Как делают пцр мокроты

Полимеразная цепная реакция (далее ПЦР) — это высокоточный метод молекулярно-генетического исследования материла, который позволяет выявить у человека различные инфекционные заболевания и установить генотип возбудителя.

ПЦР для выявления различных заболеваний стала применяться в самом конце прошлого века. Первооткрывателем этого метода исследования является американский биохимик Кэри Муллис. Свое открытие он сделал в 1983 году. Но еще несколько лет понадобилось, чтобы доработать метод.

С помощью ПЦР-диагностики можно обнаружить фрагменты чужеродного ДНК в любой жидкой среде организма. На анализ могут быть взяты такие жидкости:

Кровь.
Слюна.
Мокрота.
Выделения из половых органов.
Смывная жидкость бронхов.
Желудочный сок.

Лечащий врач сам определяет, какую биологическую жидкость лучше взять на анализ при конкретном заболевании.

ПЦР-диагностика позволяет не только обнаружить микрофрагменты чужеродной ДНК, но и определить к какому конкретному виду она относится. То есть с помощью ПЦР можно не только точно установить возбудителя заболевания, но и выяснить к какому виду он принадлежит.

Процесс анализа ПЦР — очень сложный. Он состоит из нескольких этапов:

Сначала нужно обнаружить фрагменты вредоносной ДНК в предоставленном образце.
Копирование фрагмента ДНК. Маленького участка ДНК для анализа недостаточно, поэтому его копируют. Нуклеиновая кислота может копироваться в пробирке с помощью фермента полимеразы (вне живого организма). В пробирке образуется множество клонов, то есть происходит цепная реакция. Весь процесс происходит в три этапа под воздействием различных температур.
Когда генетического материала становится достаточно для исследования, тогда возбудитель определяется обычными методами.

Метод ПЦР очень точен и может выявить наличие любого возбудителя по небольшому фрагменту ДНК или РНК.

ПЦР-анализ на туберкулез является самым информативным методом диагностирования этого заболевания. Относительно туберкулеза этот метод позволяет не только установить наличие микобактерий в организме, но и определить к какому виду они принадлежат.

Результат ПЦР диагностики может быть простой и расширенный. В простом результате указывается только наличие/отсутствие микобактерии. Расширенный результат дает представление о дополнительных параметрах протекания заболевания. Правильно понять, что написано в результате анализа ПЦР может только фтизиатр.

ПЦР-диагностика туберкулеза не проводится всем без исключения. Это объясняется дороговизной реактивов и недоступностью проведения исследования в некоторых отдалённых районах (в таких местах пользуются другими методами диагностики).

Показаниями для проведения ПЦР-исследования являются:

Длительный контакт с больным туберкулезом.
Беременность. ПЦР крови на туберкулез является самым быстрым и безопасным методом для беременной женщины.
Экстренная ситуация. Например, необходимость срочного оперативного вмешательства, при котором нужно точно установить наличие/отсутствие туберкулеза в организме.
Аллергическая реакция на туберкулиновые пробы.
ВИЧ-инфекция.
Невозможность диагностирования заболевания другими способами, при наличии явных признаков туберкулеза.
Неоднозначные симптомы, которые не позволяют создать четкую клиническую картину заболевания (болезни верхних дыхательных путей, сопровождающиеся большим количеством мокроты, кровохарканьем и пр.).

Метод ПЦР, при всей своей сложности и дороговизне, проводится и расшифровывается в течение нескольких часов. Что делает этот метод золотым стандартом при диагностике туберкулезной инфекции.

Забор материала — это первый этап при выполнении ПЦР-исследования. Для того, чтобы выполнить качественный анализ, нужно соблюдать определенные правила по сбору материла:

Для ПЦР мокроты на туберкулез нужно тщательно провести туалет полости рта. Делать это нужно вечером и утром перед анализом. Все это время не есть. Вечером выпить муколитическое средство для лучшего отхождения мокроты.
Перед сдачей крови на ПЦР нужно не употреблять пищу в течение 8 часов. Лучше всего производить забор крови утором натощак. Курить перед забором крови также нельзя. Кровь берется из вены на локтевом сгибе руки в стерильную пробирку. В эту же емкость добавляется антикоагулянт, чтобы кровь оставалась жидкой. Смешивать антикоагулянт с кровью нужно очень аккуратно, не делая резких движений. Если кровь была взята не в лабораторных условиях, то она должна быть предоставлена лаборанту до истечения пятичасового срока. Иначе результат может быть не точным.
Моча собирается в стерильную емкость утром, до приема пищи. Перед сбором мочи необходим тщательный туалет промежности.
Остальные виды жидкостей (смывы с бронхов, спинномозговая жидкость) может собрать только специалист в условиях стационара.
Перед забором жидкостей на ПЦР-исследование запрещено принимать некоторые препараты (например, прием некоторых антибиотиков нужно прекратить за две недели до забора материала).
Требования к лаборатории, в которой проводится забор анализов на ПЦР очень строгие. Лаборатория должна быть стерильна, чтобы не произошло перекрестное загрязнение материала. В этом случае результаты могут быть ложноположительными.

ПЦР-тест на туберкулез — высокоточный информативный анализ. И требования к его проведению крайне строгие. Чтобы анализ получился, нужно соблюдать регламент.

Для работы в ПЦР-лаборатории приглашаются специально обученные врачи: бактериологи, вирусологи, микробиологи. Все они прошли дополнительное обучение для работы на сложном оборудовании.

Лаборатория должна иметь лицензию на выполнение работ связанных с бактериологически-опасными вирусами и бактериями.

В самой лаборатории должны быть выделены такие рабочие зоны:

Зона приемки и сортировки проб.
Зона подготовки проб. В этом помещении выделяются нуклеиновые кислоты из образцов материала.
Зона проведения реакционных проб.
Зона для учета результатов и расшифровки анализов.

Все помещения располагают последовательно. Допуск в эти зоны разрешен только работающим там сотрудникам, которые при входе соблюдают правила личной защиты от бактерий и вирусов.

Лучше, если есть возможность расположить лабораторию в отдельно стоящем здании с собственной системой вентиляции.

В лаборатории соблюдаются стерильные условия работы, чтобы избежать перекрестного загрязнения проб. Даже если один фрагмент чужеродной ДНК попадет в исследуемый материал, ПЦР его размножит, и анализ получится ложноположительным.

В каждой зоне лаборатории имеется свой набор оборудования и посуды для проведения исследований. Также имеются свои холодильники, которые не могут быть использованы в других целях, кроме хранения материала конкретной зоны исследований.

Использованные расходные материалы и остатки биологического материала уничтожаются специальными способами, в соответствии с инструкциями.

ПЦР-тест на туберкулез имеет множество плюсов, которые делают этот метод диагностики все более востребованным:

Срок проведения. Несмотря на сложность проведения анализа, он готовится намного быстрее других лабораторных методов диагностики туберкулеза (около пяти часов). Это свойство анализа ПЦР становится особенно важным, когда анализ необходимо провести экстренно.
Анализ ПЦР абсолютно безопасен и может проводиться беременным женщинам и детям.
ПЦР-исследование можно сделать, когда по каким-то причинам нельзя выполнить другие методы диагностики.
С помощью ПЦР-диагностики можно провести исследование любой биологической жидкости на выбор. В некоторых случаях это имеет большое значение.
Позволяет обнаружить возбудителя на любой фазе заболевания. Даже после проведенного лечения, сохранившиеся остатки ДНК мертвых микобактерий будут обнаружены.
Высочайшая чувствительность этого метода позволяет обнаруживать в биологическом материале даже единичные фрагменты ДНК микроорганизмов.
Метод ПЦР позволяет не только обнаружить присутствие заболевания, но и может определить генотип возбудителя, отличив его от похожих микроорганизмов.
ПЦР-исследование очень эффективно при рецидивирующем течении заболевания.
Благодаря высочайшей чувствительности, анализ ПЦР может распознать микобактерии в организме человека, когда он только недавно инфицировался туберкулезом, задолго до появления клинических симптомов.

Казалось бы, метод ПЦР-диагностики содержит в себе только плюсы, но это не так.

Минусы этого метода исследования тоже существенны. При выборе метода исследования туберкулеза это также стоит учитывать:

Это дорогостоящий метод исследования. Для проведения ПЦР-диагностики нужна специально-оборудованная лаборатория. Оборудование для таких исследований стоит очень дорого, и не во всякой лаборатории оно имеется. В крайнем случае, можно обратиться в платную лабораторию.
Сразу же после проведенного лечения метод ПЦР применять не рекомендуется. В крови пациента некоторое время сохраняется небольшое количество живых и мертвых микобактерий. Если провести анализ в этот период, он покажет ложноположительный результат.
При мутациях микобактерий, анализ будет недостоверным, так как нормальная ДНК не сможет синтезироваться.
Для ПЦР-исследования имеет значение правильный выбор биологической жидкости на анализ.
Сверхчувствительность. Это тот случай, когда достоинство метода становится его недостатком. Если при проведении анализа в биологический материал каким-то образом попадет даже единичный фрагмент чужеродного ДНК, то ПЦР его размножит, и будет получен ложный результат.

ПЦР-лаборатория имеется только в крупных противотуберкулезных диспансерах и диагностических центрах.

Объясняется это высокой стоимостью оборудования и высокими требованиями к содержанию лаборатории (реактивы, обработка).

Медицинские чиновники не сильно переживают из-за отсутствия ПЦР-лаборатории в каком-то конкретном населенном пункте, поскольку анализы на туберкулёз можно провести другими методами (культивирование микобактерий, микроскопическое исследование).

Если в населённом пункте нет бесплатной ПЦР-лаборатории, пациент по желанию может обратиться в платное учреждение.

В последнее время ПЦР-диагностика занимает все более прочные позиции в диагностике туберкулеза и других заболеваний, отодвигая на задний план другие методы диагностики.

источник

Ольга, Вы большая молодец, что у вас дошли руки почитать эти приказы. Вот сижу сейчас и думаю, чтобы нас никто не обломал сейчас фразой, типа все это является лишь дополнительными методами диагностики ТБ. Вот, к примеру в 109 приказе от 2003 года, есть такая хрень:
«В качестве методов, альтернативных классическому культуральному исследованию, возможно использование автоматизированных и полуавтоматизированных систем ускоренной культуральной диагностики, основанной на использовании жидких питательных сред и различных способах индикации роста микобактерий.

С целью быстрой идентификации микобактерий туберкулезного комплекса в качестве дополнительных допускается использование методов, основанных на амплификации фрагментов генома микобактерий (полимеразная цепная реакция — ПЦР), других молекулярно-биологических методов. ПЦР-анализ может быть применен для исследования материала от больного (мокроты, промывных вод бронхов, мочи и спинномозговой жидкости), а также культур микроорганизмов.»

Наталья, вот. Держите. Это я только 2 пункта разжевывала.

А теперь подробнее.
5.6. В течение 6 дней с момента постановки пробы Манту (внимание. У ребенка отказ от манту) направляются на консультацию в противотуберкулезный диспансер (зачем? Если они не делали манту!) по месту жительства следующие категории детей:

— с впервые выявленной положительной реакцией (папула 5 мм и более), не связанной с предыдущей иммунизацией против туберкулеза;

— с длительно сохраняющейся (4 года) реакцией (с инфильтратом 12 мм и более);

— с нарастанием чувствительности к туберкулину у туберкулиноположительных детей — увеличение инфильтрата на 6 мм и более;

— увеличение менее чем на 6 мм, но с образованием инфильтрата размером 12 мм и более;

— с гиперреакцией на туберкулин — инфильтрат 17 мм и более;

— при везикуло-некротической реакции и лимфангите.

5.7. Дети, направленные на консультацию в противотуберкулезный диспансер (почему они направлены описано в пункте 5.6), родители или законные представители которых не представили в течение 1 месяца с момента постановки пробы Манту (опять 25! Манту то не ставили) заключение фтизиатра об отсутствии заболевания туберкулезом, не допускаются в детские организации.

Дети, туберкулинодиагностика которым не проводилась (это походу те 5%, которые не отказались, но у них медицинские противопоказания для постановки манту) допускаются в детскую организацию при наличии заключения врача-фтизиатра об отсутствии заболевания.
Т.е. отказ от медвмешательства — от пробы манту, отказ от противотуберкулезной помощи и есть основание не ходить по фтизиатрам и доказывать кому-то что он не верблюд.

Елена, Внимание! Человеческая просьба не писать вопросы в ЛС к автору темы. Все необходимые образцы отказов, а также советы и пути ведения диалогов имеются в теме и группе.

Постановление Главного государственного санитарного врача РФ от 22 октября 2013 г. № 60 “Об утверждении санитарно-эпидемиологических правил СП 3.1.2.3114-13 “Профилактика туберкулеза”
(НЕ ВСТУПИЛО В СИЛУ!)
Зарегистрировано в Минюсте РФ 6 мая 2014 г.
Регистрационный № 32182

Текст обращения в ГенПрокуратуру по несоответствию с другими законами:
http://www.1796kotok.com/forum/viewtopic.php?f=26..

Наиболее интересующие нас пункты: V и VI
V. Организация раннего выявления туберкулеза у детей

5.1. В целях раннего выявления туберкулеза у детей туберкулинодиагностика проводится вакцинированным против туберкулеза детям с 12-месячного возраста и до достижения возраста 18 лет. Внутрикожную аллергическую пробу с туберкулином (далее — проба Манту) ставят 1 раз в год, независимо от результата предыдущих проб.

Ежегодный охват пробой Манту детей до 14 лет включительно должен составлять не менее 95%. В обязательном порядке обследуются дети из социально неблагополучных семей и проживающие на территории Российской Федерации дети иностранных граждан, прибывшие из неблагополучных по туберкулезу стран.

5.2. Проба Манту проводится 2 раза в год:

— детям, не вакцинированным против туберкулеза по медицинским противопоказаниям, а также не привитым против туберкулеза по причине отказа родителей от иммунизации ребенка, до получения ребенком прививки против туберкулеза;

— детям, больным хроническими неспецифическими заболеваниями органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, сахарным диабетом;

— детям, получающим кортикостероидную, лучевую и цитостатическую терапию;

5.3. Постановка пробы Манту осуществляется средними медицинскими работниками детских, подростковых, амбулаторно-поликлинических и оздоровительных организаций, прошедших обучение в противотуберкулезных медицинских организациях и имеющих справку- допуск.

Средние медицинские работники детских, подростковых, амбулаторно-поликлинических и оздоровительных организаций проходят обучение в противотуберкулезных медицинских организациях не реже 1 раза в 2 года.

5.4. Не допускается проведение пробы Манту на дому, а также в детских и подростковых организациях в период карантина по инфекционным заболеваниям. Постановка проб Манту проводится до профилактических прививок.

5.5. Интервал между профилактической прививкой, биологической диагностической пробой и пробой Манту должен быть не менее одного месяца. В день постановки туберкулиновых проб проводится медицинский осмотр детей.

5.6. В течение 6 дней с момента постановки пробы Манту направляются на консультацию в противотуберкулезный диспансер по месту жительства следующие категории детей:

— с длительно сохраняющейся (4 года) реакцией (с инфильтратом 12 мм и более);

— увеличение менее чем на 6 мм, но с образованием инфильтрата размером 12 мм и более;

— с гиперреакцией на туберкулин — инфильтрат 17 мм и более;

— при везикуло-некротической реакции и лимфангите.

5.7. Дети, направленные на консультацию в противотуберкулезный диспансер, родители или законные представители которых не представили в течение 1 месяца с момента постановки пробы Манту заключение фтизиатра об отсутствии заболевания туберкулезом, не допускаются в детские организации.

Дети, туберкулинодиагностика которым не проводилась, допускаются в детскую организацию при наличии заключения врача-фтизиатра об отсутс

источник

В современном мире существует множество способов обнаружить возбудителей заболеваний на разных этапах развития заболевания. Одним из таких методов является PCR (метод ПЦР или полимеразная цепная реакция), позволяющий выявить инфекцию на самом раннем этапе. Буквально одна единица ДНК или РНК уже могут указать на наличие того или иного возбудителя в организме при должном уровне подготовки пациента и профессионализма лаборантов медицинского учреждения.

Анализ на ПЦР заключается в копировании ДНК и РНК возбудителя в лабораторных условиях. Так как основным хранилищем генетической информации является ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота), образованная 2 нитями, соединенными нуклеотидами, именно при множественном копировании (синтезе) этой кислоты можно установить наличие патогенного организма, если речь идет о бактерии.

Бактерии имеют свою собственную оболочку, защищающую их от внешней среды, которая нередко является агрессивной по отношению к последним. У вирусов же нет собственной оболочки (у некоторых представителей имеется нечто похожее на оболочку), а информацию в себе несет не ДНК, а РНК (рибонуклеиновые кислоты).

РНК устроены таким образом, что они встраиваются в цепи ДНК организма-переносчика и меняют их, позволяя проникать в клетки и жить за счет организма. Грубо говоря, бактерии и вирусы оставляют «отпечатки» своими ДНК и РНК, которые и выявляет анализ ПЦР. Эти «отпечатки», как и отпечатки пальцев, являются уникальными для каждого возбудителя. Поэтому ПЦР позволяет выявить заболевание на любых этапах, даже если развитие патогена происходит бессимптомно.

До широкого внедрения ПЦР в гинекологии и урологии на ИППП широко использовались методы:

микроскопия — окрашенные и неокрашенные препараты исследуются через микроскоп. Метод очень завязан на опытности лаборанта. Таким методом хорошо выявляются бактерии, имеющие большой размер (гарднереллы, кандиды,трихомонады,гонококки);
бактериология — метод заключается в выращивании возбудителей инфекции на питательном агаре, идентификации возбудителя и определения чувствительности его к антибиотикам. Долгое время считался «золотым стандартом». К минусам относят необходимость быстрой доставке материала в КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория), сроки выращивания и выяснения чувствительности к группам антибактериальных препаратов (как правило, 5-7 суток);
иммуноферментный анализ — Определение антител организма, возникающих в ответ на внедрение антигена возбудителем инфекции. Из плюсов стоит отметить возможность определения стадии заболевания (острая стадия сопровождается наличием IgG в сыворотке крови, хроническая – IgM.) К минусам относится невозможность определения у людей с ослабленным иммунитетом, а также специфичность ИФА. Другими словами, при наличии только результата иммуноферментного анализа, невозможно было выставить диагноз, а можно было только определить, что организм борется с какой-либо инфекцией.

В зависимости от материала, который забирается для проведения анализа ПЦР, существует несколько обязательных правил для пациента. Кровь сдается строго натощак утром. Мочу тоже стоит сдавать утром, первую порцию. Мокрота также сдается натощак, хотя это и необязательно. Мазки сдаются в любое время суток и имеют специфические требования. Мазок из ротоглотки также следует сдавать утром до приема пищи.

Забор материала производится сертифицированным специалистом стерильными одноразовыми инструментами. Берут анализ крови на ПЦР одноразовым стерильным шприцом, из вены забирают приблизительно 1-2 мл венозной крови для выявления таких инфекций как герпес или ВПЧ (вирус папилломы человека). Мочи достаточно 10 мл, мокроты – субстанции, размером со спичечную головку.

Для каждого вида анализа ПЦР существуют свои требования:

кровь, как говорилось выше, забирают из вены натощак;
мочу следует сдавать утром, первую порцию. Но, если забор является срочным, то достаточно сдать мочу по прошествии 2 часов после последнего мочеиспускания. Это позволит инфекции набрать необходимую критическую массу на 1 мл для более простого обнаружения патогена;
как берут соскоб из уретры. Первым делом обрабатывают раствором NaCl 0.9% наружное отверстие уретры. Затем, совершая циркулярные движения, зонд проводят на 2-4 см в уретру. Головку зонда, которая имеет щетинистое строение отсекают и кладут в пробирку со специальным раствором (своеобразный питательный агар для бактерий);
из влагалища производят мазок. Предварительно убирают секрет бартолиновых желез, затем из заднего нижнего свода влагалища специальной ватной палочкой происходит забор материала. При видимых патологических изменениях во влагалище мазок следует брать непосредственно на поврежденном участке;
как проводят соскоб из цервикального канала у женщин. Удалив слизь из наружных половых путей, зонд на 0,5 – 1,5 см вводят в шейку матки, совершают циркулярное движение и, не касаясь стенок влагалища, удаляют зонд из половых путей. Затем совершают действия, аналогичные соскобу из уретры;
из ротоглотки забор происходит натощак. Придерживая кончик языка, зондом производят мазок с задней стенки глотки, по миндалинам или по небным дужкам. Не соприкасаясь со слизистой ротовой полости и зубами, зонд выводится и отправляется на пцр-исследование;
из конъюнктивы, предварительно очистив физиологическим раствором гнойные выделения, производят соскоб слизистой нижнего века от латерального к медиальному краю. Веко при этом придерживается медицинским работником во избежание соприкосновения зонда со слизистой глаза и ресницами.

Анализ на ПЦР является самым быстрым и достоверным способом на ранних этапах обнаружить инфекцию, но бывают и ложноположительные/ложноотрицательные результаты.

Для сохранения нервной системы как своей, так и сотрудников медицинского учреждения, следует правильно подготовиться к исследованию.

Перед исследованием ПЦР мужчинам следует помнить, чего делать нельзя:

мочиться за 3 часа до исследования;
производить спринцевание и стерильную обработку члена;
мыть член мылом, содержащим антибиотик;
заниматься сексом за двое суток до ПЦР на ИППП;

Женщинам перед тем как сдать мазок на ПЦР запрещено:

при соскобе из уретры запрещено мочиться за 3 часа до исследования;
использовать вагинальные растворы с дезинфицирующими свойствами;
за двое суток до исследования применять суппозитории для влагалища;
использовать антибиотики местно, в том числе и мыло с антибиотиком;
занятия сексом за 48 часов до исследования;
применять антибиотик внутрь влагалища и уретры;
спринцеваться;
принимать антибиотики. После последнего приема антибактериального препарата должно пройти не менее 4 недель;
сдавать ПЦР во время менструации.

Следует сдать на анализ первую мочу утром, ее среднюю порцию. Другими словами начинать мочиться следует в унитаз. Затем остановить акт мочеиспускания, подставить под уретру баночку для сбора мочи, продолжить мочиться в течении 2-3 секунд, затем снова остановить мочеиспускание и, убрав контейнер, закончить акт мочеиспускания в унитаз.

Женщинам и мужчинам перед тем как сдать ПЦР следует хорошо вымыть наружные половые органы для исключения попадания в мочу смегмы (смесь секрета сальных желез крайней плоти) и выделений из влагалища.

Баночка для мочи должна быть стерильной. Попросите контейнер в клинике, где вы сдаете анализ, либо заранее приготовьте баночку с плотно закрывающейся крышкой и прокипятите их не менее 10 минут.

Непосредственно перед сдачей ПЦР запрещено:

мочиться (необходима самая первая порция мочи за день);
изменять количество выпитой за сутки до исследования жидкости. Это необходимо, чтобы поддерживать обычный водно-электролитный баланс организма, в котором себя комфортно чувствует потенциальный возбудитель инфекции;
использовать уросептики;
применять мыло, содержащее в себе антибиотик;
заниматься сексом за 12 часов до исследования;
при менструации желателен забор мочи уретральным катетером для исключения попадания крови в контейнер с мочой;

Если один из пунктов был нарушен:

Следует воздержаться от проведения диагностики инфекций методом ПЦР. Если же все-таки анализ был сдан, следует его повторить через двое суток. Если при использовании антисептиков и антибиотиков результат оказался «хорошим» – не стоит радоваться. Скорее всего, при наличии определенных жалоб, это ложноположительный результат.

Расшифровка анализов ПЦР очень просто (см примерный бланк выше). Существует положительный и отрицательный результаты исследования. Положительный означает, что инфекция в организме есть, но это не должно наводить страх на пациента. Наоборот, это значит, что теперь можно начать лечение и вовремя остановить патоген. Отрицательный результат, соответственно, показывать отсутствие инфекции в организме.

Также не стоит забывать о ложноположительных/ложноотрицательных результатах. В медицине золотым стандартом является три одинаковых результата подряд в независимых клиниках. Стоит помнить, что в разных клиниках сама КДЛ (клинико-диагностическая лаборатория) может быть одна. То есть, здания и названия будут разные, но все анализы отправляются в одну лабораторию, связывающую эти клиники. Поэтому, получив результат в одной клинике, для того, чтобы удостовериться в правильности данного результата, стоит обратиться еще в две клиники и узнать, не сдают ли они результаты в одну и ту же КДЛ.

Метод ПЦР относится к группе обширных анализов. С помощью ПЦР анализа можно определить практически любое заболевание. К сожалению, это не самый дешевый метод исследования, поэтому его не назначают всем пациентам поголовно. Цены могут варьироваться в зависимости от клиники и количества исследований.

Существует полимеразная цепная реакция (анализы ПЦР) на 12 инфекций. Какие инфекции входят в ПЦР 12:

микоплазмы гениталиум (mycoplasma genitalium) и гоминис (hominis);
трихомонады (trichomonas);
хламидии (chlamydia trachomatis);
уреаплазмы (ureaplasma, включающая ureaplasma parvum (уреаплазмы парвум));
кандиды (candida);
гарднереллы (gardnerella vaginalis);
гонококк (neisseria gonorrhoeae);
антитела IgG, IgM;
герпеса двух типов.

Также есть упрощенная ПЦР 6 диагностика. Она исключает уреаплазму парвум, кандиды, гонококк, IgG, IgM, герпес обоих типов.

ПЦР на ВИЧ следует выделить отдельным пунктом, так как тут существует специфический набор ограничений.

Во-первых, ПЦР на ВИЧ определяет не ДНК вируса иммунодефицита человека, а ДНК измененной вирусом клетки-лимфоцита. В нем будет храниться информация о вирусе и размножаться, создавая все больше пораженных лимфоцитов.

Сдавать анализ следует через 14 суток после известного контакта с ВИЧ-инфицированным человеком. Стоит помнить, что заразность этого вируса несколько преувеличена из-за тяжести нелеченного заболевания. Если произошел контакт через кровь, то тут шанс заразиться самый высокий, однако и он не превышает 85%. При остальных контактах вероятность заражения составляет от 1% до 10%.

При исследовании ПЦР на ВИЧ вероятность ложноположительного результата составляет около 2%, если не было нарушений среди медицинского персонала (правильно маркированная пробирка, не перепутали пробирки местами, не было загрязнения материала при вскрытии пробирки).

Длительность ПЦР может составлять от 4 часов до 7 суток, в зависимости от организованности медицинского учреждения, где происходит диагностика инфекций.

При отражении плюсов ПЦР следует отметить:

чувствительность. Как говорилось выше, даже единичный агент, оставленный возбудителем, позволяет обнаружить инфекцию на ее ранней стадии или если она протекает скрытно;
широкий спектр. Например, ПЦР 6 позволяет 1 исследованием выявить целых 6 возбудителей;
точность. Ложные результаты при данном методе исследования имеют место быть, но их количество сведено к минимуму;
скорость. Как правило, пациент уже на следующий день может забрать готовый результат ПЦР исследования.

стоимость. ПЦР-исследование не включено в список исследований в системе ОМС. Дорогое высокоточное оборудование требует оплаты своей работы;
требования к соблюдению техники исследования и к профессионализму сотрудников;
требования к подготовке.

источник

ПЦР на туберкулёз назначают, когда невозможно поставить диагноз или нельзя провести иные исследования. Анализ даёт возможность выявить палочку Коха на самых ранних стадиях и своевременно начать лечение.

Описание ПЦР на туберкулёз

Показания для ПЦР диагностики

Виды анализов ПЦР на туберкулёз

Подготовка к сдаче анализа

Как проводится ПЦР на туберкулёз

Расшифровка результатов обследования

Особенности ПЦР на туберкулёз у детей

Сколько стоит ПЦР на туберкулёз?

ПЦР (полимеразная цепная реакция) на туберкулёз – это точный анализ, способный выявить палочку Коха за несколько часов. Диагностика основана на методах генной инженерии. Врачи выделяют клетку ДНК, при помощи генно-молекулярных тестов определяют тип возбудителей.

позволяет выявить возбудителя на ранних стадиях, без проявления видимых симптомов;
диагностика не имеет противопоказаний и разрешена детям;
исследование можно проводить при взятии минимального количества материала.
универсальность исследования биоматериалов;
исследование эффективно при определении рецидива болезни.

Наряду с достоинствами, у ПЦР исследования имеются и недостатки.

Исследование не везде можно сдать. Поскольку оборудование для такой диагностики дорогостоящее, его устанавливают в платных лабораториях.
ПЦР на туберкулёз может дать положительный ответ, если обнаружит убитые микобактерии, к примеру, после проведённого лечения.
Мутации возбудителей болезни значительно снижают эффективность метода ПЦР, поскольку нити ДНК неспособны последовательно синтезироваться.
Необходимость тщательно выбирать биоматериал для анализа.

Направляют на обследование по следующим показаниям:

Если был хотя бы единичный контакт с больным туберкулёзом и выявить заболевание с помощью стандартных анализов сложно.
Бывают ситуации, когда нет возможности привести человека для рентгена или других исследований. В таких случаях гораздо проще доставить мокроту.
Анализ назначается накануне предстоящей операции, когда необходимо определить, болен человек или нет.
Если у пациента сомнительный результат реакции Манту.
Назначают беременным и детям, чтобы избежать облучения от рентгена.

Выбор биоматериала для обследования на туберкулёз должен назначаться в индивидуальном порядке.

Для диагностики ПЦР на туберкулёз могут взять анализы:

Особенности анализа крови на туберкулёз:

Проводят в тех случаях, когда другие диагностики не подходят или противопоказаны. Например, для постановки верного диагноза требуется делать не один рентген-снимок. Для организма излишнее облучение небезопасно, поэтому взять кровь у пациента гораздо проще.
Также врач может дать направление на кровь при получении спорных результатов после флюорографии.

Анализ слюны менее популярен и информативен, чем другие исследования, так как туберкулёз не поражает слюнные железы. Поэтому в большинстве случаев результат будет отрицательным.
Метод направлен на выявление лёгочных и внелёгочных форм.
Если под действием реагента цвет образца не меняется, это означает, что возбудителей нет. Если все же возникает подозрение на болезнь, то проводится дополнительный комплекс анализов.

Анализ мокроты является наиболее информативным для выявления возбудителей туберкулёза. Пробы берут несколько раз, как правило, трёх раз достаточно. Это исключает возможность ошибок при получении некачественного материала.

Если человек заражён туберкулёзом, то вместе с кашлем будет выделяться мокрота в небольших количествах. У больных в запущенной стадии заболевания слизь будет выделяться с кровянистыми вкраплениями.

Не рекомендуется брать мокроту для обследования, если у пациента подозрения на туберкулёз костей или нервной системы.

Анализ мочи – это один из способов выявления внелёгочных форм заболевания: туберкулёз почек и мочеполовой системы.

При лёгочной форме заболевания общий анализ мочи практически неинформативен, так как не наблюдается ярко выраженных патологических изменений.

Из видео вы узнаете какой врач ставит диагноз туберкулёз. Снято каналом tuberculum. ru.

При сдаче анализа крови ПЦР стоит придерживаться некоторых правил для получения достоверного результата:

рекомендуется сдавать анализ натощак;
следует исключить алкоголь накануне обследования;
нужно закончить приём антибиотиков за 15–20 дней до анализа;
рекомендуется воздержаться от курения за час до забора крови.

При сдаче мокроты для обследования также рекомендуется следовать некоторым правилам:

материал собирают утром, поэтому предварительно чистят зубы и тщательно полоскают ротовую полость;
если мокрота плохо отходит, то рекомендуется вечером принять отхаркивающее средство или сделать ингаляцию;
необходимо прекратить приём антибиотиков за 15 дней до обследования.

Для получения достоверного результата анализа мочи, пациенту рекомендуется придерживаться следующих правил:

материал необходимо собирать с утра;
накануне не рекомендуется употреблять в пищу продукты, которые способны изменить цвет жидкости (свёклу, чернику и другие);
прекратить приём антибиотиков за 15 дней до обследования.

Особенности забора материала:

Анализ крови обязательно берётся у пациента утром из вены в лаборатории.
Для сдачи мокроты на слизь нужна обязательно из гортани и желательно без большого количества слюны. Её пациент должен сплюнуть в специальный стерильный контейнер, после чего сдать на исследование.
Врачи берут соскоб специальным инструментом со слизистой щеки.
Моча сдаётся в специальном контейнере. Берётся средняя часть утренней порции.

Молекулярно генетическая реакция посредством ПЦР проводится с помощью специального прибора, который называется амплификатор. Для изучения необходимы сегменты ДНК, с которых начинается синтез молекул.

Методика состоит из четырёх этапов:

Изначально собирается необходимый биоматериал для исследования (кровь, мокрота и слюна).
Затем образец прогревается при температуре до 98 градусов и не более двух минут. Таким образом, разрушается первичная форма генетики ДНК и образуются две цепочки.
Далее идёт отжиг или понижение температуры, за счёт чего праймер связывается с нитью ДНК.
Последний этап носит название элонгация. Это синтез молекул, который приводит к конечному результату.

Необходимо провести 25–30 подобных циклов, чтобы получить определённое количество копий ДНК вирусов. По ним и определяются возбудители заболевания.

Информативность и достоверность ПЦР диагностики составляет 100%.

Сроки изготовления анализа составляют порядка 5–6 часов.

Диагностика методом ПЦР даёт 2 варианта результатов:

Обнаружено. В материале, который исследовали, были выявлены ДНК туберкулёзного агента. Вероятность заражения составляет 97%. Таких пациентов быстро направляют в противотуберкулёзный диспансер, где и будет проводиться лечение.
Не обнаружено. Отрицательный ответ свидетельствует об отсутствии возбудителя заболевания.

При положительном результате врачом проводится развёрнутая расшифровка, которая определяет стадию и очаг болезни.

ПЦР назначают, если сомнителен результат пробы Манту или при малейшем подозрении на заражение. Провежение процедуры безапасно для детей.

Регион	Стоимость	Фирма
Москва	от 365 руб.	«ИНВИТРО»
Челябинск	от 140 руб.	«Областная клиническая больница №3»
Краснодар	от 350 руб.	«Солнечная»

Из видео узнаете что такое ПЦР и каким образом её проводят. Снято каналом СТС.

источник

Для выявления палочки Коха в организме человека, используют разные диагностические методы. Благодаря ним патологию можно обнаружить даже на начальном этапе, что увеличивает шансы больного на выздоровление. Анализ мокроты на туберкулез – это методика, которая наиболее ценится, так является достаточно эффективной. Что она собой представляет и сколько стоит такой анализ?

ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Данный способ эффективен по отношению к инфекционным болезням. Чтобы установить четкий диагноз не нужно собирать большое количество биоматериала и ждать много времени, как при бак-посеве мокроты.

В основе методики лежит получение ДНК частиц микроорганизма. Далее молекулярно-генетическое исследование определит, к какому типу микроорганизмов стоит отнести имеющийся материал. В пробирочных условиях за несколько часов специалист синтезирует молекулы бактерий и делает соответствующие выводы.

Анализ мокроты на микобактерии туберкулеза эффективен тогда, когда палочка Коха поразила органы дыхания. В таком случае без труда можно выявить болезнь, даже в первые часы инфицирования.

Но, анализ мокроты не покажет достоверного результата, если присутствует туберкулез:

костей;
головного, спинного мозга;
нервной системы;
суставов и пр.

Определить вид заболевания сможет фтизиатр, учитывая присутствующую симптоматику и опираясь на полученные результаты общих и иных анализов.

Также нецелесообразен такой метод исследования в том случае, когда нужно провести контрольный анализ после терапевтического лечения заболевания. Результат будет положительным, так как в организме в любом случае еще имеются живые или мертвые МБК. Тут лучше отдать предпочтение другой диагностической процедуре.

Как таковых противопоказаний для исследования мокроты на туберкулез при помощи ПЦР нет. Есть ограничения. Как уже говорилось выше, нет надобности в его проведении после лечения туберкулеза. Полученные результаты не принесут пользы. Тут желательно прибегнуть к иной диагностике.

Кроме этого, нет никаких иных препятствия для проведения этой диагностики. Исследовать мокроту можно в любой возрастной категории и при любых сопутствующих заболеваниях. Даже если нет обильного выхода мокроты, анализ можно сделать путем забора слизи с помощью бронхоскопии.

У рассматриваемого метода масса плюсов, к ним относится:

Высокая специфичность и чувствительность. Выявляется только возбудитель туберкулеза. Ложного ответа быть не может, если учтены все нюансы проведения процедуры. Микобактерии обнаруживаются даже тогда, когда их минимальное количество. Даже если в собранном материале 10 патологических клеток, инфекция будет выявлена.
Быстрота получения ответа. Сколько делается анализ? Уже через 3-5 часов можно получить результат. Тут не нужно делать посев мокроты на туберкулез, и это сужает сроки.
Выявить можно как скрытую инфекцию, так и ту, которая находится в острой форме.
Нет абсолютных противопоказаний. Это дает возможность проводить процедуру всем без исключения (даже маленьким детям) и особенно тогда, когда другие методы неразрешены.
При помощи ПЦР-диагностики изучается различный биоматериал (урина, кал, кровь, слюна, спинномозговая жидкость и др.).
Метод выявляет туберкулез и на ранних стадиях, в первые часы после заражения.

к содержанию ↑

Помимо положительных сторон, есть и отрицательные. Это:

Анализ на ПЦР – дорогое «удовольствие». Кроме этого, оборудование, необходимое для его проведения имеется не в каждом медицинском центре. В поликлиниках оно присутствует редко, так как его стоимость также велика. Если говорить о частных клиниках, то да, найти такой вид диагностики можно. Позволить его себе, к сожалению, может не каждый.
Показывает ложноположительный результат у тех людей, которые недавно прошли курс противотуберкулезного лечения.
Если МБК мутировали, то метод может также дать ложные результаты.
Если материал собран неправильно, или специалист, который проводит исследование, имеет недостаточный квалификационный уровень, то также возможен сбой. В некоторых случаях повторять процедуру придется несколько раз и каждый раз оплата повторяется.

к содержанию ↑

Чтобы материал был качественным, его нужно собрать правильно и подготовиться к этому как следует.

Существуют определенные правила сбора мокроты на туберкулез. Алгоритм действий заключается в следующем:

Еще накануне, вечером человеку нужно выпить отхаркивающее средство (если мокрота плохо отходит). Если даже это не помогло, следует провести ингаляцию на основе лекарственного разжижающего и отхаркивающего препарата. При отсутствии мокроты пациента нацеливают на то, что будет производиться бронхоскопия. Именно во время этой процедуры и берется материал для исследования.
Заранее приобрести специальную емкость. Она стерильная и герметичная, поэтому ничего лишнего туда помещать нельзя, также как и открывать заранее.
Помещение, где будет собираться мокрота должно хорошо вентилироваться. Нужно открыть окна, двери, включить вытяжку. Еще один неплохой вариант – выйти на свежий воздух (например, на балкон или во двор).
Непосредственно перед процедурой нужно всех предупредить, чтобы никто не входил в комнату, где будет все происходить. Никаких лишних микрочастиц в биоматериале быть не должно – это важно.
Принимать пищу до сбора не рекомендуется.
Рот и глотка полощутся.
Слюна выплевывается. Ее в емкость должно попасть минимальное количество.
Путем откашливания человек выводит мокроту наружу и сплевывает ее в подготовленный контейнер. После окончания процедуры нужно плотно закрыть крышку и отвести образец в лабораторию.

Как правильно собрать мокроту должен рассказать врач. Если больной не решается сделать это самостоятельно, то на помощь приходят медработники. Во время манипуляции они надевают специальную защитную маску. Собирать мокроту будут в специальном кабинете, куда нет хода посторонним. Если прийти в клинику больной не может, то специалист приезжает к нему на дом и помогает осуществить сбор слизи.

Если делается бронхоскопия, то больному вводят в трахею прибор – бронхоскоп. Именно с его помощью и производится забор материала.

Для достоверности целесообразно сдать анализ трижды, а именно:

в утренние часы натощак;
после первого раза через 4-5 часов;
через 24 часа после первого исследования и тоже до приема пищи.

к содержанию ↑

Сдать анализ мокроты на туберкулез – это только часть работы. Основное впереди. Многое зависит от того, как подготовлен специалист.

Ход исследования следующий:

Специалист приступает к разрушению первичной структуры ДНК (денатурации). Тут имеется две цепочки. При высокой температуре они разъединяются.
На следующем этапе производится снижение температуры (отжиг). Это необходимо для связи нити ДНК с праймером.
Третий этап – элонгация. Тут синтезируются нужные молекулы.

к содержанию ↑

Микобактерии туберкулеза в мокроте методом ПЦР могут быть обнаружены или же нет. Положительный результат основан тем, что в биоматериале имеется ДНК палочки Коха. Это говорит о том, что человек заражен. При отрицательном – 98% того, что обследуемый не является инфицированным.

По показателям можно судить о том:

в какой фазе патология (латентной или активной);
насколько организм поражен;
эффективно ли выбранное лечение в конкретном случае.

Имейте в виду, что ничто не досконально. Поэтому и тут может быть ложноположительный или ложноотрицательный результат. Чтобы убедиться в его правильности, рекомендованы иные диагностические процедуры или же прохождение ПЦР дважды (трижды).

Сдать мокроту на ПЦР можно в разных клиниках. Приведем примеры нескольких популярных московских центров с ценовой политикой.

Наименование медицинского центра	Адрес	Цена за анализ
Медицинская лаборатория Биотест	Москва, Куркино, Родионовская улица, 3	600 рублей
Медицинская лаборатория Дитрикс Медикал	Москва, Чертаново Южное, Кировоградская улица, 38, к. 1	810 рублей
Медицинская лаборатория Инвитро	Москва, Алексеевский, Кулаков переулок, 13	845 рублей

Кроме вышеуказанных адресов имеются и другие. Узнать о месторасположении всех лабораторий можно на их сайте. Из приведенных примеров видно, что стоимость анализа велика, но если учитывать его результативность, то это того стоит.

ПЦР-диагностика – это один из эффективных диагностических методов, активно используемых в современной медицине. Сбор мокроты на микобактерии туберкулеза может осуществляться как самостоятельно в домашних условиях, так и при помощи специалиста. Если мокрота не отходит, то делают бронхоскопию. Важна предварительная подготовка. Правильно сдать биоматериал – это уже полдела. Мокрота при туберкулезе будет иметь в себе микобактерии, обнаружить которые при ПЦР не составит труда, даже если их там небольшое количество. Огромный плюс данного способа – это выявление заболевания в первые часы после заражения. Использовать в диагностических целях можно как у взрослых, так и у детей.

Даже внушительная сумма не может остановить человека получить достоверную информацию касательно здоровья близкого человека или его собственного.

источник

Туберкулёз — специфическая инфекция, его очаг может находиться в тканях человека годами, а после чего распространиться в течение нескольких месяцев. Это хроническое заболевание, оптимальные схемы лечения которого сложно подобрать. Одна из причин этого — запоздавшая диагностика, когда микобактерии, находясь в организме человека, уже адаптировались ко многим препаратам.

Какие современные методы постановки диагноза существуют? ПЦР диагностика — что это такое? Как проводится это исследование? В каких случаях туберкулёз диагностируется этим методом и в чём его суть?

Это один из самых современных методов диагностики не только заболеваний, но и обнаружения биологического материала. ПЦР диагностика была изобретена относительно недавно. Около 30 лет назад в 1983 году американский биохимик Кэри Бэнкс Муллис предложил сложную схему восстановления биологического материала микроорганизмов по одному краткому сегменту. Благодаря своему открытию учёный был удостоен наивысшей награды — Нобелевской премии.

Что это такое — ПЦР диагностика инфекций? Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это диагностика выявления вирусных заболеваний, основанная на методах генной инженерии. Она широко применяется в медицинской микробиологии, иммунологии и вирусологии. Метод универсальный и помогает поставить диагноз при малом количестве материала. Выявить инфекцию можно буквально в первые часы заражения ею, задолго до того, как проявятся первые симптомы заболевания.

Суть метода заключается в получении из материала от больного человека не самого возбудителя, а фрагментов генома (частиц ДНК), его биосинтезе с последующим определением к какому классу микроорганизмов принадлежит полученный генетический материал с помощью молекулярно-генетических методов.

Несмотря на то что это сложный процесс, он занимает намного меньше времени, чем многие биологические способы обнаружения возбудителей инфекций. В течение всего нескольких часов с помощью ПЦР удаётся обнаружить микроорганизм. Для этого нет необходимости выделять его из среды (крови, спинномозговой жидкости, мокроты) и долго выращивать на искусственных питательных средах. Достаточно чтобы в исследуемом материале присутствовал небольшой фрагмент нити ДНК возбудителя инфекции.

В основе реакции лежит возможность в искусственных условиях (в пробирке) создать синтез молекул нуклеиновых кислот возбудителя инфекции.

Что необходимо для проведения ПЦР?

Праймеры — участки ДНК, с которых и начинается биосинтез или создание.
Нуклеотиды или сложные соединения, которые являются основой молекулы ДНК либо РНК.
Полимеразная цепная реакция невозможна без присутствия полимеразы, которая представляет собой фермент ускоряющий ход ПЦР.

Как проводится молекулярная диагностика методом ПЦР? Процедура несложная и занимает короткий промежуток времени с учётом сбора материала.

Перед началом исследования берут необходимый биологический материал — это промывные воды бронхов, кровь, желудочное содержимое, мокрота. Тип биологического материала зависит от предполагаемого возбудителя.
Денатурация или разрушение первичной структуры ДНК, которая состоит из двух цепочек. Суть этого этапа — разъединить две цепи под воздействием высокой температуры (максимальная — 98 ºC, которая действует не более двух минут).
На следующей стадии ПЦР, под названием — отжиг, температуру снижают на несколько градусов, чтобы праймер связался с нитью ДНК.
Элонгация, в процессе которой происходит непосредственно синтез нужных молекул.

В результате всего 25–30 таких циклов получают нужное количество копий ДНК микроорганизмов, которые легко распознать.

Нет возможности абсолютно всем людям с подозрением на туберкулёз проводить ПЦР, так как метод требует наличия дорогостоящего оборудования. Не все государственные поликлиники могут себе позволить купить его. Кроме этого, так сложилось, что привычные методы диагностики инфекции в большинстве случаев тоже себя оправдывают.

опрос пациента, сбор анамнеза;
полноценный осмотр человека;
исследование с помощью туберкулиновой пробы Манту;
рентгенография или флюорография;
компьютерная диагностика при необходимости;
микробиологические методы исследования: микроскопия мазка и бактериологическое исследование мокроты.

ПЦР на туберкулёз проводится в особых случаях, когда сложно поставить диагноз или нет возможности провести другие инструментальные методы.

Несмотря на изобилие способов диагностики заболеваемость туберкулёзом продолжает расти. В настоящее время отмечается не только её рост, но и другие особенности:

болезнь часто протекает в тяжёлой форме;
повышается количество летальных случаев;
всё чаще диагностируются устойчивые к современным химиопрепаратам формы заболевания.

Нежелание самих людей ежегодно проходить обычные профосмотры, отказ от вакцинации приводит к распространению туберкулёза. В таких условиях нужны быстрые, информативные и эффективные методы исследования, которые должны быть доступны для детей и взрослых. Все вышеперечисленные методы диагностики во многом уступают ПЦР.

Это исследование хоть и новое, но хорошо себя зарекомендовало, особенно в спорных случаях, когда диагноз поставить невозможно по ряду причин.

Благодаря ПЦР намного легче обнаружить в исследуемом материале ДНК возбудителя туберкулёза.

Преимущества ПЦР диагностики в следующем.

Это быстрый анализ. По небольшому фрагменту молекулы ДНК можно установить диагноз всего за несколько часов (около пяти), что успешно используется в экстренных ситуациях, когда, например, перед операцией нужно установить не болен ли человек туберкулёзом.
Анализ ПЦР допускается в случае, когда другие методы недоступны или запрещены (для обнаружения туберкулёза лёгких иногда приходится сделать несколько рентгенографических снимков, что составит большую дозу облучения).
С помощью ПЦР проводится исследование любой биологической среды на присутствие в ней возбудителя. К примеру, можно провести исследование спинномозговой жидкости, если есть подозрение на туберкулёзный менингит.
Разрешена ПЦР диагностика инфекционных заболеваний в детском возрасте, так как метод безопасен.
Позволяет выявить возбудителя на любой стадии развития болезни.
Высокая чувствительность ПЦР позволяет обнаружить микобактерии туберкулёза, даже если в биологическом материале всего несколько микроорганизмов.
Хорошо его проводить для диагностики рецидива заболевания.

После всего прочитанного ПЦР кажется практически идеальным методом диагностики, который должны делать всем с подозрением на туберкулёз. Но и здесь есть свои минусы, их необходимо учитывать.

В наше время такая диагностика скорее редкость, чем закономерность. И для этого есть основания.

Это дорогой метод исследования. Во многих поликлиниках оборудование для проведения ПЦР отсутствует из-за высокой его стоимости, но в платных лабораториях анализ всё-таки можно сделать.
Сразу после проведённого лечения мёртвые микобактерии или живые в незначительном количестве могут ещё присутствовать в организме человека (при проведении ПЦР диагностики результат будет положительным), поэтому в это время метод будет недостоверным, проводить его нет смысла.
Мутации микобактерий приводят к неэффективности ПЦР — не может синтезироваться нормальная последовательность нити ДНК.
Нужно правильно выбирать среду для исследования, кровь берут только при подозрении на её заражение (сепсис), нет необходимости брать мокроту если под вопросом стоит туберкулёз органов нервной системы. В таком случае ПЦР не сможет обнаружить возбудителя и диагностика будет неинформативной.

ПЦР диагностика туберкулёза проводится чаще всего в спорных случаях. Когда врачи направляют на это исследование?

Если сложно поставить диагноз обычными доступными методами, но был контакт с больным туберкулёзом.
В случае, когда человека невозможно доставить на исследование в поликлинику для прохождения рутинных привычных исследований на туберкулёз, его легче обследовать с помощью ПЦР, так как мокроту для исследования можно доставить в баночке, а диагноз подтверждается в течение нескольких часов.
Если человеку предстоит экстренная операция и нужно срочно выяснить болен ли он туберкулёзом.
При необходимости беременную женщину тоже лучше обследовать на туберкулёз с помощью ПЦР, так как метод безопасен.
На платной основе диагностику может пройти каждый, у кого туберкулёз не был подтверждён с помощью бактериологических методов и рентгеноскопии. Такое бывает, когда очаг в лёгких незаметен на прямом снимке, а человек при сдаче мокроты на исследование не смог соблюсти рекомендации по правильному забору материала. При этом человека беспокоят все симптомы, характерные для туберкулёза лёгких.
Когда есть сомнения в результатах пробы Манту.
Предпочтительнее делать ПЦР диагностику туберкулёза у детей. Процедура безопасна, не создаёт дополнительную лучевую нагрузку, эффективна в отношении обнаружения сложных для диагностики форм заболевания.

Своевременная диагностика туберкулёза — это залог правильно назначенного лечения и снижения распространения заболевания. Часто знакомые методы выявления болезни не всегда эффективны. Поэтому ПЦР на сегодня является одним из самых достоверных и безопасных способов обнаружения инфекции на ранних этапах её развития.

источник

Туберкулез — опасное заболевание, которое успешно лечится при своевременной диагностике.

Одно из наиболее информативных исследований, позволяющих выявить недуг на ранней стадии, носит название метод ПЦР (полимеразной цепной реакции).

Анализ ПЦР — не только самое информативное, но и одно из самых доступных исследований, которое позволяет выявить туберкулез на ранних стадиях.

Все живые микроорганизмы, включая вирусы и бактерии, содержат в своей структуре молекулы РНК и ДНК. Выделив эти кислоты, можно с большой достоверностью сказать, какие чужеродные агенты присутствуют в крови человека, и поставить точный диагноз.

Суть метода ПЦР заключается в особой обработке образцов биологических жидкостей, в результате чего можно определить, к какому виду относятся присутствующие в нем микроорганизмы.

Методика ПЦР применяется у людей с тяжелыми поражениями легких в тех случаях и респираторными проявлениями (сильный кашель, кровохаркание), когда точно диагностировать болезнь по клиническим симптомам невозможно.

Рекомендуется пройти исследование и после непосредственного контакта с носителем заболевания. В число преимуществ, которыми он обладает, входят:

скорость выполнения — для получения результата не нужно выращивать культуру возбудителя или проводить другие сложные процедуры;
высокая информативность — при диагностике туберкулеза точность анализа достигает 90% и выше;
высокая чувствительность и специфичность — для выявления возбудителей болезни в материале может содержаться всего одна клетка вируса;
универсальность — для анализа подходят практически любые биологические жидкости: мокрота, кровь, смывы бронхов.

Для сравнения: точность микроскопии мазков мокроты, которая используется для выявления туберкулеза, составляет всего 40-50%, а при низком количестве возбудителей снижается до 10% и меньше. Культуральные исследования мокроты более информативны, но для получения результатов требуется от 2 до 8 недель.

Можно использовать ПЦР на туберкулез вместо Манту, если у человека имеются какие-либо противопоказания к пробе.

К недостаткам методики относится риск получения ложноотрицательного результата. Иными словами, отсутствие в мокроте, крови или моче специфического ДНК еще не говорит об отсутствии туберкулеза у больного.

Важно. При диагностике туберкулеза у детей чувствительность анализа ПЦР ниже, чем у взрослых, и составляет около 25-83%.

Фото 1. Делать ПЦР вместо Манту ребенку, это хороший вариант, если он аллергик или часто болеет.

Процедура проведения анализа ПЦР проводится посредством специального прибора под названием амплификатор, и состоит из четырех этапов. Для проведения исследования необходимы участки ДНК, с которых начинается синтез молекул, нуклеотиды (основы молекул ДНК), а также полимераза, или фермент, ускоряющий проведение процедуры.

Забор биологического материала (мокрота, кровь, смывы бронхов).
Прогревание образца до температуры около 98% для разрушения первичной структуры цепочки ДНК.
Отжиг, или снижение температуры на несколько градусов, чтобы связать праймер с нитью ДНК.
Синтез молекул, необходимых для получения результата.

После проведения 25-30 подобных циклов образуется определенное количество копий ДНК вирусов, по которым легко определить возбудителя заболевания.

Внимание: анализ ПЦР не отличает «мертвые» микроорганизмы от «живых», поэтому результат может быть положительным в течение определенного времени после проведенного лечения.

Если сдается анализ крови ПЦР на туберкулез, то нет необходимости в специальной подготовке, но больным рекомендуется придерживаться общих правил: воздержаться от приема пищи не менее чем на 8 часов, исключить алкоголь и прием медикаментозных препаратов, не курить в течение часа перед забором материала.

Мокроту собирают в утреннее время после чистки зубов и тщательного полоскания полости рта.

Если экссудат выделяется плохо, накануне вечером следует принять отхаркивающий препарат или сделать ингаляцию. Диагностическую ценность имеет мокрота со слизью, гноем, белыми или желтоватыми вкраплениями.

Если взять мокроту на анализ невозможно, для выявления возбудителей заболевания используются смывы из бронхов. Такой анализ не требует подготовки, а забор материала выполняется следующим образом. С помощью гортанного шприца больному вливают в трахею раствор хлорида натрия, который вызывает сильный кашель — выкашлянная жидкость используется для исследования.

Внимание. Результат анализа искажают антибиотики, гепарин и другие препараты, использующиеся для местного лечения, поэтому исследование рекомендуется проводить через 10-14 дней после приема.

источник