Приготовить мазок из мокроты больного

Микроскопическое исследование мокроты, промывных вод бронхов, лаважной жидкости для диагностики гельминтозов.

Исследование мокроты

Необходимые реактивы и оборудование
1. Раствор NaOH или КОН 0,5 %-ный
2. Центрифужные пробирки
3. Предметные стекла, большие предметные стекла
4. Центрифуга
5. Микроскоп

Подготовка к работе
Мокроту, представляющую собой патологический секрет дыхательных путей вместе с отделяемым носоглотки и полости рта, собрать в стерильную (можно прокипяченную стеклянную емкость с крышкой и исследовать сразу после доставки в лабораторию. Исследуется мокрота, выделенная при откашливании (не слюна и не слизь с носоглотки).
При слизисто-гнойной мокроте для лучшего растворения слизи, гноя:
• мокроту смешать с равным объемом 0,5 %-ного раствора едкой щелочи;
• слегка подогреть пробирку на водяной бане;
• пробирку энергично встряхивать в течение 5 мин.

Исследование нативного мазка мокроты

Ход исследования
• Мокроту из стеклянной емкости пипеткой переносят на предметное стекло (лучше большое).
• Приготовить мазок путем равномерного растирания между двумя предметными стеклами или нанесения и равномерного растирания палочкой на большом предметном стекле.
• Микроскопировать при увеличении: объектив х8 или х10, окуляр х10, для уточнения морфологических особенностей окуляр х40.

Исследование мокроты с центрифугированием
Ход исследования
• Перелить мокроту в центрифужные пробирки.
• Центрифугировать в течение 3—5 мин при 1500 об/мин.
• Слить надосадочную жидкость.
• Перенести осадок пипеткой или сразу из пробирки на предметное стекло.
• Микроскопировать при увеличении: объектив х 8 или х 10, окуляр х 10, для уточнения
морфологических особенностей окуляр х 40.
Эффективность метода
• Эффективен для выявления яиц гельминтов, паразитирующих в легких, бронхах (яйца парагонимуса томинкса), иногда яиц шистосом.
• Менее эффективен при диагностике личиночных стадий кишечных нематод в период миграции через легкие (личинки аскарид, анкилостомид, стронгилоидеса).
• Иногда можно обнаружить личиночные стадии эхинококков (сколексы эхинококка, альвеококка) при поражении легких и прорыве пузырей в бронх.
Применение метода
• Для диагностики легочных гельминтозов.

Исследование окрашенных мазков на пневмоцистоз
Необходимые реактивы и оборудование
Химреактивы
1.Для приготовления мазков — муколитики (0,3 %-ный дитиотреитол в 0,02 М ЭДТА, рН=7,0) или ацетилцистеин, или 4 %-ный р-р NaOH; формалин, спирт.
2. Для окраски мазков по Романовскому-Гимзе — смесь Никифорова; сульфатно-уксусный реагент (45 мл ледяной уксусной кислоты и 15 мл концентрированной серной кислоты) -10 %-ная краска Романовского-Гимзы в фосфатном буфере рН=7,2.
3. Для окраски мазков толуидиновым синим — толуидиновый синий 0,15 %-ный (75 мг толуидинового синего + 15 мл дистиллированной воды + 0,5 мл концентрированной соляной кислоты + 35 мл абсолютного спирта); водный метиловый желтый 0,25 %-ный,
4. Для окраски по Гомори-Грохотту — формалин 10 %-ный; дистиллированная вода; раствор хромовой кислоты (5 г хромовокислого оксида + 95 мл дистиллированной воды), 1 %-ный раствор метабисульфита калия (или натрия); рабочий раствор серебра (100 мл водного 3 %-ного раствора метенамина или
уротропина + 5 мл водного 5 %-ного нитрата серебра) — готовится непосредственно перед употреблением; 5 %-ный водный тетраборат натрия (бура); диметилсульфоксид; раствор хлорного золота 0,2 %-ный; водный раствор тиосульфата соды 2 %-ный; лихтгрюн (0,02 г лихтгрюна + 100 мл дистиллированной воды + 5 капель ледяной уксусной кислоты).
5. Для окраски акридиновым оранжевым — маточный раствор: 100 мл акридина оранжевого растворяют в 100 мл дистиллированной воды, рабочий раствор готовится при разведении маточного раствора в 10—100 раз физиологическим раствором, абсолютный метанол (получают обезвоживанием с помощью окиси кальция с последующей дистилляцией).

Оборудование
1. Центрифужные пробирки
2. Стеклянные палочки
3. Предметные стекла
4. Термостат
5. Центрифуга
6. Микроскоп

Подготовка к работе
• Мокроту или другой материал рекомендуется исследовать немедленно. В исключительных случаях возможно временное сохранение лаважной жидкости с помощью консервации:
а) лаважную жидкость слить в стоящую во льду посуду с 50 мл раствора Хенкса коммерческого, рН=7,2—7,4;
б) лаважную жидкость заморозить до -4° С.
• Подготовка предметных стекол: желательно использовать альбуминизированные стекла.

Ход исследования
Приготовление мазков мокроты

• Поместить мокроту в центрифужную пробирку.
• Добавить равное количество муколитика.
• Полученную смесь быстро перемешать.
• Поместить в термостат при температуре 37 °С на 5—15 мин,
• Развести смесью формалина и спирта (1:1).
• Центрифугировать 10 мин при 1500 об/мин.
• Слить надосадочную жидкость.
• Осадок перенести на 4—8 предметных стекол.
• Осадок нанести на стекло в виде тонкого мазка.
• Мазок высушить на воздухе.

Приготовление мазков лаважной жидкости

• Поместить лаважную жидкость в центрифужную пробирку.
• Добавить равное количество 50°-ного спирта и перемешать.
• Центрифугировать 20 мин при 2500 об/мин.
• Слить надосадочную жидкость.
• Осадок перенести на 4—8 предметных стекол.
• Осадок нанести на стекло в виде тонкого мазка.
• Мазок высушить на воздухе.

A) Скрининговая окраска по Романовскому-Гимзе

• Высушенный мазок фиксируют в смеси Никифорова в течение 10—15 мин.
• Опустить мазок в сульфатно-уксусный реагент на 10 мин.
• Промывать проточной водой в течение 5 мин.
• Высушить мазок на воздухе.
• Окрашивать 10 %-ной краской Романовского-Гимзы в течение 30 мин.

Результат: цитоплазма трофозоитов голубоватая, ядро — розовое, внутрицист тельца имеют фиолетовое ядро.

Б) Окончательная или специфическая окраска толуидиновым синим

• Высушенный мазок фиксируют в 10 %-ном растворе формалина.
• Промыть дистиллированной водой.
• Опустить мазок в сульфатно-уксусный реагент на 5 мин.
• Реагент перемешать стеклянной палочкой.
• Оставить мазок в сульфатно-уксусном реагенте еще на 10 мин.
• Промыть проточной водой.
• Высушить мазок на воздухе.
• Окрашивать 0,15 %-ным толуидиновым синим в течение 3 мин.
• Промыть проточной водой.
• Высушить мазок на воздухе.
• Докрашивать в 0,25 %-ном растворе водного метанилового желтого в течение 2 мин.
• Промыть водой.

Результат: четко дифференцируется стенка пневмоцист, но не дает представление клеточном содержимом; цисты сине-фиолетовые, тканевые элементы и фон — зелен: желтые.

Б) Окончательная или специфическая окраска по Гомори-Грохоту
Высушенные мазки фиксируют в 10 %-ном растворе формалина в течение 5—10 мин Промыть дистиллированной водой.
Быстро подогреть раствор хромовой кислоты в стакане до 65 °С. В нагретый раствор быстро погрузить мазки на 1 мин. Промыть дистиллированной водой.

• Опустить мазки в 1 %-ный раствор метабисульфита калия на 1 мин.
• Приготовить раствор: 25 мл рабочего раствора серебра + 25 мл дистиллированной воды +2 мл 5 %-ного водного тетрабората натрия + 15 мл диметилсульфоксида.
• Опустить мазки в приготовленный раствор.
• Подогреть до 90—95 °С, пока мазки не станут темно-коричневыми, а раствор светло-серым.
• Прополоскать мазки в трех сменах дистиллированной воды.
• Опустить мазки в 0,2 %-ный водный раствор тиосульфата соды
• Промыть дистиллированной водой.
• Окрашивать лихтгрюном в течение 5 мин.
• Промыть дистиллированной водой.

Результат: цисты светло- или темно-коричневые (цвет зависит от толщины мазка), округлой или чашеобразной формы, окружающий фон и тканевые элементы зелено-желтые.

Г) Окраска акридином оранжевым.

• Высушенные мазки фиксируют в абсолютном метаноле в течение 2 мин.
• Окрасить рабочим раствором акридина оранжевого 10 мин.
• Промыть дистиллированной водой.
• Высушить окрашенные мазки на воздухе.
• Микроскопировать под масляной иммерсией при увеличении: объектив х90 или х100, окуляр х7 или х10.

• Метод эффективен при условии немедленного исследования материала и использования двух вариантов окрашивания параллельно.

• Метод применяют для диагностики пневмоцистоза.
• Другой материал на пневмоцистоз (слизь из горла и гортани, аспираты из бронхов, биоптаты и мазки-отпечатки легочной ткани) исследуется так же, как и мокрота.

источник

Анализ мокроты — показание, как правильно собрать и сдавать, расшифровка результатов и показатели нормы

При бронхите и других воспалительных заболеваниях необходимо сдавать общий анализ мокроты, проанализировав результаты которого, врач сможет определить характер и причину развития патологического процесса. При поражениях дыхательных органов выделяется слизистый секрет, который несет в себе информацию о возбудителях, ставших катализаторами ухудшения состояния организма. Это могут быть микробактерии туберкулеза, клетки злокачественных опухолей, примеси гноя или крови. Все они влияют на количество и состав выделяемой пациентом мокроты.

Исследование мокроты является одним из самых эффективных методов, позволяющих определить характер заболевания дыхательных путей. Многие недуги представляют серьезную угрозу для жизни человека, например, такие болезни как актиномикоз, гнилостный бронхит, гангрена легкого, пневмония, бронхиальная астма, абсцесс легкого и т.д. Попадая в организм человека, вредоносные микроорганизмы способствуют развитию патологического процесса, который стимулирует выделение секрета из органов дыхания.

Чтобы диагностировать болезнь, врачи проводят общий анализ, который включает несколько этапов: бактериологический, макроскопический, химический и микроскопический. Каждое исследование содержит важную информацию о секрете, на основе чего происходит итоговое составление медицинского заключения. Анализы подготавливают около трех рабочих дней, в некоторых случаях возможны задержки на более длительный срок.

Микроскопия мокроты проводится среди пациентов, страдающих заболеваниями легких или других органов дыхания, с целью выявления причины недуга. Слизистый секрет выделяется только при наличии патологических отклонений в работе организма, поэтому при появлении выделений из дыхательных путей следует как можно скорее обратиться к врачу. Отхождение мокроты происходит во время кашля, микроскопический анализ слизи помогает получить всю необходимую информацию о локализации и стадии воспалительного процесса.

Цвет и консистенция мокроты могут быть разными в зависимости от болезни. Исходя из полученных данных, врачи определяют возбудителя патологии и подбирают рациональный курс лечения. Присутствие в секрете патогенных микроорганизмов способствует подтверждению или опровержению наличия злокачественных опухолей, что немаловажно при постановке окончательного диагноза.

Сдавать посев мокроты для проведения общего анализа необходимо тем пациентам, у которых присутствует подозрение на хронические или острые заболевания дыхательной системы. Например, бронхит, рак легкого, туберкулез, пневмония. Данная группа людей находится в категории риска, поэтому регулярные исследования секрета являются неотъемлемой частью комплексной терапии заболеваний. Собирать слизь приходится даже после прохождения курса лечения, поскольку некоторые недуги имеют тенденцию к временному прекращению активности.

Данная процедура требует от пациентов соблюдения определенных правил, которые гарантируют «чистоту» проведения исследования. Ротовая полость человека содержит особую флору, которая может смешиваться с патогенным секретом. Чтобы предоставить корректные данные медицинской комиссии, пациент должен придерживаться следующих рекомендаций:

1. Пить много теплой воды.
2. Принимать отхаркивающие средства.
3. Почистить зубы и прополоскать рот перед процедурой.

Перед тем, как сдавать мокроту на анализ, ее необходимо собрать в домашних или амбулаторных условиях. Пациенту выдают стерильную баночку, которую следует открывать непосредственно перед процедурой. Лучше всего собирать секрет с утра, поскольку в это время суток он является самым свежим. Мокроту для исследования нужно постепенно выкашливать, но, ни в коем случае, не отхаркивать. Чтобы улучшить выделение слизи, врачи рекомендуют:

1. Сделать 3 медленных вдоха и выдоха, задерживая дыхание между ними на 5 секунд.
2. Откашляться и сплюнуть накопившуюся мокроту в баночку для анализов.
3. Убедиться, что слюна из ротовой полости не попала в емкость.
4. Повторять вышеуказанные действия до тех пор, пока уровень секрета не достигнет отметки 5 мл.
5. В случае неудачи, можно подышать паром над кастрюлей с горячей водой для ускорения процесса отхаркивания.

Как только сбор мокроты завершен, баночку следует отвезти в лабораторию для проведения анализа. Важно, чтобы секрет был свежим (не более 2 часов), поскольку в человеческой слизи очень быстро начинают размножаться сапрофиты. Данные микроорганизмы мешают правильной постановке диагноза, поэтому все время от сбора до транспортировки емкость со слизью необходимо хранить в холодильнике.

Длительный кашель, который не прекращается на протяжении трех недель, считается показанием для исследования мокроты. Подозрение на туберкулез – серьезный диагноз, поэтому патогенную слизь собирают только под присмотром врача. Данный процесс может происходить в стационарных или амбулаторных условиях. Сдавать мокроту при подозрении на туберкулез приходится 3 раза.

Первый сбор проходит рано утром, второй – по прошествии 4 часов, а последний – на следующий день. Если пациент по какой-то причине не может самостоятельно прийти в больницу для сдачи анализов, к нему домой наведывается медсестра и доставляет полученный секрет в лабораторию. При обнаружении бактерий Коха (микробактерий туберкулеза) врачи ставят диагноз – открытая форма туберкулеза.

Расшифровка анализа мокроты состоит из трех этапов. Сначала лечащий врач проводит визуальный осмотр пациента, оценивает характер, цвет, слоистость и другие показатели патогенного секрета. Полученные образцы изучают под микроскопом, после чего наступает черед бактериоскопии. Завершающим исследованием является посев на питательные среды. Бланк с результатами выдается в течение трех дней по завершению сдачи анализов, исходя из полученных данных, специалист делает вывод о характере заболевания.

Чтобы правильно поставить диагноз пациенту, мокроту оценивают по трем разным показателям. Проводится макроскопический, бактериоскопический и микроскопический анализ, результаты по каждому исследованию дают четкое представление о состоянии человека. Цвет, консистенция, запах, деление на слои и наличие включений – это основные показатели макроскопического анализа секрета. Например, прозрачная слизь встречается у людей с хроническими заболеваниями дыхательных путей.

Ржавый оттенок секрета обусловлен кровянистыми примесями (распад эритроцитов), что часто свидетельствует о наличии туберкулеза, крупозной пневмонии, рака. Гнойная мокрота, которая образуется при скоплении лейкоцитов, характерна для абсцесса, гангрены или бронхита. Желтый или зеленый цвет выделений является показателем патологического процесса в легких. Вязкая консистенция секрета может быть следствием воспаления или приема антибиотиков.

Спирали Куршмана в мокроте, которые представляют собой белые извитые трубочки, свидетельствуют о наличии бронхиальной астмы. Результаты микроскопического и бактериоскопического анализа предоставляют информацию о содержании в слизи болезнетворных микроорганизмов или бактерий. К ним относятся: диплобациллы, атипичные клетки, стафилококки, эозинофилы, гельминты, стрептококки. Серозная мокрота выделяется при отеке легких, пробки Дитриха встречаются у пациентов, страдающих гангреной или бронхоэктазами.

У здорового человека железы крупных бронхов образуют секрет, который проглатывается при выделении. Данная слизь обладает бактерицидным эффектом и служит для очищения дыхательных путей. Однако появление даже незначительного количества мокроты свидетельствует о том, что в организме развивается патологический процесс. Это может быть застой в легких, острый бронхит или пневмония. Единственным исключением являются курильщики, поскольку у них слизь выделяется постоянно.

Наличие единичных эритроцитов при анализе секрета является нормой и не оказывает влияния на диагностические результаты. Объем ежедневно вырабатываемой трахеобронхиальной слизи у человека должен находиться в переделах от 10 до 100 мл. Превышение указанной нормы свидетельствует о необходимости проведения дополнительных анализов. При отсутствии отклонений мазок на МТБ должен показать отрицательный результат.

В норме у человека не должно происходить отхождение мокроты, поэтому при появлении слизи подозрительного характера необходимо сразу же обратиться за помощью к специалисту. С помощью бактериоскопического исследования определяется тип возбудителя, мазок с грамположительными бактериями окрашивается в синий цвет, а с грамотрицательными – в розовый. Микроскопический анализ помогает обнаружить опасные патологии, к которым относятся опухолевые клетки, эластичные волокна, альвеолярные макрофаги и т.д. Исходя из полученных результатов слизи, врач назначает терапию.

При микроскопическом исследовании мокроты часто встречаются клетки плоского эпителия, однако это никак не влияет результаты анализа. Обнаружение клеток цилиндрического эпителия может свидетельствовать о наличии таких недугов, как астма, бронхит или рак легкого. В большинстве случаев вышеупомянутые образования являются примесями слизи из носоглотки и не имеют диагностического значения.

Клетки ретикулоэндотелия можно обнаружить у людей, которые длительное время находились в контакте с пылью. Протоплазма альвеолярных макрофагов содержит фагоцитированные частицы, которые называют «пылевыми» клетками. Некоторые из вышеуказанных микроорганизмов включают продукт распада гемоглобина – гемосидерин, поэтому им было присвоено название «клетки сердечных пороков». Такие образования возникают у пациентов с диагнозами инфаркт легкого, митральный стеноз, застой легкого.

Любой секрет содержит небольшое количество лейкоцитов, однако скопление нейтрофилов свидетельствует о том, что имеются гнойные выделения. При бронхиальной астме у пациента можно обнаружить эозинофилы, что также характерно и для следующих заболеваний: рак, туберкулез, инфаркт, пневмония, гельминтоз. Большое число лимфоцитов встречаются у тех людей, которые болеют коклюшем. Иногда причиной повышения их количества выступает туберкулез легких.

Слизь человека может содержать единичное количество эритроцитов, что никак не влияет на состояние его здоровья. При развитии таких патологических процессов, как легочное кровотечение, количество эритроцитов сильно возрастает, что приводит к кровохарканью. Наличие свежей крови в слизистых выделениях говорит о наличии неизменных эритроцитов, но если кровь задерживалась в дыхательных путях, то по ней определяют выщелоченные клетки.

При распаде легочной ткани образуются так называемые эластичные волокна. Их появление в секрете свидетельствует о наличии абсцесса, туберкулеза, рака или гангрены легких. Последнее заболевание может протекать без присутствия эластичных волокон, поскольку они иногда растворяются под действием ферментов слизи. Отличительной особенностью бесцветных кристаллов Шарко-Лейдена является высокое содержание эозинофилов, что характерно для таких заболеваний как бронхиальная астма и эозинофильная пневмония.

Кристаллы Шарко-Лейдена – не единственный представитель эластичных волокон. В мокроте многих пациентов, страдающих заболеваниями дыхательных путей, часто встречаются спирали Куршмана. Они представляют собой трубчатые тела, которые иногда заметны даже невооруженным глазом. В остальных случаях кристаллы обнаруживают с помощью микроскопического исследования слизи. Трубчатые тела могут предвещать развитие пневмонии, бронхиальной астмы, туберкулеза легких.

Эозинофилы считаются признаками астмы, но данное утверждение верно лишь для некоторых случаев. Микроорганизмы этого типа содержат специфический белок, который способен не только защищать организм от паразитов, но и разрушать эпителий дыхательных путей. Эозинофилы считаются одной из главных причин развития патологии органов дыхания, однако исследования по данному вопросу все еще не завершены. Эти клетки невозможно полностью удалить из дыхательных путей, однако можно существенно снизить их количество при соответствующем лечении антителами.

источник

Бактериоскопическое исследование мокроты

КРИСТАЛЛИЧЕСКИЕ ОБРАЗОВАНИЯ МОКРОТЫ

Кристаллы Шарко-Лейдена – блестящие бесцветные ромбы различной величины, напоминающие стрелки компаса. Образуются из распадающихся эозинофилов. Часто свежевыделенная мокрота не содержит кристаллов Шарко-Лейдена, они образуются в ней через 24 часа. Присутствие этих кристаллов в мокроте характерно для бронхиальной астмы, встречается также при глистных поражениях легких.

Кристаллы гематоидинаимеют вид ромбов или иголок золотисто-желтого цвета. Являются продуктом распада гемоглобина. Образуются в глубине гематом, в некротизированной ткани. В препаратах мокроты располагаются на фоне детрита, эластических волокон.

Кристаллы холестерина — бесцветные четырехугольные пластинки с обломанным углом, образуются при распаде жироперерожденных клеток, задержке мокроты в полостях. Встречаются при кавернозном туберкулезе, опухолях и абсцессах легких.

Для исследования морфологии клеточных элементов мокроты используют обычные гематологические методы окраски – по Романовскому, Паппенгейму и др. В окрашенных препаратах дифференцируются нейтрофилы, эозинофилы, лимфоциты, базофилы, альвеолярные макрофаги, эпителиальные клетки, клетки злокачественных опухолей.

Этот этап исследования мокроты в клинико-диагностических лабораториях общей лечебной сети включает в себя микроскопию препаратов, окрашенных:

— по Цилю-Нильсену для выявления микобактерий туберкулеза (кислотоустойчивых микобактерий, КУМ);

— по Грамму для изучения микрофлоры мокроты (выявления стрептококков, стафилококков, пневмококков и др.). Бактериоскопическое исследование окрашенных по Грамму препаратов имеет ориентировочное значение. Правильность выявления этих бактерий должна подтверждаться бактериологическим исследованием (посевом).

Бактериоскопическое исследование мокроты необходимо проводить в соответствии с правилами, изложенными в приложении №10 к приказу Минздрава России от 21.03.2003г. №109. Сбор мокроты для анализа на кислотоустойчивые микобактерии (КУМ) изложен в общих правилах сбора мокроты.

Процедура приготовления мазков для бактериоскопического исследования начинается с подготовки предметных стекол. Необходимо использовать только новые стекла ГОСТ 9284-75 , отмытые и обезжиренные в спирте или смеси Никифорова (96% этиловый спирт + эфир в соотношении 1:1), без царапин и сколов. Новые предметные стекла кипятят 15 минут в 1% растворе питьевой соды, промывают в 1% растворе соляной кислоты, а затем в проточной воде и протирают насухо. Для обезжиривания вымытые и высушенные стекла помещают в герметически закрытые емкости со смесью Никифорова или с 96% этиловым спиртом не менее чем на 1 сутки. Непосредственно перед приготовлением мазков стекла повторно протираются насухо.

Техника приготовления мазков из мокроты изложена выше.

При приготовлении мазка необходимо добиваться правильной его толщины. Если мазок слишком тонкий и содержит мало материала, при микроскопическом исследовании можно получить ложноотрицательный результат. Если мазок слишком толстый, это затрудняет его фиксацию, материал недостаточно плотно прикрепляется к стеклу и может быть частично или полностью удален при окраске. Кроме того, толстый мазок плохо просматривается при микроскопическом исследовании. Через правильно приготовленный неокрашенный мазок можно читать газетный шрифт, расположенный позади стекла на расстоянии 5-10см.

Фиксация мазков.Приготовленные мазки помещают на 15-30 минут на лотки (подносы), выстланные фильтровальной бумагой, и высушивают при комнатной температуре в вытяжном шкафу или при его отсутствии — на столе, в специально отведенном месте. Ни в коем случае не допускается фиксация сырых мазков над пламенем горелки. Стекла с высохшими мазками пинцетом или специальными щипцами берут за конец, на который нанесена маркировка, и трижды медленно проводят через верхнюю треть пламени спиртовки или газовой горелки до исчезновения признаков запотевания стекла. Общая продолжительность пребывания мазка в пламени не должна превышать 3-5 секунд. Затем стекла помещают на специальную подставку («рельсы») для окрашивания.

В плане охраны труда оптимальным является метод Хайна, согласно которому предметные стекла с мазками раскладывают на жестяные или эмалированные подносы и помещают в сушильный шкаф, где сначала высушивают при 37°C, а затем температуру повышают до 105°C и через 10 минут шкаф выключают. При таком методе достигается надежное прикрепление материала к стеклу и гибель микобактерий, как находящихся в материале мазка, так и случайно попавших на поднос. Фиксирующая температура не должна превышать 105°С, чтобы не изменить свойства микобактерий.

Высушенные и фиксированные мазки должны сразу же окрашиваться. Нефиксированные мазки ни в коем случае не должны оставляться открытыми на ночь, так как это увеличивает опасность распространения инфекции и возможность переноса ее насекомыми. Фильтровальная бумага, которой был выстлан лоток (поднос), по окончании фиксации каждой серии мазков подлежит обязательному сжиганию или автоклавированию, а лоток обжигается спиртом. Лотки ежедневно выстилаются чистой бумагой.

Дата добавления: 2014-11-29 ; Просмотров: 2530 ; Нарушение авторских прав? ;

Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет

источник

Консультант по гематологии,

цитохимии и микробиологии

Важное место в общем комплексе клинико-лабораторных исследований, применяемых для профилактики, диагностики и лечения гнойно-воспалительных заболеваний и осложнений у больных в лечебно-профилактических учреждениях занимают микробиологические исследования. Современная клиническая медицина предъявляет к микробиологическим (бактериологическим) исследованиям возрастающие требования по увеличению объема, повышению качества исследований, разработке и внедрению новых более совершенных методов. Это связано как с новыми научными достижениями в области эпидемиологии и бактериологии, так и с увеличением гнойно-воспалительных заболеваний, ростом госпитальных инфекций.

Материалом для изучения этиологии заболеваний дыхательных путей служат: отделяемое зева и носа; мокрота; содержимое бронхов, полученное при бронхоскопии или при отсасывании через трахеостому (у больных, находящихся на аппаратном дыхании); экссудаты; резецированные ткани и др. Материал собирают с соблюдением правил асептики в предварительно простерилизованные баночки или пробирки и доставляют в лабораторию. Хранение материала способствует размножению сапрофитирующей микрофлоры, развитию процессов гниения и брожения, что искажает результаты анализа. Интервал между взятием материала и его посевом не должен превышать 1-2 часа. Самым простым методом выявления микобактерий туберкулеза в выделениях больных является микроскопия мазка, приготовленного из мокроты. При бактериоскопии мазка, окрашенного по Цилю-Нильсену, микобактерии туберкулеза могут быть обнаружены при наличии не менее 100 000 — 1 000 000 бактериальных клеток в 1 мл патологического материала (мокроты). Такое большое количество микобактерий встречается у больных с далеко зашедшими прогрессирующими формами заболевания (диссеминированными и фиброзно-кавернозными). У значительно большего числа больных количество выделяемых ими микобактерий ниже предела метода бактериоскопии.

Чувствительность метода люминесцентной микроскопии значительно выше — от 10 000 до 100 000 микобактерий в 1 мл материала, кроме того, этот метод дает возможность за значительно более короткое время просмотреть необходимое количество препаратов. Эффективность бактериоскопии повышается также при передаче изображения на компьютер при помощи присоединенной к микроскопу видеокамеры.

Чтобы диагностировать туберкулез, необходимо сделать все возможное для выявления возбудителя заболевания. Микробиологически диагноз может быть подтвержден на основе результатов культурального исследования на комплекс M. tuberculosis (или, при возможности, путем идентификации специфических последовательностей нуклеиновых кислот) в пробах, взятых в месте локализации патологического процесса. Однако на практике в настоящее время многие лаборатории не располагают материально-технической базой для проведения культуральных исследований. К счастью, микроскопия окрашенных препаратов мокроты доступна практически везде, поэтому диагностика туберкулеза может проводиться на основе выявления кислотоустойчивых микобактерий. На территориях с высокой распространенностью туберкулеза выявление кислотоустойчивых микобактерий в окрашенных препаратах мокроты демонстрирует высокую специфичность, поэтому положительный результат микроскопии мокроты можно рассматривать как подтверждение диагноза. Кроме высокой специфичности к комплексу M. tuberculosis, выявление кислотоустойчивых микобактерий при микроскопии играет важную роль по трем причинам: это – наиболее быстрый метод диагностики туберкулеза; позволяет выявить больных с тяжелым развитием патологии, чреватым высоким риском летального исхода; дает возможность выявить больных, являющихся распространителями инфекции.

Оценка качества работы лабораторий микроскопии должна проводиться соответствующим государственными органом (как правило, представителями национальной программы борьбы с туберкулезом).

Неправильный диагноз, поставленный перед началом лечения, приводит к риску ненужного, неправильного или неудачного лечения. Более того, подобный подход чреват несвоевременной постановкой правильного диагноза и назначением соответствующего лечения. При надлежащем подходе и контроле в большинстве случаев у детей в возрасте пяти лет и старше могут быть получены образцы мокроты. У подростков (хотя они часто относятся к детской возрастной группе, по крайней мере, до 15 лет) получить пробы мокроты не составляет большого труда. Поэтому фактор возраста не может рассматриваться как препятствие для сбора проб мокроты у детей и подростков.

Исходя из имеющихся данных, можно прийти к заключению, что для диагностики туберкулеза необходимо взять не менее двух проб мокроты. В случаях, когда имеются соответствующие возможности, можно направлять для лабораторного исследования еще и третью пробу, но исследование более трех проб мокроты вряд ли целесообразно, поскольку не может в значительной мере повысить эффективность диагностики. Кроме того, исследование третьей пробы может оказаться полезным только для подтверждения диагноза, если одна или две предыдущие пробы дали положительный результат. Крайне желательно, чтобы результаты микроскопии мокроты направлялись лечащему врачу в течение одного рабочего дня с момента отправки проб. Не меньшее значение имеет также и время сбора проб. Результаты исследований показывают, что эффективность лабораторных анализов максимальна, если пробы мокроты получены утром, после пробуждения от ночного сна. Возможно, совершенно необязательно собирать только утренние пробы, но, про крайней мере, одна из них должна быть получена утром.

Как правило, внелегочные очаги туберкулезного процесса содержат гораздо меньшее количество M. tuberculosis, поэтому микроскопическое выявление кислотоустойчивых микобактерий в пробах из внелегочных очагов весьма затруднено, и в таких случаях результаты культуральных исследований приобретают большое значение. Учитывая низкую результативность микроскопии, при внелегочном туберкулезе культуральные и морфологические исследования приобретают особое значение, например, в диагностическом исследовании проб ткани лимфатических узлов, полученных при помощи игловой биопсии.

Лечение пациентов, у которых наблюдаются тяжелое или быстро развивающееся заболевания, ассоциированные с туберкулезом, необходимо начинать немедленно, даже до лабораторного подтверждения диагноза. Лечение следует начинать до получения результатов лабораторного исследования и лишь позднее внести необходимые поправки и изменения в схему лечения с учетом результатов микроскопии.

Хотя микроскопия мокроты является наиболее доступным бактериологическим тестом, там, где ресурсы позволяют и имеются условия для качественной лабораторной диагностики, в диагностический алгоритм необходимо включать культуральные исследования мокроты, в случаях отрицательных результатов микроскопии. Правильное проведение культуральных исследований связано с определенными трудностями и дополнительными затратами, но этот метод отличается более высокой чувствительностью и повышает вероятность раннего выявления больных туберкулезом.

Микроскопия мазков мокроты по Циль-Нильсену является важнейшим элементом диагностики туберкулеза. Исследование 3 мазков мокроты позволяет выявить более 60% случаев туберкулеза легких и 95% наиболее заразных случаев (исследование одного мазка мокроты выявляет 75% наиболее заразных случаев, исследование второго мазка мокроты добавляет еще 20%, а исследование третьего — еще 5%).

Микроскопия мазков мокроты по Циль-Нильсену позволяет быстро получить результаты, выявить основные источники инфекции, является менее дорогостоящей, чем посев мокроты и широко доступна для применения. Но она должна быть надежной и хорошо контролироваться. Вероятность обнаружения МБТ при бактериоскопии мазков мокроты прямо пропорциональна концентрации возбудителя в исследуемом материале. Например, когда в 1 мл мокроты содержится от 1000 до 10000 МБТ, то вероятность получения положительного результата составляет около 40-50%. При концентрации МБТ менее 1000 в 1 мл мокроты вероятность их обнаружения резко снижается – отрицательные результаты получаются примерно в 96% случаев.

Основным и наиболее часто изучаемым биоматериалом в пульмонологической практике является мокрота. Требования к забору и качеству мокроты следующие:
1) первую пробу мокроты желательно получить до начала курса антибиотикотерапии;
2) мокроту оптимально собирать утром, до приема пищи, после тщательного туалета полости рта (полоскание кипяченой водой);
3) больным нужно доступно объяснить, что требуется получить именно содержимое нижних отделов дыхательных путей, а не ротоглотки, и, по возможности, проконтролировать их действия;
4) забор материала проводить в стерильные интактные контейнеры;
5) продолжительность хранения мокроты в контейнерах не должна превышать 2 ч (в летнее время желательно не более 1 ч);
6) в условиях лаборатории качество мокроты оценивается после окрашивания мазка по Граму (при наличии в мазке менее 25 лейкоцитов и более 10 эпителиальных клеток, при просмотре не менее 8-10 полей зрения при малом увеличении, мокрота признается некачественной, дальнейшее ее исследование нецелесообразно, так как, скорее всего, материал получен из ротовой полости);
7) высокая диагностическая ценность исследования признается при выделении возбудителя в концентрации і106 КОЕ/мл.

Вообще, в диагностике заболеваний туберкулезом можно выделить несколько этапов:

· Преаналитический этап (предварительный диагноз, выбор материала и метода исследования, забор биомтериала и его транспортировка)

· Аналитический этап (непосредственно проведение анализа)

· Постаналитический этап (оценка результатов)

Часть этих этапов проводится вне лаборатории, поэтому очень важна согласованная и качественная работа всех специалистов, привлеченных в этот процесс. Важен правильный выбор исследуемого материала. Важным этапом диагностики являются процедуры взятия и доставки материала в лабораторию.При взятии всех видов исследуемого материала следует ориентироваться на стандартные системы для этой цели: тампоны, цитощетки, тубсеры, контейнеры и т.п. Эффективность аналитического этапа во многом определяется уровнем технического оснащения лабораторий. Постаналитический этап исследования включает две составляющие: проверку достоверности полученного результата и оценку этиологической значимости выделенных штаммов. В лаборатории должен осуществляться строгий внутренний контроль качества исследований, важной составляющей которого является проверка полученных результатов на достоверность. Оценка этиологической значимости выделенных микроорганизмов принципиальна для выбора адекватной терапии. Процедура приготовления мазков начинается с подготовки предметных стекол. Необходимо использовать только новые, отмытые и обезжиренные в спирте или смеси для обезжиривания предметных стекол (производство АБРИС+) стекла без царапин и сколов. При повторном использовании стекла могут быть недостаточно хорошо отмыты от предыдущего материала, что может привести к получению ложноположительных результатов. Не рекомендуется использовать саморезанные стекла, которые приводят к значительным аберрациям исследуемого изображения. Стекла должны соответствовать ГОСТу. Стекла, на которых при микроскопическом исследовании были обнаружены кислотоустойчивые микобактерии, сохраняются в лаборатории в течение 1 года, а затем подлежат обязательному уничтожению и не должны использоваться повторно. Новые предметные стекла кипятят 15 минут в 1% растворе питьевой соды (10 г двууглекислого натрия на 1 л воды), промывают в 1% растворе соляной кислоты (к 1 л воды добавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты), а затем промывают в проточной воде и протирают насухо.

Для обезжиривания вымытые и высушенные стекла помещают в герметически закрытые емкости со смесью для обезжиривания. Стекла должны подвергаться обезжириванию в течение суток. Непосредственно перед приготовлением мазков стекла повторно протираются насухо. Для окраски мазков, приготовленных непосредственно из диагностического материала (метод прямой микроскопии), наиболее часто используется метод Ziehl-Neelsen (Циль-Нильсен) (Реагенты — «Диахим» — набор для окраски по Циль-Нильсену»)..

источник

Как указывалось выше, мазок может быть приготовлен непосредственно из нативного (необработанного) материала или его осадка (при исследовании жидких материалов).

Если мазок будет окрашиваться по методу Ziehl-Neelsen и исследоваться в световом микроскопе, рН мазка не корригируется.

В случае окраски флуорохромными красителями для исследования в люминесцентном микроскопе перед нанесением материала на предметное стекло необходимо добиться нейтрального значения рН (6,8-7,0). Уровень рН осадка определяют с помощью бумажной индикаторной полоски.

Перед приготовлением мазка на один конец стекла (или его матовую часть) наносят полный номер пробы исследуемого материала, под которым он зарегистрирован в лабораторном регистрационном журнале при приеме материала. Номер наносят с помощью алмазного карандаша или несмываемого маркера с таким расчетом, чтобы в процессе окраски этот номер сохранился.

Не следует касаться чистой поверхности стекла руками или перчатками.

Приготовление мазков для прямой микроскопии из нативной мокроты.

Если материал поступил в емкости, в которой невозможно обнаружить и выбрать частицы для приготовления мазка, его переносят в чашку Петри, под дно которой подложена черная бумага. При этом проявляют известную осторожность, чтобы избежать образования аэрозолей.

Так как в необработанной нативной мокроте микобактерии наиболее часто располагаются в плотных комочках распада тканей, следует иметь в виду, что результат микроскопического исследования в значительной степени зависит от правильности выбора этих гнойных комочков.

При приготовлении мазков наиболее удобно пользоваться деревянной палочкой, которую перед работой разламывают пополам.

Затем из разных участков образца мокроты выбирают 2-3 наиболее плотных гнойных небольших комочка, переносят их на стекло, при необходимости разминают его и равномерно распределяют тонким слоем в центре стекла на поверхности приблизительно размером 1×2 см в виде овала. Забор комочков производят с помощью сломанных концов палочки, что обеспечивает более надежную фиксацию материала к палочке и облегчает последующее его нанесение на поверхность предметного стекла и приготовление мазка посредством растирания.

На одно предметное стекло следует наносить только один мазок.

Использованные для приготовления мазка палочки удаляют в банку с дезинфицирующим раствором или в контейнер с отработанным заразным материалом. Для каждой порции мокроты используется новая чистая палочка.

Практикуется также приготовление мазков с помощью бактериологических петель или препаровальных игл. Удобно пользоваться двумя петлями или иглами. В случае, когда мазок готовят с помощью бактериологической петли, она может быть использована повторно после очистки от остатков мокроты путем 2-Зх кратного погружения ее в банку с песком, залитым спиртом, и последующего прожигания в пламени горелки до появления красного цвета. После прокаливания петлю следует охладить, оставив ее на 1-2 минуты в штативе-петледержателе.

Песок для очистки петель может использоваться длительное время при условии периодического обновления раствора спирта с таким расчетом, чтобы его уровень превышал уровень песка не менее чем на Зсм.

Приготовления мазка из осадка необработанного нативного материала.Такие мазки приготавливают из полученного после центрифугирования осадка любого жидкого диагностического материала (бронхоальвеолярные смывы, промывные воды бронхов или желудка, моча, пунктаты из закрытых полостей, экссудаты и др.). Осадок представляет собой обогащенную фракцию диагностического материала и значительно чаще позволяет получить положительные результаты. Особенностью существования М. tuberculosis в жидкостях является способность их долгое время находиться во взвешенном состоянии. В связи с этим рекомендуется производить центрифугирование при 3000 g (см. Приложение № 11 настоящего приказа).

Для приготовления мазка, надосадочную жидкость аккуратно удаляют, полученный в пробирке осадок перемешивают и с помощью пипетки наносят на стекло 1-2 капли осадка, распределяя его тонким слоем в центре стекла на площади не менее 1 см х 2 см.

Необходимо иметь в виду, что мазки из осадка жидких материалов (моча, промывные воды бронхов, экссудаты и пр.) легко смываются в процессе окраски. Поэтому мазки из осадка жидких материалов желательно приготавливать на стеклах, предварительно обработанных яичным белком.

Для этого белок куриного яйца в течение 30 — 40 минут взбивают с чистыми стерильными стеклянными бусами в стерильной посуде и оставляют на 1 — 1,5 часа при комнатной температуре. Затем жидкую часть взбитой смеси отбирают пипеткой, переносят ее в другую посуду и, смачивая в ней ватный тампон, аккуратно наносят ее на чистые обезжиренные предметные стекла, равномерно распределяя по 2/3 их поверхности. 1/3 предметного стекла оставляется необработанной белком для последующего нанесения на нее номера пробы. Обработанные белком стекла раскладывают на чистой фильтровальной бумаге и высушивают при комнатной температуре. Стекла готовят накануне их использования. Срок хранения не превышает 2-х суток.

Другим способом закрепления осадка жидкого материала является использование сыворотки крови. На чистом стекле каплю сыворотки смешивают с 1-2 каплями осадка материала и распределяют смесь по стеклу.

При приготовлении мазка для микроскопического исследования необходимо добиваться правильной его толщины. Если мазок слишком тонкий и содержит мало материала, при микроскопическом исследовании можно получить ложноотрицательный результат.

Если мазок слишком толстый, это затрудняет его фиксацию, материал недостаточно плотно прикрепляется к стеклу и может быть частично или полностью удален при окраске. Кроме того, толстый мазок плохо просматривается при микроскопическом исследовании.

Не рекомендуется готовить мазки способом «растяжки» материала между двух предметных стекол. Такой способ сопровождается образованием биологически опасного аэрозоля.

Через правильно приготовленный не окрашенный мазок можно читать газетный шрифт, расположенный позади стекла на расстоянии 5 -10 см.

Ограниченная площадь мазка (

1 см х 2 см в центре стекла) значительно повышает безопасность манипуляции и последующей микроскопии, так как периферические части и ребра предметного стекла остаются незагрязненными инфекционным материалом.

источник

Весь контент iLive проверяется медицинскими экспертами, чтобы обеспечить максимально возможную точность и соответствие фактам.

У нас есть строгие правила по выбору источников информации и мы ссылаемся только на авторитетные сайты, академические исследовательские институты и, по возможности, доказанные медицинские исследования. Обратите внимание, что цифры в скобках ([1], [2] и т. д.) являются интерактивными ссылками на такие исследования.

Если вы считаете, что какой-либо из наших материалов является неточным, устаревшим или иным образом сомнительным, выберите его и нажмите Ctrl + Enter.

Микроскопическое исследование нативных и фиксированных окрашенных препаратов мокроты позволяет подробно изучить ее клеточный состав, и известной степени отражающий характер патологического процесса в легких и бронхах, его активность, выявить различные волокнистые и кристаллические образования, также имеющие важное диагностическое значение, и, наконец, ориентировочно оценить состояние микробной флоры дыхательных путей (бактериоскопия).

При микроскопии используют нативные и окрашенные препараты мокроты. Для изучения микробной флоры (бактериоскопии) мазки мокроты обычно окрашивают по Романовскому-Гимзе, по Граму, а для выявления микобактерий туберкулеза но Цилю-Нильсену.

Из клеточных элементов, которые можно обнаружить в мокроте больных пневмонией, диагностическое значение имеют эпителиальные клетки, альвеолярные макрофаги, лейкоциты и эритроциты.

Эпителиальные клетки. Плоский эпителий из полости рта, носоглотки, голосовых складок и надгортанника диагностического значения не имеет, хотя обнаружение большого количества клеток плоского эпителия, как правило, свидетельствует о низком качестве образца мокроты, доставленного в лабораторию и содержащего значительную примесь слюны.

У больных пневмониями мокрота считается пригодной к исследованию, если при микроскопии с малым увеличением количество эпителиальных клеток не превышает 10 в поле зрения. Большее количество эпителиальных клеток указывает на недопустимое преобладание в биологическом образце содержимого ротоглотки.

Альвеолярные макрофаги, которые в незначительном количестве также можно обнаружить в любой мокроте, представляют собой крупные клетки ретикулогистиоцитарного происхождения с эксцентрически расположенным крупным ядром и обильными включениями в цитоплазме. Эти включения могут состоять из поглощенных макрофагами мельчайших частиц пыли (пылевые клетки), лейкоцитов и т.п. Количество альвеолярных макрофагов увеличивается при воспалительных процессах в легочной паренхиме и дыхательных путях, в том числе при пневмониях.

Клетки цилиндрического мерцательного эпителия выстилают слизистую оболочку гортани, трахеи и бронхов. Они имеют вид удлиненных клеток, расширенных с одного конца, где расположено ядро и реснички. Клетки цилиндрического мерцательного эпителия обнаруживаются в любой мокроте, однако их увеличение свидетельствует о повреждении слизистой бронхов и трахеи (острый и хронический бронхит, бронхоэктазы, трахеит, ларингит).

Лейкоциты в небольшом количестве (2-5 в поле зрения) обнаруживаются в любой мокроте. При воспалении ткани легкого или слизистой бронхов и трахеи, особенно при нагноительных процессах (гангрена, абсцесс легкого, бронхоэктазы) их количество значительно увеличивается.

При окраске препаратов мокроты по Романовскому-Гимзе удается дифференцировать отдельные лейкоциты, что имеет иногда важное диагностическое значение. Так, при выраженном воспалении легочной ткани или слизистой бронхов увеличивается как общее число нейтрофильных лейкоцитов, так и количество их дегенеративных форм с фрагментацией ядер и разрушением цитоплазмы.

Увеличение числа дегенеративных форм лейкоцитов является важнейшим признаком активности воспалительного процесса и более тяжелого течения заболевания.

Эритроциты. Единичные эритроциты можно обнаружить практически и любой мокроте. Значительное их увеличение наблюдается при нарушении сосудистой проницаемости у больных пневмониями, при разрушении ткани легкого или бронхов, застое в малом круге кровообращения, инфаркте легкого и т.д. В большом количестве эритроциты в мокроте обнаруживаются при кровохарканье любого генеза.

Эластические волокна. Следует упомянуть также еще об одном элементе мокроты пластических волокнах, которые появляются в мокроте при деструкции легочной ткани (абсцесс легкого, туберкулез, распадающийся рак легкого и др.). Эластические волокна представлены в мокроте в виде тонких двухконтурных, извитых нитей с дихотомическим делением на концах. Появление эластических волокон в мокроте у больных с тяжелым течением пневмонии свидетельствует о возникновении одного из осложнений заболевания — абсцедировании ткани легкого. В ряде случаев при формировании абсцесса легкого эластические волокна в мокроте можно обнаружить даже несколько раньше, чем соответствующие рентгенологические изменения.

Нередко при крупозной пневмонии, туберкулезе, актиномикозе, фибринозном бронхите в препаратах мокроты можно обнаружить тонкие волокна фибрина.

Признаками активного воспалительного процесса в легких являются:

1. характер мокроты (слизисто-гнойная или гнойная);
2. увеличение количества нейтрофилов в мокроте, в том числе их дегенеративных форм;
3. увеличение количества альвеолярных макрофагов (от единичных скоплений из нескольких клеток в поле зрения и больше);

Появление в мокроте эластических волокон свидетельствует о деструкции легочной ткани и формировании абсцесса легкого.

Окончательные выводы о наличии и степени активности воспаления и деструкции легочной ткани формируются только при их сопоставлении с клинической картиной заболевания и результатами других лабораторных и инструментальных методов исследования.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Микроскопия мазков мокроты, окрашенных по Граму, и изучение микробной флоры (бактериоскопия) у части больных пневмонией позволяет ориентировочно установить наиболее вероятного возбудителя легочной инфекции. Этот простой метод экспресс-диагностики возбудителя недостаточно точен и должен использоваться только в комплексе с другими (микробиологическими, иммунологическими) методами исследования мокроты. Иммерсионная микроскопия окрашенных мазков мокроты иногда бывает весьма полезной для экстренного подбора и назначения адекватной антибактериальной терапии. Правда, следует иметь в виду возможность обсеменения бронхиального содержимого микрофлорой верхних дыхательных путей и ротовой полости, особенно при неправильном сборе мокроты.

Поэтому мокроту считают пригодной для дальнейшего исследования (бактериоскопии и микробиологического исследования) только в том случае, если она удовлетворяет следующим условиям:

• при окраске по Грамму в мокроте выявляется большое количество нейтрофилов (более 25 в поле зрения при малом увеличении микроскопа);
• количество эпителиальных клеток, больше характерных для содержимого ротоглотки, не превышает 10;
• в препарате имеется преобладание микроорганизмов одного морфологического типа.

При окраске по Граму в мазке мокроты иногда можно достаточно хорошо идентифицировать грамположительные пневмококки, стрептококки, стафилококки и группу грамотрицательных бактерий — клебсиеллу, палочку Пфейффера, кишечную палочку и др. При этом грамположительные бактерии приобретают синий цвет, а грамотрицательные — красный.

Бактериальные возбудители пневмоний

1. Пневмококки Streptococcus pneumoniae.
2. Стрептококки Streptococcus pyogenes, Streptococcus viridans.
3. Стафилококки: Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus.

1. Клебсиеллы (Klebsiella pneumoniae)
2. Гемофильная палочка (Пфейфера) Haemophilius influenzae
3. Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa)
4. Легионелпа
5. Кишечная палочка (Escherichia coli)