Что показывает пцр мокроты при туберкулезе

• Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза
• Обследование на туберкулез: как собрать мокроту
• Различные методики обследования на туберкулез
• Диагностика с помощью ПЦР
• Подводим итоги

Заболевания дыхательной системы наверняка знакомы каждому. Врачи часто для постановки диагноза берут анализ мокроты на туберкулез.

У всех было такое состояние, когда появлялся сухой кашель, незначительно повышалась температура тела, имелась слабость во всем теле. Данные симптомы характерны для многих заболеваний, однако одним из тяжелых видов такой патологии является туберкулез.

Туберкулез легких широко распространен в таких странах, как:

Это заболевание зачастую имеется у лиц без определенного места жительства, заключенных, малообеспеченных людей. Оно характеризуется тяжелым поражением легких с образованием полостей распада (каверн), очагов уплотнения в легких. Они поражаются, в частности, из-за того, что легочная ткань обильно снабжена кровеносными и лимфатическими сосудами. А это обуславливает распространение туберкулеза на другие системы органов.

Заболевание передается воздушно-капельным путем, что существенно увеличивает риск заражения при контакте с больным человеком. Для того чтобы выявить наличие туберкулеза у пациента, создано множество методов, одним из которых является анализ мокроты.

Мокрота — секрет слизистой оболочки бронхов, при нормальном состоянии организма не образующийся. Во время заболевания наблюдается повышение секреции данной субстанции. Она начинает образовываться даже в самых мелких бронхах, что существенно увеличивает риск попадания микобактерий (основной возбудитель туберкулеза) в мокроту. Во время кашля частицы мокроты несколько рассеиваются в выдыхаемом воздухе. При вдыхании подобного воздуха происходит попадание микобактерий в незараженный организм , в котором, при соблюдении определенных условий, развивается инфекционный процесс, и туберкулез начинает прогрессировать.

При появлении вышеуказанных симптомов паниковать не стоит, так как вполне возможно, что место имеет банальная простуда. Однако туберкулез следует заподозрить , когда данные симптомы имеются уже довольно долгое время (не менее двух недель), пациент похудел за это время, а также если не делалась контрольная флюорография (нет данных минимум за полгода). Если же симптомы развились за несколько дней, есть стопроцентная уверенность в том, что это не туберкулез.

Если все же состояние здоровья ухудшилось, а кашель стал постоянным, следует обязательно сделать флюорографию. Без нее не всегда врачи согласятся провести анализ мокроты на микобактерии.

При подозрении на туберкулез (наличие на снимке очаговых уплотнений до 1 см в диаметре, затемнения доли или сегмента легкого, чаще всего, верхних его частей) немедленно стоит обратиться к фтизиатру за консультацией. Если же и у него возникнет подозрение на туберкулез, то сразу же будет назначен анализ мокроты.

В первую очередь следует взять чистую и стерильную баночку или плевательницу для слюны, чтобы избежать неправильной интерпретации анализа. Перед сплевыванием мокроты обязательно нужно почистить зубы, так как чаще всего неправильные результаты обусловлены попаданием микроорганизмов из ротовой полости.

Мокрота лучше всего отходит после длительного периода покоя (ночной сон). Она сплевывается в баночку. Лучше всего сразу же закрыть баночку. Хранить ее до исследования нужно в темном и прохладном месте. Оптимальное время для доставки мокроты на исследование — 2 часа. Каким же образом проводится само исследование мокроты?

Самыми примитивными методиками определения микобактерий являются бактериоскопический и бактериологический методы. Бактериоскопия основывается на выявлении под микроскопом специфических микробных тел, однако нельзя судить о наличии туберкулеза только по наличию данных микроорганизмов. Для более достоверного исследования обязательно проведение таких процедур, как ИФА, ПЦР.

Интерпретация анализа двояка. Без проведения специальных методик врач-лаборант вправе написать на бланке направления только “КУБ (кислотоустойчивые бактерии) положительны» или «КУБ отрицательны”. Если в мазке имеются похожие на микобактерию палочки, выставляется КУБ+. Если же их нет (КУБ-), то это исключает диагноз туберкулеза. В редких случаях анализ может быть ложноположительным или ложноотрицательным.

В первом случае имеет место перекрестная реакция антигенов. Ложноотрицательный результат возможен, когда в среду было внесено мало реагента и его просто не хватило для полноценной реакции между антигеном и вносимым компонентом.

Для лучшего выявления бактерий мазок окрашивают специфическими красителями (окраска по Цилю-Нельсену).

Если для бактериоскопии мокроты мало или больной ее не выделяет, лучше всего накануне перед сном прописать пациенту амброксол или бромгексин.

Если же все-таки имеется пометка КУБ+, то следует продолжить исследование.

В первую очередь необходимо провести иммуноферментный анализ (ИФА).

Суть его заключается в следующем:

1. К раствору, содержащему исследуемый антиген, добавляют специфические антитела. Их имеется две разновидности — меченые и немеченые.
2. Немеченые вносятся в среду на первом этапе, а на втором — меченные определенными ферментами.
3. При присоединении данных антител к антигенам образуется комплекс антиген-антитело. Концентрации вносимых компонентов известны.
4. После связывания компонентов определяют ферментативную активность среды, по которой судят о количестве антигена и возможном диагнозе.

ИФА методика позволяет довольно быстро определить наличие специфических антигенов и поспособствовать постановке диагноза.

Еще одним из часто использующихся методов исследования является определение микобактерий на ВАСТЕС.

Под ВАСТЕС понимают специализированные аппарат, в котором возможно определение многих видов микроорганизмов. Суть исследования такова:

1. Мокроту, полученную от пациента, разбавляют специальной средой, для каждого микроорганизма подбирают собственную.
2. Пробирку с полученным раствором помещают в аппарат, где в определенных условиях проводится выращивание штамма бактерий.
3. По мере их роста за счет содержащихся в среде веществ начинает вырабатываться углекислый газ, который соединяется со специальным красителем.
4. Он воспринимается определенными датчиками.
5. По тому, какой имеется индекс флюоресценции, судят о том, какие микроорганизмы находятся в исследуемом образце.

Более простой разновидностью этой методики является бактериологический метод или, как его называют, культуральный. Проводится посев мокроты на специальную среду, и в течение месяца наблюдают за тем, какие колонии растут. Если они приобретают специфический вид для микобактериальной культуры, то диагноз туберкулеза можно считать подтвержденным и доказанным. Однако этот метод используется крайне редко, так как занимает довольно много времени.

К более сложным методам относят диагностику микобактерий при помощи ПЦР. Эта методика доступна не во всех учреждениях здравоохранения и проводится обычно как минимум на районном или областном уровнях.

Полимеразная цепная реакция основывается на образовании в исследуемой среде участков генетического материала, сходного с таковым у микобактерии. Мокрота подвергается термической и химической обработке, после чего в определенных условиях в нее вносят необходимые реагенты. На основании имеющегося генетического материала происходит достраивание цепей молекул, которые впоследствии исследуются. Если генетический материал соответствует таковому, как у микобактерии, то диагноз можно считать подтвержденным.

Если диагноз туберкулеза положительный, пациента необходимо сразу же изолировать от других людей с целью исключения риска заражения окружающих.

Согласно исследованию количества микобактерий в мокроте, больных туберкулезом можно подразделить на две группы — БК+ и БК- К группе БК+ относят активных выделителей микобактерий, у которых имеется прогрессирующий процесс в легких. Такой контингент и представляет наибольшую опасность для окружающих.

Если же было подтверждено, что мокрота не содержит микобактерий или они единичны, то такой человек относится к группе БК- Он не представляет опасности для окружающих, однако с целью профилактики прогрессирования заболевания и перехода его в открытую форму такого человека тоже необходимо изолировать.

При проведении соответствующего лечения и подтверждении, что человек не является бактериовыделителем, больные становятся на учет к фтизиатру. При наличии нескольких отрицательных результатов на КУБ и БК (т.е. при получении стерильной мокроты при повторных методиках обследования типа ИФА или ПЦР) пациента снимают с учета.

Как видно, туберкулез является довольно значимой проблемой современного общества. Никогда нельзя знать заранее, отчего кашляет человек и может ли контакт с ним привести к тяжелым последствиям. Именно из-за этого, методика выявления микобактерий туберкулеза совершенствуется. Создаются новые экспресс-методы, позволяющие по наличию мокроты и ее характеру сразу же определить наличие туберкулеза у пациента. Однако все они играют важную роль на ранних стадиях заболевания, когда процесс еще не стал активным.

источник

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

• Кровь.
• Слюна.
• Мокрота.
• Выделения из половых органов.
• Смывная жидкость бронхов.
• Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

1. Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
2. Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
3. Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

• Длительный контакт с больным туберкулезом.
• Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
• Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
• Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
• ВИЧ-инфекция.
• Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
• Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

• Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
• Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
• Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
• Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
• Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
• Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

• Зона приемки и сортировки проб.
• Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
• Зона проведения реакционных проб.
• Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

• Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
• Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
• ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
• С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
• Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
• Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
• Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
• ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
• Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

• Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
• Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
• При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
• Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
• Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

ПЦР на туберкулёз назначают, когда невозможно поставить диагноз или нельзя провести иные исследования. Анализ даёт возможность выявить палочку Коха на самых ранних стадиях и своевременно начать лечение.

Описание ПЦР на туберкулёз

Показания для ПЦР диагностики

Виды анализов ПЦР на туберкулёз

Подготовка к сдаче анализа

Как проводится ПЦР на туберкулёз

Расшифровка результатов обследования

Особенности ПЦР на туберкулёз у детей

Сколько стоит ПЦР на туберкулёз?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) на туберкулёз – это точный анализ, способный выявить палочку Коха за несколько часов. Диагностика основана на методах генной инженерии. Врачи выделяют клетку ДНК, при помощи генно-молекулярных тестов определяют тип возбудителей.

• позволяет выявить возбудителя на ранних стадиях, без проявления видимых симптомов;
• диагностика не имеет противопоказаний и разрешена детям;
• исследование можно проводить при взятии минимального количества материала.
• универсальность исследования биоматериалов;
• исследование эффективно при определении рецидива болезни.

Наряду с достоинствами, у ПЦР исследования имеются и недостатки.

1. Исследование не везде можно сдать. Поскольку оборудование для такой диагностики дорогостоящее, его устанавливают в платных лабораториях.
2. ПЦР на туберкулёз может дать положительный ответ, если обнаружит убитые микобактерии, к примеру, после проведённого лечения.
3. Мутации возбудителей болезни значительно снижают эффективность метода ПЦР, поскольку нити ДНК неспособны последовательно синтезироваться.
4. Необходимость тщательно выбирать биоматериал для анализа.

Направляют на обследование по следующим показаниям:

1. Если был хотя бы единичный контакт с больным туберкулёзом и выявить заболевание с помощью стандартных анализов сложно.
2. Бывают ситуации, когда нет возможности привести человека для рентгена или других исследований. В таких случаях гораздо проще доставить мокроту.
3. Анализ назначается накануне предстоящей операции, когда необходимо определить, болен человек или нет.
4. Если у пациента сомнительный результат реакции Манту.
5. Назначают беременным и детям, чтобы избежать облучения от рентгена.

Выбор биоматериала для обследования на туберкулёз должен назначаться в индивидуальном порядке.

Для диагностики ПЦР на туберкулёз могут взять анализы:

Особенности анализа крови на туберкулёз:

1. Проводят в тех случаях, когда другие диагностики не подходят или противопоказаны. Например, для постановки верного диагноза требуется делать не один рентген-снимок. Для организма излишнее облучение небезопасно, поэтому взять кровь у пациента гораздо проще.
2. Также врач может дать направление на кровь при получении спорных результатов после флюорографии.

1. Анализ слюны менее популярен и информативен, чем другие исследования, так как туберкулёз не поражает слюнные железы. Поэтому в большинстве случаев результат будет отрицательным.
2. Метод направлен на выявление лёгочных и внелёгочных форм.
3. Если под действием реагента цвет образца не меняется, это означает, что возбудителей нет. Если все же возникает подозрение на болезнь, то проводится дополнительный комплекс анализов.

Анализ мокроты является наиболее информативным для выявления возбудителей туберкулёза. Пробы берут несколько раз, как правило, трёх раз достаточно. Это исключает возможность ошибок при получении некачественного материала.

Если человек заражён туберкулёзом, то вместе с кашлем будет выделяться мокрота в небольших количествах. У больных в запущенной стадии заболевания слизь будет выделяться с кровянистыми вкраплениями.

Не рекомендуется брать мокроту для обследования, если у пациента подозрения на туберкулёз костей или нервной системы.

Анализ мочи – это один из способов выявления внелёгочных форм заболевания: туберкулёз почек и мочеполовой системы.

При лёгочной форме заболевания общий анализ мочи практически неинформативен, так как не наблюдается ярко выраженных патологических изменений.

Из видео вы узнаете какой врач ставит диагноз туберкулёз. Снято каналом tuberculum. ru.

При сдаче анализа крови ПЦР стоит придерживаться некоторых правил для получения достоверного результата:

• рекомендуется сдавать анализ натощак;
• следует исключить алкоголь накануне обследования;
• нужно закончить приём антибиотиков за 15–20 дней до анализа;
• рекомендуется воздержаться от курения за час до забора крови.

При сдаче мокроты для обследования также рекомендуется следовать некоторым правилам:

• материал собирают утром, поэтому предварительно чистят зубы и тщательно полоскают ротовую полость;
• если мокрота плохо отходит, то рекомендуется вечером принять отхаркивающее средство или сделать ингаляцию;
• необходимо прекратить приём антибиотиков за 15 дней до обследования.

Для получения достоверного результата анализа мочи, пациенту рекомендуется придерживаться следующих правил:

• материал необходимо собирать с утра;
• накануне не рекомендуется употреблять в пищу продукты, которые способны изменить цвет жидкости (свёклу, чернику и другие);
• прекратить приём антибиотиков за 15 дней до обследования.

Особенности забора материала:

1. Анализ крови обязательно берётся у пациента утром из вены в лаборатории.
2. Для сдачи мокроты на слизь нужна обязательно из гортани и желательно без большого количества слюны. Её пациент должен сплюнуть в специальный стерильный контейнер, после чего сдать на исследование.
3. Врачи берут соскоб специальным инструментом со слизистой щеки.
4. Моча сдаётся в специальном контейнере. Берётся средняя часть утренней порции.

Молекулярно генетическая реакция посредством ПЦР проводится с помощью специального прибора, который называется амплификатор. Для изучения необходимы сегменты ДНК, с которых начинается синтез молекул.

Методика состоит из четырёх этапов:

1. Изначально собирается необходимый биоматериал для исследования (кровь, мокрота и слюна).
2. Затем образец прогревается при температуре до 98 градусов и не более двух минут. Таким образом, разрушается первичная форма генетики ДНК и образуются две цепочки.
3. Далее идёт отжиг или понижение температуры, за счёт чего праймер связывается с нитью ДНК.
4. Последний этап носит название элонгация. Это синтез молекул, который приводит к конечному результату.

Необходимо провести 25–30 подобных циклов, чтобы получить определённое количество копий ДНК вирусов. По ним и определяются возбудители заболевания.

Информативность и достоверность ПЦР диагностики составляет 100%.

Сроки изготовления анализа составляют порядка 5–6 часов.

Диагностика методом ПЦР даёт 2 варианта результатов:

1. Обнаружено. В материале, который исследовали, были выявлены ДНК туберкулёзного агента. Вероятность заражения составляет 97%. Таких пациентов быстро направляют в противотуберкулёзный диспансер, где и будет проводиться лечение.
2. Не обнаружено. Отрицательный ответ свидетельствует об отсутствии возбудителя заболевания.

При положительном результате врачом проводится развёрнутая расшифровка, которая определяет стадию и очаг болезни.

ПЦР назначают, если сомнителен результат пробы Манту или при малейшем подозрении на заражение. Провежение процедуры безапасно для детей.

Из видео узнаете что такое ПЦР и каким образом её проводят. Снято каналом СТС.

источник

Для выявления палочки Коха в организме человека, используют разные диагностические методы. Благодаря ним патологию можно обнаружить даже на начальном этапе, что увеличивает шансы больного на выздоровление. Анализ мокроты на туберкулез – это методика, которая наиболее ценится, так является достаточно эффективной. Что она собой представляет и сколько стоит такой анализ?

ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Данный способ эффективен по отношению к инфекционным болезням. Чтобы установить четкий диагноз не нужно собирать большое количество биоматериала и ждать много времени, как при бак-посеве мокроты.

В основе методики лежит получение ДНК частиц микроорганизма. Далее молекулярно-генетическое исследование определит, к какому типу микроорганизмов стоит отнести имеющийся материал. В пробирочных условиях за несколько часов специалист синтезирует молекулы бактерий и делает соответствующие выводы.

Анализ мокроты на микобактерии туберкулеза эффективен тогда, когда палочка Коха поразила органы дыхания. В таком случае без труда можно выявить болезнь, даже в первые часы инфицирования.

Но, анализ мокроты не покажет достоверного результата, если присутствует туберкулез:

• костей;
• головного, спинного мозга;
• нервной системы;
• суставов и пр.

Определить вид заболевания сможет фтизиатр, учитывая присутствующую симптоматику и опираясь на полученные результаты общих и иных анализов.

Также нецелесообразен такой метод исследования в том случае, когда нужно провести контрольный анализ после терапевтического лечения заболевания. Результат будет положительным, так как в организме в любом случае еще имеются живые или мертвые МБК. Тут лучше отдать предпочтение другой диагностической процедуре.

Как таковых противопоказаний для исследования мокроты на туберкулез при помощи ПЦР нет. Есть ограничения. Как уже говорилось выше, нет надобности в его проведении после лечения туберкулеза. Полученные результаты не принесут пользы. Тут желательно прибегнуть к иной диагностике.

Кроме этого, нет никаких иных препятствия для проведения этой диагностики. Исследовать мокроту можно в любой возрастной категории и при любых сопутствующих заболеваниях. Даже если нет обильного выхода мокроты, анализ можно сделать путем забора слизи с помощью бронхоскопии.

У рассматриваемого метода масса плюсов, к ним относится:

1. Высокая специфичность и чувствительность. Выявляется только возбудитель туберкулеза. Ложного ответа быть не может, если учтены все нюансы проведения процедуры. Микобактерии обнаруживаются даже тогда, когда их минимальное количество. Даже если в собранном материале 10 патологических клеток, инфекция будет выявлена.
2. Быстрота получения ответа. Сколько делается анализ? Уже через 3-5 часов можно получить результат. Тут не нужно делать посев мокроты на туберкулез, и это сужает сроки.
3. Выявить можно как скрытую инфекцию, так и ту, которая находится в острой форме.
4. Нет абсолютных противопоказаний. Это дает возможность проводить процедуру всем без исключения (даже маленьким детям) и особенно тогда, когда другие методы неразрешены.
5. При помощи ПЦР-диагностики изучается различный биоматериал (урина, кал, кровь, слюна, спинномозговая жидкость и др.).
6. Метод выявляет туберкулез и на ранних стадиях, в первые часы после заражения.

к содержанию ↑

Помимо положительных сторон, есть и отрицательные. Это:

1. Анализ на ПЦР – дорогое «удовольствие». Кроме этого, оборудование, необходимое для его проведения имеется не в каждом медицинском центре. В поликлиниках оно присутствует редко, так как его стоимость также велика. Если говорить о частных клиниках, то да, найти такой вид диагностики можно. Позволить его себе, к сожалению, может не каждый.
2. Показывает ложноположительный результат у тех людей, которые недавно прошли курс противотуберкулезного лечения.
3. Если МБК мутировали, то метод может также дать ложные результаты.
4. Если материал собран неправильно, или специалист, который проводит исследование, имеет недостаточный квалификационный уровень, то также возможен сбой. В некоторых случаях повторять процедуру придется несколько раз и каждый раз оплата повторяется.

к содержанию ↑

Чтобы материал был качественным, его нужно собрать правильно и подготовиться к этому как следует.

Существуют определенные правила сбора мокроты на туберкулез. Алгоритм действий заключается в следующем:

1. Еще накануне, вечером человеку нужно выпить отхаркивающее средство (если мокрота плохо отходит). Если даже это не помогло, следует провести ингаляцию на основе лекарственного разжижающего и отхаркивающего препарата. При отсутствии мокроты пациента нацеливают на то, что будет производиться бронхоскопия. Именно во время этой процедуры и берется материал для исследования.
2. Заранее приобрести специальную емкость. Она стерильная и герметичная, поэтому ничего лишнего туда помещать нельзя, также как и открывать заранее.
3. Помещение, где будет собираться мокрота должно хорошо вентилироваться. Нужно открыть окна, двери, включить вытяжку. Еще один неплохой вариант – выйти на свежий воздух (например, на балкон или во двор).
4. Непосредственно перед процедурой нужно всех предупредить, чтобы никто не входил в комнату, где будет все происходить. Никаких лишних микрочастиц в биоматериале быть не должно – это важно.
5. Принимать пищу до сбора не рекомендуется.
6. Рот и глотка полощутся.
7. Слюна выплевывается. Ее в емкость должно попасть минимальное количество.
8. Путем откашливания человек выводит мокроту наружу и сплевывает ее в подготовленный контейнер. После окончания процедуры нужно плотно закрыть крышку и отвести образец в лабораторию.

Как правильно собрать мокроту должен рассказать врач. Если больной не решается сделать это самостоятельно, то на помощь приходят медработники. Во время манипуляции они надевают специальную защитную маску. Собирать мокроту будут в специальном кабинете, куда нет хода посторонним. Если прийти в клинику больной не может, то специалист приезжает к нему на дом и помогает осуществить сбор слизи.

Если делается бронхоскопия, то больному вводят в трахею прибор – бронхоскоп. Именно с его помощью и производится забор материала.

Для достоверности целесообразно сдать анализ трижды, а именно:

• в утренние часы натощак;
• после первого раза через 4-5 часов;
• через 24 часа после первого исследования и тоже до приема пищи.

к содержанию ↑

Сдать анализ мокроты на туберкулез – это только часть работы. Основное впереди. Многое зависит от того, как подготовлен специалист.

Ход исследования следующий:

1. Специалист приступает к разрушению первичной структуры ДНК (денатурации). Тут имеется две цепочки. При высокой температуре они разъединяются.
2. На следующем этапе производится снижение температуры (отжиг). Это необходимо для связи нити ДНК с праймером.
3. Третий этап – элонгация. Тут синтезируются нужные молекулы.

к содержанию ↑

Микобактерии туберкулеза в мокроте методом ПЦР могут быть обнаружены или же нет. Положительный результат основан тем, что в биоматериале имеется ДНК палочки Коха. Это говорит о том, что человек заражен. При отрицательном – 98% того, что обследуемый не является инфицированным.

По показателям можно судить о том:

• в какой фазе патология (латентной или активной);
• насколько организм поражен;
• эффективно ли выбранное лечение в конкретном случае.

Имейте в виду, что ничто не досконально. Поэтому и тут может быть ложноположительный или ложноотрицательный результат. Чтобы убедиться в его правильности, рекомендованы иные диагностические процедуры или же прохождение ПЦР дважды (трижды).

Сдать мокроту на ПЦР можно в разных клиниках. Приведем примеры нескольких популярных московских центров с ценовой политикой.

Кроме вышеуказанных адресов имеются и другие. Узнать о месторасположении всех лабораторий можно на их сайте. Из приведенных примеров видно, что стоимость анализа велика, но если учитывать его результативность, то это того стоит.

ПЦР-диагностика – это один из эффективных диагностических методов, активно используемых в современной медицине. Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза может осуществляться как самостоятельно в домашних условиях, так и при помощи специалиста. Если мокрота не отходит, то делают бронхоскопию. Важна предварительная подготовка. Правильно сдать биоматериал – это уже полдела. Мокрота при туберкулезе будет иметь в себе микобактерии, обнаружить которые при ПЦР не составит труда, даже если их там небольшое количество. Огромный плюс данного способа – это выявление заболевания в первые часы после заражения. Использовать в диагностических целях можно как у взрослых, так и у детей.

Даже внушительная сумма не может остановить человека получить достоверную информацию касательно здоровья близкого человека или его собственного.

источник

На данный момент существует достаточное количество лабораторных способов определения бактерий Коха. У каждого имеются определенные преимущества и недочеты, например, требуется наличие определенной концентрации клеток в пробе или достаточное время для культивирования.

На данный момент более приемлемым анализом считается ПЦР на туберкулез, который характеризуется высокой результативностью (100%) даже при наличии небольшого количества фрагментов генетического аппарата микобактерий Mycobacterium tuberculosis. Полимеразная цепная реакция дает возможность выявлять ограниченные и диссеминированные формы патогенеза, что важно при обследовании детей, когда микробиологическая диагностика не дала результата.

Туберкулез – инфекционное заболевание, вызываемое микобактерией – палочка Коха. Чаще поражаются легкие, но очаги могут быть и в других тканях. Передается респираторно, а также со слюной, кровью, при совместном использовании бытовых приборов и тесном контакте в быту.

Заболевание протекает в двух формах:

1. Закрытая стадия. Больной при контакте не опасен для окружающих. В мокроте анализы не выявляются признаки возбудителей, ложной будет и ПЦР диагностика на туберкулез. При отсутствии лечения патогенез усугубляется.
2. Открытая стадия. Палочка Коха присутствует в биологических жидкостях человека, легко диагностируется лабораторными методиками. В таком состоянии человек является опасным для окружающих.

Обратите внимание. Поскольку начало туберкулеза легких протекает латентно, то проводится скрининг. Взрослые люди должны раз в год или два (зависит от региона проживания) проходить флюорографию, которая показывает наличие инфильтрата в тканях. Это дешёвый и быстрый способ диагностики.

На данный момент для выявления опасных микобактерий проводят ряд анализов:

• методы рентгенографии;
• КТ или МРТ;
• туберкулиновые пробы (реакция Манту).

Однако именно анализ крови на ПЦР на туберкулез дает наиболее достоверный результат, причем определяет наличие инфекции вне зависимости от локации очага.

Врач фтизиатр, пульмонолог или терапевт может направить больного на прохождение диагностики при наличии подозрений.

Кроме этого, тест ПЦР на туберкулез требуется, если:

• возможны внелегочные очаги;
• наличие признаков бактериемии на фоне туберкулезной инфекции (субфебрилитет, потливость и прочие);
• при регулярном контакте с инфицированным человеком;
• при ВИЧ-инфекции;
• ПЦР диагностика туберкулеза у детей показана при ненормальной реакции на пробу Манту;
• сильные увеличения лимфоузлов при заболевании нижних дыхательных путей (прикорневые воспаления легких, бронхиты);
• кровохарканье при этом человек слаб и быстро утомляется;
• длительный кашель после острых бронхитов и пневмоний.

Полимеразная цепная реакция основана на узнавании целых цепочек бактериальной ДНК и РНК или их фрагментов, находящихся в крови пациента или других биологических жидкостях:

• мокрота;
• легочные и бронхиальные смывы;
• моча.

Обратите внимание. Высокая результативность данной методики основана на принципе работы фермента полимеразы (основная функция сборка нуклеиновых молекул). Она может узнавать даже самые мелкие фрагменты генного материала возбудителя. Поэтому результат будет положительный или отрицательный.

Преимущества анализа ПЦР на микобактерии туберкулеза:

• выявление специфических последовательностей ДНК микобактерий;
• точность – 98%;
• чувствительность анализа не менее 100 ДНК-копий в 5 мкл пробе, прошедшей особую обработку;
• срочный анализ дает возможность получить результат в течение 4 ч., после забора крови.

Использование полимеразной цепной реакции существенно облегчило определение многих заболеваний (не только туберкулеза). Причем метод позволяет регистрировать наличие патогена на самых начальных стадиях патогенеза, когда нет еще никаких признаков. Гарантированность результата обеспечивается благодаря тому, что полимераза среди тысяч клеток может находить по определенному маркеру комплементарные (подходящие) только ей последовательности бактериальных генов или даже их фрагменты.

Помимо этого, ПЦР при туберкулезе помогает выяснить уровень резистентности к назначенной терапии и скорректировать лечение, что в разы повышает его эффективность. Длительность такого анализа три, максимум четыре дня, но при этом врач получает данные, существенно меняющие качество противотуберкулезной терапии. Более подробно обо всех нюансах полимеразной цепной реакции изложено на видео в этой статье.

Инструкция проведения анализа на данный момент не представляет особой сложности: сначала проводится отбор исследуемого материала, после чего выделяется ДНК и проводится его классификация по типу патогенной бактерии. Основные моменты указаны в таблице.

Таблица. Как проводится анализ ПЦР на туберкулез:

Полученный материал должен быть на несколько минут нагрет до высоких температур (97º С). Такая мера нужна для расщепления парных молекул нуклеиновых кислот на отдельные цепи (разрыв спирали). Это нужно для того, чтобы полимераза начала работу. При понижении температуры особая молекулярная структура праймер, ассоциируется с одной из свободных цепей ДНК, что позволит в дальнейшем инициировать сборку новой спирали. Если полимераза нашла нужные бактериальные последовательности и начала сборку, то результат положительный, в противном случае отрицательный.