды», 1990 г.

Дата введения: 2 сентября 2010 г.

Установлен порядок проведения лабораторных исследований для обнаружения сальмонелл в клиническом материале, пищевых продуктах и объектах окружающей среды.

Анализ на сальмонеллез проводят в целях диагностики заболеваний, выявления сальмонеллоносительства, обсемененности объектов внешней среды, определения безопасности пищевых продуктов, а также при расследовании вспышек сальмонеллезов для установления источников и факторов передачи возбудителей инфекции. Исследования могут осуществляться только в лабораториях, имеющих право на работу с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности). Помещения и оборудование должны соответствовать СанПиН 1.3.2322-08.

Указания вводятся в действие со 2 сентября 2010 г. Они предназначены для специалистов органов и учреждений Роспотребнадзора, организаций здравоохранения и иных заинтересованных лиц.

источник