Методы окраски мазков мокроты

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Предметные и покровные стекла.
2. Шпатели и иглы.
3. Смесь Никифорова.
4. Газовая или спиртовая горелка.
5. Пастеровская пипетка с резиновым баллончиком.
6. Водяная баня с мостиком.
7. Иммерсионное масло.
8. Микроскоп.
9. Фильтровальная бумага.
10. Пинцеты Корне.
11. Бумажки Синева.
12. Основной фуксин.
13. 96° этиловый спирт.
14. Фенол.
15. Глицерин.
16. Концентрированная соляная кислота.
17. Метиленовая синька.
18. Дистиллированная вода.
19. Генцианвиолет.
20. Реактив Люголя.
21. Едкий натр (NaOH).
22. Бензин или ксилол.

Для бактериоскопического исследования готовят обычно два препарата: один для обнаружения микобактерий туберкулеза и другой для обнаружения прочих микроорганизмов. Для первого препарата отбирают те же частицы, которые были предназначены для микроскопии, для второго — гнойные частицы. Взятый материал распределяют по предметному стеклу до получения достаточно тонкой ажурной сеточки (материал на первом стекле распределяют на 2/3 его поверхности, на втором — в центре).

Оба препарата фиксируют троекратным проведением над пламенем горелки. Первый препарат окрашивают по Цилю — Нильсену, второй — по Граму.

Для окраски препаратов по Цилю-Нильсену необходимы следующие краски и реактивы:

1. Фуксин Циля: основного фуксина 1 г, глицерина 4 капли, этилового спирта 96° 10 мл, карболовой кислоты (5% раствор фенола) 5 мл, дистиллированной воды 90 мл. К фуксину, помещенному в фарфоровую ступку, прибавляют глицерин, хорошо растирают, постепенно приливают карболовую кислоту, спирт и воду. Фильтруют.
2. 3% раствор солянокислого спирта: 3 мл концентрированной соляной кислоты удельного веса 1,19 и 97 мл 96° этилового спирта.
3. 0,2 % водный раствор метиленовой синьки — 1 г метиленовой синьки растворяют в 500 мл дистиллирован- вой воды.

Техника окраски . На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги (уже и короче предметного стекла), на которую наливают в избытке фуксин Циля. Затем препарат нагревают до появления паров (достаточно троекратно медленно провести его над пламенем горелки), дают ему остыть в течение 3-5 минут, сбрасывают с помощью пинцета бумажку, промывают препарат водой и наливают на него 3% раствор солянокислого спирта для обесцвечивания на 20 секунд. После этого препарат промывают водой и вновь повторяют обесцвечивание. Материал должен быть серовато-розового цвета. Затем на препарат на 20-30 секунд наливают 1: 500 водный раствор метиленовой синьки, краску сливают, препарат промывают водой и высушивают, установив в вертикальном положении на полоску фильтровальной бумаги.

Высушенный препарат рассматривают под микроскопом с иммерсией, с поднятым конденсором.

В препарате микобактерии туберкулеза (рис. 60) красного цвета, нежные, тонкие, слегка изогнутые, иногда зернистые. Иногда обнаруживают микобактерип туберкулеза в виде так называемых осколков (в составе тетрады Эрлиха).

Рис. 60. Микобактерии туберкулеза в мокроте. 1 — окраска по Цилю-Нильсену, 2 — в люминесцентном микроскопе.

Все остальные элементы, в том числе и другие микроорганизмы, окрашены в синий цвет. С целью обнаружения мпкобактерий туберкулеза препарат тщательно исследуют, продвигая от одного продольного края к другому и поперек мазка. Во всех сомнительных случаях рекомендуют обработать препараты жавелевой водой
Результат исследования оформляют, используя следующую формулировку: «микобактерип туберкулеза не обнаружены» или «микобактерип туберкулеза обнаружены», и отмечают приблизительное их количество, например, «единичные в препарате», «единичные в поле зрения» и т. д.

В настоящее время находит все большее распространение люминесцентный способ обнаружения микобактерий туберкулеза в мокроте. Микобактерип туберкулеза имеют золотисто-желтое свечение на черном фоне препарата (рис. 60, 2).

В тех случаях, когда количество микобактерий туберкулеза в мокроте незначительно, для их обнаружения применяют метод обогащения (флотация), который состоит в следующем. В бутылку с нешироким горлышком (емкостью 250 мл) помещают 12-20 мл мокроты, добавляют равный объем 0,5% раствора КОН и встряхивают 5-10 минут. Затем приливают около 10 мл дистиллированной воды и 0,5-1 мл бензина или ксилола, взбалтывают 10-15 минут и доливают дистиллированную воду гак, чтобы горлышко бутылки было заполнено. Смесь оставляют на 1-2 часа до образования на поверхности жидкости сливкообразного слоя. На два предметных стекла, заранее расположенных на мостике над водяной баней, нагретой до 60-65°, каплями, с помощью пастеровской пипетки, 5-6 раз наносят сливкообразный слой, каждый раз после подсыхания предыдущей капли. Мазки окрашивают фуксином Циля на водяной бане (без дополнительной фиксации) в течение 10 минут, промывают водой, 3-4 минуты обесцвечивают 3% раствором солянокислого спирта, вновь обмывают водой, докрашивают 0,2% водным раствором метиленовой синьки, высушивают и исследуют под микроскопом.

Для окраски препаратов по Граму требуются следующие краски и реактивы:

1. Разведенный фуксин Циля (фуксин Пфейффера): 1 часть фуксина Циля + 9 частей дистиллированной воды.
2. Реактив Люголя.
3. 1 % спиртовой раствор генцианвиолета — 1 г генцианвиолета растворяют в 100 мл 96° этилового спирта. Этот раствор краски можно заменить бумажкой, приготовленной по методу Синева (белую фильтровальную бумажку пропитывают 1% спиртовым раствором генцианвиолета, затем высушивают и разрезают на мелкие квадратики соответственно размеру мазка).

Техника окраски . На фиксированный препарат накладывают бумажку Синева и смачивают ее водой (при отсутствии бумажки Синева ее заменяют белой фильтровальной бумажкой, на которую наносят несколько капель 1% спиртового раствора генцианвнолета). Через 1-2 минуты бумажку сбрасывают и на препарат наливают 1-2 капли реактива Люголя. Через 1-2 минуты препарат обесцвечивают 1-2 каплями 96° этилового спирта до появления бледно-серой окраски материала, смывают водой, на 10-15 секунд наносят сруксин Пфейффера, после чего вновь смывают водой и высушивают. В препаратах могут быть обнаружены (рис. 61) стафилококки, стрептококки, диплококки, палочки Пфейффера, спирохеты Плаута-Венсана, актиномицеты и другие микроорганизмы.

Рис. 61. Различные микроорганизмы в мокроте: диплококки (1), палочки Пфейффера (2), стрептококки (3), стафилококки (4), диплобациллы Фридлендера (5), симбиоз Венсана (6), мицелий актиномицет (7).

После проведенного исследования мокроту сжигают или обеззараживают. Последнее достигается следующими способами: а) автоклавированием в течение одного часа при 1,5 атм.; б) кипячением в течение одного часа в 1-2% растворе соды; в) обработкой 5% раствором лизола, карболовой кислоты или смесью, состоящей из равных объемов 5% раствора хлорамина и 5% раствора сернокислого аммония, в течение 12-24 часов. После обеззараживания посуду тщательно моют водой и высушивают.

Металлические предметы (шпатели, иглы) обеззараживают прокаливанием над огнем. Во избежание переноса микроорганизмов из одной порции мокроты в другую шпатель и иглу немедленно прокаливают после отбора соответствующих частиц.

Покровные стекла опускают в небольшую плоскую чашечку с 40% раствором серной кислоты на 12-24 часа. Затем кислоту сливают, а стекла неоднократно промывают водопроводной и дистиллированной водой. Вымытые стекла высушивают и используют для последующих исследований.

источник

Для микроскопического исследования мокроты прежде всего готовят неокрашенные (нативные) препараты мокроты. Полноценность исследования зависит от правильного приготов¬ления и количества просмотренных препаратов. Материал для исследования выбирают из разных мест и переносят металлической иглой на предметное стекло, затем покрывают покровным стеклом так, чтобы мокрота не выступала за его края.
Препараты должны быть тонкими, элементы в них должны располагаться однослойно. Микроскопию проводят сначала при малом увеличении микроскопа (объектив 8Х, окуляр 10Х), просмотр с малым увеличением дает представление о качестве выбранного материала, позволяет обнаружить скопление клеток, кристаллических образований, найти эластические волокна, спирали Куршмана, элементы новообразования. Дальнейшее исследование производится при большом увеличении микроскопа (объектив 40Х, окуляр 10Х).
При этом в мокроте можно обнаружить в большем или меньшем количестве лейкоциты и среди них по более темной окраске и наличию в цитоплазме обильной, четкой, преломляющей свет зернистости различить эозинофилы, наличие которых характерно для бронхиальной астмы и других аллергических состояний. Эритроциты в мокроте имеют вид желтоватых дисков. Единичные эритроциты встречаются в каждом виде мокроты, большое же их количество характерно для кровянистой мокроты и встречается при инфаркте легкого, легочных кровотечениях, застое в малом круге кровообращения.

В мокроте всегда можно обнаружить эпителий. Плоский эпителий попадает в мокроту из полости рта и носоглотки. Большое число клеток говорит о недостаточно хорошем туалете полости рта перед взятием мокроты для исследования.
Обнаружение в мокроте цилиндрического мерцательного эпителия, выстилающего слизистую оболочку гортани, трахеи и бронхов, свидетельствует о поражении соответствующих отделов. Клетки имеют удлиненную форму, расширение с одного конца, где расположено округлое ядро, и мерцательные реснички. Располагаются эти клетки группами, и в свежевыделенной мокроте можно наблюдать активное движение ресничек. При воспалительных процессах (бронхиты, пневмонии, профессиональные заболевания легких) в мокроте встречаются альвеолярные макрофаги — клетки гистиоцитарной системы. Это крупные клетки округлой формы с наличием в цитоплазме включений. Если альвеолярные макрофаги содержат гемосидерин, то их называют сидерофагами или образно «клетками сердечных пороков», так как они могут появиться при застое крови в легких, при декомпенсированных пороках сердца. С достоверностью выявить эти клетки можно реакцией обра¬зования берлинской лазури.

Бактериоскопия.

Этот этап исследования мокроты включает в себя микроскопию препаратов, окрашенных по Цилю—Нильсену, для выявления микобактерий туберкулеза и препаратов, окрашенных по Граму, для изучения микрофлоры мокроты. Иногда для выявления микобактерий туберкулеза прибегают к обогащению методом флотации. Препараты мокроты для бактериоскопического исследования, приготовленные на предметном стекле, высушивают, фиксируют над пламенем горелки и затем окрашивают.

Окраска по Цилю—Нильсену.

Реактивы:
Карболовый фуксин: 1 г основного фуксина растворяют в 10мл этилового спирта, раствор выливают в 100мл 5% раствора карболовой кислоты.
3% солянокислого спирта: 3 мл НСl и 97 мл этилового спирта
Водный 0,5% раствор метиленового синего

На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги и наливают раствор карболового фуксина, затем препарат нагревают над пламенем горелки до появления паров, охлаждают и снова нагревают (3 раза). После остывания препарата сбрасывают фильтровальную бумагу и опускают его в солянокислый спирт для обесцвечивания. Обесцвечивают до полного удаления краски, промывают водой и докрашивают метиленовым синим 20—30с. Снова промывают водой и высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсионной системой.
Туберкулезные микобактерий окрашиваются в красный цвет, все остальные элементы мокроты и бактерии — в синий. Туберкулезные микобактерий имеют вид тонких, слегка изогнутых палочек различной длины с утолщениями на концах или посередине, располагаются группами и поодиночке.
При окраске по Цилю—Нильсену в красный-цвет красятся также кислотоупорные сапрофиты. Дифференциальная диагностика туберкулезных микобактерий и кислотоупорных сапрофитов ведется бактериологическими методами исследования

При исследовании следует избегать:
приготовления толстых мазков мокроты;
фиксации плохо высушенных мазков;
недостаточной фиксации;
обугливания препарата при длительной фиксации.

Если микобактерий выделяется мало, то в обычных мазках их не находят и прибегают к методу накопления.

Метод флотации (всплывание) по Поттенджеру.

Свежевыделенную мокроту (не более 10—-15 мл) помещают в узкогорлую бутылку, приливают двойное количество 0,5% раствора едкой щелочи,-смесь энергично встряхивают 10—15 мин. Затем добавляют 1 мл ксилола (можно бензина, толуола) и около 30 мл дистиллированной воды для разжижения мокроты и снова встряхивают 10— 15 мин. Доливают дистиллированную воду в таком количестве, чтобы уровень жидкости поднялся до горлышка бутылки. Оставляют на 1 — 2 ч для отстаивания. Образовавшийся верхний беловатый слой снимают по каплям пипеткой и наносят на предметные стекла, предварительно подогретые до 60 °С (стекла для подогревания можно положить на металлический подносик и покрыть им водяную баню). Каждую последующую каплю наносят на предыдущую подсушенную. Препарат фиксируют и красят по Цилю—Нильсену.
Наиболее достоверные результаты в обнаружении микобактерий туберкулеза дают бактериологические методы исследования. Другие бактерии, встречающиеся в мокроте, например стрептококки, стафилококки, диплобациллы, палочки Фридлендера и пр., могут быть распознаны только методом посева. Бактериоскопическое исследование препарата в этих случаях имеет только ориентировочное значение. Препараты красят метиленовым синим, фуксином или по Граму.

Окраска по Граму.

Реактивы:
Карболовый раствор генцианового фиолетового: 1 г генцианового фиолетового растворяют в 10 мл 96 % спирта,, раствор выливают в 100 мл 1 — 2 % карболовой кислоты, взбалтывают
Ра¬створ Люголя: 1 г йода, 2 г йодида калия и 300 мл дистиллированной воды; йод и йодид калия расстворяют сначала в 5—8 мл воды, а затем: приливают остальную воду
96 % спирт или сырец
10 % раствор карболового фуксина: 10 мл карболового фуксина и 90 мл дистиллированной воды

На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор генцианового фиолетового. Красят 11/2—2 мин. Бумажку сбрасывают и заливают препарат раствором Люголя на 2 мин, а потом прополаскивают препарат в спирту до сероватого цвета. Промывают водой и окрашивают 10% раствором карболового фуксина 10—15 с. После этого препарат опять промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионным объективом.

источник

При исследовании мазков по Цилю-Нельсону следует избегать:

• 1. приготовления толстых мазков мокроты;
• 2. фиксации плохо высушенных мазков;
• 3. недостаточной фиксации;
• 4. обжигания препарата при длительной фиксации.

Эта методика должна выполнятся в условиях клинических лабораторий, начиная с уровня поликлиники, входит в поликлинический и клинический минимум обследования пациента, страдающего кашлем с мокротой (трехкратное микроскопическое исследование мокроты на микобактерии туберкулеза). Бактериоскопия мокроты должна проводится и больным хроническими заболеваниями органов дыхания и мочевыводящих путей, а также работникам неблагоприятных по туберкулезу животноводческих хозяйств. При обнаружении в мазке в одном поле зрения пяти и более микобактерии вероятность получения положительного результата посева материала на питательные среды значительно возрастает. Метод микроскопического исследования кислотоустойчивых мазков с окраской по Цилю-Нильсону позволяет быстро получить результаты, но обладает низкой чувствительностью и специфичностью. Частота выявлений микобактерии у больных туберкулезом при микроскопии мокроты составляет по данным разных авторов от 48 до 78%. При этом сравнение данных микроскопических исследований с данными культуральных исследований показывает, что доля ложноположительных результатов составляет до 6%.

Приготовление растворов для метода по Цилю-Нильсону:

Раствор 1. Насыщенный спиртовый раствор фуксина (3%) — растереть в ступке 0,3 г основного фуксина с 2-3 каплями глицерина, добавить по каплям 10 мл 96 ? этилового спирта. Добиться полного растворения фуксина.

Раствор 2. Рабочий раствор фенола (5% водный раствор) — расплавить 5 г кристаллического фенола на водяной бане или в термостате (температура плавления фенола 41 ? С).

Осторожно! При попадании фенола на кожу вызывает ожоги. Растворить расплавленный фенол в 100 мл воды.

Рабочий раствор 3. Рабочий раствор карболового фуксина — в 90 мл полученного раствора фенола (раствор №2) добавить 10 мл насыщенного раствора фуксина (раствор №1).

Раствор 4. Обесцвечивающий раствор серной кислоты (25%) — к 75 мл дистиллированной воды осторожно долить 25 мл концентрированной серной кислоты, постепенно наслаивая ее по стенкам сосуда, смешать. Содержимое нагреется.

Или: обесцвечивающий раствор соляной кислоты (3%) — к 97 мл 96% этилового спирта осторожно добавить 3 мл концентрированной соляной кислоты.

Всегда медленно добавляйте кислоту в спирт, а не наоборот! Смесь может нагреться.

Раствор 5. 0,3% раствор метиленового синего — растворить 0,3 г хлорида метиленового синего в 100 мл дистиллированной воды.

Переходные материалы и реактивы

Предметные стекла; 25х75 мм; 1,1-1,3 мм толщиной (на 1 год).

Восковые карандаши или алмазные ручки или несмываемые водой фломастеры.

Фильтровальная бумага, фильтры диаметром 15 см №1.

Шариковая ручка черная или синяя.

Петля бактериологическая, нихромовая, 1 мм диаметром.

Спирт этиловый 96%, х.4 (для приготовления спиртового фуксина).

Реактивы для обесцвечивания:

• — серная кислота, 96% х.4, или
• — солянокислый спирт 3%
• — соляная кислота, концентрированная, х.4
• — спирт этиловый, 96%, х.4

Спирт этиловый технический.

Учет результатов микроскопического исследования

Количество КУМ являет очень важным информационным показателем, так как оно характеризует степень эпидемиологической опасности больного и тяжесть заболевания. Поэтому микроскопическое исследования должно быть не только качественным, но и количественным. При использовании объектива 90х или 100х окуляра 7х10 (общее увеличение равно 630х 1000х) используется следующая градация результатов световой иммерсионной микроскопии.

Градация результатов микроскопического исследования

источник

Бактериоскопическое исследование мокроты

КРИСТАЛЛИЧЕСКИЕ ОБРАЗОВАНИЯ МОКРОТЫ

Кристаллы Шарко-Лейдена – блестящие бесцветные ромбы различной величины, напоминающие стрелки компаса. Образуются из распадающихся эозинофилов. Часто свежевыделенная мокрота не содержит кристаллов Шарко-Лейдена, они образуются в ней через 24 часа. Присутствие этих кристаллов в мокроте характерно для бронхиальной астмы, встречается также при глистных поражениях легких.

Кристаллы гематоидинаимеют вид ромбов или иголок золотисто-желтого цвета. Являются продуктом распада гемоглобина. Образуются в глубине гематом, в некротизированной ткани. В препаратах мокроты располагаются на фоне детрита, эластических волокон.

Кристаллы холестерина — бесцветные четырехугольные пластинки с обломанным углом, образуются при распаде жироперерожденных клеток, задержке мокроты в полостях. Встречаются при кавернозном туберкулезе, опухолях и абсцессах легких.

Для исследования морфологии клеточных элементов мокроты используют обычные гематологические методы окраски – по Романовскому, Паппенгейму и др. В окрашенных препаратах дифференцируются нейтрофилы, эозинофилы, лимфоциты, базофилы, альвеолярные макрофаги, эпителиальные клетки, клетки злокачественных опухолей.

Этот этап исследования мокроты в клинико-диагностических лабораториях общей лечебной сети включает в себя микроскопию препаратов, окрашенных:

— по Цилю-Нильсену для выявления микобактерий туберкулеза (кислотоустойчивых микобактерий, КУМ);

— по Грамму для изучения микрофлоры мокроты (выявления стрептококков, стафилококков, пневмококков и др.). Бактериоскопическое исследование окрашенных по Грамму препаратов имеет ориентировочное значение. Правильность выявления этих бактерий должна подтверждаться бактериологическим исследованием (посевом).

Бактериоскопическое исследование мокроты необходимо проводить в соответствии с правилами, изложенными в приложении №10 к приказу Минздрава России от 21.03.2003г. №109. Сбор мокроты для анализа на кислотоустойчивые микобактерии (КУМ) изложен в общих правилах сбора мокроты.

Процедура приготовления мазков для бактериоскопического исследования начинается с подготовки предметных стекол. Необходимо использовать только новые стекла ГОСТ 9284-75 , отмытые и обезжиренные в спирте или смеси Никифорова (96% этиловый спирт + эфир в соотношении 1:1), без царапин и сколов. Новые предметные стекла кипятят 15 минут в 1% растворе питьевой соды, промывают в 1% растворе соляной кислоты, а затем в проточной воде и протирают насухо. Для обезжиривания вымытые и высушенные стекла помещают в герметически закрытые емкости со смесью Никифорова или с 96% этиловым спиртом не менее чем на 1 сутки. Непосредственно перед приготовлением мазков стекла повторно протираются насухо.

Техника приготовления мазков из мокроты изложена выше.

При приготовлении мазка необходимо добиваться правильной его толщины. Если мазок слишком тонкий и содержит мало материала, при микроскопическом исследовании можно получить ложноотрицательный результат. Если мазок слишком толстый, это затрудняет его фиксацию, материал недостаточно плотно прикрепляется к стеклу и может быть частично или полностью удален при окраске. Кроме того, толстый мазок плохо просматривается при микроскопическом исследовании. Через правильно приготовленный неокрашенный мазок можно читать газетный шрифт, расположенный позади стекла на расстоянии 5-10см.

Фиксация мазков.Приготовленные мазки помещают на 15-30 минут на лотки (подносы), выстланные фильтровальной бумагой, и высушивают при комнатной температуре в вытяжном шкафу или при его отсутствии — на столе, в специально отведенном месте. Ни в коем случае не допускается фиксация сырых мазков над пламенем горелки. Стекла с высохшими мазками пинцетом или специальными щипцами берут за конец, на который нанесена маркировка, и трижды медленно проводят через верхнюю треть пламени спиртовки или газовой горелки до исчезновения признаков запотевания стекла. Общая продолжительность пребывания мазка в пламени не должна превышать 3-5 секунд. Затем стекла помещают на специальную подставку («рельсы») для окрашивания.

В плане охраны труда оптимальным является метод Хайна, согласно которому предметные стекла с мазками раскладывают на жестяные или эмалированные подносы и помещают в сушильный шкаф, где сначала высушивают при 37°C, а затем температуру повышают до 105°C и через 10 минут шкаф выключают. При таком методе достигается надежное прикрепление материала к стеклу и гибель микобактерий, как находящихся в материале мазка, так и случайно попавших на поднос. Фиксирующая температура не должна превышать 105°С, чтобы не изменить свойства микобактерий.

Высушенные и фиксированные мазки должны сразу же окрашиваться. Нефиксированные мазки ни в коем случае не должны оставляться открытыми на ночь, так как это увеличивает опасность распространения инфекции и возможность переноса ее насекомыми. Фильтровальная бумага, которой был выстлан лоток (поднос), по окончании фиксации каждой серии мазков подлежит обязательному сжиганию или автоклавированию, а лоток обжигается спиртом. Лотки ежедневно выстилаются чистой бумагой.

Дата добавления: 2014-11-29 ; Просмотров: 2527 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Исследование мокроты предусматривает определение физи­ческих свойств мокроты, ее микроскопическое исследование в нативном мазке и бактериологическое исследование в окрашен­ных препаратах.

Мокроту, получаемую при откашливании утром до приема пи­щи, собирают в чистую сухую склянку. Перед исследованием боль­ной должен почистить зубы и тщательно прополоскать рот водой.

Мокроту помещают в чашку Петри, рассматривают на светлом и темном фоне, описывают ее свойства. Количество мокроты за сутки при различных патологических процессах может быть раз­лично: так например, при бронхите — скудное (5-10 мл), при абсцессе легкого, бронхоэктазах — большое количество (до 200—300 мл).

Деление на слои наблюдается в случаях опорожнения боль­ших полостей в легком, например, абсцесса легкого. В этом случае мокрота образует 3 слоя: нижний слой состоит из детри­та, гноя, верхний слой — жидкий, на поверхности его иногда имеется третий — пенистый слой. Такую мокроту называют трехслойной.

Характер: характер мокроты определяет содержание слизи, гноя, крови, серозной жидкости, фибрина. Характер ее может быть слизистый, слизисто-гиойный, слизисто-гнойно-кровянистый и т.п.

Цвет: зависит от характера мокроты, от выдыхаемых частиц, которые могут окрашивать мокроту. Так например, желтоватый, зеленоватый цвет зависит от наличия гноя, «ржавая» мокрота -от распада эритроцитов, встречается при крупозной пневмонии. Прожилки крови в мокроте или красная мокрота может быть при примеси крови (туберкулез, бронхоэктазы). Серый и черный цвет придает мокроте уголь.

Консистенция: зависит от состава мокроты, жидкая — в ос­новном от наличия серозной жидкости, клейкая — при наличии слизи, вязкая — фибрина.

Запах: свежевыделенная мокрота обычно без запаха. Непри­ятный запах свежевыделенной мокроты обычно появляется при абсцессе легкого, при гангрене легкого — гнилостный.

Нативные препараты готовят, выбирая материал из разных мecт мокроты, берут также для исследования все частицы, выде­ляющиеся окраской, формой, плотностью.

Отбор материала производят металлическими палочками, по­мещают его на предметное стекло и покрывают покровным. Мате­риал не должен выходить за покровное стекло.

Лейкоциты: всегда содержатся в мокроте, количество их зависит от характера мокроты.

Эозинофилы: распознаются в нативном препарате по более темной окраске и наличию в цитоплазме четкой, одинаковой, пре­ломляющей свет зернистости. Часто располагаются в виде больших скоплений. Эозинофилы встречаются при бронхиальной астме, других аллергических состояниях, гельминтозе, эхинококке лег­кого, новообразованиях, эозинофильном инфильтрате.

Эритроциты: имеют вид дисков желтого цвета. Единичные эритроциты могут встречаться в любой мокроте, в большом коли­честве — в мокроте, содержащей примесь крови: новообразовани­ях легкого, туберкулезе, инфаркте легкого.

Клетки плоского эпителия: попадают в мокроту из полости рта, носоглотки, большого диагностического значения не тлеют.

Цилиндрический мерцательный эпителий: выстилает слизистую оболочку гортани, трахеи, бронхов. В большом количестве обнаруживается при острых катарах верхних дыхательных путей, бронхитах, бронхиальной астме, новообразованиях легкого, пневмосклерозе и др.

Альвеолярные макрофаги: большие клетки различной величи­ны, чаще круглой формы, с наличием в цитоплазме включений черно-бурого цвета. Встречаются чаще в слизистой мокроте с небольшим количеством гноя. Обнаруживаются при различных па­тологических процессах: пневмонии, бронхитах, профессиональ­ных заболеваниях легких и др. Альвеолярные макрофаги, содер­жащие гемосидерин, старое название — «клетки сердечных поро­ков», имеют в цитоплазме золотисто-желтые включения. Для их выявления применяют реакцию на берлинскую лазурь. Ход реакции: кусочек мокроты помещают на предметное стекло, прибавляют 2 капли 5% раствора соляной КИОЛОТЫ и 1-2 капли 5% раствора желтой кровяной соли. Перемешивают стеклянной палочной и по-крывают покровным стеклом. Гемосидерин, лежащий внутриклеточно, окрашивается в голубой или синий цвет. Эти клетки обнару­живаются в мокроте при застойных явлениях в легких, инфарктах легкого.

Жирное перерождение клетки (липофаги, жировые шары): чаще округлые, цитоплазма их заполнена жиром. При прибавлении к препарату судана Ш капли окрашиваются в оранжевый цвет. Группы таких клеток встречаются при новообразованиях легкого, актиномикозе, туберкулезе и др.

Эластические волокна: в мокроте имеют вид извзитых блес­тящих волокон. Как правило располагаются на фоне лейкоцитов и детрита. Наличие их указывает на распад ткани легкого. Обнаруживаются при абсцессе, туберкулезе, новообразованиях легко­го.

Коралловые волокна: Грубые ветвящиеся образования с буг­ристыми утолщениями вследствие отложения на волокнах жирных кислот и мыл. Их обнаруживают в мокроте при кавернозном тубер­кулезе.

Обызвествленные эластические волокна — грубые, пропитанные солями извести палочковидные образования. Обнаруживают при распаде петрифицированного очага, абсцессе легкого, ново­образованиях, Элемента распада петрифицированнго очага носят название тетрады Эрлиха: I) обызвествленные эластические во­локна; 2)аморфные соли извести; 3) кристаллы холестерина; 4) микобактерии туберкулеза.

Спирали Куршмана_- уплотнены, закрученные в спираль слизевые образования. Центральная часть резко преломляет свет и выглядит спиралью, по периферии свободно лежащая слизь обра­зует мантию. Спирали Куршмана образуются при бронхиальной астме.

Кристаллические образования: кристаллы Шарко-Лейдена, вы­тянутые блестящие ромбы, можно обнаружить в желтоватых кусоч­ках мокроты, содержащих большое количество эозинофилов. Их образование связывают с распадом эозинофилов,

Кристаллы гематоидина: имеют форму ромбов и иголок золо­тистого цвета. Образуются при распаде гемоглобина при крово­излияниях, распаде новообразований. В препарате мокроты видны обычно на фоне детирита, эластических волокон.

Кристаллы холестерина: бесцветные четырехугольники с обло­манными ступенеобразным углом, обнаруживаются при распаде жирно перерожденных клеток, в полостях. Встречаются при туберку­лезе, абсцессе легкого, новообразованиях.

Пробки Дитриха: мелкие желтовато-серые зернышки с непри­ятным запахом, содержатся в гнойной мокроте. Микроскопически представляют собой детрит, бактерии, кристаллы жирных кислот в виде игл и капелек жира. Образуются при застое мокроты в полостях при абсцессе легкого, бронхоэктазах.

Исследование на туберкулезные микобактерии: Препарат готовят из гнойных частиц мокроты, высушивают

на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. Окрашивают по

Методика окрашивания: Реактивы:

2) 2% спиртовой раствор соляной кислоты,

3) водный раствор 0,5% метиленового синего.

1. На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги и наливают раствор карболового фуксина.

2. Препарат нагревают над пламенем горелки до появления паров, охлаждают и снова нагревают (так 3 раза).

3. С остывшего стекла снимают фильтровальную бумагу. Обесцвечивают мазок в солянокислом спирте до полного отхождения краски.

5. Докрашивают препарат метиленовнм синим 20-30 секунд.

6. Промывают водой и высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсионной системой. Туберкулезные микобактерии окрашиваются в красный цвет,

все остальные элементы мокроты и бактерии — в синий. Туберку­лезные микобактерии имеют вид тонких, слегка изогнутых пало­чек с утолщениями на концах или посередине.

При окраске по Цилю-Нильсону в красный цвет красятся также кислотоупорные сапрофиты. Дифференциальная диагностика туберкулезных микробактерий и кислотоупорных сапрофитов ведет­ся методами посева и заражения животных.

Исследование мокроты может проводиться также методом фло­тации. Метод Потенжера: ход исследования:

1. Свежевыделенную мокроту (не более 10-15 мл) помещают в узкогорлую бутылку, приливают двойное количество едкой ще­лочи, смесь энергично встряхивают (10-15 мин).

2. Приливают I мл ксилола (можно бензина, толуола) и около 100 мл дистиллированной вода для разжижения мокроты. Снова встряхивают 10-15 мин.

3. Доливают дистиллированную воду до горлышка бутылки и оставляют стоять на 10-50 мин.

4. Образовавшийся верхний слой (беловатый) снимают по каплям пипеткой и наносят на предметные стекла, предвари­тельно нагретые до 60°. Каждую последующую каплю наносят на подсохшую предыдущую.

5. Препарат фиксируют и красят по Цилю-Нильсону.

Исследование на другие бактерии:

Другие бактерии, встречающиеся в мокроте, например, стрептококки, стафилококки, диплобациллы и др. могут быть распознаны только методом посева. Бактериологическое иссле­дование препарата в этих случаях имеет только ориентировоч­ное значение. Препараты красят метиленовым синим, фуксином или по граму. Окраска по Граму: Реактивы: I) карболовый раствор генцианвиолета,

4) 40% раствор карболового фуксина.

1. На фиксированный препарат кладут полоску фильтроваль­ной бумаги, наливают раствор генцианвиолета, красят 1-2 мин.

2. Бумажку снимают и препарат заливают раствором Люголя на 2 минуты.

3. Раствор Люголя сливают и прополаскивают препарат в спирте до серого цвета.

4. Промывают водой и окрашивают 10-15 секунд раствором фуксина.

Приложение: посуда и оборудование: Препарат промывают водой и высушивают на воздухе. Смотрят с иммерсией.

2. Инструменты для отбора мокроты: металлические палоч­ки с расплющенными концами, препаровальные иглы и др.

7. Дезинфицирующая жидкость.

Абсцесс лег­кого Обильное, гнойная, со зловонным запахом Обрывки ткани легкого. Сплошь лейкоциты, эла­стические волокна, кристаллы жирных кис­лот, гематоидина, хо-лестерша, разнообраз­ная обильная флора

Различное, рисовидные тельца слизисто-гнойная, иногда с примесью кро­ви Микобактерии тубер­кулёза, эластические волокна, различные кристаллы

Различное, слизисто-кровянистое Обрывки ткани. Атипические клетки.

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Как то на паре, один преподаватель сказал, когда лекция заканчивалась — это был конец пары: «Что-то тут концом пахнет». 8334 — | 7954 — или читать все.

193.124.117.139 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)
очень нужно

источник

Слизисто-гнойная, иногда слизисто-гнойно-кровянистая

Лейкоциты — большое количество, эритроциты, обильная флора, макрофаги.

Обильное (утренняя — «полным ртом»)

Лейкоциты — сплошь, кристаллы жирных кислот, гематоидина, холестерина, флора разнообразная, обильная.

Цилиндрический эпителий, кристаллы Шарко-Лейдена, эозинофилы.

Скудное вначале, обильное позже

Клейкая, ржавая вначале, позже слизисто-гнойная

Свёртки фибрина, изменённая кровь

Макрофаги, лейкоциты, эритроциты, кристаллы гематоидина, зёрнышки гемосидерина, пневмококки.

Обильное при прорыве абсцесса в бронх

Гнойная со зловонным запахом,

Сплошь лейкоциты, эластические волокна, кристаллы жирных кислот, гематоидина, холестерина, флора разнообразная, обильная.

Слизисто-гнойная, иногда с примесью крови

Рисовидные тельца («линзы Коха») при наличии каверн

Нахождение микобактерий туберкулёза, эластические волокна и различные кристаллы.

Обрывки ткани в обильной мокроте при распаде опухоли

БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОКРОТЫ.

Это этап исследования мокроты включает микроскопию препаратов, окрашенных по Циль-Нильсену для выявления микобактерий туберкулёза (кислотоустойчивых бактерий, КУБ), препаратов, окрашенных по Граму, для изучения микрофлоры мокроты (стрептококки, стафилококки, пневмококки). В последнем случае бактериоскопическое исследование имеет ориентировочное значение. Правильность выявлений этих бактерий всегда подтверждают посевом.

Техника приготовления окрашенных препаратов.

На край предметного стекла кладутся кусочки из мокроты, растираются другим предметным стеклом до гомогенной массы. Препарат должен занимать не более половины стекла, для удобства при приготовлении, фиксации и окраски. Затем препараты высушивают, фиксируют путём троекратного проведения над пламенем горелки и окрашивают.

Для бактериоскопического исследования готовят обычно два препарата: один для обнаружения микобактерий туберкулёза, другой – для обнаружения прочих микроорганизмов. Для первого препарат отбирают частицы, которые были предназначены для микроскопии, для второго – гнойные частицы.

Первый препарат окрашивают по методу Циль-Нильсену, а второй по Граму.

3. Водный 0,5% р-р метиленовой сини.

1. На препарат кладут квадратик фильтровальной бумаги.

2. Наливают р-р карболового фуксина Циля.

3. Препарат нагревают над пламенем горелки до 3-х кратного отхождения пара.

5. Сбрасывают бумажку и опускают препарат в солянокислый спирт для обесцвечивания.

6. Промывают препарат водой.

7. Докрашивают препарат метиленовым синим в течение 20-30 сек.

8. Промывают водой и высушивают на воздухе.

9. Микроскопируют с иммерсионной системой.

Микобактерии туберкулёза окрашиваются в красный цвет , а все остальные элементы — в синий. Микобактерии имеют вид точек, слегка изогнутых, расположенных группами или поодиночке.

Если микобактерий с мокротой выделяется мало, то в обычных мазках их не находят и прибегают к методу накопления (обогащения).

МЕТОД ОБОГАЩЕНИЯ ПО ПОТТЕНДЖЕРУ.

1. 10-15 мл свежевыделенной мокроты помещают в узкогорлую бутылку.

2. Доливают двойным объёмом 0,5% р-ра NaOH или КОН.

3. Смесь энергично встряхивают 10-15 мин.

4. Добавляют 1 мл летучего вещества (ксилола, толуола, бензола) и 100 мл воды.

5. Снова встряхивают 10-15 мин.

6. Доливают дистиллированной воды до горлышка.

7. Оставляют на один час для отстаивания.

8. Верхний беловатый слой (флотационное кольцо) снимают пипеткой по каплям и наносят на предметные стекла, подогретые на воздушной бане до 60 0 С. Каждую новую каплю наносят на высохшую предыдущую.

10. Красят по Циль-Нильсену.

МЕТОД СЕДИМЕНТАЦИИ МОКРОТЫ.

1. 1 часть мокроты смешивается с 2 частями 10% трёхзамещённого фосфорнокислого натрия ( Na ₁₂ H ₂ О).

2. Смесь ставят в термостат на 1 сутки (можно не ставить).

3. Слить надосадочную жидкость.

4. 10 мл надосадочной жидкости центрифугируют при 2000 об/мин в течение 12 мин.

5. Быстро сливают надосадочную жидкость.

6. Из осадка делают препараты, высушивают при Т 90 0 С в течение 30 мин., затем окрашивают по Цилю-Нильсену.

Метод седиментации предпочтительнее, так как при флотации по Поттенджеру образуется аэрозоль, что увеличивает риск заражения мед.персонала.

3. 1% Карболовый раствор генцианового фиолетового.

1. На фиксированный препарат накладывают полоску фильтровальной бумаги.

2. Наносят несколько капель 1% карболового раствора.

3. Через 1-2 мин бумажку сбрасывают и на препарат наливают 1-2 капли реактива Люголя.

4. Через 1-2 мин препарат обесцвечивают 96 0 этиловым спиртом.

5. Препарат промываю водой и докрашивают фуксином Пфейффера 10-15 сек.

6. Промывают водой и высушивают.

7. Микроскопируют с иммерсионной системой.

Грамположительные бактерии окрашивают в фиолетовый цвет (синий), а грамотрицательные – в красный цвет.

В препаратах, окрашенных по Граму, обнаруживают пневмококки, стрептококки, стафилококки, актиномицеты и другие микроорганизмы.

ОКРАСКА МЕТИЛЕНОВЫМ СИНИМ.

1. На приготовленный препарат наливают краску так, чтобы она покрывала всё стекло.

2. Через 2-3 мин краску смывают водой.

3. Препарат высушивают и микроскопируют.

Окраска метиленовым синим — это ориентировочное ознакомление с клеточным и бактериальным составом мокроты.

ОКРАСКА ПРЕПАРАТА ПО ЛЕЙШМАНУ

ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ АТИЧЕСКИХ КЛЕТОК

Основным свойством клеток злокачественной опухоли является морфологическая и биологическая анаплазия (потеря способности клетки к дифференцированию и нарушение биохимических свойств):

1. Полиморфизм размеров и формы клеток.

2. Особенности структуры ядра (неравномерное распределение хроматина в ядрах, что обуславливает неравномерность окраски этих ядер, изменение цитоплазмы).

3. Особенности цитоплазмы (дистрофические и дегенеративные изменения (включение обломков клеток или целых клеточных образований)).

источник

Микроскопическое исследование нативных и фиксированных окрашенных препаратов мокроты позволяет подробно изучить ее клеточный состав, и известной степени отражающий характер патологического процесса в легких и бронхах, его активность, выявить различные волокнистые и кристаллические образования, также имеющие важное диагностическое значение, и, наконец, ориентировочно оценить состояние микробной флоры дыхательных путей (бактериоскопия).

При микроскопии используют нативные и окрашенные препараты мокроты. Для изучения микробной флоры (бактериоскопии) мазки мокроты обычно окрашивают по Романовскому-Гимзе, по Граму, а для выявления микобактерий туберкулеза но Цилю-Нильсену.

Из клеточных элементов, которые можно обнаружить в мокроте больных пневмонией, диагностическое значение имеют эпителиальные клетки, альвеолярные макрофаги, лейкоциты и эритроциты.

Эпителиальные клетки. Плоский эпителий из полости рта, носоглотки, голосовых складок и надгортанника диагностического значения не имеет, хотя обнаружение большого количества клеток плоского эпителия, как правило, свидетельствует о низком качестве образца мокроты, доставленного в лабораторию и содержащего значительную примесь слюны.

У больных пневмониями мокрота считается пригодной к исследованию, если при микроскопии с малым увеличением количество эпителиальных клеток не превышает 10 в поле зрения. Большее количество эпителиальных клеток указывает на недопустимое преобладание в биологическом образце содержимого ротоглотки.

Альвеолярные макрофаги, которые в незначительном количестве также можно обнаружить в любой мокроте, представляют собой крупные клетки ретикулогистиоцитарного происхождения с эксцентрически расположенным крупным ядром и обильными включениями в цитоплазме. Эти включения могут состоять из поглощенных макрофагами мельчайших частиц пыли (пылевые клетки), лейкоцитов и т.п. Количество альвеолярных макрофагов увеличивается при воспалительных процессах в легочной паренхиме и дыхательных путях, в том числе при пневмониях.

Клетки цилиндрического мерцательного эпителия выстилают слизистую оболочку гортани, трахеи и бронхов. Они имеют вид удлиненных клеток, расширенных с одного конца, где расположено ядро и реснички. Клетки цилиндрического мерцательного эпителия обнаруживаются в любой мокроте, однако их увеличение свидетельствует о повреждении слизистой бронхов и трахеи (острый и хронический бронхит, бронхоэктазы, трахеит, ларингит).

Лейкоциты в небольшом количестве (2-5 в поле зрения) обнаруживаются в любой мокроте. При воспалении ткани легкого или слизистой бронхов и трахеи, особенно при нагноительных процессах (гангрена, абсцесс легкого, бронхоэктазы) их количество значительно увеличивается.

При окраске препаратов мокроты по Романовскому-Гимзе удается дифференцировать отдельные лейкоциты, что имеет иногда важное диагностическое значение. Так, при выраженном воспалении легочной ткани или слизистой бронхов увеличивается как общее число нейтрофильных лейкоцитов, так и количество их дегенеративных форм с фрагментацией ядер и разрушением цитоплазмы.

Увеличение числа дегенеративных форм лейкоцитов является важнейшим признаком активности воспалительного процесса и более тяжелого течения заболевания.

Эритроциты. Единичные эритроциты можно обнаружить практически и любой мокроте. Значительное их увеличение наблюдается при нарушении сосудистой проницаемости у больных пневмониями, при разрушении ткани легкого или бронхов, застое в малом круге кровообращения, инфаркте легкого и т.д. В большом количестве эритроциты в мокроте обнаруживаются при кровохарканье любого генеза.

Эластические волокна. Следует упомянуть также еще об одном элементе мокроты пластических волокнах, которые появляются в мокроте при деструкции легочной ткани (абсцесс легкого, туберкулез, распадающийся рак легкого и др.). Эластические волокна представлены в мокроте в виде тонких двухконтурных, извитых нитей с дихотомическим делением на концах. Появление эластических волокон в мокроте у больных с тяжелым течением пневмонии свидетельствует о возникновении одного из осложнений заболевания — абсцедировании ткани легкого. В ряде случаев при формировании абсцесса легкого эластические волокна в мокроте можно обнаружить даже несколько раньше, чем соответствующие рентгенологические изменения.

Нередко при крупозной пневмонии, туберкулезе, актиномикозе, фибринозном бронхите в препаратах мокроты можно обнаружить тонкие волокна фибрина.

Признаками активного воспалительного процесса в легких являются:

1. характер мокроты (слизисто-гнойная или гнойная);
2. увеличение количества нейтрофилов в мокроте, в том числе их дегенеративных форм;
3. увеличение количества альвеолярных макрофагов (от единичных скоплений из нескольких клеток в поле зрения и больше);

Появление в мокроте эластических волокон свидетельствует о деструкции легочной ткани и формировании абсцесса легкого.

Окончательные выводы о наличии и степени активности воспаления и деструкции легочной ткани формируются только при их сопоставлении с клинической картиной заболевания и результатами других лабораторных и инструментальных методов исследования.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Микроскопия мазков мокроты, окрашенных по Граму, и изучение микробной флоры (бактериоскопия) у части больных пневмонией позволяет ориентировочно установить наиболее вероятного возбудителя легочной инфекции. Этот простой метод экспресс-диагностики возбудителя недостаточно точен и должен использоваться только в комплексе с другими (микробиологическими, иммунологическими) методами исследования мокроты. Иммерсионная микроскопия окрашенных мазков мокроты иногда бывает весьма полезной для экстренного подбора и назначения адекватной антибактериальной терапии. Правда, следует иметь в виду возможность обсеменения бронхиального содержимого микрофлорой верхних дыхательных путей и ротовой полости, особенно при неправильном сборе мокроты.

Поэтому мокроту считают пригодной для дальнейшего исследования (бактериоскопии и микробиологического исследования) только в том случае, если она удовлетворяет следующим условиям:

• при окраске по Грамму в мокроте выявляется большое количество нейтрофилов (более 25 в поле зрения при малом увеличении микроскопа);
• количество эпителиальных клеток, больше характерных для содержимого ротоглотки, не превышает 10;
• в препарате имеется преобладание микроорганизмов одного морфологического типа.

При окраске по Граму в мазке мокроты иногда можно достаточно хорошо идентифицировать грамположительные пневмококки, стрептококки, стафилококки и группу грамотрицательных бактерий — клебсиеллу, палочку Пфейффера, кишечную палочку и др. При этом грамположительные бактерии приобретают синий цвет, а грамотрицательные — красный.

Бактериальные возбудители пневмоний

1. Пневмококки Streptococcus pneumoniae.
2. Стрептококки Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans.
3. Стафилококки: Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus.

1. Клебсиеллы (Klebsiella pneumoniae)
2. Гемофильная палочка (Пфейфера) Haemophilius influenzae
3. Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa)
4. Легионелпа
5. Кишечная палочка (Escherichia coli)