Как сдать мокроту на анализ методом пцр

В здоровом организме бронхи вырабатывают слизь без цвета и запаха, которая необходима для того, чтобы очищать дыхательные пути от попадающих туда микроскопических частичек пыли, вдыхаемого мусора и микробов. Механизм очищения органов дыхания очень прост: реснички эпителия, устилающего их, поднимают слизь наверх вместе с чужеродными частицами. В норме такой мокроты вырабатывается очень мало, поэтому здоровый человек не замечает ее отделения, и она проглатывается вместе со слюной.

Но на фоне любого воспалительного процесса, сопровождающего, какое-либо заболевание дыхательных путей, в том числе и туберкулеза, количество продуцируемой бронхами мокроты значительно возрастает. Это связано, в первую очередь, с раздражением бокаловидных клеток, а также, при присоединении воспалительного процесса, когда клетки иммунной системы организма начинают поглощать патогенные микроорганизмы, образуются гнойные массы. Они также формируют отделяемое в виде мокроты при заболеваниях дыхательных путей. С помощью кашля организм выводит эту жидкость – именно с помощью нее диагностируются многие бронхо — легочные патологии и выявляется степень и характер течения воспалительного процесса.

Количество выделяемой при влажном кашле мокроты также указывает на некоторые особенности течения заболевания. При этом она может, не выводится посредством кашля совсем (трудноотделяемая мокрота) или, наоборот, биоматериал можно собрать без каких-либо трудностей. Два самых распространённых исследования этого отделяемого – это бактериоскопия и посев: именно эти два этапа позволяют провести точную диагностику заболевания, вызвавшего повышенное отделение мокроты и как следствие, влажный кашель с рядом сопутствующих симптомов.

1. Для начала необходимо позаботиться о контейнере – его можно купить в любой аптеке. Это специализированная емкость для сбора мокроты: она стерильна, с широким горлышком и крышкой. Также контейнер могут выдать в медицинском учреждении. Необходимый объем биоматериала для исследования – 5мл, поэтому емкость должна быть соответствующая.
2. Самым подходящим временем для сбора мокроты являются утренние часы, поскольку за время ночного сна скапливается достаточное количество и собрать ее гораздо легче. Однако бывают такие обстоятельства, когда мокрота забирается в любое время суток.
3. Перед тем, как приступить к сбору мокроты на анализ, тщательно прополоскать ротовую полость, при этом чистить зубы перед этим нельзя.
4. Биоматериал для анализа собирается следующим образом: сделав максимально глубокий вдох, задержать дыхание, после чего медленно выдохнуть – повторить еще раз. Сделав третий глубокий вдох, резко выдохнуть, как бы выталкивая воздух из лёгких, и как следует откашляться. Во время этого рот должен быть прикрыт марлевой повязкой.
5. Контейнер необходимо придерживать у нижней губы — сплюнуть в него все содержимое, которое получилось откашлять и плотно закрыть стерильную баночку крышкой.
6. Если после одного раза мокроты отошло очень мало, то процедуру следует повторить, для того чтобы собрать необходимое для исследования количество(5-7 мл.)

Для начала можно попробовать поменять положение тела при откашливании: облегчают отхождение мокроты наклоны вниз, положения, лежа на боку или на животе.

Если такие меры не привели к положительному результату, то можно принять отхаркивающие средства или сделать ингаляцию. Отхаркивающие препараты назначает лечащий врач, и начинать принимать их необходимо за сутки до сбора мокроты (бромгексин, амбробене и другие традиционные препараты). Совместно с приемом таких препаратов необходимо употреблять достаточно большое количество жидкости для облегчения отхождения мокроты.

Ингаляцию для этой цели делают на основе раствора соды и соли. Вдыхать такую смесь следует через небулайзер 10-15 минут(40-60 мл.). Если начинается усиленное слюноотделение, то ее нужно сплюнуть, только потом собирать мокроту.

Если не удается собрать мокроту всеми вышеперечисленными способами, то пациенту назначается процедура бронхоскопии. Еще такое исследование проводится в случаях, когда необходимо собрать секрет мокроты с бронхов, без примесей слюны и носоглоточной микрофлоры.

Процедура проводится посредством двух методик:

• В бронхи вводится 100-200 мл. физ. раствора через вставленный катетер, после чего полученная жидкость посредством аспирации выводится обратно.
• В просветы бронхиального дерева вводят катетер для прямой аспирации слизи.
  Пациенту необходимо пройти подготовку к этой процедуре: не употреблять пищу и жидкость в течение 6 часов, как правило, она назначается на утреннее время, чтобы пациенту было легче выдержать такой интервал времени. А после нее не употреблять аспириносодержащие препараты, которые обладают способностью разжижать кровь.
  И промывные воды, и непосредственно мокрота, полученные таким способом, используются для всех видов исследований на данном биоматериале.

Если сдача мокроты проводится в условиях стационара, то медицинский работник предоставляет пациенту специально оборудованную процедурную, консультирует по поводу процедуры сдачи и контролирует весь процесс. Также медработник подписывает контейнер с биоматериалом и отправляет его на исследование.

Анализ мокроты на туберкулез позволяет выявить легочный тип развития заболевания. Основными показаниями для его проведения являются:

• Кашель затяжного характера (влажный или сухой);
• Выявленные затемнения на снимках рентгена;
• Повышенная температура тела.

Для постановки диагноза туберкулез легких, анализ мокроты является обязательным в спектре исследований, проводимых при подозрении на данное заболевание. Обязательным исследование на инфицирование туберкулезом считается в тех случаях, когда больной больше трех месяцев страдает от сухого кашля, который не поддается никаким видам лечения.

В связи с тем, что биоматериал для исследования на микобактерии берется не только при помощи непосредственного отхаркивания, но и путем бронхоскопии, данное исследование имеет противопоказания. При процедуре бронхоскопии вводится трубка в верхние органы дыхания под общей или местной анестезией. Поэтому, такая методика забора анализа противопоказана:

• пациентам, страдающим аллергией на обезболивающие медикаменты;
• людям с тяжелой дыхательной недостаточностью;
• с нарушениями свертываемости крови;
• пациентам, в ближайшие пол года перенесшим инфаркт миокарда или инсульт;
• с такими заболеваниями, как эпилепсия и шизофрения.

Детям до 18 лет процедура бронхоскопии назначается и делается только с согласия родителей. Сама процедура является безопасной и осложнения вызывает крайне редко, но препараты, предназначенные для общей и местной анестезии, могут вызывать непереносимость и аллергические реакции. Этот вопрос необходимо обязательно обсудить перед процедурой с лечащим врачом.

Самым весомым плюсом этого анализа является стопроцентная точность диагностики и возможность выявления туберкулеза на ранних этапах заражения. Тест включает в себя забор нескольких проб, которые способны однозначно указать присутствие или отсутствие возбудителя в легких пациента.

Сам анализ вариативен, и проводить его можно удобным для пациента способом; данная методика выполняется в короткие сроки, и доставляет минимум дискомфорта пациенту.

Такой метод сбора анализа на микобактерии не имеет побочных воздействий на организм пациента. Нет необходимости вводить медицинские препараты или сдавать анализы крови, мочи. По сути, сбор анализа на микобактерии происходит естественно, без особых трудностей и дискомфорта для пациента. Часто это становится актуально, когда речь идет о малолетних детях, которые весьма негативно переносят такие диагностические процедуры.

С помощью такого информативного метода, как бронхоскопия, медики имеют возможность выявить и другие патологии небактериального характера на ранних сроках (бронхиальная астма, рак легких и т.д.). Расширенное исследование качественного состава мокроты позволяет произвести диагностику на любом этапе развития заболевания . Таким образом, анализ может не только подтвердить или опровергнуть диагноз туберкулез, но и установить причину возникновения тревожной симптоматики.

К минусам можно отнести достаточно долгое ожидание результата анализа. На это есть две главные причины: многостороннее обследование биоматериала, включающее в себя бактериологический анализ и посев мокроты на питательные типы сред, который и является самым долгосрочным видом исследования. Время ожидания может растянуться от 3 недель до двух месяцев.

К отрицательной стороне также можно отнести многократное проведение бронхоскопии при подозрении на заражение туберкулезом, при отсутствии главного симптома – кашля.

После того как биоматериал поступил на исследование в лабораторию, специалист в первую очередь, занимается его визуальной оценкой. При тяжелых формах туберкулеза, например, в мокроте наблюдаются вкрапления крови или кровяные сгустки. Но такое отделяемое не является стопроцентным показателем заражения туберкулезом – наличие крови в мокроте может говорить и о крупозной пневмонии, и об опухолевых процессах, о бронхоэктатической болезни.

Если все же речь идет о туберкулезном заражении, то при дальнейшем исследовании в мокроте будут обнаружены микобактерии. В современной медицине используются две основных проверенных временем методики лабораторного исследования мокроты: бактериоскопическая и культуральная (биологическая).

Бактериоскопия применяется в диагностике туберкулеза уже более ста лет. Она включает в себя макроскопическое описание, микроскопическое исследование – при нем выявляются эритроциты, волокна легочной ткани, коралловидные, спириллы Куршмана и т.д. В мокроте зараженного туберкулезом пациента обнаруживаются, помимо микобактерий, темные фрагменты (зерна) – это частицы старых, распадающихся очагов.

Этот метод используется не только для выявления и диагностики такого коварного заболевания, как туберкулез, также он помогает в выборе рациональных схем химиотерапии и оценке их клинической эффективности.

Бактериологическая диагностика проводится в таком порядке:

1. Обработка материала, поступившего в лабораторию.
2. Микроскопическое исследование мокроты.
3. Посев мокроты на туберкулез.
4. Идентификация микроорганизма при помощи бактериологического и биохимического тестирования.
5. Определение лекарственной чувствительности туберкулезной палочки.

Проводится исследование мокроты на туберкулез с помощью двух методов: обычная (простая) бактериоскопия и метод флорации. Простой метод включает в себя приготовление мазков из комочков мокроты – их помещают между двумя предметными стеклами. Затем одна часть биоматериала окрашивается по Грамму на общую флору, а другая – на микобактерии туберкулеза.

С начала 90-х годов многие современные лаборатории стали использовать в диагностике туберкулеза флюоресцентную микроскопию, основанную на кислотоустойчивости микобактерии. Под воздействием ультрафиолетового излучения туберкулезные палочки проявляются в ярко-желтом цвете на черном фоне.

Культуральный метод включает в себя такие диагностические процедуры:

1. Удаление белковых масс путем обработки мазка разжижающими веществами.
2. Удаление сопутствующей бактериальной формы с помощью деконтаминации образца.
3. Встряхивание.
4. Отстаивание смеси.
5. Помещение в холодную центрифугу.
6. После этого содержимое пробирки отбирается на посев:
   • агаровой среды,
   • плотной яичной среды,
   • бульонного культивирования автоматизированного типа.

Культуральный посев мокроты повышает точность исследования в разы — при более легких степенях развития заболевания, при которых бактериологический метод может показать отрицательный результат. Однако работа таким методом требует хорошо оснащенных, современных лабораторий, которых, к сожалению, не имеют многие небольшие города и поселки городского типа.

Самыми быстрыми и точными видами анализов на обнаружение туберкулезной палочки являются молекулярно-генетические методы диагностики. Это современные комплексы анализов, включающие в себя расшифровку генома микобактерии туберкулеза. Такие молекулярно-диагностические методы открыли в современной медицине хорошие перспективы на последующее развитие эффективных методик борьбы с этим коварным заболеванием. Наиболее часто используется способ полимеразной цепной реакции – это тест предназначен для выявления микобактерии в мокроте или установления вида бактерий в культуральных средах.

Что имеет первостепенное значение в постановке диагноза — это время: вместе с обработкой материала, идентификация туберкулезной палочки занимает всего 5-6 часов. Кроме того, реакция ПЦР обладает высокой чувствительностью и специфичностью, что является залогом стопроцентно точного результата.

источник

Анализ мокроты — показание, как правильно собрать и сдавать, расшифровка результатов и показатели нормы

При бронхите и других воспалительных заболеваниях необходимо сдавать общий анализ мокроты, проанализировав результаты которого, врач сможет определить характер и причину развития патологического процесса. При поражениях дыхательных органов выделяется слизистый секрет, который несет в себе информацию о возбудителях, ставших катализаторами ухудшения состояния организма. Это могут быть микробактерии туберкулеза, клетки злокачественных опухолей, примеси гноя или крови. Все они влияют на количество и состав выделяемой пациентом мокроты.

Исследование мокроты является одним из самых эффективных методов, позволяющих определить характер заболевания дыхательных путей. Многие недуги представляют серьезную угрозу для жизни человека, например, такие болезни как актиномикоз, гнилостный бронхит, гангрена легкого, пневмония, бронхиальная астма, абсцесс легкого и т.д. Попадая в организм человека, вредоносные микроорганизмы способствуют развитию патологического процесса, который стимулирует выделение секрета из органов дыхания.

Чтобы диагностировать болезнь, врачи проводят общий анализ, который включает несколько этапов: бактериологический, макроскопический, химический и микроскопический. Каждое исследование содержит важную информацию о секрете, на основе чего происходит итоговое составление медицинского заключения. Анализы подготавливают около трех рабочих дней, в некоторых случаях возможны задержки на более длительный срок.

Микроскопия мокроты проводится среди пациентов, страдающих заболеваниями легких или других органов дыхания, с целью выявления причины недуга. Слизистый секрет выделяется только при наличии патологических отклонений в работе организма, поэтому при появлении выделений из дыхательных путей следует как можно скорее обратиться к врачу. Отхождение мокроты происходит во время кашля, микроскопический анализ слизи помогает получить всю необходимую информацию о локализации и стадии воспалительного процесса.

Цвет и консистенция мокроты могут быть разными в зависимости от болезни. Исходя из полученных данных, врачи определяют возбудителя патологии и подбирают рациональный курс лечения. Присутствие в секрете патогенных микроорганизмов способствует подтверждению или опровержению наличия злокачественных опухолей, что немаловажно при постановке окончательного диагноза.

Сдавать посев мокроты для проведения общего анализа необходимо тем пациентам, у которых присутствует подозрение на хронические или острые заболевания дыхательной системы. Например, бронхит, рак легкого, туберкулез, пневмония. Данная группа людей находится в категории риска, поэтому регулярные исследования секрета являются неотъемлемой частью комплексной терапии заболеваний. Собирать слизь приходится даже после прохождения курса лечения, поскольку некоторые недуги имеют тенденцию к временному прекращению активности.

Данная процедура требует от пациентов соблюдения определенных правил, которые гарантируют «чистоту» проведения исследования. Ротовая полость человека содержит особую флору, которая может смешиваться с патогенным секретом. Чтобы предоставить корректные данные медицинской комиссии, пациент должен придерживаться следующих рекомендаций:

1. Пить много теплой воды.
2. Принимать отхаркивающие средства.
3. Почистить зубы и прополоскать рот перед процедурой.

Перед тем, как сдавать мокроту на анализ, ее необходимо собрать в домашних или амбулаторных условиях. Пациенту выдают стерильную баночку, которую следует открывать непосредственно перед процедурой. Лучше всего собирать секрет с утра, поскольку в это время суток он является самым свежим. Мокроту для исследования нужно постепенно выкашливать, но, ни в коем случае, не отхаркивать. Чтобы улучшить выделение слизи, врачи рекомендуют:

1. Сделать 3 медленных вдоха и выдоха, задерживая дыхание между ними на 5 секунд.
2. Откашляться и сплюнуть накопившуюся мокроту в баночку для анализов.
3. Убедиться, что слюна из ротовой полости не попала в емкость.
4. Повторять вышеуказанные действия до тех пор, пока уровень секрета не достигнет отметки 5 мл.
5. В случае неудачи, можно подышать паром над кастрюлей с горячей водой для ускорения процесса отхаркивания.

Как только сбор мокроты завершен, баночку следует отвезти в лабораторию для проведения анализа. Важно, чтобы секрет был свежим (не более 2 часов), поскольку в человеческой слизи очень быстро начинают размножаться сапрофиты. Данные микроорганизмы мешают правильной постановке диагноза, поэтому все время от сбора до транспортировки емкость со слизью необходимо хранить в холодильнике.

Длительный кашель, который не прекращается на протяжении трех недель, считается показанием для исследования мокроты. Подозрение на туберкулез – серьезный диагноз, поэтому патогенную слизь собирают только под присмотром врача. Данный процесс может происходить в стационарных или амбулаторных условиях. Сдавать мокроту при подозрении на туберкулез приходится 3 раза.

Первый сбор проходит рано утром, второй – по прошествии 4 часов, а последний – на следующий день. Если пациент по какой-то причине не может самостоятельно прийти в больницу для сдачи анализов, к нему домой наведывается медсестра и доставляет полученный секрет в лабораторию. При обнаружении бактерий Коха (микробактерий туберкулеза) врачи ставят диагноз – открытая форма туберкулеза.

Расшифровка анализа мокроты состоит из трех этапов. Сначала лечащий врач проводит визуальный осмотр пациента, оценивает характер, цвет, слоистость и другие показатели патогенного секрета. Полученные образцы изучают под микроскопом, после чего наступает черед бактериоскопии. Завершающим исследованием является посев на питательные среды. Бланк с результатами выдается в течение трех дней по завершению сдачи анализов, исходя из полученных данных, специалист делает вывод о характере заболевания.

Чтобы правильно поставить диагноз пациенту, мокроту оценивают по трем разным показателям. Проводится макроскопический, бактериоскопический и микроскопический анализ, результаты по каждому исследованию дают четкое представление о состоянии человека. Цвет, консистенция, запах, деление на слои и наличие включений – это основные показатели макроскопического анализа секрета. Например, прозрачная слизь встречается у людей с хроническими заболеваниями дыхательных путей.

Ржавый оттенок секрета обусловлен кровянистыми примесями (распад эритроцитов), что часто свидетельствует о наличии туберкулеза, крупозной пневмонии, рака. Гнойная мокрота, которая образуется при скоплении лейкоцитов, характерна для абсцесса, гангрены или бронхита. Желтый или зеленый цвет выделений является показателем патологического процесса в легких. Вязкая консистенция секрета может быть следствием воспаления или приема антибиотиков.

Спирали Куршмана в мокроте, которые представляют собой белые извитые трубочки, свидетельствуют о наличии бронхиальной астмы. Результаты микроскопического и бактериоскопического анализа предоставляют информацию о содержании в слизи болезнетворных микроорганизмов или бактерий. К ним относятся: диплобациллы, атипичные клетки, стафилококки, эозинофилы, гельминты, стрептококки. Серозная мокрота выделяется при отеке легких, пробки Дитриха встречаются у пациентов, страдающих гангреной или бронхоэктазами.

У здорового человека железы крупных бронхов образуют секрет, который проглатывается при выделении. Данная слизь обладает бактерицидным эффектом и служит для очищения дыхательных путей. Однако появление даже незначительного количества мокроты свидетельствует о том, что в организме развивается патологический процесс. Это может быть застой в легких, острый бронхит или пневмония. Единственным исключением являются курильщики, поскольку у них слизь выделяется постоянно.

Наличие единичных эритроцитов при анализе секрета является нормой и не оказывает влияния на диагностические результаты. Объем ежедневно вырабатываемой трахеобронхиальной слизи у человека должен находиться в переделах от 10 до 100 мл. Превышение указанной нормы свидетельствует о необходимости проведения дополнительных анализов. При отсутствии отклонений мазок на МТБ должен показать отрицательный результат.

В норме у человека не должно происходить отхождение мокроты, поэтому при появлении слизи подозрительного характера необходимо сразу же обратиться за помощью к специалисту. С помощью бактериоскопического исследования определяется тип возбудителя, мазок с грамположительными бактериями окрашивается в синий цвет, а с грамотрицательными – в розовый. Микроскопический анализ помогает обнаружить опасные патологии, к которым относятся опухолевые клетки, эластичные волокна, альвеолярные макрофаги и т.д. Исходя из полученных результатов слизи, врач назначает терапию.

При микроскопическом исследовании мокроты часто встречаются клетки плоского эпителия, однако это никак не влияет результаты анализа. Обнаружение клеток цилиндрического эпителия может свидетельствовать о наличии таких недугов, как астма, бронхит или рак легкого. В большинстве случаев вышеупомянутые образования являются примесями слизи из носоглотки и не имеют диагностического значения.

Клетки ретикулоэндотелия можно обнаружить у людей, которые длительное время находились в контакте с пылью. Протоплазма альвеолярных макрофагов содержит фагоцитированные частицы, которые называют «пылевыми» клетками. Некоторые из вышеуказанных микроорганизмов включают продукт распада гемоглобина – гемосидерин, поэтому им было присвоено название «клетки сердечных пороков». Такие образования возникают у пациентов с диагнозами инфаркт легкого, митральный стеноз, застой легкого.

Любой секрет содержит небольшое количество лейкоцитов, однако скопление нейтрофилов свидетельствует о том, что имеются гнойные выделения. При бронхиальной астме у пациента можно обнаружить эозинофилы, что также характерно и для следующих заболеваний: рак, туберкулез, инфаркт, пневмония, гельминтоз. Большое число лимфоцитов встречаются у тех людей, которые болеют коклюшем. Иногда причиной повышения их количества выступает туберкулез легких.

Слизь человека может содержать единичное количество эритроцитов, что никак не влияет на состояние его здоровья. При развитии таких патологических процессов, как легочное кровотечение, количество эритроцитов сильно возрастает, что приводит к кровохарканью. Наличие свежей крови в слизистых выделениях говорит о наличии неизменных эритроцитов, но если кровь задерживалась в дыхательных путях, то по ней определяют выщелоченные клетки.

При распаде легочной ткани образуются так называемые эластичные волокна. Их появление в секрете свидетельствует о наличии абсцесса, туберкулеза, рака или гангрены легких. Последнее заболевание может протекать без присутствия эластичных волокон, поскольку они иногда растворяются под действием ферментов слизи. Отличительной особенностью бесцветных кристаллов Шарко-Лейдена является высокое содержание эозинофилов, что характерно для таких заболеваний как бронхиальная астма и эозинофильная пневмония.

Кристаллы Шарко-Лейдена – не единственный представитель эластичных волокон. В мокроте многих пациентов, страдающих заболеваниями дыхательных путей, часто встречаются спирали Куршмана. Они представляют собой трубчатые тела, которые иногда заметны даже невооруженным глазом. В остальных случаях кристаллы обнаруживают с помощью микроскопического исследования слизи. Трубчатые тела могут предвещать развитие пневмонии, бронхиальной астмы, туберкулеза легких.

Эозинофилы считаются признаками астмы, но данное утверждение верно лишь для некоторых случаев. Микроорганизмы этого типа содержат специфический белок, который способен не только защищать организм от паразитов, но и разрушать эпителий дыхательных путей. Эозинофилы считаются одной из главных причин развития патологии органов дыхания, однако исследования по данному вопросу все еще не завершены. Эти клетки невозможно полностью удалить из дыхательных путей, однако можно существенно снизить их количество при соответствующем лечении антителами.

источник

• О методе ПЦР
• Цены на ПЦР диагностику

ПЦР (полимеразная цепная реакция) – на сегодняшний день самый быстрый и достоверный метод диагностики инфекционных заболеваний.

Принцип метода полимеразной цепной реакции был разработан Кэри Мюлисом (Kary Mullis) в 1983 г. За свое открытие К. Мюллис в 1993 г получил Нобелевскую премию по химии.

Метод ПЦР позволяет добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе). Метод основан на многократном избирательном копировании (амплификации) определённого участка ДНК при помощи ферментов в искусственных условиях.

Многие традиционные методы диагностики, например иммуноферментный анализ, выявляют белки-маркеры, являющиеся продуктами жизнедеятельности инфекционных агентов, что дает лишь опосредованное свидетельство наличия инфекции. Выявление специфического участка ДНК возбудителя методом ПЦР дает прямое указание на присутствие возбудителя инфекции.

Высокая специфичность метода ПЦР обусловлена тем, что в исследуемом материале выявляется уникальный, характерный только для данного возбудителя фрагмент ДНК. Специфичность задается нуклеотидной последовательностью праймеров, что исключает возможность получения ложных результатов, в отличие от иммунологических методов анализа, где нередки ошибки в связи с перекрестно-реагирующими антигенами.

Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР анализ обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно. Чувствительность ПЦР анализа составляет 10-100 клеток в пробе (чувствительность иммунологических и микроскопических тестов — 103-105 клеток).

Материалом для исследования методом ПЦР служит ДНК возбудителя. Метод основан на выявлении фрагмента ДНК или РНК, являющегося специфичным для конкретного организма. Сходство химического состава всех нуклеиновых кислот позволяет применять унифицированные методы проведения лабораторных исследований. Это дает возможность диагностировать несколько возбудителей из одной биопробы.

Для проведения ПЦР анализа не требуется выделение и выращивание культуры возбудителя, что занимает большое количество времени. Унифицированный метод обработки биоматериала и детекции продуктов реакции и автоматизация процесса амплификации дают возможность провести полный анализ за 4-5 часов.

Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и персистирующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях. Применение ПЦР диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов.

• Эпителиальные соскобы со слизистых оболочек. Обычно используются для диагностики заболеваний, передающихся половым путем (ЗППП), таких как гонорея, хламидиоз, микоплазмоз, уреаплазмоз, трихомониаз, гарднереллез, герпетическая и другие инфекции, поражающие слизистые оболочки.
• Моча. Моча может использоваться при инфекционном поражении мочеполового тракта у мужчин и мочевыделительных органов у женщин (у мужчин использование в качестве материала мочи заменяет эпителиальный соскоб).
• Мокрота. Мокрота используется для диагностики туберкулеза и реже для диагностики респираторных форм хламидиоза и микоплазмоза. Мокроту в количестве 15-20 мл собирают в стерильный (одноразовый) флакон.
• Кровь, плазма, сыворотка. Используются для ПЦР анализа вирусов гепатитов B, C, D, G, герпеса, ЦМВ, ВИЧ, исследования генов человека.
• Биологические жидкости. Сок простаты, плевральная, спинномозговая, околоплодная, суставная жидкость, бронхоальвеолярный лаваж, слюна забираются по показаниям.
• Биоптаты. Чаще всего используют биоптаты желудка и двенадцатиперстной кишки для выявления хеликобактерной инфекции.

р.д. — рабочий день, кол. — количественный, кач. — качественный, ген. — генотипирование, АЖ — амниотическая жидкость, БАЛ — бронхо-альвеолярный лаваж, СМЖ — спинно-мозговая жидкость, ПЖ — плевральная жидкость

источник

Мокрота – это слизь, которая образуется в бронхах и трахее при заболеваниях дыхательных путей. Анализ этого секрета выявляет возбудителя, определяет его чувствительность к лекарственным препаратам. Кроме того, исследования показывают стадию болезни, динамику лечения пациента.

Анализ на мокроту лучше сдавать утром, так как ночью во время сна она скапливается в органах дыхательной системы. Приготовьте заранее специальную емкость – стерильную баночку для анализов. Ее крышка должна быть широкой (не менее 35 мм в диаметре), плотно закрываться на внутреннюю резьбу.

После пробуждения почистите зубы, прополощите ротовую полость слабым антисептическим раствором (фурацилина, ромашки). Через полчаса снова выполните полоскание чистой водой, начинайте процедуру. Помните, перед тем, как сдавать мокроту, нельзя завтракать, пить чай, кофе, сок.

Общий анализ назначается при кашле, который трудно поддается лечению. Чтобы собрать нужное количество мокроты, сядьте на стул, сделайте два глубоких вздоха. На третий раз задержите воздух в легких, а после – резко выдохните.

Глубокое дыхание раздражает кашлевые рецепторы. Поэтому приложите баночку к нижней губе и тщательно откашляйтесь. Повторите процедуру несколько раз, пока в емкости не окажется 3-5 мл мокроты. Во время кашля примите наиболее удобную позу (наклонитесь вперед, лягте на бок, присядьте на корточки).

Если не удается откашлять достаточное количество секрета, можно сделать теплые ингаляции небулайзером. При этом заправляйте резервуар чистой кипяченой водой или физраствором.

Дети и лежачие больные не могут сдать анализ классическим способом. В этом случае помощник проводит тампоном в зоне корня их языка, вызывая кашлевой рефлекс. Влажным от мокроты ватным шариком он проводит по специальным стеклам. А после высушивания – направляет их в лабораторию для исследования.

Врачи назначают анализ на атипичные клетки при подозрении на злокачественную опухоль в органах дыхательной системы. Пациенты сдают мокроту непосредственно в лаборатории, чтобы специалист как можно быстрее приступил к исследованию. Помните, через 2 часа после откашливания клеточные элементы слизи будут полностью разрушены микробной флорой.

Анализ на бактериологическое исследование назначают до приема антибиотиков. Мокроту помещают в культурную среду и создают благоприятные условия для роста бактерий. Через несколько дней врачи приступают к изучению колоний, определению возбудителя, его чувствительности к лекарственному препарату.

Анализ на туберкулез назначают при:

• субфебрильной лихорадке, не поддающейся лечению;
• затяжном кашле (более двух недель);
• затемнении легких на рентгенограмме;
• слабости днем, повышенном потоотделении ночью.

Больной сдает мокроту три раза (утром, вечером, утром следующего дня). Мазки осматривают под микроскопом для выявления микобактерий туберкулеза, оставляют в культурной среде на 2-2,5 месяца. Все это время проводится лечение больного. Но после результатов анализа фтизиатр может скорректировать терапию, подобрать наиболее эффективный лекарственный препарат.

Эта диагностическая процедура проводится для исследования дыхательных путей при подозрении на пневмонию, туберкулез, абсцессах в легких. С ее помощью можно взять анализ мокроты без примесей слюны и слизи из носовых пазух.

Исследование выполняется под местным или общим наркозом. В ходе процедуры бронхоскоп вводится в легкие через ротовую полость. Под контролем изображения с видеокамеры врач проводит забор плохо отделяемой слизи.

Из-за травматичности метода он противопоказан во время острой фазы болезни, а также для людей с легочной и сердечной недостаточностью.

источник

Туберкулёз — специфическая инфекция, его очаг может находиться в тканях человека годами, а после чего распространиться в течение нескольких месяцев. Это хроническое заболевание, оптимальные схемы лечения которого сложно подобрать. Одна из причин этого — запоздавшая диагностика, когда микобактерии, находясь в организме человека, уже адаптировались ко многим препаратам.

Какие современные методы постановки диагноза существуют? ПЦР диагностика — что это такое? Как проводится это исследование? В каких случаях туберкулёз диагностируется этим методом и в чём его суть?

Это один из самых современных методов диагностики не только заболеваний, но и обнаружения биологического материала. ПЦР диагностика была изобретена относительно недавно. Около 30 лет назад в 1983 году американский биохимик Кэри Бэнкс Муллис предложил сложную схему восстановления биологического материала микроорганизмов по одному краткому сегменту. Благодаря своему открытию учёный был удостоен наивысшей награды — Нобелевской премии.

Что это такое — ПЦР диагностика инфекций? Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это диагностика выявления вирусных заболеваний, основанная на методах генной инженерии. Она широко применяется в медицинской микробиологии, иммунологии и вирусологии. Метод универсальный и помогает поставить диагноз при малом количестве материала. Выявить инфекцию можно буквально в первые часы заражения ею, задолго до того, как проявятся первые симптомы заболевания.

Суть метода заключается в получении из материала от больного человека не самого возбудителя, а фрагментов генома (частиц ДНК), его биосинтезе с последующим определением к какому классу микроорганизмов принадлежит полученный генетический материал с помощью молекулярно-генетических методов.

Несмотря на то что это сложный процесс, он занимает намного меньше времени, чем многие биологические способы обнаружения возбудителей инфекций. В течение всего нескольких часов с помощью ПЦР удаётся обнаружить микроорганизм. Для этого нет необходимости выделять его из среды (крови, спинномозговой жидкости, мокроты) и долго выращивать на искусственных питательных средах. Достаточно чтобы в исследуемом материале присутствовал небольшой фрагмент нити ДНК возбудителя инфекции.

В основе реакции лежит возможность в искусственных условиях (в пробирке) создать синтез молекул нуклеиновых кислот возбудителя инфекции.

Что необходимо для проведения ПЦР?

1. Праймеры — участки ДНК, с которых и начинается биосинтез или создание.
2. Нуклеотиды или сложные соединения, которые являются основой молекулы ДНК либо РНК.
3. Полимеразная цепная реакция невозможна без присутствия полимеразы, которая представляет собой фермент ускоряющий ход ПЦР.

Как проводится молекулярная диагностика методом ПЦР? Процедура несложная и занимает короткий промежуток времени с учётом сбора материала.

1. Перед началом исследования берут необходимый биологический материал — это промывные воды бронхов, кровь, желудочное содержимое, мокрота. Тип биологического материала зависит от предполагаемого возбудителя.
2. Денатурация или разрушение первичной структуры ДНК, которая состоит из двух цепочек. Суть этого этапа — разъединить две цепи под воздействием высокой температуры (максимальная — 98 ºC, которая действует не более двух минут).
3. На следующей стадии ПЦР, под названием — отжиг, температуру снижают на несколько градусов, чтобы праймер связался с нитью ДНК.
4. Элонгация, в процессе которой происходит непосредственно синтез нужных молекул.

В результате всего 25–30 таких циклов получают нужное количество копий ДНК микроорганизмов, которые легко распознать.

Нет возможности абсолютно всем людям с подозрением на туберкулёз проводить ПЦР, так как метод требует наличия дорогостоящего оборудования. Не все государственные поликлиники могут себе позволить купить его. Кроме этого, так сложилось, что привычные методы диагностики инфекции в большинстве случаев тоже себя оправдывают.

• опрос пациента, сбор анамнеза;
• полноценный осмотр человека;
• исследование с помощью туберкулиновой пробы Манту;
• рентгенография или флюорография;
• компьютерная диагностика при необходимости;
• микробиологические методы исследования: микроскопия мазка и бактериологическое исследование мокроты.

ПЦР на туберкулёз проводится в особых случаях, когда сложно поставить диагноз или нет возможности провести другие инструментальные методы.

Несмотря на изобилие способов диагностики заболеваемость туберкулёзом продолжает расти. В настоящее время отмечается не только её рост, но и другие особенности:

• болезнь часто протекает в тяжёлой форме;
• повышается количество летальных случаев;
• всё чаще диагностируются устойчивые к современным химиопрепаратам формы заболевания.

Нежелание самих людей ежегодно проходить обычные профосмотры, отказ от вакцинации приводит к распространению туберкулёза. В таких условиях нужны быстрые, информативные и эффективные методы исследования, которые должны быть доступны для детей и взрослых. Все вышеперечисленные методы диагностики во многом уступают ПЦР.

Это исследование хоть и новое, но хорошо себя зарекомендовало, особенно в спорных случаях, когда диагноз поставить невозможно по ряду причин.

Благодаря ПЦР намного легче обнаружить в исследуемом материале ДНК возбудителя туберкулёза.

Преимущества ПЦР диагностики в следующем.

1. Это быстрый анализ. По небольшому фрагменту молекулы ДНК можно установить диагноз всего за несколько часов (около пяти), что успешно используется в экстренных ситуациях, когда, например, перед операцией нужно установить не болен ли человек туберкулёзом.
2. Анализ ПЦР допускается в случае, когда другие методы недоступны или запрещены (для обнаружения туберкулёза лёгких иногда приходится сделать несколько рентгенографических снимков, что составит большую дозу облучения).
3. С помощью ПЦР проводится исследование любой биологической среды на присутствие в ней возбудителя. К примеру, можно провести исследование спинномозговой жидкости, если есть подозрение на туберкулёзный менингит.
4. Разрешена ПЦР диагностика инфекционных заболеваний в детском возрасте, так как метод безопасен.
5. Позволяет выявить возбудителя на любой стадии развития болезни.
6. Высокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить микобактерии туберкулёза, даже если в биологическом материале всего несколько микроорганизмов.
7. Хорошо его проводить для диагностики рецидива заболевания.

После всего прочитанного ПЦР кажется практически идеальным методом диагностики, который должны делать всем с подозрением на туберкулёз. Но и здесь есть свои минусы, их необходимо учитывать.

В наше время такая диагностика скорее редкость, чем закономерность. И для этого есть основания.

1. Это дорогой метод исследования. Во многих поликлиниках оборудование для проведения ПЦР отсутствует из-за высокой его стоимости, но в платных лабораториях анализ всё-таки можно сделать.
2. Сразу после проведённого лечения мёртвые микобактерии или живые в незначительном количестве могут ещё присутствовать в организме человека (при проведении ПЦР диагностики результат будет положительным), поэтому в это время метод будет недостоверным, проводить его нет смысла.
3. Мутации микобактерий приводят к неэффективности ПЦР — не может синтезироваться нормальная последовательность нити ДНК.
4. Нужно правильно выбирать среду для исследования, кровь берут только при подозрении на её заражение (сепсис), нет необходимости брать мокроту если под вопросом стоит туберкулёз органов нервной системы. В таком случае ПЦР не сможет обнаружить возбудителя и диагностика будет неинформативной.

ПЦР диагностика туберкулёза проводится чаще всего в спорных случаях. Когда врачи направляют на это исследование?

1. Если сложно поставить диагноз обычными доступными методами, но был контакт с больным туберкулёзом.
2. В случае, когда человека невозможно доставить на исследование в поликлинику для прохождения рутинных привычных исследований на туберкулёз, его легче обследовать с помощью ПЦР, так как мокроту для исследования можно доставить в баночке, а диагноз подтверждается в течение нескольких часов.
3. Если человеку предстоит экстренная операция и нужно срочно выяснить болен ли он туберкулёзом.
4. При необходимости беременную женщину тоже лучше обследовать на туберкулёз с помощью ПЦР, так как метод безопасен.
5. На платной основе диагностику может пройти каждый, у кого туберкулёз не был подтверждён с помощью бактериологических методов и рентгеноскопии. Такое бывает, когда очаг в лёгких незаметен на прямом снимке, а человек при сдаче мокроты на исследование не смог соблюсти рекомендации по правильному забору материала. При этом человека беспокоят все симптомы, характерные для туберкулёза лёгких.
6. Когда есть сомнения в результатах пробы Манту.
7. Предпочтительнее делать ПЦР диагностику туберкулёза у детей. Процедура безопасна, не создаёт дополнительную лучевую нагрузку, эффективна в отношении обнаружения сложных для диагностики форм заболевания.

Своевременная диагностика туберкулёза — это залог правильно назначенного лечения и снижения распространения заболевания. Часто знакомые методы выявления болезни не всегда эффективны. Поэтому ПЦР на сегодня является одним из самых достоверных и безопасных способов обнаружения инфекции на ранних этапах её развития.

источник

Для выявления палочки Коха в организме человека, используют разные диагностические методы. Благодаря ним патологию можно обнаружить даже на начальном этапе, что увеличивает шансы больного на выздоровление. Анализ мокроты на туберкулез – это методика, которая наиболее ценится, так является достаточно эффективной. Что она собой представляет и сколько стоит такой анализ?

ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Данный способ эффективен по отношению к инфекционным болезням. Чтобы установить четкий диагноз не нужно собирать большое количество биоматериала и ждать много времени, как при бак-посеве мокроты.

В основе методики лежит получение ДНК частиц микроорганизма. Далее молекулярно-генетическое исследование определит, к какому типу микроорганизмов стоит отнести имеющийся материал. В пробирочных условиях за несколько часов специалист синтезирует молекулы бактерий и делает соответствующие выводы.

Анализ мокроты на микобактерии туберкулеза эффективен тогда, когда палочка Коха поразила органы дыхания. В таком случае без труда можно выявить болезнь, даже в первые часы инфицирования.

Но, анализ мокроты не покажет достоверного результата, если присутствует туберкулез:

• костей;
• головного, спинного мозга;
• нервной системы;
• суставов и пр.

Определить вид заболевания сможет фтизиатр, учитывая присутствующую симптоматику и опираясь на полученные результаты общих и иных анализов.

Также нецелесообразен такой метод исследования в том случае, когда нужно провести контрольный анализ после терапевтического лечения заболевания. Результат будет положительным, так как в организме в любом случае еще имеются живые или мертвые МБК. Тут лучше отдать предпочтение другой диагностической процедуре.

Как таковых противопоказаний для исследования мокроты на туберкулез при помощи ПЦР нет. Есть ограничения. Как уже говорилось выше, нет надобности в его проведении после лечения туберкулеза. Полученные результаты не принесут пользы. Тут желательно прибегнуть к иной диагностике.

Кроме этого, нет никаких иных препятствия для проведения этой диагностики. Исследовать мокроту можно в любой возрастной категории и при любых сопутствующих заболеваниях. Даже если нет обильного выхода мокроты, анализ можно сделать путем забора слизи с помощью бронхоскопии.

У рассматриваемого метода масса плюсов, к ним относится:

1. Высокая специфичность и чувствительность. Выявляется только возбудитель туберкулеза. Ложного ответа быть не может, если учтены все нюансы проведения процедуры. Микобактерии обнаруживаются даже тогда, когда их минимальное количество. Даже если в собранном материале 10 патологических клеток, инфекция будет выявлена.
2. Быстрота получения ответа. Сколько делается анализ? Уже через 3-5 часов можно получить результат. Тут не нужно делать посев мокроты на туберкулез, и это сужает сроки.
3. Выявить можно как скрытую инфекцию, так и ту, которая находится в острой форме.
4. Нет абсолютных противопоказаний. Это дает возможность проводить процедуру всем без исключения (даже маленьким детям) и особенно тогда, когда другие методы неразрешены.
5. При помощи ПЦР-диагностики изучается различный биоматериал (урина, кал, кровь, слюна, спинномозговая жидкость и др.).
6. Метод выявляет туберкулез и на ранних стадиях, в первые часы после заражения.

к содержанию ↑

Помимо положительных сторон, есть и отрицательные. Это:

1. Анализ на ПЦР – дорогое «удовольствие». Кроме этого, оборудование, необходимое для его проведения имеется не в каждом медицинском центре. В поликлиниках оно присутствует редко, так как его стоимость также велика. Если говорить о частных клиниках, то да, найти такой вид диагностики можно. Позволить его себе, к сожалению, может не каждый.
2. Показывает ложноположительный результат у тех людей, которые недавно прошли курс противотуберкулезного лечения.
3. Если МБК мутировали, то метод может также дать ложные результаты.
4. Если материал собран неправильно, или специалист, который проводит исследование, имеет недостаточный квалификационный уровень, то также возможен сбой. В некоторых случаях повторять процедуру придется несколько раз и каждый раз оплата повторяется.

к содержанию ↑

Чтобы материал был качественным, его нужно собрать правильно и подготовиться к этому как следует.

Существуют определенные правила сбора мокроты на туберкулез. Алгоритм действий заключается в следующем:

1. Еще накануне, вечером человеку нужно выпить отхаркивающее средство (если мокрота плохо отходит). Если даже это не помогло, следует провести ингаляцию на основе лекарственного разжижающего и отхаркивающего препарата. При отсутствии мокроты пациента нацеливают на то, что будет производиться бронхоскопия. Именно во время этой процедуры и берется материал для исследования.
2. Заранее приобрести специальную емкость. Она стерильная и герметичная, поэтому ничего лишнего туда помещать нельзя, также как и открывать заранее.
3. Помещение, где будет собираться мокрота должно хорошо вентилироваться. Нужно открыть окна, двери, включить вытяжку. Еще один неплохой вариант – выйти на свежий воздух (например, на балкон или во двор).
4. Непосредственно перед процедурой нужно всех предупредить, чтобы никто не входил в комнату, где будет все происходить. Никаких лишних микрочастиц в биоматериале быть не должно – это важно.
5. Принимать пищу до сбора не рекомендуется.
6. Рот и глотка полощутся.
7. Слюна выплевывается. Ее в емкость должно попасть минимальное количество.
8. Путем откашливания человек выводит мокроту наружу и сплевывает ее в подготовленный контейнер. После окончания процедуры нужно плотно закрыть крышку и отвести образец в лабораторию.

Как правильно собрать мокроту должен рассказать врач. Если больной не решается сделать это самостоятельно, то на помощь приходят медработники. Во время манипуляции они надевают специальную защитную маску. Собирать мокроту будут в специальном кабинете, куда нет хода посторонним. Если прийти в клинику больной не может, то специалист приезжает к нему на дом и помогает осуществить сбор слизи.

Если делается бронхоскопия, то больному вводят в трахею прибор – бронхоскоп. Именно с его помощью и производится забор материала.

Для достоверности целесообразно сдать анализ трижды, а именно:

• в утренние часы натощак;
• после первого раза через 4-5 часов;
• через 24 часа после первого исследования и тоже до приема пищи.

к содержанию ↑

Сдать анализ мокроты на туберкулез – это только часть работы. Основное впереди. Многое зависит от того, как подготовлен специалист.

Ход исследования следующий:

1. Специалист приступает к разрушению первичной структуры ДНК (денатурации). Тут имеется две цепочки. При высокой температуре они разъединяются.
2. На следующем этапе производится снижение температуры (отжиг). Это необходимо для связи нити ДНК с праймером.
3. Третий этап – элонгация. Тут синтезируются нужные молекулы.

к содержанию ↑

Микобактерии туберкулеза в мокроте методом ПЦР могут быть обнаружены или же нет. Положительный результат основан тем, что в биоматериале имеется ДНК палочки Коха. Это говорит о том, что человек заражен. При отрицательном – 98% того, что обследуемый не является инфицированным.

По показателям можно судить о том:

• в какой фазе патология (латентной или активной);
• насколько организм поражен;
• эффективно ли выбранное лечение в конкретном случае.

Имейте в виду, что ничто не досконально. Поэтому и тут может быть ложноположительный или ложноотрицательный результат. Чтобы убедиться в его правильности, рекомендованы иные диагностические процедуры или же прохождение ПЦР дважды (трижды).

Сдать мокроту на ПЦР можно в разных клиниках. Приведем примеры нескольких популярных московских центров с ценовой политикой.

Кроме вышеуказанных адресов имеются и другие. Узнать о месторасположении всех лабораторий можно на их сайте. Из приведенных примеров видно, что стоимость анализа велика, но если учитывать его результативность, то это того стоит.

ПЦР-диагностика – это один из эффективных диагностических методов, активно используемых в современной медицине. Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза может осуществляться как самостоятельно в домашних условиях, так и при помощи специалиста. Если мокрота не отходит, то делают бронхоскопию. Важна предварительная подготовка. Правильно сдать биоматериал – это уже полдела. Мокрота при туберкулезе будет иметь в себе микобактерии, обнаружить которые при ПЦР не составит труда, даже если их там небольшое количество. Огромный плюс данного способа – это выявление заболевания в первые часы после заражения. Использовать в диагностических целях можно как у взрослых, так и у детей.

Даже внушительная сумма не может остановить человека получить достоверную информацию касательно здоровья близкого человека или его собственного.

источник