Оки тест кала что это такое

Экспресс-тест для выявления ДНК 7 основных возбудителей острой диареи методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с детекцией в режиме «реального времени». Исследование используется для установления причин острых кишечных инфекций.

Острые кишечные инфекции (ОКИ) – группа заболеваний, обусловленных вирусами, бактериями или паразитами, для которых характерен фекально-оральный механизм передачи. Общими для данных инфекций являются факторы передачи: пищевые продукты, вода, инфицированные бытовые предметы и грязные руки. Первые симптомы возникают через несколько часов или дней после инфицирования, начало резкое, с появлением частого жидкого стула, рвоты, боли в животе, признаков интоксикации (лихорадки, озноба, тошноты). Заболевание может носить групповой характер и проявиться у нескольких человек, употреблявших инфицированную пищу или воду.

Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов как причин ОКИ варьирует в разных возрастных группах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90 % заболеваний, на долю бактериальных – 10-20 %; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30 %.

Данная тест-система позволяет выявить нуклеиновые кислоты следующих возбудителей ОКИ: ДНК микроорганизмов рода Шигелла, Сальмонелла, энтероинвазивных E. Coli, Кампилобактера, аденовирусов группы F и РНК ротавирусов группы А, норовирусов 2 генотипа, астровирусов.

Астровирусная инфекция не обладает клиническими особенностями, позволяющими дифференцировать ее от других кишечных инфекций. Вклад астровирусной инфекции в ОКИ в нашей стране составляет около 4%.

Аденовирусные инфекции отличаются разнообразием клинической симптоматики и ассоциированы с 7 группами аденовирусов человека (A-G), которые объединяют более 50 серотипов. С симптоматикой ОКИ в настоящее время доказательно ассоциированы аденовирусы только группы F. Однако у лиц с острыми респираторными заболеваниями, а часто и клинически здоровых лиц, в образцах фекалий закономерно обнаруживаются аденовирусы других типов, не имеющих связи с патологией желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). В России аденовирусы группы F занимают 4-5-е место по распространенности среди вирусных агентов, вызывающих ОКИ.

Норовирус является одной из частых причин вспышек ОКИ небактериальной этиологии: каждая вторая вспышка ОКИ и 90% вспышек вирусной этиологии ассоциированы с норовирусами. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является «золотым стандартом» в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Ротовирус. Заболевания у человека вызывают ротавирусы А, В, и С. Ротавирусы группы А имеют наибольшее эпидемиологическое значение и являются наиболее широко распространенной причиной диарейных заболеваний у детей в возрасте до 5 лет.

Сальмонеллы. Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций.

Сальмонеллез характеризуется значительным полиморфизмом клинического течения с преимущественным поражением ЖКТ, возможной генерализацией и различной степенью выраженности симптомов общей интоксикации и обезвоживания. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.

Шигеллы (Shigella species) – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Клинической особенностью шигеллеза является наличие у заболевших симптомов поражения толстого кишечника в виде гемоколита со скудным стулом и ложными позывами на дефекацию.

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. Upsaliensis. Наиболее частыми формами кампилобактериоза являются энтероколит и энтерит. Заболевание кампилобактериозом регистрируется повсеместно как в экономически развитых, так и развивающихся странах в виде спорадических случаев, локальных или крупных вспышек с пищевым и водным путем передачи инфекции.

При возникновении острой диареи всегда нужно максимально быстро найти причину заболевания, чтобы определиться с тактикой лечения пациента, или решить вопрос о необходимости госпитализации. Диарея, вызванная вирусами, протекает чаще всего благоприятно при своевременной терапии и заканчиваются выздоровлением через 3-7 дней. Неадекватное применение антибиотиков у таких пациентов не только бесполезно, но и приносит вред, задерживая выздоровление. Заболевания, вызванные кишечными патогенными бактериями, могут потребовать госпитализации и применения антибактериальной терапии. У детей младшего возраста при диарее любого происхождения очень быстро развивается интоксикация и обезвоживание, поэтому их госпитализируют, независимо от причины заболевания в инфекционный стационар.

Быстрый ПЦР-тест на идентификацию основных возбудителей острой диареи в кале позволяет за один день подтвердить инфекционную природу диареи. Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации. Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).

Контрольный анализ кала после перенесенной инфекции позволяет определить прекращение выделения возбудителя у выздоровевших.

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов. Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Кал собирается в стерильный контейнер с завинчивающейся крышкой и ложечкой в количестве не более 1/3 объёма контейнера. Материал должен быть доставлен в лабораторию в день сбора. Во время сбора избегать примесей мочи, отделяемого половых органов.

Материал для исследования: кал.

Установление этиологического фактора острой кишечной инфекции.
Дифференциальная диагностика причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).
Острое начало заболевания с одновременным или последовательным появлением рвоты, жидкого стула, возможно – лихорадочной реакции.
Одновременное или последовательное развитие острой кишечной инфекции у нескольких членов семьи, детей в детском учреждении или пациентов в стационаре.
Обострение симптоматики ОКИ у госпитализированного с этим диагнозом пациента.

Интерпретация результатов содержит аналитическую информацию для лечащего врача. Лабораторные данные входят в комплекс всестороннего обследования пациента, проводимого врачом и не могут быть использованы для самодиагностики и самолечения.

Тест является качественным. Результат выдаётся в терминах «обнаружено» или «не обнаружено».

«не обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала не найдено фрагментов нуклеиновых кислот, специфичных для Shigella spp., Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus II, Astrovirus.

«обнаружено»: в анализируемом образце биологического материала найдены фрагменты ДНК, специфичные для Shigella spp., Salmonella spp., Campylobacter spp., AdenovirusF, RotavirusA, NorovirusII, Astrovirus.

источник

Данная тест-система позволяет выявить ДНК следующих возбудителей ОКИ: астровируса, аденовируса, норовируса, ротавируса, сальмонеллы, шигеллы, и кампилобактера.

Астровирусная инфекция не обладает клиническими особенностями, позволяющими дифференцировать ее от других кишечных инфекций. Вклад астровирусной инфекции в ОКИ в нашей стране составляет около 4%.

Аденовирусные инфекции отличаются разнообразием клинической симптоматики и ассоциированы с 7 группами аденовирусов человека (A-G), которые объединяют более 50 серотипов. С симптоматикой ОКИ в настоящее время доказательно ассоциированы аденовирусы только группы F. Однако у лиц с острыми респираторными заболеваниями, а часто и клинически здоровых лиц, в образцах фекалий закономерно обнаруживаются аденовирусы других типов, не имеющих связи с патологией желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). В России аденовирусы группы F занимают 4-5-е место по распространенности среди вирусных агентов, вызывающих ОКИ.

Норовирус является одной из частых причин вспышек ОКИ небактериальной этиологии: каждая вторая вспышка ОКИ и 90% вспышек вирусной этиологии ассоциированы с норовирусами. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является «золотым стандартом» в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Ротовирус. Заболевания у человека вызывают ротавирусы А, В, и С. Ротавирусы группы А имеют наибольшее эпидемиологическое значение и являются наиболее широко распространенной причиной диарейных заболеваний у детей в возрасте до 5 лет.

Сальмонеллы. Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций.

Шигеллы (Shigella species) – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Клинической особенностью шигеллеза является наличие у заболевших симптомов поражения толстого кишечника в виде гемоколита со скудным стулом и ложными позывами на дефекацию.

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. Upsaliensis. Наиболее частыми формами кампилобактериоза являются энтероколит и энтерит. Заболевание кампилобактериозом регистрируется повсеместно как в экономически развитых, так и развивающихся странах в виде спорадических случаев, локальных или крупных вспышек с пищевым и водным путем передачи инфекции.

источник

Острые кишечные инфекции, скрининг (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus)

Комплексное молекулярно-генетическое исследование, которое позволяет выявить генетический материал наиболее вероятных возбудителей острых кишечных инфекций в кале и установить этиологию заболевания.

Синонимы английские

Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Согласно официальной статистике, в России до 65-67% заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90% заболеваний, на долю бактериальных – 10-20%; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30%.

Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев «бактериологически неподтвержденной дизентерии», особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.

Бактерии рода Salmonella относятся к семейству энтеробактерий. S. typhi и S. parathyphi являются возбудителями брюшного тифа и паратифа. Существует множество серовариантов Salmonella species, способных вызвать у человека инфекцию по типу гастроэнтероколита, а также стать причиной внутрибольничных инфекций. Сальмонеллез может протекать в форме острой кишечной инфекции, тяжелой генерализированной инфекции или бессимптомного носительства. Окончательный диагноз ставится только после выделения возбудителя или обнаружения его ДНК.

Кампилобактерии являются одними из наиболее сложных для культивирования (которое требуется в ходе анализа) микроорганизмов. Это объясняется их микроаэрофильностью и возможностью подавления их роста сопутствующей флорой. Род кампилобактерий объединяет как возбудителей ОКИ (термофильные виды), так и сапрофитные и условно-патогенные виды, о чем необходимо помнить при выявлении этих микроорганизмов в клиническом материале. Применение наборов на основе ПЦР для определения термофильной группы кампилобактерий позволяет не только избежать трудоемкой и высокозатратной бактериологической работы, но и четко ограничить детекцию тех видов кампилобактерий, которые имеют этиологическую связь с острой кишечной инфекцией (С. jejuni, C. coli, C. lari, C. upsaliensis).

В соответствии с данными зарубежной литературы, норовирус – наиболее частый возбудитель вспышек ОКИ небактериальной этиологии. Эта особенность связана с низкой инфицирующей дозой и высокой устойчивостью в окружающей среде. ПЦР является «золотым стандартом» в клинической диагностике норовирусных инфекций.

Несмотря на несколько меньшую в сравнении с рота- и норовирусами распространенность, астровирусы составляют значительный пласт кишечных инфекций, у трети пациентов протекающий с явлениями колита. Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНК-содержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.

Для выявления и дифференциальной диагностики кишечных инфекций используются культуральные и молекулярно-генетические методы исследования генетического материала возбудителя в кале и определение концентрации специфических иммуноглобулинов в крови. ПЦР обладает преимуществом перед культуральными методами благодаря быстрому получению результатов, высокой специфичности и чувствительности исследования. Данный анализ позволяет со 100-процентной точностью определить возбудителя кишечного заболевания, а быстрая диагностика острых кишечных инфекций помогает избежать лишних процедур и оперативных вмешательств, своевременно начать лечение и ограничить очаг распространения инфекции.

Для чего используется исследование?

Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).

Когда назначается исследование?

При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus).

Причины отрицательного результата:

отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus (2-й генотип), Astrovirus.

Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации.
Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.

Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: МИА, 2005. – 736 с.
Gómez-Duarte O., Bai J., Newel E. Detection of E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by Three-reaction Multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009 January; 63(1): 1-9. PMCID: PMC2701628.

источник

Острые кишечные инфекции — это группа заболеваний (около 30), для которых характерно поражение желудочно-кишечного тракта. Кишечные инфекции широко распространены в мире. По частоте распространения среди всех болезней человека кишечные инфекций уступают лишь респираторным заболеваниям. Более 60% всех случаев кишечной инфекций встречается у детей. Каждый год от кишечных инфекций в мире умирает около 1 млн. детей (большая часть в возрасте до 2 лет). Ведущим симптомом (который ведет к тяжелым последствиям) кишечных инфекций является сильный понос (диарея). Если раньше кишечные инфекции чаще диагностировались только в летом, то в настоящее время из-за выраженной миграции людей могут встречаться в любое время года. Причиной развития острых кишечных инфекций могут быть бактерии (сальмонелла, шигеллы, стафилококк, эшерихии, иерсинии, кампилобактер и др.), а также вирусы (энтеровирус, ротавирус). Возбудители бактериальных кишечных инфекций вырабатывают энтеротоксин (яд), который, попадая в кишечник, вызывает отравление организма человека.

Пищевые отравления стафилококком. Стафилококковые пищевые отравления входят в большую группу кишечных инфекций, которые возникают в результате употребления в пищу пищевых продуктов, зараженных микробом (стафилококком). Источники стафилококковой инфекции это больные ангиной, фарингитом, тонзиллитом или люди с гнойными поражениями кожи. Как правило, отравление стафилококком происходит при употреблении следующих продуктов питания: молоко, кефир, рыба, мясо. Необходимым условием для возникновения стафилококковой кишечной инфекции является нарушение правил приготовления и хранения пищи. Первые признаки и симптомы пищевого отравления стафилококком появляются уже спустя 5-8 часов после употребления в пищу зараженных продуктов.

Сальмонеллез — это острая кишечная инфекция, возбудителем которой являются бактерии из рода сальмонелл. Известны более 1500-2000 видов сальмонелл, которые могут быть причиной желудочно-кишечных инфекции у людей. Основной причиной развития сальмонеллеза является нарушение правил обработки и хранения пищи. Инкубационный период при сальмонеллезе составляет от 5-7 часов до 3 суток. Основным источником инфекции для людей являются животные (крупный рогатый скот, лошади, свиньи, кошки, собаки, птицы и т.д.). Иногда сальмонеллы встречаются в яйцах домашней птицы. Как правило, сальмонеллез возникает в результате употребления плохо приготовленных мяса или яиц зараженных сальмонеллами. Иногда причиной сальмонеллеза является больной человека или бактерионоситель (носитель сальмонелл).

Дизентерия (или шигеллез) относится к группе острых кишечных инфекций – заболеваниям с фекально-оральным механизмом передачи, которые характеризуются симптомами общей интоксикации и диареей. Возбудителем дизентерии является бактерии рода Shigella , поэтому и само заболевание называется «шигеллез». Название «дизентерия» образовалось из двух слов греческого происхождения – «dys» (нарушение) и «enteron» (кишечник). Шигеллы распространены повсеместно. Выделяют 4 вида этой бактерии, каждый из которых способен вызывать дизентерию у человека: Shigella dysenteriae, Shigella flexneri , Shigella boydii и Shigella sonnei. Заражение происходит следующим образом: бактерии из кишечника больного человека попадают в желудочно-кишечный тракт здорового человека. Это может произойти через грязные руки, при попадании бактерий в пищевые продукты, воду, через насекомых. Кроме того, заражение возможно при купании в загрязненных водоемах.

Эшерихиоз – острая кишечная инфекция, вызываемая некоторыми типами кишечных палочек, протекающая с синдромом гастроэнтерита и гастроэнтероколита. Реже эшерихиоз протекает с внекишечной локализацией как генерализованная форма болезни. E. coli имеют сложную антигенную структуру. Основными источниками инфекции являются больные (чаще стертой формой заболевания); меньшее значение имеют бактерионосители. Механизм передачи – фекально-оральный. Реализация его происходит разными путями: пищевым, водным и бытовым. 80 % случаев эшерихиоза имели пищевой путь заражения, особенно через молоко и молочные продукты.

Ротовирусная кишечная инфекция — это заболевание, принадлежащее к группе кишечных инфекций, возбудителем которого является ротавирус. Источником ротавирусной кишечной инфекция является сам больной человек, в котором размножается микроорганизм или же носитель данного вируса. Механизм передачи инфекции от человека к человеку фекально-оральный, то есть в основном причина — немытые руки после посещения туалета, уборки фекалий за домашними животными или же попадание частичек на предметы обихода вследствие не соблюдения элементарных правил гигиены.

Наряду с дизентерией и сальмонеллезом кампилобактериоз является одной из основных острых кишечных инфекций. Ее признаки и течение сходны с признаками и течением дизентерии. Возбудителя кампилобактериоза распространяют животные и птицы: дикие, сельскохозяйственные (куры, крупный рогатый скот и др.) и домашние (кошки, собаки). У многих из них этот микроб живет в желудочно-кишечном тракте, не вызывая заболевания. Возбудитель передается при употреблении загрязненных продуктов питания или воды. Наиболее часто заражение происходит при недостаточно долгой термической обработке домашней птицы. Кампилобактериоз возникает также после употребления непастеризованного или некипяченого молока, контакта с зараженным животным.

Кишечный иерсиниоз – острая инфекционная болезнь, с фекально-оральным механизмом передачи инфекции. Поражает желудочно-кишечный тракт, печень, опорно-двигательный аппарат и другие органы. Встречается повсеместно. Иерсинии весьма неприхотливы к питательным веществам и поэтому растут в кипяченой, водопроводной и стерильной дистиллированной воде. Хранение продуктов в холодильнике не является гарантией безопасности от инфекции! Достаточно долго иерсинии выживают на различных продуктах питания и даже могут на них размножаться, например, на овощах (морковь, капуста, зеленый и репчатый лук), особенно приготовленных в виде салатов. В молоке иерсинии сохраняются до 18 суток, на хлебе, кондитерских изделиях — от 16 до 24 суток. Больной кишечным иерсиниозом или носитель при определенных условиях может явиться источником инфекции для окружающих.

Для диагностики и лечения вышеперечисленных заболеваний необходимо провести ряд лабораторных исследований, таких как:

Лечение кишечных инфекций необходимо проводить под контролем врача, чтобы избежать формирования бактерио- или вирусоносительства. ООО «Лаборатория Гемотест» может помочь в своевременной ранней диагностике острых кишечных инфекций.

Заведующая отделом общеклинических исследований КДЛ ООО «Лаборатория Гемотест» Дубровская Г.Е.

Заведующая отделом бактериологии ООО «Лаборатория Гемотест» Прима Е.Д.

8 495 532 13 13 — центральный офис
8 800 550 13 13 — бесплатный звонок

источник

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Shigella species и Esherichia coli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий.

К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии).

Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев «бактериологически неподтвержденной дизентерии», особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.

Ротавирусы группы А являются наиболее частой причиной спорадических заболеваний ОКИ у детей, а ДНК-содержащий аденовирус F (серотипы 40 и 41) нередко вызывает вспышки гастроэнтеритов у детей младшего возраста.

Для чего используется исследование?

Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).

Когда назначается исследование?

При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus).

Причины отрицательного результата:

отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus.

Что может влиять на результат?

Факторы, искажающие результат:

длительное хранение материала до его поступления в лабораторию;
замораживание материала или его термическая обработка;
несоблюдение правил взятия биоматериала и его загрязнение.

источник

Исследуемый материал: кал.

Взятие, хранение, доставка материала: Кал собирается в чистую, сухую, одноразовую пластиковую посуду (флакон для кала с лопаткой с красной или голубой крышкой).

Нельзя направлять кал на исследование после клизм, а также рентгенологического исследования желудка и кишечника (при использовании рентгеноконтрастных веществ).

Кал должен быть доставлен в лабораторию не позднее, чем 12 ч после дефекации, хранить до исследования в холодильнике. Для исследования кала на наличие простейших (вегетативные формы) материал необходимо доставить не позднее 15 – 20 минут после дефекации (позднее вегетативные формы погибают). Для обнаружения цист срок доставки увеличивается до 24 часов (при условии хранения в холодильнике). Для более точного анализа необходимо собрать кал (по 3-5 гр.) от каждой порции в одну посуду.

Факторы, влияющие на результаты:

Например: на обнаружение скрытой крови в кале могут влиять: мясо, рыба, зеленые овощи, лекарства содержащие железо и медь (исключаются за 2-3 дня до исследования). На результаты влияет характер пищи, а также прием лекарств, изменяющих перистальтику или цвет кала.

С помощью копрологического исследования можно оценить:

Ферментативную активность и переварительную способность желудка и кишечника;

Характер и интенсивность микробной деятельности (дисбиоз, дисбактериоз);

Наличие воспалительного процесса;

Эвакуаторную функцию желудка и кишечника;

Наличие гельминтов, простейших или их яиц, цист.

В норме – оформленный, некрошащийся.

Твердый, сухой – застой кала в толстом отделе кишечника, мегаколон, болезнь Гиршпрунга;

«овечий кал» (в виде мелких комков) – спастическое состояние кишечника (спастический колит);

Влажный, начинающий терять форму – усиление перистальтики ЖКТ;

Кашицеобразный, неоформленный – сильная перистальтика ЖКТ, инфекции, отравления;

Диарея водянистая – сильная перистальтика, нарушение (прекращение) всасывания, острые желудочно-кишечные инфекции, сильная интоксикация;

Цвет кала обусловлен содержанием стеркобилина.

У молодняка молочное кормление способствует светлой (желтовато-коричневой) окраске; некоторые растительные корма и лекарства способны изменять цвет кала (свекла, черника, препараты висмута, железа и проч.).

Дегтеобразный – при кровотечениях из верхних отделов ЖКТ, прием препаратов висмута;

Темно-коричневый – при запорах, колите, чисто мясном кормлении;

Светло-коричневый – при ускоренной эвакуации из толстой кишки, растительном кормлении;

Красноватый – при колите с изъязвлениями;

Зеленый – при содержании билирубина, биливердина, повышенной перистальтике;

Светло-желтый – при недостаточности поджелудочной железы, бродильной диспепсии;

Серо-белый – ахолический кал при непоступлении желчи в кишечник.

Запах обусловлен присутствием продуктов распада белков (индол, скатол, фенол и др.), который усиливается в условии гниения при обилии белковой пищи. Длительная задержка кала (запоры) приводит к всасыванию газов, и запах может практически полностью исчезать.

В норме – специфический, нерезкий.

Гнилостный – при гнилостной диспепсии, колите с запором, моторных расстройствах кишечника;

Зловонный – при нарушении секреции поджелудочной железы, ахолии, парвовирусном гастроэнтерите;

Кислый – при бродильной диспепсии;

Масляной кислоты – при ускоренной эвакуации из толстой кишки.

Кислотность

Референтные интервалы:

У плотоядных — слабокислая – нейтральная (рН 5,5 – 7,0)

Слабощелочная – недостаточность пищеварения в тонкой кишке

Щелочная – недостаточность желудочного пищеварения, нарушение секреции поджелудочной железы, колиты, запоры

Резко щелочная – гнилостная диспепсия

Резко кислая – при бродильной диспепсии

Референтные интервалы

Собаки, кошки – положительно.

Стеркобилин присутствует в норме (выделяется в зависимости от массы животного 20 – 350 мг/в сутки). Определяет цвет кала.

Повышено (гиперхолический кал):

Понижено (ахолический кал):

Обтурационная желтуха, холангит

Референтные интервалы:

Собаки, кошки – отсутствует.

Появление в кале:

Повышенная моторика ускоренная эвакуация

Подавление микрофлоры кишечника (длительный прием антибиотиков)

Кровь (гемоглобин)

Референтные интервалы:

Собаки, кошки – отсутствует.

Появление в кале:

Кровотечения из ЖКТ, верхних дыхательных путей (при заглатывании крови)

Распадающиеся опухоли ЖКТ

Микроскопия кала позволяет получить детальный характер патологических примесях в испражнениях. Обнаружение элементов пищевого происхождения дает представление о степени переваримости корма.

Мышечные волокна – выявляются в большом количестве из-за недостаточного переваривания белков при ахилии, анацидном состоянии, ослаблении панкреатического пищеварения, усилении перистальтики кишечника

Соединительно-тканные волокна – находятся в кале при недостаточности желудочного пищеварения (снижение количества или отсутствие свободной соляной кислоты в желудке) и при функциональной недостаточности поджелудочной железы

Нейтральный жир – появляется в испражнениях при недостаточном поступлении панкреатической липазы, желчи, недостаточности переваривания в тонкой кишке

Жирные кислоты и мыла – содержатся при уменьшении поступления в кишечник желчи, нарушении секреции поджелудочной железы, бродильной диспепсии

Крахмал – при снижении амилолитической функции поджелудочной железы или ускоренной перистальтике кишечника

Таблица. Клинико-диагностическое значение обнаруживаемых в кале элементов (по: Морозова В.Т., Миронова И.И., Марцишевская Р.Л.).

Элементы кала

Клиническая ситуация

Ахлоргидрия, ахилия, ускоренная эвакуация, гиперхлоргидрия

Хронический атрофический гастрит, злокач.опухоль, язвенная болезнь

Недостаточность поджелудочной железы

Нормальная и повышенная желудочная секреция, ускоренная эвакуация, бродильная диспепсия

Хронические гастриты, энтериты, колиты, недостат.поджелудочной железы

Переваримая клетчатка (обнаружение)

Недостаточность желудочного пищеварения

Непереваримая клетчатка (большое количество)

Дисбактериоз, дисбиоз толстого отдела ЖКТ

Постоянные или периодические диспептические расстройства

Острый и хронический панкреатит, обтурационная желтуха, инфекц.гепатит, энтерит, колит, гастроэнтерит

Соли жирных кислот (увеличено)

Ахолия вследствие закупорки или внутрипеченочного холестаза

источник

Острые кишечные инфекции, скрининг (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus)

Для чего используется этот анализ?

Для дифференциальной диагностики причин острой диареи.

Когда назначается анализ?

При симптомах острой кишечной инфекции (диарея, рвота, лихорадка, боли в животе).

Синонимы английские

Acute intestinal infection screening; Bacterial and viral diarrhea screening, PCR, fecal samples.

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исследование рекомендуется проводить до начала приема антибиотиков и других антибактериальных химиотерапевтических препаратов.
Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.) и на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Согласно официальной статистике, в России до 65-67 % заболеваний этой группы составляют ОКИ неуточненной этиологии. Если возбудитель инфекции неизвестен, эффективность противоэпидемических мероприятий ограничивается. Соотношение частоты выявления вирусных и бактериальных патогенов варьируется в разных возрастах: у детей до 3 лет на долю вирусных агентов приходится 80-90 % заболеваний, на долю бактериальных – 10-20 %; среди взрослых пациентов доля вирусных возбудителей снижается до 30 %.

Shigellaspecies и Esherichiacoli – грамотрицательные палочковидные микроорганизмы из семейства энтеробактерий. К роду Shigella относятся патогенные бактерии S. dysenteriae, S. flexneri, S. boydii и S. sonnei, которые являются возбудителями шигеллеза (бактериальной дизентерии). Энтероинвазивные E. coli (EIEC) очень близки с шигеллами, синтезируют и выделяют шигеллоподобный токсин, способны проникать в клетки слизистой кишечника и разрушать энтероциты, что приводит к образованию язвенных дефектов в слизистой кишечника. За значительную часть случаев «бактериологически неподтвержденной дизентерии», особенно у детей, ответственен энтероинвазивный эшерихиоз.

Для чего используется исследование?

Для установления этиологического фактора острой кишечной инфекции;
для дифференциальной диагностики причин острого гастроэнтероколита (воспаления ЖКТ).

Когда назначается исследование?

При симптомах острого гастроэнтерита, вероятно, инфекционной этиологии (жидкий частый стул, рвота, лихорадка, боли в животе);
при одновременном или последовательном развитии ОКИ у нескольких членов семьи, у детей в детском учреждении или пациентов в стационаре;
при подозрении на развитие внутрибольничной кишечной инфекции (при обострении симптомов энтероколита у пациента, находящегося на лечении по поводу ОКИ).

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

присутствие ДНК или РНК возбудителя ОКИ; этиология в зависимости от выявленного вида возбудителя (Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus).

Причины отрицательного результата:

отсутствие инфицирования Shigella spp., E. coli (EIEC), Salmonella spp., Campylobacter spp., Adenovirus F, Rotavirus A, Norovirus 2 генотип, Astrovirus.

Что может влиять на результат?

Факторы, искажающие результат:

длительное хранение материала до его поступления в лабораторию;
замораживание материала или его термическая обработка;
несоблюдение правил взятия биоматериала и его загрязнение.

Рекомендуется проводить исследование в первые 3 суток с начала заболевания, у госпитализированных пациентов – в первый день госпитализации.
Важно помнить, что острый энтероколит может быть обусловлен и другими инфекциями (например, амебами, лямблиями, иерсиниями, клостридиями, протеями и др.) или неинфекционными причинами (токсинами, ядовитыми веществами, острой непроходимостью кишечника, тромбозом сосудов брыжейки, воспалительными заболеваниями кишечника, острым панкреатитом, аппендицитом, целиакией, острым гепатитом, мальабсорбцией, дивертикулитом).

Кто назначает исследование?

Инфекционист, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.

Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М.: МИА, 2005. – 736 с.
Gómez-Duarte O., Bai J., Newel E. Detection of E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae, and Campylobacter spp. enteropathogens by Three-reaction Multiplex PCR. Diagn Microbiol Infect Dis. 2009 January; 63(1): 1-9. PMCID: PMC2701628.

Оставьте ваш E-mail и получайте новости, а также эксклюзивные предложения от лаборатории KDLmed

источник

Несмотря на постоянные усилия, предпринимаемые для улучшения санитарно-эпидемиологической обстановки (повышение качества продуктов питания, питьевой воды, ужесточение санитарно-гигиенических требований), гастроэнтериты вирусной, бактериальной и протозойной этиологии по-прежнему широко распространены во всем мире. Они являются наиболее распространенной причиной смерти детей в возрасте до 5 лет (по оценкам, примерно 2 млн. случаев ежегодно).
Вплоть до последнего времени в Российской Федерации методами лабораторной диагностики выявляли в основном бактериальных возбудителей «традиционных» инфекционных заболеваний: дизентерии, сальмонеллеза, холеры и брюшного тифа, а также некоторых протозойных инфекций (лямблиоз). Это связано как с распространенностью возбудителей, так и с устоявшейся лабораторной практикой, основанной главным образом на микробиологических методах диагностики. Что касается вирусных инфекций, их лабораторная диагностика была налажена только по отношению к вирусным гепатитам. Отсутствие в широкой лабораторной практике арсенала методов выявления более широкого круга инфекционных агентов, в первую очередь вирусов, приводило и приводит до сих пор к постановке большого числа диагнозов «Острая кишечная инфекция неустановленной этиологии». Эта графа, как правило, является преобладающей в статистической отчетности.
В России среди установленных возбудителей острых кишечных инфекций (ОКИ) преобладают инфекционные агенты бактериальной природы (80–85%), тогда как на вирусы и простейшие приходится по 5¬–10%. Эта картина зеркально противоположна по отношению к статистике, характерной для стран Западной Европы и США.
В последние годы, с внедрением в практику отечественных лабораторий новых тестов, основанных на определении специфических антигенов (иммунохимические методы) и специфических геномных последовательностей (ПЦР), появилась возможность точной идентификации возбудителей ОКИ небактериальной природы. В результате, значительно чаще идентифицируются вирусные инфекции, доля которых в статистических показателях заболеваемости острыми кишечными инфекциями растет [1, 4]. Так, многочисленные вспышки гастроэнтеритов, произошедшие в первой половине 2010 года в ряде областей РФ, были вызваны, помимо традиционно определяемых сальмонелл, ротавирусом и норовирусом [5].
Как эффективность мер, направленных на снижение распространенности инфекционных гастроэнтеритов, так и правильный выбор лечебных мероприятий напрямую зависят от точного и своевременного установления агента, вызвавшего заболевание. Клиническая симптоматика ОКИ, вызванных разными инфекционными агентами, во многом сходна. Основным симптомом всех ОКИ является диарея, различная по характеру и интенсивности. И диарея, и другие симптомы — тошнота, рвота, боль в животе, симптомы интоксикации — не являются специфическими. Данные анамнеза, как правило, также не указывают на природу инфекционного агента. Таким образом, диагностика в основном обеспечивается лабораторными методами.
Очень важен также фактор времени, особенно при возникновении инфекционной вспышки. Чем быстрее выявлен этиологический агент, ставший причиной вспышки, тем раньше и более эффективно производятся дезинфекция и противоэпидемические мероприятия. Это, в свою очередь, позволяет значительно сократить экономические потери: стоимость материалов и работы при проведении дезинфекции, оплата больничных листов и сверхурочных работ, упущенная выгода и т.д. Так, потери, причиненные вспышкой норовирусной инфекции в одном из госпиталей в США, были оценены более чем в 650 тысяч долларов [19]. Показано, что, если норовирус, как причина вспышки, идентифицируется на день раньше, ее продолжительность сокращается на 5¬¬–7 дней, с соответствующим снижением числа заболевших и экономического ущерба [24].
В связи с этим применение надежных и быстрых методов диагностики, в особенности экспресс-тестов, предназначенных для использования не только в лаборатории, но и непосредственно в очаге заболевания, приобретает первостепенное значение.
Использование традиционных серологических тестов для диагностики ОКИ является малоэффективным. Антитела в крови, выявляемые с помощью этих тестов, появляются слишком поздно, когда острая фаза заболевания уже завершилась или наступило выздоровление. Для диагностики значительно более важными являются методы, основанные на непосредственном определении антигенов возбудителей в кале. Как правило, эти методы позволяют идентифицировать инфекционный агент одновременно с появлением симптомов заболевания.
Диагностические наборы для определения антигенов возбудителей ОКИ на основе широко распространенного метода иммуноферментного анализа (ИФА) обладают высокой чувствительностью и специфичностью. Для проведения анализа не обязательно наличие в образце интактных микроорганизмов или других морфологически целостных структур, необходимых для эффективной микроскопии. Методики анализа стандартны, просты и удобны, легко поддаются автоматизации и экономически оправданы, особенно при значительном потоке исследований. В то же время для проведения ИФА необходимо специальное, хотя и широко распространенное, оборудование, что предполагает передачу образцов для исследования в лабораторию. Диагностика в полевых условиях и «у постели больного» с помощью наборов ИФА не предусматривается, хотя в принципе возможна.
Альтернативой ИФА являются использование быстрых иммунохроматографических тестов. Постоянное совершенствование технологии привело к тому, что их чувствительность и специфичность близки к соответствующим показателям наборов для ИФА. При этом экспресс-тесты выполняются быстро (как правило, не более, чем за 15 минут), проведение анализа и интерпретация результата очень просты, для проведения анализа не требуется специальное оборудование. Очень важно, что анализ может быть проведен непосредственно в инфекционном очаге, что позволяет избежать потери времени на транспортировку образца в лабораторию.

1 – образец, содержащий аналит; 2 – конъюгат; 3,4 – иммобилизованные антитела (тестовая и контрольная полосы); 5 – подушечка для образца; 6 – подушечка для конъюгата; 7 – мембрана; 8 – подушечка для абсорбции реагентов; 9 – подложка для мембраны; 10 – тестовая полоса: положительный результат; 11 – контрольная полоса: достоверный результат теста.

Схема работы иммунохроматографического экспресс-теста (на примере тестов производства компании R-Biopharm (ФРГ) приведена на Рис. 1. Исследуемый образец суспендируют в специальном буферном растворе, твердым частицам дают осесть в течение нескольких минут. Надосадочную жидкость вносят в специальное окошко тест-кассеты, после чего она смешивается в определенной пропорции с конъюгатом — специфичными к определяемому антигену антителами, связанными с окрашенными частицами латекса. Частицы образовавшегося комплекса «антиген–конъюгат» двигаются с током жидкости вдоль нитроцеллюлозной мембраны, в определенном месте которой (тестовой зоне) иммобилизованы другие антитела, также специфичные к антигену. Молекулы этих антител связывают частицы движущегося комплекса, в результате чего в тестовой зоне концентрируются окрашенные частицы и образуется видимая глазом полоса, свидетельствующая о наличии определяемого возбудителя в образце. Кроме того, проявляется контрольная полоса, свидетельствующая о том, что миграция образца вдоль мембраны произошла нормально, следовательно, анализ выполнен правильно и его результат достоверен. На мембране комбинированных экспресс-тестов, предназначенных для определения нескольких возбудителей одновременно, антитела разной специфичности присутствуют в нескольких тестовых зонах, соответственно в результате анализа может окраситься несколько тестовых полос, обычно разного цвета, соответствующих присутствующему в образце возбудителю (Рис. 2).

Формат теста: вверху – тест-кассета, внизу – тест-полоска.
1 – участок внесения образца.
2 – участок расположения конъюгата.
3 – реакционная зона; слева направо – контрольная полоса (С); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии в образце веротоксина (T2); тестовая полоса, свидетельствующая о наличии антигенов штамма O157 (T1).
4 – участок абсорбции реагентов (закрыт пленкой с названием теста).

Вирусные инфекции
Ротавирус
Ротавирусная инфекция является наиболее распространенной причиной вирусных ОКИ у детей. С ней связано примерно 40% всех госпитализаций, вызванных диареей у детей [27, 28]. Считается, что в возрасте до 5 лет почти каждый ребенок имеет контакт с вирусом (может быть, бессимптомный), каждый пятый обращается к врачу, 1 из 65 нуждается в госпитализации, 1 из 293 умирает. По оценкам, ежегодно в мире от гастроэнтеритов, вызванных ротавирусной инфекцией, умирает 500–600 тысяч человек [22, 27]. Распространенность инфекции за последние 20 лет возрастает, а смертность и число госпитализаций хоть и снижаются, но намного медленнее, чем при ОКИ, вызванных бактериями и паразитами. Возможными причинами этого являются невысокая эффективность противоэпидемических мероприятий и отсутствие своевременной этиотропной терапии. Кроме того, из-за сильной рвоты, обычной при этом заболевании, не всегда удается вовремя и адекватно восполнять потери воды.
Основной путь заражения – фекально-оральный. Ротавирусы выделяются с фекалиями больных в огромных количествах (миллиарды частиц в миллиграмме), в то время как доза, равная нескольким тысячам частиц, может быть достаточна для заражения. Вирус устойчив во внешней среде, может долго сохраняться в холодильнике (в продуктах питания), обнаруживается в водоемах. Для ротавирусной инфекции характерна заболеваемость в виде эпидемических вспышек. Часто возникают вспышки внутрибольничной инфекции.
Вирус поражает эпителиальные клетки слизистой оболочки тонкого кишечника. Вирусный энтеротоксин (белок NSP4) вызывает нарушение реабсорбции воды. Кроме того, гибель эпителиальных клеток, секретирующих лактазу, приводит к недостаточности этого фермента, которая может продолжаться в течение нескольких недель после выздоровления и быть причиной непереносимости молока.
Учитывая высокую контагиозность ротавируса, его распространенность и риск развития внутрибольничных осложнений, важнейшей задачей является быстрая и эффективная диагностика ротавирусной инфекции. Решение этой задачи обеспечивает широкое использование иммунохимических диагностических препаратов: наборов для ИФА и экспресс-тестов. Так, показано, что быстрый тест RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus (R-Biopharm) имеет чувствительность 75% (для выявления ротавируса) по отношению к ПЦР, что позволяет с успехом применять его при вспышках инфекции [32].

Аденовирус
Аденовирус — вторая по частоте после ротавируса причина ОКИ, встречающихся у детей. Поражение желудочно-кишечного тракта вызывают аденовирусы только одного вида – группы F (или типов 40/41), однако при инфекции другими аденовирусами также могут наблюдаться вторичные симптомы со стороны ЖКТ. Антигены аденовируса выявляют в образцах кала у 4–15% детей с гастроэнтеритом. Так же, как и при поражении ротавирусом, возникают эпидемические вспышки, в том числе внутрибольничные инфекции.
Для экспресс-диагностики аденовирусной инфекции при гастроэнтеритах обычно используют двойной тест (одновременное выявление рота- и аденовируса). Примером может служить экспресс-тест RIDA QUICK Rotavirus/Adenovirus [32].

Норовирус
Норовирус (старое название — вирус Норфолк, по названию города в штате Огайо, где он впервые был идентифицирован) является одной из главных причин ОКИ во всем мире — как в развивающихся, так и в развитых странах [8], в том числе и в России [2, 6]. По оценкам, в США 80–90% случаев вспышек эпидемических гастроэнтеритов вызывается норовирусом [10, 13].
Контагиозность вируса чрезвычайно высока, что связано с его крайне низкой инфекционной дозой, а также высокой устойчивостью к воздействию неблагоприятных факторов внешней среды. Основным путем распространения являются бытовые контакты, а также заражение при вдыхании аэрозолей, содержащих частицы рвотных масс больного. Вспышки заболевания возникают при санитарных нарушениях, в частности, при попадании содержимого канализации в водопровод. Наиболее часто вспышки происходят в локализованных группах: в школах, детских садах, летних лагерях, больницах, лечебно-оздоровительных учреждениях, домах престарелых, на морских судах и т.д.
Вызванный норовирусом гастроэнтерит протекает сравнительно легко и обычно не требует терапевтического вмешательства; исключение составляют больные с ослабленной иммунной системой. Тем не менее, своевременное определение этиологического фактора имеет важное значение, позволяя своевременно проводить санитарно-гигиенические и противоэпидемические мероприятия и тем самым значительно сократить нанесенный вспышкой экономический ущерб. Для выявления норовируса в кале больных широко используется метод ПЦР, обладающий высокой чувствительностью. Этот метод пригоден и для диагностики спорадических случаев, и для инфекционных вспышек, а также используется как метод подтверждения. Однако, учитывая чрезвычайную важность фактора времени при выяснении причины инфекционной вспышки, необходимо иметь возможность диагностики на месте, без отправления образцов в специализированную лабораторию. Диагностические наборы, основанные на методе ИФА, а также иммунохроматографические экспресс-тесты, хотя несколько уступают в чувствительности ПЦР-анализу, тем не менее обеспечивают быструю и надежную диагностику инфекции в эпидемическом очаге [12, 21]. Набор для ИФА RIDASCREEN Norovirus (R-Biopharm) был первым в мире набором, при помощи которого определялись вирусы, принадлежащие к обеим опасным для человека геногруппам GI и GII. При специфичности близкой к 100%, чувствительность современных наборов третьего поколения составляет 80%. Это позволяет, исследуя 2–3 образца, полученных во время вспышки, определить ее норовирусную этиологию с эффективностью, практически не уступающей ПЦР [11]. Экспресс-тест RIDA QUICK Norovirus (R-Biopharm) – первый в мире быстрый тест, предложенный для диагностики норовирусной инфекции, — имеет сходные с ИФА показатели чувствительности и специфичности. Время, необходимое для проведения анализа, составляет 20 минут.

Астровирус
По оценкам зарубежных ученых, в развитых странах астровирусная инфекция является причиной до 10% случаев спорадических ОКИ и до 15% инфекционных вспышек у детей в возрасте до 7 лет [23, 25]. Астровирусы — небольшие, лишенные оболочки частицы (28–32 нм) икосаэдральной формы, содержащие одноцепочечную РНК.
Заболевание обычно протекает в легкой форме. Более тяжелые проявления встречаются при иммунодефицитных состояниях.
В течение значительного времени астровирусы выявляли методом электронной микроскопии. При этом ввиду того, что далеко не все вирусы имеют характерную звездчатую форму, заболеваемость ОКИ астровирусной этиологии была значительно занижена. Применение иммунохимических методов анализа, таких, как ИФА, позволило более реально оценить вклад астровирусов в заболеваемость ОКИ.

Бактериальные инфекции
Кампилобактер
Наряду с сальмонеллами, инфекция бактерии рода Campylobacter, главным образом C.jejuni и C.coli, являются одной из основных причин ОКИ бактериального происхождения. Эти бактерии широко распространены в кишечнике домашних животных и птиц, они часто являются симбионтами организма хозяина. Человек заражается через мясопродукты, фекально-оральным путем, при контакте с зараженным животным. Возможно также заражение через воду, взятую из инфицированных водоемов.
Кампилобактериоз распространен повсеместно и, по разным оценкам, составляет от 5 до 14% всех ОКИ. Чаще всего заболевание развивается у детей в возрасте до 7 лет. Пик заболеваемости приходится на летние месяцы. Кампилобактериоз — частая причина «диареи путешественников».
Помимо классических симптомов ОКИ (диарея и связанные с ней обезвоживание и нарушение водно-электролитного баланса, боль в животе, общая слабость) кампилобактериоз часто сопровождается повышением температуры до 39–40° С, головной болью и болью в мышцах и суставах. Терапия обычно сводится к восстановлению водно-электролитного баланса. В тяжелых случаях применяют антибиотики.
Редко встречающееся инфицирование бактериями Campylobacter fetus может привести к серьезным системным осложнениям: эндокардиту, септическим артриту и флебиту, менингиту, синдрому Гийена-Барре.
Для лабораторной диагностики кампилобактериоза применяются традиционный микробиологический метод, считающийся «золотым стандартом». Анализ выполняется в специализированной лаборатории квалифицированным персоналом. Бактерии прихотливы к условиям культивирования; кроме того, требуется подавление контаминирующей микрофлоры. Это предъявляет высокие требования к взятию и транспортировке исследуемых образцов.
В последние годы все большее распространение получили тест-системы для ИФА, предназначенные для прямого выявления антигенов возбудителей в фекалиях. Чувствительность и специфичность лучших из них сопоставима с показателями микробиологического анализа. Так, при проведении испытаний ИФА-наборов RIDASCREEN Campylobacter (R-Biopharm), чувствительность составила 100% (14 образцов из 14) , а специфичность — 99,6% (244 образцов из 245). При этом время проведения анализа значительно меньше, а требования к качеству образца менее строгие, чем в случае микробиологического исследования.

Геморрагические штаммы Escherichia coli
В отличие от большинства штаммов E.coli, персистирующих в кишечнике человека и не вызывающих каких-либо симптомов патологии, геморрагические штаммы продуцируют шига-подобные токсины (веротоксины) и способны вызывать тяжелые заболевания как кишечника, так и других органов. Большая часть инфекционных вспышек вызывается штаммами, принадлежащими к серотипу E.coli O157:H7.
В США, где вспышки заболеваний, вызванных геморрагическими E.coli, регистрируются с 1983 г., ежегодно возникает более 70 000 новых случаев, более 2 000 из которых требуют госпитализации.
Большинство случаев инфекции протекает сравнительно легко, проявляется в основном водянистой диареей и завершается самоизлечением. Однако у части больных развивается геморрагический колит (ГК) с кровавой диареей, а у 5–10% больных ГК –тромботическая тромбоцитопеническая пурпура или гемолитический уремический синдром (ГУС) – тяжелое, угрожающее жизни состояние. Тяжелые осложнения наиболее часты у детей, лиц пожилого возраста и лиц с ослабленным иммунитетом.
Природным носителем бактерий штамма O157:H7 является крупный рогатый скот, у которого инфекция протекает бессимптомно. Основной путь передачи – через продукты питания (мясо, молоко, овощи, употребляемые в пищу без термической обработки) и зараженную воду. Также возможна передача инфекции контактным путем, в том числе и от инфицированного животного. Бактерии способны долго (до года) сохраняться в унавоженной почве и в воде, особенно при невысокой температуре. Более того, они способны выживать и размножаться внутри широко распространенного в почве простейшего Acanthamoeba polyphaga. Инфекционная доза очень невелика (до 50 КОЕ). Возможно, это объясняется повышенной устойчивостью бактерий к низким значениям pH, позволяющим им успешно преодолевать кислую среду желудка.
Микробиологическое выявление бактерий серотипа O157 требует применения селективных питательных сред, основанных на некоторых особенностях метаболизма, свойственных этим бактериям (задержка утилизации D-сорбитола и отсутствие экспрессии β-глюкуронидазы). Однако, как показывает практика, для более надежной диагностики, особенно при тяжелых случаях инфекции, необходимо определение в фекалиях патогенных факторов — веротоксинов. Для этого применяются как методы молекулярной диагностики, так и более простые иммунохимические методы (ИФА и иммунохроматография). Наибольшая чувствительность этих анализов достигается, если бактерии, содержащиеся в образце, предварительно подращивают в течение ночи в специальной питательной mTSB-среде, содержащей митомицин С. Культивирование в этой среде способствует усиленной продукции веротоксинов.
ИФА-набор RIDASCREEN Verotoxin (R-Biopharm) имеет достаточно высокую чувствительность (96%) и специфичность (99%) по отношению к культуральному цитотоксическому тесту [9]. Эти наборы были успешно использованы для выявления причин ГУС, возникшего у детей при вспышке ОКИ в г. Омске [3]. Экспресс-тест RIDA QUICK Verotoxin/O157 Combi (R-Biopharm) является двухпараметровым и позволяет раздельно определять как антигены серотипа O157, так и молекулы веротоксинов I и II , что увеличивает чувствительность анализа. Обнаружение бактерий серотипа O157 особенно важно в связи с расширением циркуляции штаммов, способных усваивать сорбитол, что сильно затрудняет микробиологическую диагностику [20, 26]. Есть основания полагать, что у больных, инфицированных бактериями именно этих штаммов, чаще всего развивается ГУС [7, 29].

Clostridium difficile
Clostridium difficile – анаэробные грамположительные бактерии, способные к спорообразованию как во внешней среде, так и при неблагоприятных условиях в кишечнике. Большинство штаммов C.difficile не вызывает у человека каких-либо симптомов, однако ряд штаммов, содержащих ген PaLoc, способны к продукции токсинов A (энтеротоксин) и B (цитотоксин). Молекулы токсинов поражают клетки эпителия кишечника и межклеточные контакты, вызывая воспаление кишечной стенки.
Диарея, вызываемая токсинами C.difficile, часто возникает при терапии антибиотиками. При этом нарушение баланса микрофлоры в кишечнике приводит к активному размножению клостридий, малочувствительных к воздействию широко распространенных антибиотиков, продукции ими токсинов и развитию заболевания. Это часто происходит у больных, находящихся на стационарном лечении. C.difficile — одна из главных причин внутрибольничных гастроэнтеритов в развитых странах. В ряде случаев развивается псевдомембранозный колит – острое заболевание с тяжелым течением.
Основные пути передачи — фекально-оральный и контактный. Споры могут сохраняться на открытых поверхностях в течение 5 месяцев.
Число ОКИ, вызванных C.difficile, в последние годы имеет устойчивую тенденцию к росту. Это связано как с появлением штаммов, устойчивых к воздействию этиотропных лекарственных препаратов (фторхинолонов), так и расширяющейся циркуляцией нового штамма NAP1/BI/027, имеющего более высокую вирулентность [18].
Бактериологические методы определения C.difficile для диагностики ОКИ практического значения не имеют, так как они не позволяют выявить токсин-продуцирующие штаммы. «Золотым стандартом» диагностики является цитотоксический культуральный метод, с применением антител, специфичных к токсинам A и B, для подтверждения в реакции нейтрализации. Другой вариант культурального метода —выращивание бактерий на специальных средах, стимулирующих продукцию токсинов, с дальнейшим определением токсинов методами ИФА или ПЦР. Оба теста проводятся в специализированных лабораториях, для их выполнения необходим высококвалифицированный персонал, время анализа составляет до 48 часов.
Применение иммуноферментных тест-систем, предназначенных для суммарного выявления токсинов A и B в образцах кала, позволяет получить результат в течение 2–3 часов. Чувствительность таких наборов по отношению к культуральным тестам составляет более 90%, тогда как специфичность близка к 100% [30]. Оптимальной является следующая схема диагностики: анализ проводится методом ИФА с последующим тестированием отрицательно прореагировавших образцов культуральными методами.

Протозойные инфекции
Лямблии
Жгутиковое простейшее Giardia lamblia — самый распространенный протозойный возбудитель ОКИ, являющийся причиной примерно 200 миллионов случаев заболевания в год по всему миру, большей частью в развивающихся странах. Вызванный лямблиями гастроэнтерит большей частью поражает детей.
В жизненном цикле лямблии существуют в трофозоитной и цистной форме. Трофозоиты размножаются в проксимальных отделах тонкого кишечника. С калом выводятся как цисты (до 200 000 в грамме), так и трофозоиты. Во внешней среде выживают только цисты, причем они сохраняют жизнеспособность в течение месяцев. Инфицирование цистами происходит через зараженную воду и продукты питания, а также фекально-оральным путем. Возможен половой путь передачи инфекции.
Лямблиоз проявляется типичными симптомами ОКИ. Заболевание может длиться до 6 недель и переходить в хроническую форму, чреватую серьезными нарушениями пищеварения и всасывания в кишечнике и задержкой развития у детей [15].

Криптоспоридии
Простейшие рода Cryptosporidium — внутриклеточные паразиты, обитающие в организме человека и многих млекопитающих. 8 видов криптоспоридиев вызывают заболевания у человека, основная часть которых приходится на C.hominis и C.parvum. Заболеваемость составляет примерно 3% населения в развитых и 6% — в развивающихся странах. Чаще болеют дети (соответственно около 7% и 12%). Криптоспоридиоз также является распространенной оппортунистической инфекцией у больных синдромом приобретенного иммунодефицита (СПИД).
Криптоспоридии паразитируют на эпителиальных клетках тонкого кишечника, чаще всего в его дистальной части, вызывая атрофию ворсинок. Жизненный цикл включает половое размножение и формирование цист, выделяющихся из кишечника во внешнюю среду. Основной путь передачи инфекции — через зараженную цистами воду. Цисты очень устойчивы во внешней среде, в том числе и к действию многих дезинфицирующих реагентов, в частности к хлорированию водопроводной воды, бассейнов и т.д. [16, 17]. Возможны также фекально-оральный путь и передача инфекции человеку от зараженного животного.
Криптоспоридии вызывают диарею, продолжающуюся до 2 недель и обычно завершающуюся выздоровлением без специального лечения. Однако при иммунодефицитных состояниях, в частности, у больных СПИД, заболевание может длиться несколько месяцев. Диарея у этих больных длительная и обильная, похожа на симптом холеры и приводит к обезвоживанию, требующему терапевтической коррекции. Возникают также симптомы поражения других отделов ЖКТ (пищевод, желудок, желчевыводящие пути), поджелудочной железы и органов дыхания.

Entamoeba histolytica
В настоящее время E.histolytica считается единственным представителем рода Entamoeba, вызывающим заболевание у человека; патогенность очень близких к ней E.dispar и E.moshkovskii находится под вопросом. В развитых странах E.histolytica вызывает ОКИ, заболеваемость составляет 1—4% населения. Однако в развивающихся, особенно южных, странах заболеваемость носит массовый характер (70–90% населения в эндемичных регионах) и болезнь часто протекает в тяжелой форме. По разным оценкам, от амёбиаза ежегодно умирает от 40 000 до 100 000 человек [14, 33].
В норме энтамеба колонизирует дистальный отдел тонкого и начало толстого кишечника, не вызывая каких-либо симптомов. Только 10–20% инфицированных лиц заболевают. Вызванная амёбами ОКИ может протекать как в легкой неинвазивной, так и в инвазивной форме, когда энтамебы проникают в толщу слизистой оболочки кишечника, вызывая образование абсцессов (состояние, известное также как «амебная дизентерия»). Абсцессы затем вскрываются в просвет кишечника, образуя кровоточащие язвы. При распространении амёб по кровяному руслу развивается внекишечный амёбиаз, чаще всего проявляющийся абсцессами печени. Также могут поражаться легкие и головной мозг [31].

Лабораторная диагностика протозойных ОКИ
Традиционным методом лабораторной диагностики ОКИ, вызванных простейшими, является выявление цист и трофозоитов в кале при помощи световой микроскопии. Для микроскопической диагностики необходим персонал, имеющий высокую квалификацию. Поскольку трофозоиты можно обнаружить только в свежих образцах, а выделение цист обычно носит пульсирующий характер, для анализа рекомендуется использовать несколько проб, взятых в разные дни. Так, при исследовании одного образца чувствительность микроскопических тестов составляет 60-80% (лямблии) и 35-50% (энтамебы); при использовании 3 образцов, взятых в течение 10 дней, чувствительность обоих тестов составляет 90-95%.
Удобной альтернативой микроскопии являются иммунохимические методы — ИФА и иммунохроматография, предназначенные для выявления антигенов простейших в образцах фекалий. Как правило, молекулы антигенов выделяются со стулом больного постоянно и необходимости в повторных анализах не возникает. Чувствительность и специфичность современных иммунохимических диагностикумов, в частности, тест-систем RIDASCREEN (ИФА) и RIDA Quick (экспресс-тесты), превосходят соответствующие показатели микроскопического анализа. Крайне удобными для использования являются двойные тесты (лямблии/криптоспоридии) и тройные тесты (лямблии/криптоспоридии/энтамебы), позволяющие установить возбудителя ОКИ в ходе одного анализа.
Широкое внедрение в лабораторную практику иммунохимических методов выявления антигенов возбудителей ОКИ в фекалиях открывает новые перспективы быстрой диагностики и значительно расширяет представление о структуре заболеваемости.

Сергей Дмитриевич Зайко
Ведущий специалист по продукции ЗАО «Аналитика»

Материал подготовлен для журнала «Справочник заведующего КДЛ» (готовится к печати)

источник