Электрофорез и иммунофиксация сыворотки крови и мочи

Иммунофиксация — это ключевой тест для подтверждения и типирования М-компонента с целью диагностики гаммапатий (миелома, болезнь Вальденстрема, лимфома, амилоидозы и пр.) при помощи антисывороток к тяжелым (G, A, M, D, E) и легким (каппа, лямбда) цепям иммуноглобулинов.

При выявлении аномальных полос на электрофореграмме сывороточных белков, в первую очередь в зонах гамма-глобулинов, а также в зонах альфа- и бета-глобулинов (эти полосы могут быть скрыты за обычными белками соответствующих зон), всегда следует заподозрить наличие моноклональных белков, т.е. гаммапатию. Для идентификации этих аномальных полос применяется методика иммунофиксации. Кроме того, иммунофиксация позволяет выявить моноклональные белки небольшой концентрации и/или скрытые другими обычными белками электрофоретического профиля.

Электрофорез с иммунофиксацией – это простая методика, которая позволяет фиксировать белок in situ после электрофореза путем образования нерастворимого комплекса с антителом к нему.

Результаты. Результат иммунофиксации сыворотки каждого пациента представлен в виде шести дорожек — одна референсная дорожка (ELP) на которой зафиксированы все белки и пяти дорожек обработанных индивидуальными антисыворотками против цепей Ig (G, А, М, каппа, лямбда или другими выбранными антисыворотками). — В первую очередь проводится оценка референсной дорожки на наличие качественных аномалий. Затем анализируются дорожки, обработанные антисыворотками. В случае присутствия в образце моноклональных Ig, выявленные на дорожках с антисыворотками полосы (одна полоса на любой из дорожек тяжелых цепей и одна на дорожка легких цепей) сравниваются с аномальными полосами на референсной дорожке – они должны иметь одинаковую скорость.

Материал для исследования: сыворотка крови или моча

Пробоподготовка: не требуется.

Совместимость с прибором

№ по каталогу

Наименование набора

Кол-во тестов на набор

Белковые фракции с иммунофиксацией ГИДРАГЕЛЬ (HYDRAGEL 1 IF (SM))

Белковые фракции с иммунофиксацией ГИДРАГЕЛЬ (HYDRAGEL 2 IF (SM))

Белковые фракции с иммунофиксацией ГИДРАГЕЛЬ (HYDRAGEL 4 IF (SM) — ACID VIOLET))

Белковые фракции с иммунофиксацией ГИДРАГЕЛЬ (HYDRAGEL 4 IF (SM) – AMIDOBLACK)

Белковые фракции с иммунофиксацией ГИДРАГЕЛЬ (HYDRAGEL 9 IF (SM))

Антисыворотки (обязательны для анализа, различные фасовки и комбинации)

Антисыворотки для иммунофиксации (IF ANTISERA AND FIXATIVE SOLUTION (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig A (ANTI-Ig A 1 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig G (ANTI-Ig G 1 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig M (ANTI-Ig M 1 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-KAPPA (ANTI-KAPPA 1 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-LAMBDA (ANTI-LAMBDA 1 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig DE (ANTI-Ig DE 0,5 mL (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig D (ANTI-Ig D 1 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig E (ANTI-Ig E 1 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ПОЛИВАЛЕНТ (POLYVALENT 8 ml)

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig A (ANTI-Ig A 8 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig G (ANTI-Ig G 8 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-Ig M (ANTI-Ig M 8 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-KAPPA (ANTI-KAPPA 8 ml (SM))

Антисыворотки для иммунофиксации ANTI-LAMBDA (ANTI-LAMBDA 8 ml (SM))

Контрольные материалы

Контрольная сыворотка для электрофореза ИФ (IF CONTROL)

Дополнительные реагенты и расходные материалы (по потребности)

Промывающий раствор для электрофореза ГИДРАЗИС (HYDRASYS WASH SOLUTION)

Обесцвечивающий раствор для электрофореза (DESTAINING SOLUTION)

Аксессуары для иммунофиксации и исследования белка Бен Джонса (для гелей форматом 1 образец на гель)

Аксессуары для иммунофиксации (для гелей форматом 2 или 4 образца на гель)

Аксессуары для иммунофиксации (для гелей форматом 9 образцов на гель)

источник

В плазме человеческой крови находится множество белковых компонентов. Они различны по своему составу, строению и подвижности в определенной среде, проводящей электрический ток. На этом и строится разделение общего белка, который локализуется в плазме, на различные белковые фракции. При проведении электрофореза сыворотки крови выясняют количественное отношение отдельных белковых составляющих и структур. Это необходимо для определения наличия у человека различных патологических явлений, например инфекций или онкологии. Именно электрофорез белков сыворотки крови имеет большое значение при проведении диагностики различных болезней.

Для расщепления белковых фракций применяют электрофорез сыворотки крови, принцип которого основан на разной подвижности белковых компонентов в созданном электрическом поле. Такой метод исследования является более точным и информативным, в отличие от стандартного общего анализа крови. Но при этом электрофорез показывает только количество определённой фракции белка, характер и степень патологического процесса в общей форме. Анализ проведенных исследований позволяет медицинским специалистам выяснить, какое именно соотношение белковых фракций наблюдается в организме человека, и определить специфику патологии, присущую конкретному заболеванию.

Большую часть основной биологической жидкости человека, или крови, составляют белки. В общем количестве их норма находится в пределах 60-80 г/л. Для получения точного анализа проводится электрофорез сыворотки крови на бумаге. Это исследование является самым распространенным способом анализа. Основной средой является особая фильтровальная бумага. Главная ее особенность – высокая гигроскопичность. Такая бумага может поглотить воды больше своего веса в 130-200 раз. В зависимости от применяемого оборудования электрофорез на бумаге длится 4-16 часов. Происходит подразделение белковых структур. Затем полосы бумаги обрабатывают специальными красками для получения анализа. Такая методика является самой распространенной в работе медицинских лабораторий. За счёт воздействия электрического тока белковые фракции, заряженные отрицательно, двигаются в сторону положительно заряженного электрода. Благодаря этому белковые составляющие крови подразделяются на 5 известных фракций:

Альбумины заряжены отрицательно, имеют маленькую, по сравнению с другими фракциями, молекулярную массу. За счет этого скорость их передвижения гораздо выше, чем у остальных фракций, и они дальше всех локализуются от участка старта. Первые три фракции глобулина передвигаются с более низкой скоростью из-за своей массы. Но самая маленькая скорость регистрируется у γ-глобулинов. Эти белки имеют большую массу и крупные, относительно других, размеры. Их заряд почти нейтрален, поэтому данная белковая фракция практически не сдвигается с линии старта.

В настоящее время электрофорез сыворотки крови часто проводимый анализ для постановки точного диагноза болезни. Этот анализ могут назначить как терапевты, так врачи узкого профиля. Показаниями по проведению исследований будут:

различные воспаления;
болезни хронической природы;
патологические процессы в соединительной ткани;
внутреннее кровотечение;
злокачественные новообразования.

Для того чтобы полученные результаты поведенных исследований были верными, не менее чем за 8 часов до сдачи крови необходимо отказаться от приёма еды. Кроме того, необходимо согласовать прием лекарственных средств, если таковые имеются, с лечащим врачом.

Для того чтобы результаты не были по ошибке завышены, необходимо снизить до минимума возможность свертывания крови для определения показателя белковых фракций и общего белка. Электрофорез сыворотки крови проводится аккуратно, поскольку существует вероятность искажения полученных результатов из-за фибриногена. Он может прятать ненормальные белки или быть спутанным с ними.

В течение суток после сдачи пробы будет готов анализ на электрофорез белков сыворотки крови. Норма полученных показателей по категориям у взрослых людей:

Общий белок – 63-82 г/л.
Альбумины – 40-60 % от общего количества фракций.
α₁-глобулины – 2-5 %.
α₂-глобулины – 7-13 %.
β-глобулины – 8-15 %
γ-глобулины – 12-22 %.

Изменение количества любой белковой фракции в большую или меньшую сторону может свидетельствовать о развитии той или иной патологии. Для получения достоверной информации об этом необходим электрофорез белков сыворотки крови. Расшифровка результатов облегчит медицинским специалистам постановку диагноза и выбор лечения.

В самом начале при анализе полученных результатов определяют количество альбумина. Увеличение этой фракции может говорить об обезвоживании. Такое может произойти, если у больного отмечается затяжная рвота или нарушения в пищеварительной системе. Также увеличение альбумина происходит при ожогах большой площади кожного покрова.

Гораздо опаснее, если в организме снижается количество альбуминов, это может говорить о следующих патологиях:

Поражения почек и печени.
Патологии желудочно-кишечного тракта.
Инфекционные процессы.
Нарушения в деятельности сердечно-сосудистой системы.
Кровотечения.
Злокачественные новообразования.
Сепсис.
Ревматизм.

Незначительное уменьшение количества альбуминов может быть также:

У будущих матерей.
При превышении дозы лекарственных препаратов.
При длительной лихорадке.
У заядлых курильщиков.

Уменьшение количества a1-глобулинов регистрируется при недостатке α₁-антитрипсина. Увеличение же отмечают при обострении воспалений в организме, нарушениях в работе печени, при тканевом распаде.

Регистрируют его при сахарном диабете, воспалительных процессах в поджелудочной железе, у новорожденных детей при желтухе, при гепатитах токсического происхождения. Свидетельствует оно и о неправильном, несбалансированном питании.

Происходит при наличии следующих заболеваний:

Воспаления, особенно с присутствием гнойного экссудата (воспаление легких и другие процессы с наличием гноя).
Поражения соединительной ткани (например, ревматизм).
Злокачественные новообразования.
Периоды восстановления после ожогов.
Поражение почек.

Кроме того, такое явление характерно для гемолиза крови в пробирке во время проведения исследования.

Проявляется при гиперлипопротеидемии (увеличении количества липидов в крови), патологиях печени и почек. Можно обнаружить при открытой язве желудка, а также гипотиреозе (нарушение работы щитовидной железы). Снижение фракции регистрируют при гипобеталипопротеинемии (повышение в крови компонента беталипопротеин).

Эта фракция включает в свой состав иммуноглобулины. Поэтому увеличение γ-глобулинов регистрируется при сбоях в иммунитете. Обычно это происходит при различных инфекциях, развитии воспалительного процесса, изменениях ткани и ожоговых поражениях. Рост γ-глобулинов отмечают у больных хронической формой гепатита. Практически такая же картина характерна для цирроза печени. При запущенных случаях данного заболевания количество белковой фракции γ-глобулинов значительно выше показателя альбуминов. При определенных болезнях могут возникать сбои в образовании γ-глобулинов, и происходит развитие измененных протеинов в крови – парапротеинов. Для выяснения характера такого развития производится дополнительное исследование – иммуноэлектрофорез. Такая картина характерна для миеломного заболевания и патологии Вальденстрема.

Увеличение количества γ-глобулинов также присуще следующим патологиям:

красной волчанке;
эндотелиоме;
ревматоидной форме артрита;
остеосаркоме;
хронической форме лимфолейкоза;
кандидомикозу.

Снижение показателя γ-глобулинов подразделяют на 3 вида:

Физиологический (характерен для детей в возрасте от трех до пяти месяцев).
Врожденный (развивается с момента рождения).
Идиопатический (когда причину развития установить не удается).

Вторичное снижение регистрируется при развитии заболеваний, которые вызывают истощение иммунной системы. В последнее время в медицинской практике все чаще проводится анализ на определение количества преальбуминов. Обычно такое исследование проводят больным, находящимся в реанимации.

Уменьшение количества преальбуминов очень важный и точный тест на определение недостаточности белковых структур в организме пациента. При проведении анализа на преальбумины выполняют коррекцию белкового метаболизма у таких пациентов.

Принцип проведения подобного анализа схож с технологией выполнения электрофореза сыворотки крови. Проводят его для более точной постановки диагноза или обнаружения других патологий. Кроме того такой анализ поможет выявить у больного наличие протеинурии.

Электрофорез сыворотки крови и мочи – важные методы в диагностике различных инфекционных заболеваний. Благодаря методике исследования и высокой точности они помогают определить вид патологии. Точный диагноз – верный путь к правильному лечению и полному выздоровлению.

источник

Этот анализ является исследованием, которое позволяет определить их количественные и качественные показатели по тому, как белки распределяются в электрическом поле. Исследование основано на том, что белковые молекулы несут заряды, положительные или отрицательные в зависимости от того, какой кислотностью будет обладать среда, в которой будет проводиться непосредственно электрофорез. Молекулы, которые окажутся положительно заряженными, будут адсорбироваться лучше, нежели чем те, которые несут отрицательный заряд.

Носителями, которые будут применяться для электрофореза, могут быть хроматографическая бумага, агаровый гель, полиакриловой гель, ацетатцеллюлозная бумага или акриловый гель. Значительно реже применяется капиллярный электрофорез.

Во время анализа белки разделяют на 5 или 6 фракций, в зависимости от применяемого метода. Это будут гамма-глобулины, которые делятся на бета-1 и бета-2, альбумины — альфа-1 и альфа-2, а также бета-глобулины.

Имеются установленные нормы белковых фракций, которые должны присутствовать в крови. Отклонение их от показателей является признаком нарушения в организме, что требует проведения обследования для выявления причины.

Фракция	Норма в г/л
Альбумин	35-44
Глобулин альфа-1	1-3
Глобулин альфа-2	5-8
Бета-глобулин	4-10
Гамма-глобулин	5-12

Значения показателей, в зависимости от того какие реактивы применяются в конкретной лаборатории, могут несколько изменяться. Поэтому в бланке результатов исследования в каждом медицинском учреждении обязательно указываются значения нормы, которые приняты в нем. На них будет ориентироваться врач при расшифровке анализа.

Электрофорез белков крови назначают не очень часто, так как сегодня современные лабораторные исследования позволяют провести анализ на определенный белок, что ускоряет процесс диагностики. Абсолютным показанием к электрофорезу является наличие монолокальной гаммапатии. Также иногда анализ может быть показан в таких случаях:

чрезмерно высокая скорость оседания эритроцитов, когда она превышает 50 мм/ч;
значительно повышенный уровень гамма-глобулинов;
скрининговое обследование для контроля эффективности лечения миеломной болезни;
чрезмерно высокий общий белок в крови;
ряд аутоиммунных заболеваний, поражающих печень и почки;
слабость, для которой нет выраженной причины;
развитие патологических переломов костей и постоянные боли в костях;
частые рецидивы инфекционных заболеваний;
нарушения, обнаруженные в прочих анализах, указывающие на то, что у человека могут развиваться анемии, лейкемии, гиперкальциемия или гипоальбуминемия.

При общей диспансеризации и получении медицинских справок для трудоустройства данное исследование крови не осуществляется. Не требуется оно и в процессе подготовки человека к хирургическому вмешательству.

Для получения наиболее точных результатов рекомендуется соблюдение правил подготовки к анализу. Они включают в себя голодную диету в течение 15 часов до того как будет взята кровь, когда пациент может употреблять только чистую не газированную воду. За 90 минут до проведения исследования необходимо полностью исключить нагрузки как эмоциональные, так и физические, и курение в активной или пассивной форме. Чтобы не допустить искажение данных, забор материала не проводят сразу после того, как был осуществлен гемодиализ или проведена процедура, при которой использовались радиоконтрастные составы. Важно также, чтобы за несколько дней до исследования полностью было исключено лечение пенициллином, так как он вызывает расщепление амбулина, что исказит результат.

Фракция	Повышение	Понижение
Амбулин	Злоупотребление алкоголем, период вынашивания ребёнка, дегидрация	Холецистит в острой форме, лейкоз, миелома, саркоидоз, пневмония, остеомиелит, системная красная волчанка, лимфома
Глобулин альфа-1	Цирроз печени, стрессовые состояния, лимфогранулематоз, период вынашивания ребёнка, язва желудка, острое или хроническое воспаление	Гепатит вирусной природы в острой форме
Глобулин альфа-2	Сахарный диабет, остеомиелит, гломерулонефрит в острой форме, стрессовые состояния, системная красная волчанка, узловатый полиартрит, цирроз	Гипертиреоз, гепатит вирусной природы в острой форме, гемолиз интраваскулярный
Бета-глобулин	Сахарный диабет, саркоидоз, ревматоидный артрит, беременность, гломерулонефрит, желтуха подпеченочная, нефротический синдром	Лейкоз, цирроз, склеродермия имеющая системный характер, лимфома, системная красная волчанка
Гамма-глобулин	Цирроз, склеродермия системного характера, ревматоидный артрит, лимфолейкоз в хронической форме, муковисцидоз, синдром Шегрена	Лейкоз, склеродермия, гепатит вирусной природы в острой форме, лимфома, гломерулонефрит

Исказить показатели, кроме неправильной подготовки к проведению анализа, могут 2 фактора: недавно проведенная процедура гемодиализа, из-за которой произошло разрушение эритроцитов в крови, и повышенный уровень билирубина в организме. В любом из этих случаев потребуется пересдача анализа через некоторое время, которое определит врач.

источник

С принципом электрофореза знаком каждый студент, закончивший курс биохимии. Однако с помощью этого метода возможно исследование далеко не каждого параметра: это имеет смысл в случае определения креатинкиназы, лактатдегидрогеназы, гемоглобина и белков сыворотки крови. Таким образом можно исследовать сыворотку, плазму, мочу или ликвор.

Движение молекул в агарозном геле происходит под воздействием электрического поля. Положительно заряженные частицы движутся к катоду, а анионы, соответственно, к аноду. Скорость движения зависит от величины частиц и их заряда. Полученные в результате такого движения полосы можно окрасить, а насыщенность цвета определить методом денситометрии. Таким способом выявляются гипоальбуминемии, белки фазы острого воспаления и парапротеинемии (моноклональные гаммапатии). В других же случаях, например, для альбумина, липопротеинов и креатинкиназы, на практике используются различные иммунологические тесты и вестерн-блоттинг.

С помощью стандартного электрофореза белки можно разделить в зависимости от их радиуса, заряда и структуры. Электрофорез протеинов плазмы проводят в закрытых аппаратах при константных температурах. Однако этим методом затруднительно разделить протеины по определенному признаку, поскольку на их поведение в электрическом поле влияют все три фактора (заряд, размер и молекулярная структура белка). Именно поэтому был разработан другой метод электрофореза с использованием специального реагента — додецилсульфата натрия, SDS (sodium dodecyl sulfate). Это вещество связывается с белками, придавая им отрицательный заряд. Также при этой методике используется меркаптоэтанол, способный расщеплять все дисульфидные мостики. Таким образом заряд протеина больше не играет роли при движении белка в электрическом поле. Полиакриламид представляет собой химически инертный полимер, не несущий заряда. Можно менять концентрацию геля, тем самым регулируя размер пор в нем. Благодаря этому скорость движения белков зависит исключительно от их размера: небольшие молекулы движутся быстрее крупных, что позволяет получить в результате электрофореза видимые зоны с бо́льшей или меньшей плотностью. После окрашивания и фиксации белков на геле яркость (плотность) областей определяют с помощью денситометрических методов (от англ. density — плотность). Полученный результат представляется в виде электрофореграммы, так знакомой нам из учебников биохимии и физиологии. Стоит заметить, что результаты плотности отдельных фракций представлены не в абсолютных цифрах, а в процентах, что всегда следует учитывать при анализе полученных результатов.

Иммунонефелометрия и иммунотурбидиметрия представляют собой спектрометрические методы анализа, используемые для детекции веществ в рамках иммунологических тестов. Эти тесты являются количественными. При использовании соответствующих антител таким способом можно исследовать все существующие белки. Антигены пробы с соответствующими антителами создают трехмерные комплексы, рассеивающие свет с определенной длиной волны. Интенсивность рассеянных волн зависит от величины и количества рассеивающих частиц. Таким образом при фиксации антител на частицы латекса становится возможным улучшить иммунологический тест, увеличив сами комплексы из антигена и антител.

При турбидиметрии фиксируется как свет, отраженный от комплексов, так и тот, что прошел через раствор. При нефелометрии регистрируются только лишь сигналы от рассеянного света. Согласно оптическим законам, концентрация вещества прямо пропорциональна величине полученного сигнала. Однако закон Ламберта-Бера применим к данным методам только в том случае, если концентрации антигенов и антител эквивалентны друг другу. При сильном недостатке или избытке антител не образуется трехмерных комплексов, рассеивающих свет. Это очень важно, поскольку чаще всего лаборатории пользуются стандартными наборами для проведения подобных тестов. Если концентрация анализируемого вещества сильно превышает указанную производителем, тест дает ложноотрицательные результаты. Такие ошибки чаще всего происходят при рецидивах онкологических заболеваний, когда человек меняет место обследования и лечащего врача. На новом месте сотрудник лаборатории и не подозревает, что концентрация того или иного вещества может быть чрезмерно завышена и не фиксироваться тестом. Во избежание таких ситуаций сотрудникам рекомендуется разбавлять пробы, тестируя их при разных концентрациях с целью определения тех случаев, когда необходимо добавить нестандартное, бо́льшее количество антител. Поэтому лечащему врачу важно контролировать результаты лабораторных тестов и относиться к ним скептически, при необходимости даже позвонить сотрудникам лаборатории и попросить их провести тест заново при новых концентрациях.

Иммунофиксацию проводят после электрофореза. При этом методе применяют моновалентные и поливалентные сыворотки. Чаще всего это исследование используют для выявления моноклональных гаммапатий (моноклональные гаммапатии IgM, IgG, IgA) и протеинов Бенса-Джонса (легкие цепи иммуноглобулинов каппа и лямбда). Сыворотку крови и мочу всегда исследуют параллельно. Этот тест является качественным. После электрофореза с применением буфера (pH = 8,6) и качественного анализа пробу фиксируют на агарозном геле, инкубируют с антисыворотками, а также окрашивают. Сперва оценивают препарат сыворотки крови. При наличии в нем преципитатов иммуноглобулинов говорят о парапротеинемии.

Dörner K. Klinische Chemie und Hämatologie: 69 Tabellen;[Taschenlehrbuch]. – Georg Thieme Verlag, 2009.
Renz H. (ed.). Praktische Labordiagnostik: Lehrbuch zur Laboratoriumsmedizin, klinischen Chemie und Hämatologie. – Walter de Gruyter, 2014.

источник

зарегистрируйте свою электронную почту на сайте и получайте дополнительные информационные материалы по аутоиммунной диагностике

где сдать анализ крови на тест анализы спб СПб инвитро Петербург Питер на целиакию аутоиммунные заболевания аутоантитела аутоиммунная диагностика Лапин autoimmun антиядерные лабораторная антинуклеарный фактор антинуклеарные антитела HEp-2 тип волчанка свечения амилоидоз склеродермия иммуноблот ревматоидный цитруллиновый расшифровка экстрагируемые скрининг заболевания смешанное системная СКВ артрит дсДНК CCP ССР АЦЦП саркоидоз антинейтрофильные криоглобулины гранулематозные АНФ АНЦА ANCA ENA иммунофиксация васкулиты Крона целиакия аутоиммунный печени язвенный колит глиадину трансглутаминазе стероидпродуцируюшим Вегенера яичника эндокринопатии пузырные пузырчатка пемфигоид рассеянный склероз миастения миелина белок олигоклональный изоэлектрофокусирования IgG IgA IgM легкие цепи полиневрит ганглиозидам полимиозит парапротеин миелома неоптерин островковые GAD антимитохондриальные гладкие скелетные мышцы ASCA колит антигену фосфолипидный синдром кардиолипину фосфолипидам гликопротеину нуклеосомам SSA SSB RNP Sm CENT Scl Jo-1 АМА антикератиновые антиперинуклеарный MCV LKM-1 рецептору иммунофлюоресценция ИФА иммунологическая лаборатория университет санкт-петербург павлова Чардж-Стросса полиангиит микрокристаллические первичный билиарный цирроз трансглутаминаза трансглютаминаза критерии ревматоидного артрита 2010 года СПб Питер Петербург нейрогенетика

Антитела к тирозинфосфатазе IA 2, КОД 01 02 15 550, Витамин д, Жильбер, антитела к цитоплазме нейтрофилов, синовиальн, Как получить результат анализов, Антитела к миокарду, трипсин, гистоны, антитела к ремикейду, свободные цепи, КАЛЬПРОТЕКТИН В КАЛЕ, днк мбт, анализ крови фиброскан цена, ANCA anti BPI, булгаковой, Грегесена, нарушения обмена железа, ss a ro 60, иммунология.

Парапротеинемии и иммунофиксация

Диагностика парапротеинемий множественная миелома, болезнь легких цепей, амилоидоз, болезнь Вальденстрема, моноклональная гаммапатия неясного значения (MGUS)

Парапротеины являются первыми описанными опухолевыми маркерами, т.е. отражают объем опухоли. Как и другие онкомаркеры парапротеины встречаются как при онкологических и так и патологических процессов, отражая нарушенное функционирование иммунной системы. Наблюдается увеличение встречаемости с возрастом; в бессимптомной популяции большинство случаев представлено гаммапатии неясного значения. Значение обнаружения парапротеинемии (ПП) в популяции приведено ниже:

MGUS(без прогресса за 5 лет)

Транзиторное (пожилой возраст)

Парапротеин может быть выявлен в сыворотке крови с помощью электорофореза белков сыворотки, количественного определения основных классов иммуноглобулинов сыворотки, а также с помощью метода иммунофиксации. Несомненным преимуществом выполняемого нами метода является проведение одновременного анализа сыворотки и мочи..

Особую важность в дифференциальной диагностике злокачественных и доброкачественных состояний является обнаружение фрагментов иммуноглобулинов, которые секретируются злокачественными клетками. Фрагменты иммуноглобулинов (легкие цепи) могут быть обнаружены в моче благодаря концентрирующему эффекту, но обычно не определяются при электрофорезе белков сыворотки. Таким фрагментом иммуноглобулина является белок Бенс-Джонса (ББД), представляющий агрегаты легких цепей иммуноглобулинов. При доброкачественных парапротеинемиях ББД в моче не обнаруживается, что позволяет использовать его выявление в качестве основного метода скрининга миеломы.

Концентрации Ig сыворотки

Болезнь тяжелых цепей альфа/гамма/мю

Тест 01.02.15.340 Легкие цепи иммуноглобулинов каппа и лямбда в сыворотке крови

При миеломе легкие цепи иммуноглобулинов отражают синтез парапротеина при большинстве типов парапротеинемий. Концентрация в крови может оставаться нормальной, но обычно повышена. Целесообразно подсчитать суточную экскрецию свободных легких цепей в моче. Для каппа цепи в норме она меньше чем 0,1 гр за 24 часа.. Увеличение свидетельствует о высокой вероятности парапротеинемии и требует обследования с помощью иммунофиксации.

Тест 01.02.15.420 Скрининг парапротеинемий методом иммунофиксации с в сыворотке крови (количественная оценкая парапротеина)

Данный метод представляет разновидность иммунофиксации, при которой белки сыворотки разделяются с помощью электрофореза, а на отдельной электрофоретической дорожке проводится иммунофиксация с антисывороткой направленной против тяжелых цепей IgG, IgM, IgA и легких цепей иммуноглобулинов. При наличии подозрения на присутсвие парапротеина (моноклональной полосы) в электрофореграмме, скрининговый иммунофиксационный метод позволяет обнаружить наличие парапротеина и расчитать его количество. Благодаря низкой цене метод скрининга более удобен для обследования как в целях дифференциальной диагностики парапротеинемий, так и наблюдения за динамикой парапротеина на фоне лечения моноклональных гаммапатий.

Тест 01.02.15.640 Скрининг белка Бенс-Джонса в крови с помощью иммунофиксации (разовая и суточная моча)

Выявление белка Бенс-Джонса позволяет отличить моноклональную гаммапатию невыясненного значения и злокачественную парапротеинемию на фоне онкогематологических заболевания, с высокой вероятностью диагностирует миелому легких цепей. Позволяет оценить содержание легких цепей (и их аггрегатов) в моче.

Тест 01.02.15.650 Скрининг гаммапатий в сыворотке и моче (два материала)

Комбинированное исследование позволяет исключить диагноз парапротеинемии (и моноклональной гаммапатии) при неясной клинической картине.

Тест 01.02.15.655 Типирование парапротеина в сыворотке крови с помощью иммунофиксации (IgG, IgA, IgM, каппа, лямбда)

с количественным исследованием парапротеина

В процессе этого метода белки сыворотки и мочи одновременно разделяются с помощью электрофореза и окрашиваются соотвествующими антисыворотками. Проводится денситометриеская оценка моноклонального компонета (парапротеина) и определяется его содержанию в г/л. Вероятность множественной миеломы значительно повышается при определении парапротеина более 3 гр/л. Тест позволяет одновременно сопоставить клональность иммуноглобулинов в сыворотке и моче.

Тест 01.02.15.645 Типирование белка Бенс-Джонса с помощью иммунофиксации (разовая и суточная моча)

Исследование позволяет определить наличие и типировать белок Бенс-Джонса в моче с панелью специфических антисывороток.

источник

Иммунохимически идентифицировать белки на электрофореграмме без потери наглядности и четкости классической электрофоретической картины позволяет метод иммунофиксации (ИФ).

При выполнении иммунофиксации на одной и той же пластине с агарозным гелем проводят несколько электрофоретических разделений исследуемого образца, после чего один из треков окрашивают сразу после окончания фореза (он служит контролем), а на поверхность остальных наносят антисыворотки определенной специфичности.

В месте расположения белка, прореагировавшего с родственной ему антисывороткой, через некоторое время (обычно в пределах часа) образуется преципитат, который полностью сохраняет форму и положение изучаемой фракции. Предварительно отмыв несвязавшиеся белки солевым раствором, пластины окрашивают. Зону миграции белка уточняют, соотнося положение преципитата, образованного этим белком, с контрольной фореграммой.

Иммунофиксацию широко используют в диагностике моноклональной секреции. К наиболее типичным ситуациям относятся:
1) иммунохимическая идентификация небольших М-градиентов, особенно при нормальном содержании поликлональных иммуноглобулинов;
2) выявление и идентификация скрытых М-градиентов, когда моноклональный белок мигрирует в зоне а- или b-глобулинов и маскируется нормальными белками этих фракций, особенно при низком уровне продукции.

В ряде случаев иммунофиксация позволяет распознать так называемые ложные М-градиенты — электрофоретически гомогенные полосы, напоминающие М-градиент, но не относящиеся к иммуноглобулинам. Отсутствие специфического преципитата в зоне такой полосы при реакции с антисыворотками к Н- и L-цепям иммуноглобулинов позволяет отвергнуть предположение о наличии парапротеина в исследуемом образце.

Выявление и характеристика М-градиента в сыворотке крови методом иммунофиксации в геле агарозы.
При проявлении электрофореграмм антисыворотками к а- и к-цепям иммуноглобулинов в b2-зоне выявлен М-градиент, образованный парапротеином Ак (указан стрелкой).

Иммунофиксация является методом выбора при анализе множественной секреции, если в образце присутствуют два и более М-градиентов.

Помимо высокой специфичности и разрешающей способности, достоинством метода является также его высокая чувствительность. Это объясняется двумя факторами: накоплением белка (антител) в зоне градиента при образовании специфического преципитата и минимальной диффузией антигена при реакции с антисывороткой. При иммунофиксации можно выявить следовые М-градиенты, которые не видны на окрашенной электрофореграмме.

Основная методическая трудность — подбор адекватного разведения образца для получения плотного, хорошо видимого преципитата. Если образец разведен недостаточно, то преципитат может раствориться в избытке антигена (исследуемый белок). При слишком большом разведении образца образовавшийся преципитат можно не увидеть. В обоих случаях имеет место ложноотрицательный результат.

В последние годы благодаря исключительно высокой информативности метода и появлению коммерческих диагностических наборов, укомплектованных высокоаффинными антисыворотками (что приводит к получению стабильных результатов), иммунофиксация в большинстве диагностических ситуаций оттеснила на второй план традиционный иммуноэлектрофорез (ИЭФ).

Чувствительность иммунофиксации можно значительно повысить, если использовать для разделения белков противоточный изотахофорез (ИТФ) на ацетат-целлюлозной мембране, предложенной Г. И. Абелевым и соавт.. Это метод электрофореза в неоднородной системе буферов, имеющих общий катион, но разные анионы.

При изотахофорезе (ИТФ) ионы разделяемого образца располагаются в порядке уменьшающейся электрофоретической подвижности между двумя видами анионов буфера: «ведущим» (с более высокой подвижностью) и «замыкающим» (с меньшей подвижностью). Изотахофорез (ИТФ) позволяет одновременно с разделением концентрировать в 10—100 раз белки, находящиеся в высокоразбавленных растворах.

В связи с этим метод хорошо подходит для выявления и индентификации белка Бенс-Джонса в моче, а также для исследования малобелковых биологических жидкостей, доступных в небольшом объеме, ограничивающем предварительное концентрирование (церебральная и слезная жидкости, слюна и т. д.).

источник

Скрининг миеломной болезни и парапротеинемий (иммунофиксация сыворотки крови с пентавалентной сывороткой)

Данный тест предназначен для обнаружения моноклонального иммуноглобулина (парапротеина) с помощью сочетания таких методов, как клинический электрофорез и иммунофиксация. В результате разделения белков сыворотки крови путем электрофореза парапротеин (также его называют М-пиком Или М-градиентом) претерпевает миграцию в виде компактной полосы, что делает его заметным на фоне других белков фракций. Метод иммунофиксации позволяет достоверно выявить моноклональный иммуноглобулиновый компонент и определить его абсолютное содержание в сыворотке крови.

Электрофоретическое разделение белков сыворотки крови, клинический электрофорез и иммунофиксация, скрининг болезни Рустицкого-Калера, скрининг миеломы, скрининг миеломатоза, скрининг ретикулоплазмоцитоза, скрининг генерализованной плазмоцитомы.

Синонимы английские

Serum protein electrophoresis , immunofixation electrophoresis, multiple myelomascreening, plasmacellscancerscreening, plasmacell myeloma screening, monoclonal gammopathy screening.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Диагностика миеломной болезни проводится с помощью симбиоза двух методов исследования – клинического электрофореза и иммунофиксации – и заключается в выявлении присутствия парапротеина в сыворотке крови для его последующего типирования. С помощью данного исследования можно выявить не только миеломную болезнь, но и другие лимфопролиферативные заболевания, а также амилоидоз, полинейропатию, гемолитические анемии, криоглобулинемию, поражения почек.

Основным признаком данных заболеваний с точки зрения лабораторной диагностики является увеличение синтеза иммуноглобулина. Метод электрофореза позволяет разделить белки сыворотки крови и выделить иммуноглобулин – в результате расщепления он выделяется на фоне других белковых фракций в виде мигрирующей полосы. Этот иммуноглобулин называется парапротеином (также его называют моноклональным иммуноглобулином, М-пиком или М- градиентом). Именно он является онкомаркером при наличии у пациента гематоонкологических заболеваний.

Клинические проявления миеломной болезни связаны с разрушением костей – это могут быть патологические переломы, боли в костях, анемический синдром, снижение гемоглобина в крови, синдром гипервязкости, тромбозы и кровотечения. Разрушение костей приводит к увеличению количества кальция в крови, что в свою очередь влечет за собой кальциевые отложения в почках, легких и на слизистой желудка. Также при миеломной болезни наблюдаются частые бактериальные инфекции у пациента – это связано с падением количества нормальных иммуноглобулинов и нарушениями процесса образования антител.

Наличие множественной миеломы напрямую связано с пролиферацией плазмацитов, способных секретировать парапротеин или его фрагменты. На момент диагноза концентрация моноклонального иммуноглобулина в сыворотке крови чаще всего превышает 25 г/л. Контроль и наблюдение за изменением уровня концентрации парапротеина позволяет проводить мониторинг состояния пациента и оценку эффективности лечения миеломы. При наличии заболевания контрольные анализы для наблюдения за изменением уровня концентрации парапротеинана на фоне терапии должны проводиться каждые 3 месяца.

При миеломе парапротеин в сыворотке крови в 60 % случаев представлен IgG, 20 % приходится на IgA. Эти 20 % относятся к определению миеломы Бенс-Джонса – в этом случае необходимо также проконтролировать продукцию свободных легких цепей (каппа или лямбда) и их наличие в моче. Достаточно редко (в 2–4 % случаев) при наличии миеломы может также отмечаться присутствие биклонального парапротеина.

Лимфома, при которой активно продуцируется моноклональный IgM, называется макроглобулинемией Вальденстрема. При данном типе лимфомы опухолевые клетки диффузно распределяются в селезенке, костном мозге и лимфоузлах. Увеличивается вязкость крови и проявляется ряд клинических симптомов: слепота, спутанность сознания, склонность к кровоточивости, гипертензия, сердечная недостаточность – это связано с повышением концентрации моноклонального IgM до 30 г/л и более. При других типах лимфомконцентрация парапротеинов класса IgM обычно не превышает 30 г/л, хотя они и обнаруживаются у 20 % пациентов.

Помимо перечисленного, моноклональный парапротеин может быть обнаружен при некоторых неопухолевых заболеваниях. Это может быть эссенциальная криоглобулинемия, парапротеинемическая хроническая полинейропатия, холодовая гемолитическая анемия, АL-амилоидоз почек и внутренних органов, болезнь отложения легких цепей. Также парапротеин в сыворотке крови обнаруживается при болезни Кастелмана, POEMS-синдроме и микседематозном лишае.

В случае если парапротеинемия не прогрессирует во множественную миелому или другое заболевание в течение 5 лет, речь идёт о доброкачественной парапротеинемии. В этом случае концентрация парапротеина обычно ниже 3 г/л.

Согласно статистике, парапротеинемия чаще всего выявляется у пациентов старше 50 лет. У лиц старше 65 лет выявляемость заболевания достигает 4-10 %. В большинстве случаев это бессимптомные моноклональные гаммапатии невыясненного значения (МГНЗ) – это парапротеинемия без других признаков онкогематологического заболевания. В этом случае не требуется постоянный мониторинг концентрации.

При выявлении парапротеинемии у пациентов моложе 50 лет необходимо проводить контрольные повторные обследования. Это связано с повышенным риском развития множественной миеломы. В случае обнаружения концентрации парапротеина выше 15 г/л необходимо провести ряд дополнительных исследований: электрофорез 24-часового образца мочи и иммунофиксация каждые 3-6 месяцев.

Для чего используется исследование?

Диагностика причины клинической симптоматики (болей в спине, спонтанных переломов, частых бактериальных инфекций, полиневрита, гемолитической анемии, нефротического синдрома, кожной пурпуры, синдрома повышенного СОЭ, гиперкальциемии, амилоидоза внутренних органов, эндокринопатии, органомегалии).
Мониторинг уровня концентрации парапротеинов при моноклональнойгаммапатии невыясненного значения.
Оценка эффективности проводимой терапии при миеломе и других гаммапатиях.

Референсные значения: парапротеина (IgG, A, M, каппа/лямбда) не обнаружено.

Парапротеин в сыворотке крови присутствует в случае наличия у пациента:

транзиторной парапротеинемии;
моноклональной гаммапатии невыясненного значения;
доброкачественной парапротеинемии;
парапротеинемической полинейропатии;
криоглобулинемии;
холодовой гемолитической анемии;
AL-амилоидоза или болезни отложения легких цепей;
миседематозного лишая;
POEMS-синдрома (полинейропатии с органомегалией);
множественной миеломы;
макроглобулинемии Вальденстрема;
лимфомы и ХЛЛ (хронического лимфолейкоза);
болезни тяжелых цепей.

Отсутствие парапротеина в сыворотке крови позволяет практически полностью исключить вероятность диагноза «гаммапатия» (для подтверждения необходимо исключить присутствие белка Бенс-Джонса в моче).

Интерпретация результатов исследования не является диагнозом и содержит информацию для лечащего врача для использования информации наряду с другими источниками (анамнеза, истории болезни, других исследований).

[40-063] Клинический и биохимический анализ крови — основные показатели

Кто назначает исследование?

Онколог, терапевт, гематолог, нефролог, уролог.

1. Лапин С.В. Тотолян А.А. Иммунологическая лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний. Издательство»Человек», СПб- 2010.

2. Tietz Clinical guide to laboratorytests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006,1798 p.

3. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Organ Specific Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2011.

4. Conrad K, Schlosler W., Hiepe F., Fitzler M.J. Autoantibodies in Systemic Autoimmune Diseases: A Diagnostic Reference/ PABST, Dresden – 2007.

5. Gershvin ME, Meroni PL, Shoenfeld Y. Autoantibodies 2 nd ed./ Elsevier Science – 2006.

6. Shoenfeld Y., Cervera R, Gershvin ME Diagnostic Criteriain Autoimmune Diseases / Human Press – 2008.

источник

Уважаемые пациенты! В ноябре детская медицинская сестра принимает 8, 9, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 23 и 30 числа.

Лабораторная диагностика парапротеинемий.

Для клинического исследования парапротеина (ПП) целесообразно использовать электрофорез в агарозном геле или капиллярный электрофорез. В зависимости от условий электрофореза и состава буфера может формироваться 5 или 6 фракций белков. В последнем случае бета-фракция разделяется на бета-1 и бета-2 (минорную) фракции. В каждой фракции в норме присутствует определенный набор белков, поэтому результат электрофореза белков сыворотки дает комплексное представление об изменении синтеза и катаболизма многих белков организма (рис. 1). Клиническая интерпретация результатов электрофореза белковых фракций изложена в ряде руководств по клинической лабораторной диагностике.

Рис. 1. Основные фракции белка сыворотки крови и их компоненты

Для выявления ПП методы электрофореза и иммунофиксации должны использоваться совместно. Электрофорез с денситометрической оценкой белковых фракций позволяет предположить наличие ПП, а иммунофиксация – подтвердить его наличие в той или иной фракции. Денситометрия является предпочтительным методом оценки содержания белка в составе белковых фракций и позволяет оценить концентрацию ПП. Предел чувствительности метода электрофореза, ассоциированного с иммунофиксацией, позволяет определять 0,5 г/л моноклонального ПП в составе иммуноглобулина.

Классический результат обнаружения ПП с помощью электрофореза представляет выраженную полосу (М-пик) в зоне гамма-глобулинов. Интенсивная фракция ПП выявляется на бледном фоне, который указывает на подавление синтеза поликлональных иммуноглобулинов. Только в этой ситуации с большой уверенностью можно интерпретировать полученный результат как ПП и определить его концентрацию. Здесь иммунофиксация позволяет типировать ПП, т. е. описать его состав. В большинстве же случаев выявление моноклонального ПП в образце не так однозначно (рис. 2), т. к. ПП происходит из поликлональных молекул иммуноглобулинов, которые обладают разными физико-химическими свойствами и могут мигрировать в составе различных фракций белков сыворотки.

Рис. 2. Детекция парапротеина с помощью электрофореза белков сыворотки и основные феномены, затрудняющие его выявление.

Чаще всего ПП класса IgG и IgM обнаруживаются в гамма-фракции, а ПП классов IgA и свободные легкие цепи мигрируют в составе альфа2- и бета-фракций. Нарушение синтеза иммуноглобулинов затрудняет выявление ПП при поликлональной гипергаммаглобулинемии (рис. 2.7), увеличение продукции IgA при циррозе (рис. 2.5), олигоклональный синтез иммуноглобулинов при хронических воспалительных заболеваниях. Гипоглобулинемия может быть проявлением миеломы Бенс-Джонса с угнетением синтеза собственных иммуноглобулинов (рис. 2.8). В последнем случае свободные легкие цепи обычно мигрируют в составе бета- или альфа2-фракции глобулинов. Изменения альфа2- и бета-фракций могут имитировать присутствие ПП. Дополнительные яркие полосы отмечаются в гамма-фракции при высоком содержании фибриногена в сыворотке (рис. 2.4), гемолизе с образованием комплексов “гемоглобин – гаптоглобин” в альфа2-фракции (рис. 2.3). Увеличение и изменение бета-фракции происходит при повышении трансферрина при железодефицитной анемии, выявлении генетических вариантов трансферрина, высокого С-реактивного белка или С3-фактора комплемента при воспалении. Подозрения на ПП могут возникать при нарушениях метаболизма при нефротическом синдроме (рис. 2.6) или индукции синтеза белков, например альфа-фетопротеина при раке печени.

Стандартного алгоритма для проведения иммунофиксации по результатам электрофореза белков сыворотки крови нет, поэтому решение о проведении дообследования клиницист и врач клинической лабораторной диагностики должны принимать совместно в зависимости от клинических находок и результатов лабораторных показателей. Обнаружение даже небольшого содержания ПП может указывать на тяжелое онкогематологическое заболевание, такое как лимфома или миелома. Определение свободных легких цепей иммуноглобулинов и их соотношения может использоваться в качестве дополнительного метода в постановке диагноза, однако такая оценка неточна при биклональной миеломе и небольшом содержании ПП (менее 5 г/л). Поэтому увеличение глобулиновых фракций сыворотки крови (альфа2, бета, гамма) требует проведения иммунофиксации. Гипогаммаглобулинемия, особенно в сочетании с протеинурией, является основным признаком миеломы Бенс-Джонса. В случае гипогаммаглобулинемии должен быть выполнен электрофорез 24-часовой мочи для обнаружения белка Бенс-Джонса.

Иммунофиксация является двустадийным процессом, который объединяет горизонтальный электрофорез в агарозном геле и детекцию иммуноглобулинов с помощью специфических антисывороток. Моноспецифические антисыворотки к тяжелым и легким цепям иммуноглобулинов наносятся на гель и проникают в его структуру за счет пассивной диффузии. Благодаря малой толщине геля линии преципитации антисыворотки иммуноглобулина образуются сравнительно быстро (через 20–30 мин), однако эффективность преципитации зависит от ряда факторов, включая концентрацию антигена, ионную силу и рН раствора, а также температуру. Образовавшиеся иммунные комплексы являются нерастворимыми и фиксируются в порах геля. Отмывка позволяет удалить несвязавшиеся белки, а иммунные комплексы окрашиваются белковым красителем.

Иммунофиксация производится одновременно на 6 дорожках, из которых в одну вносится фиксатор белков, в пять остальных – антисыворотки к тяжелым цепям IgG, IgA, IgM и легким цепям каппа и лямбда. Обнаружение характерной фракции белка, которая реагирует с антисыворотками против тяжелых и легких цепей, указывает на обнаружение ПП, представленного целой молекулой одного из основных классов иммуноглобулинов. Если фракция реагирует только с антисывороткой против легкой цепи, то рекомендуется повторное исследование с антисыворотками к IgD и IgE. Отсутствие реакции с антисыворотками к IgD и IgE указывает на то, что ПП представлен свободной легкой цепью иммуноглобулина. Болезнь тяжелых цепей представляет редкий лабораторный диагноз, который должен устанавливаться только при очевидном выявлении изолированного синтеза тяжелой цепи иммуноглобулина. Следует учитывать, что миелома класса IgA может походить на болезнь тяжелых цепей, т. к. структура ПП IgA может затруднять распознавание легких цепей соответствующими антисыворотками. Примеры обнаружения ПП с помощью иммунофиксации приведены на рис. 3. При выявлении ПП необходимо сопоставить результат иммунофиксации с электрофорезом белковых фракций, провести денситометрическое выделение моноклональной фракции и ее измерение.

Рис. 3. Варианты выявления парапротеина методом иммунофиксации на системе SAS1/SAS2 фирмы Helena Biosciences Europe (Великобритания).

Высокое содержание ПП в патологических образцах часто приводит к феномену “прозоны”, который заключается в растворении иммунных комплексов при высокой концентрации антигена. Феномен прозоны может приводить к ложноотрицательным результатам тестирования. Для устранения этого явления может потребоваться повторное исследование с многократным разведением тестируемой сыворотки для снижения концентрации ПП в образце. Высокая концентрация иммунных комплексов, ревматоидного фактора, криоглобулинов может привести к преципитации в месте нанесения сыворотки на всех дорожках. В этом случае может потребоваться использование восстанавливающих веществ, например 2-меркаптоэтанола, для растворения агрегатов и повтора исследования.

Удобным вариантом сочетания методов электрофореза белков сыворотки и иммунофиксации является исследование с пентавалентной антисывороткой. Это скрининговый метод, представляющий разновидность иммунофиксации с использованием одной антисыворотки, направленной против IgG, IgM, IgA, каппа и лямбда цепей. Окраска амидо-черным красителем позволяет проводить прямую денситометрию белковых фракций и одновременную количественную оценку ПП на основании выявленных моноклональных фракций. Этот метод не только позволяет проводить скрининговое обследование, но и сравнительно дешевле развернутого теста, т. к. вместо 6 используются только 2 дорожки.

Для выполнения клинического электрофореза и проведения иммунофиксации в нашей лаборатории с 2008 г. мы пользуемся системой клинического электрофореза SAS-1plus/SAS-2 и готовыми наборами реактивов фирмы Helena Biosciences Europe (Великобритания). Все реактивы для электрофореза объединены в системе “гель – буфер”, что исключает необходимость работы с буфером для электрофореза. На один гель может быть нанесено до 24 образцов, причем система нанесения образцов позволяет комбинировать образцы различного биологического материала, что целесообразно при одновременном проведении иммунофиксации образцов сыворотки крови и мочи. Заслуживает отдельного внимания уникальная система автоматического нанесения образцов на гель, которая может сконцентрировать биоматериал непосредственно на геле. За счет этого метод имеет высокую аналитическую чувствительность, составляющую 0,25 г/л белка на белковую фракцию сыворотки и до 10 мг/л на фракцию белков мочи. Электрофорез проводится в реакционной камере при постоянной температуре и влажности. Вся процедура фиксации, окрашивания и сушки геля стандартизована, выполняется в автоматическом режиме и не требует вмешательства персонала. Для обработки, редактирования, анализа и архивирования данных, а также ведения карт внутрилабораторного контроля качества используется русифицированный пакет программного обеспечения Platinum III. Его дополнительным преимуществом является возможность создания удобной формы заключения по результатам исследования, а также интегрирование в лабораторную информационную систему.

источник

Dörner K. Klinische Chemie und Hämatologie: 69 Tabellen;[Taschenlehrbuch]. – Georg Thieme Verlag, 2009.
Renz H. (ed.). Praktische Labordiagnostik: Lehrbuch zur Laboratoriumsmedizin, klinischen Chemie und Hämatologie. – Walter de Gruyter, 2014.

источник